直接荧光抗体染色法快速诊断脆弱类杆菌感染

用1株SFMC 10012脆弱类杆菌(Bacteroides fragilis,Bf)制备的荧光抗体应用于临床快速诊断该菌感染,共检140份临床标本,并与培养法比较。结果示直接荧光抗体染色法敏感性为100％,特异性94.5％,阳性期望值83.3％,阴性期望值100％。我们认为:(1)该荧光抗体可用于临床Bf感染的快速诊断;(2)仅用1株Bf的荧光抗体即可取代过去多株Bf制备的混合荧光抗体,从而简化工艺便于生产。     

脆弱类杆菌的快速检测法探讨

脆弱类杆菌(Bacteroides fragilis)是革兰氏阴性无芽孢厌氧杆菌,主要存存于大肠、阴道和口腔等处。Finegold(1975)研究25名健康成人大肠中的正常菌群,发现每克于粪中约有10~(10～11)个本组细菌,比大肠杆菌约高100～1000倍。临床细菌检验发现无芽孢厌氧杆菌在各种感染性标本中检出率较高,其中脆弱类杆菌占首位。在厌氧菌菌血症中,脆弱类杆菌     

脆弱类杆菌与大肠杆菌的β-葡萄糖醛酸酶活性的测定比较

作者测定了二株脆弱类杆菌与大肠杆菌3360(O_(157)K_(88))株的β-G活性,并进行了比较。结果表明:脆弱类杆菌ATCC25285的β-G平均活性为94.7u,明显高干脆弱类杆菌CDC14462株及大肠杆菌3360株。作者选定脆弱类杆菌ATCC25285株为胆红素结石动物模型的模式菌株。     

抗脆弱类杆菌和产气荚膜杆菌McAb池在外科感染快速诊断中的应用

目的 制备抗脆弱杆菌和抗产气荚膜杆菌单克隆抗体池,并用于快速诊断及时指导临床治疗。方法 采用间接免疫荧光抗体染色法（IFA）和免疫酶标抗体染色法（ELA）对我院1998～1999年191例外科感染患者的标本进行细菌学检测,并与常规培养法进行比较。结果 3种方法从191份标本中分别检出脆弱类杆菌53株（27.7%）和55株（28.8%）以及25株（13.1%）;检出产气荚膜杆菌12株（6.3%）和11株（5.8%)以及6株（3.1%）。IFA和ELA法2种厌氧菌检出率明显高于CM法。但IFA和ELA法之间检出率差异无显著性。结论 自制脆弱类杆菌和抗产气荚膜杆菌的McAb池,检测平时常见的脆弱类杆菌和战时常见的产气荚膜杆菌,敏感性高,简便,快速、便于推广。     

荧光抗体法及厌氧菌培养法检出类杆菌与梭状杆菌的质量控制

本文为1983年1月至1984年7月374例次临床标本的脆弱类杆菌、产黑类杆菌与核粒梭状杆菌的荧光抗体法(IFA)与厌氧菌培养法的对比,并对二法的质量控制如符合率、敏感性、特异性、预示值、抗血清的保存期限作了比较。说明二法符合率良好(88.5～95.99％)。IFA有快速诊断的优点外,并有下列的特点: 1.IFA可检查厌氧菌培养法的质量,经对比,证明我们现用厌氧菌培养法宜于分离产黑类杆菌、核粒梭状杆菌,不宜于分离脆弱类杆菌,对后一种厌氧菌培养法有待改进。 2.国外已有压氧菌专用荧光抗体试剂出售,国内并无此项专用试剂,但可自制厌氧菌抗血清,向北京或上海生物制品研究所购买羊抗兔免疫球蛋白荧光抗体,可作IFA的间接法快速诊断之用. 3.经三年来(1982～1983年102例次,1983～1984年的374例次)三种厌氧菌的IFA与厌氧菌培养法对比,都证明IFA可提高阳性检出率。 并对二法存在的问题略加讨论。     

抗ANXA2单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的制备ANXA2特异性单克隆抗体(McAb),为研究ANXA2的生物学功能和检测该蛋白提供有力的抗体工具。方法用经IPTG诱导表达的基因重组PGEX-4T-1-ANXA2抗原免疫BALB/c小鼠,利用常规杂交瘤技术和间接ELISA法筛选抗ANXA2杂交瘤细胞,用ELISA法鉴定所得单抗腹水的效价及Western blot鉴定McAb特异性。单抗纯化和Eu3+标记后,分别包被聚苯乙烯板及作为铕标单抗,利用时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)筛选出检测ANXA2蛋白的最佳配伍单抗。结果经细胞融合、筛选、克隆化,获得了16株可分泌高效价单抗的杂交瘤细胞,间接ELISA显示16株McAb与空载体PGEX-4T-1均未发生交叉反应,抗体特异性良好,16株抗体腹水效价为1∶8 000~1∶256 000,培养上清效价为1∶256~1∶512,纯化的腹水单抗经配对试验,2D6和9H9-Eu3+配对最佳。结论获得16株能稳定分泌高特异性抗ANXA2的杂交瘤细胞,能用于后续研究。     

霍乱弧菌单克隆抗体杂交瘤细胞株建立

本法获得了841C71、841C72两个分泌抗霍乱弧菌菌体抗原单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞株。其培养上清抗体滴度为1∶8～1∶64,小鼠腹水抗体滴度为1∶1280～1∶5120。与霍乱弧菌小川型的反应滴度在1∶80～1∶160之间,但不与水弧菌及大肠杆菌等肠道杆菌发生交叉反应。此二株细胞产生的MAb为IgG类。     

厌氧菌感染46例临床分析

本文对46例厌氧菌感染的临床特点进行了分析。病例中败血症、原发性腹膜炎各19例,肝脏肿8例。厌氮菌培养阳性63株,其频数依次为脆弱类杆菌(39.7％)、消化球菌、真杆菌、产黑色素类杆菌等。46例中细菌混合感染占45.65％,均为多种细菌反复感染或同时感染。厌氧菌感染多系继发性的内源性感染,为医院内感染重要病原菌之一。     

间接免疫荧光法与线性免疫印迹法对自身抗体检测结果分析

目的:探讨自身特异性抗体筛查试验间接免疫荧光法(IIF)与确认试验线性免疫印迹法(LIA)检测结果的相关性。方法:用IIF法作为抗核抗体(ANA)的筛查试验,用LIA法作为抗核抗体谱(ANAs)特异性抗体的确认试验,对自身免疫性疾病组(AID)及非AID疾病对照组进行检测分析,并将检测结果分为四组:IIF-ANA+/LIA+组,IIF-ANA+/LIA-组,IIF-ANA-/LIA+组和IIF-ANA-/LIA-组。结果:1在611例AID组中,IIF-ANA+/LIA+336例(55%),IIF-ANA+/LIA-116例(19%),IF-ANA-/LIA+55例(9%),IIF-ANA-/LIA-104例(17%)。2在100例非AID组中,IIF-ANA+/LIA+2例(2%),IIF-ANA+/LIA-7例(7%),IIF-ANA-/LIA+3例(3%),IIF-ANA-/LIA-88例(88%),总体符合率90%。AID组与非AID组自身抗体的检测结果比较差异有统计学意义。3 IIF-ANA-/LIA+组中,以抗SSA抗体、抗Ro-52抗体、抗ds-DNA抗体、抗组蛋白抗体、抗Jo-1抗体为主要检测出的阳性自身抗体。AID组IIF-ANA+/LIA-中,ANA检测核型以均质型、斑点型为主,混合核型以均质斑点型为主,荧光检测滴度以1∶40~1∶320为主;非AID组IIF-ANA+/LIA-中,核型以斑点型为主,荧光滴度以1∶40~1∶320为主。结论:AID患者可能会出现IIF-ANA检测阳性而LIA-ANAs检测阴性或者IIF-ANA检测阴性而LIAANAs检测阳性,检查除了进行IIF筛查ANA外,还需进行自身抗体谱的特异性抗体确认实验。     

急性冠状动脉综合征患者血浆F1+2和SFMC测定及肝素治疗的临床研究

目的:测定急性冠状动脉综合征(acutecoronarysyndrome,ACS)患者的血浆血栓前片段1+2(prothrombinfragment1+2,F1+2)和可溶性纤维蛋白单体复合物(solublefibrinmonomercomplex,SFMC)水平,观测肝素抗凝治疗对ACS患者血浆F1+2和SFMC水平的影响,为早期诊断和防治ACS患者的血栓前状态提供参考。方法:将86例ACS患者分为急性心肌梗死(acutemyocardialinfarction,AMI)组和不稳定心绞痛(unstableangina,UA)组,分别以酶联免疫法测定血浆F1+2和SFMC含量,并与75例稳定性心绞痛(stableangina,SA)患者进行对照分析。同时用肝素抗凝治疗ACS患者,观察治疗前后血浆F1+2和SFMC含量的变化。结果:ACS组及其分组的血浆F1+2和SFMC水平均明显高于SA组,差异有统计学意义(P均<0.01),AMI组的血浆F1+2和SFMC水平亦明显高于UA组,差异有统计学意义(P均<0.05)。肝素抗凝治疗后血浆F1+2和SFMC水平明显下降,与治疗前比较有统计学意义(P均<0.05)。结论:ACS患者存在明显的血栓前状态,肝素抗凝治疗后症状得到改善,血浆F1+2和SFMC是早期诊断ACS和指导抗凝治疗的敏感指标。     

脆弱类杆菌与大肠杆菌的β—葡萄糖醛酸酶活性的测定比较

We determined and compared the beta-glucuronidase (beta-G) activity among strains of B. fragilis and E. coli under the optimum condition. Results showed that the mean beta-G activity of strain B. fragilis ATCC25285 was 94.7u. B. fragilis ATCC25285 strain was selected as the model strain to establish the animal model of bilirubin gallstones because its beta-G activity was obviously higher than that of B. fragilis CDC14462 and E. coli 3362 (O157K88) strain.     

脆弱类杆菌多糖复合物抗原的提取及其鉴定

经酸、ＥＤＴＡ、脱氧胆酸钠和加热处理后从脆弱类杆菌ＡＴＣＣ２５２８５和ＣＤＣ１４４６２提取到两种多糖复合物。每种复合物中糖类与蛋白质的比例接近１：１，两种复合物之间糖类和蛋白质的相对含量世接近，提示有共同的基本结构。三类糖基可能由荚膜多糖和脂多糖成分组成。免疫血清学鉴定的结果表明两种多糖复合物都是本菌特异的表面抗原决定簇。提示可建立更特异免疫学方法诊断本菌感染。     

5株类杆菌外膜蛋白的研究

本文用实验方法１（用ＥＤＴＡ处理等过程）和方法２（用Ｔｒｉｔｏｎ处理等过程）制备脆弱类杆菌处膜蛋白，结果表明方法２优于方法１。多形类杆菌是脆弱类杆菌的亚种，其外膜蛋白的ＳＤＳ－ＰＡ－ＧＥ图型极为相似，而与不同的菌种产黑色素类杆菌，不同的菌属具核梭杆菌的外膜蛋白电泳图型不同，但牙龈类杆菌与脆弱类杆菌属于不同的菌种，其外膜蛋白电泳图型却极为相似，原因尚不能解释。     

DETECTION OF BACTEROIDES FRAGILIS AND BACTEROIDES MELANINOGENICUS BY INDIRECT IMMUNOFLUORESCENCE

This paper presents an evaluation of indirect immunofluorescent and anaerobic culture of B. fra gilis and B. melaninogenicus. 102 clinical specimens were studied. The correlation between these two methods were 87.3'70 for B. fragilis and 86.3To for B. melaninogenicus. In the 102 specimens, the positive rate of l or 2 Bacteroides was 26 (25.5'70) by immuno- fluorescence and 11 (10.7To) by anaerobic culture. The average number of B. melaninogenicus per oil im mersion field in positive anaerobic cultures was 71.9, but was only 4.3 in positive immunofluorescent nega tive cultures, indicating that immunofluorescent is more sensitive than anaerobic culture. No cross im- munofluorescence was detected in B. fragilis, B. me- laninogenicus, 24 strains of other anaerobes and 73 strains of aerobes. This shows that our immuno- fluorescent method is rather specific. The time necessary for anaerobic culture is one week or more, but immunofluorescence requires only an hour. It seems that immunofluorescent assay is more useful for early diagnosis of B. fragilis and B. melaninogeni- cus infections.     

Preparation and immunogenicity of serogroup B meningococcal OS-OMPC conjugates

INrnODUCnONNovaccineisyetavailableforpreventingtheinfectionofNeisSeriameningitidis(NmserogroupB(HuXujing,l996).NmserogIDupBspecificcaPsularPOlysaccharideisaPoorinununogenandisthereforeunsuitableforvaccinepurPoses(Zollingeretal.,1994)-ClassloMPsofNmsempupB,whicharetheInaorantigensinnaturalinfections,havethea-bilitytoinducebactericidalantibodiesinthehumanbody(Van-der-ley-Petal-,l995).However,thisislindtedbythefactthattheNmserogmpBcontainsatleasttendifferentsubtyPes.Aferseveralsubty…     

1120份临床血标本厌氧培养结果分析

对１１２０份临床血标本进行厌氧菌的培养鉴定。厌氧菌培养阳性占３２３份，阳性率２８．４％；其中儿童组３１０份，阳性８８份，阳性率２８．３％；成年组８１０分，阳性２３５份，阳性率２９．０％。两组厌氧菌培养结果差别无显著性（Ｐ＞０．０５）。对３１１株厌氧菌作了１４种抗生素药敏试验的结果，显示厌氧菌对灭滴灵、先锋Ｖ、羧苄青霉素、氯霉素和丁胺卡具有高度敏感性。     

三株B16克隆化细胞体外增殖力及移动性比较研究

本文比较具有不同转移潜能的３个Ｂ１６黑素瘤克隆株（Ｂ１６－１，Ｂ１６－３，Ｂ１６－４）细胞体外的增殖能力和移动性。结果显示，高转移力的Ｂ１６－３株体外增殖力和移动速率显著地低于低转移力的Ｂ１６－１株（Ｐ〈０．０１）。     

红霉素耐药肠球菌的质粒接合试验

目的：研究儿童临床分离的30株肠球菌,红霉素耐药性在同属同种、同属异种和异属细菌之间的传递。方法：使用临床实验室标准化研究所（CLSI）推荐的琼脂稀释法筛选30株耐红霉素的肠球菌,通过滤膜接合法进行质粒接合转移试验,采用PCR检测供体菌、受体菌和接合子ermB基因和转座子Tn1545、Tn917。结果：13株粪肠球供体菌通过质粒接合转移试验后得到13株接合子,红霉素最小抑菌浓度（MIC）≥512μg／ml,除原供体菌1株粪肠球菌阴性外,其余的12株接合子全部携带ermB基因,且ermB基因均同时存在于转座子Tn1545和Tn917;16株屎肠球供体菌和1株海氏肠球供体菌通过质粒接合转移试验后得到17株接合子,红霉素MIC≥512μg／ml,除原供体菌1株屎肠球菌阴性外,其余16株接合子全部携带ermB基因,并且有11株接合子ermB基因同时存在于Tn1545和Tn917,4株接合子ermB基因仅存在于Tn1545,1株接合子ermB基因仅存在于Tn917;30株肠球菌通过质粒接合转移试验后得到的30株金黄色葡萄球菌接合子,红霉素MIC≥512μg／ml,除原供体菌1株粪肠球菌和1株屎肠球菌阴性外,其余的28株接合子全部携带ermB基因,其中ermB基因同时存在于Tn1545和Tn917的为23株,4株接合子ermB基因仅存在于Tn1545,1株接合子ermB基因仅存在于Tn917。结论：肠球菌对红霉素的耐药性可以在同属同种、同属异种和异属之间进行传递;红霉素的耐药性与ermB基因存在一致,ermB基因与Tn1545和Tn917密切相关,ermB基因与Tn1545和Tn917可以在同属同种、同属异种和异属之间进行传递。     

肛周脓肿细菌感染菌群分布研究

①目的探讨肛周脓肿厌氧与需氧茵的菌群分布。②方法选择31例肛周脓肿患，对其脓液中的厌氧茵和需氧菌进行培养鉴定。③结果肛周脓肿感染患中男27例，女4例；感染中共分离出51株细菌，其中厌氧菌30株，需氧菌21株。厌氧菌总检出率为96．8％，需氧菌总检出率为67．4％。单纯厌氧菌感染检出率为32．3％，单纯需氧菌检出率为32％。、厌氧和需氧菌混合感染捡出率为64．5％。在所分离出的30株厌氧菌中，脆弱类杆菌占80％，消化链球菌占13％，普通类杆菌和产黑色素类杆菌各占33％21株需氧菌中，大肠杆菌占71％，肺炎克雷伯菌、产气肠杆菌、阴沟肠杆菌各占9．5％。④结论肛周脓肿男性患病率高于女性；细菌感染菌群分布以脆弱类杆菌和大肠杆菌为主；感染类型以厌氧和需氧菌混合感染居多。