survivin在食管鳞状细胞癌中的表达及其与bcl-2,bax表达的相关性

目的:探讨凋亡抑制基因survivin在食管鳞状细胞癌(简称食管鳞癌)中的表达,及其与bcl-2、bax基因表达的相关性.方法:应用SP免疫组织化学法检测85例食管鳞癌组织及对应癌旁正常食管黏膜组织中survivin,bcl-2和bax蛋白的表达.结果:食管鳞癌组织中,survivin蛋白的表达率为77.64%,显著高于癌旁正常食管黏膜组织的表达率7.06%(P＜0.05).survivin蛋白表达与食管鳞癌的TNM分期及淋巴结转移有关(P＜0.05).survivin表达与bcl-2蛋白表达呈正相关(P＜0.05),而与bax蛋白表达无关(P＞0.05).结论:survivin在食管鳞癌的发生、发展中起重要作用,可能成为食管鳞状细胞癌基因治疗的新靶点.survivin基因可能与bcl-2基因在食管鳞癌的发展中协同作用.     

圆锥角膜细胞凋亡表达的研究

目的检测细胞凋亡在圆锥角膜组织各层的表达情况以期了解圆锥角膜的发病机制。方法将5例正常角膜与11例圆锥角膜制成石蜡切片,采用TUNEL法检测其DNA片段。结果正常角膜仅3例在上皮层有染色较浅的阳性细胞;11例圆锥角膜中10例在上皮层、8例在基质层、6例在内皮层表现出阳性着色,其中6例在三层中均有TUNEL染色阳性细胞。结论圆锥角膜为一种非炎症性疾病,通过对其组织采用TUNEL法检测,推测凋亡可能是圆锥角膜发生的细胞学基础。     

人DC-SIGN真核表达载体的构建及表达

目的构建含有FLAG标签的人DC—SIGN真核表达载体,并在人胚肾293T细胞中进行表达。方法通过PCR方法获得含有FLAG标签的人DC—SIGN分子基因,将其插入到真核表达载体pIRES—neo中。构建的重组质粒pIRES—neO—FLAG—DC—SIGN转染293T细胞,利用流式细胞仪、免疫荧光及WesternBlot检测其表达情况。结果含FLAG标签的人DC—SIGN基因测序正确,PCR和酶切鉴定证明FLAG—DC—SIGN基因已成功连入真核表达载体pIRES—neo中;检测结果显示重组质粒pIRES—neo—FLAG—DC—SIGN在293T细胞中得到表达。结论成功构建了重组质粒pIRES—neo—FLAG—DC—SIGN,且在293T细胞中能有效表达,为后续DC靶向性疫苗研究奠定了基础。     

真核表达载体pIRES2-AcGFP1-Asc12的构建及表达

目的 构建真核表达载体pIRES2-AcGFP1-Ascl2,并在真核细胞HEK293T细胞中表达,为今后研究Ascl2基因在Tfh细胞的相关分子机制奠定实验基础.方法 PCR方法扩增健康人外周血单个核细胞中Ascl2基因,连接至pIRES2-AcGFP1质粒的多克隆位点中,构建pIRES2-AcGFP1-Ascl2重组质粒.通过脂质体转染法对HEK293T细胞进行转染.Realtime-PCR及Westernblot方法分析转染pIRES2-AcGFP1-Ascl2重组质粒的HEK293T细胞中Ascl2表达情况.结果 经Realtime-PCR及Westernblot方法,证实Ascl2基因能够在HEK293T细胞中正确表达.结论 成功建立表达Ascl2基因的pIRES2-AcGFP1-Ascl2重组质粒,并能在HEK293T细胞中表达,为进一步研究Ascl2在自身免疫性疾病中Tfh细胞的相关机制奠定了实验基础.     

小鼠Aire逆转录病毒表达载体的构建及表达

目的：将小鼠Aire基因定向连入MigR1-GFP质粒,得到长期稳定的Aire逆转录病毒表达载体,收集逆转录病毒上清感染胸腺基质细胞,为研究Aire在胸腺细胞终末分化中的作用奠定基础。方法：以小鼠胸腺基质细胞的cDNA为模板扩增得到Aire的ORF片段;将该片段连接入MigR1-GFP质粒;将构建成功的Aire—MigR1-GFP质粒转染293T细胞,收集逆转录病毒上清;使用逆转录病毒上清感染胸腺基质细胞系MTEC9,流式细胞仪检测感染效率,Western blot确定Aire蛋白的表达。结果：（1）成功得到Aire的ORF片段。（2）构建的Aire逆转录病毒表达质粒能够成功表达Aire蛋白。（3）逆转录病毒上清成功感染胸腺基质细胞系MTEC9。结论：成功构建了小鼠Aire逆转录病毒表达载体,并实现了Aire蛋白在胸腺基质细胞系中的强制性表达。     

肾癌FasL表达异常对T淋巴细胞凋亡的影响

目的探讨凋亡相关基因产物FasL蛋白在肾癌中的表达及对T淋巴细胞凋亡的影响.方法采用免疫组织化学方法(VP法)对44例肾癌组织和10例相邻正常肾组织FasL蛋白表达进行检测;TUNEL法检测44例肾癌组织浸润性T淋巴细胞的凋亡;体外培养786-0肾癌细胞株和JurkatT淋巴细胞,流式细胞仪(FCM)检测JurkatT淋巴细胞的凋亡.结果肾癌组织FasL阳性表达率46.5%,高于正常肾组织中FasL的表达(23.2%,P＜0.05);肾癌浸润性T淋巴细胞凋亡率33.1%,和肾癌FasL表达呈正相关(r=0.96,P＜0.01);表达FasL的786-0肾癌细胞株可引起Fas(+)的JurkatT淋巴细胞凋亡.经干扰素-γ(IFN-γ)处理后的786-0细胞株可增强对JurkatT淋巴细胞的细胞毒效应.抗FasL抗体(NOK-1)对Fas介导的凋亡有抑制作用.结论肾癌组织免疫逃避机制之一是通过高表达FasL而引起肾癌浸润性T淋巴细胞凋亡;肾癌组织表达FasL能通过Fas/FasL通路主动杀伤Fas(+)的JurkatT淋巴细胞.     

mGITRL真核表达质粒的构建及其在Lewis细胞中的表达

目的:构建含小鼠GITRL基因的真核表达质粒pIRES2-eGFP/mGITRL,体外转染小鼠肺癌细胞株Lewis细胞。方法:利用PCR方法扩增mGITRL基因,克隆至pIRES2-eGFP载体,选择阳性克隆并进行序列测定。以电穿孔法转染Lewis细胞,通过G418筛选,获得稳定表达细胞株。结果:构建了真核表达质粒pIRES2-eGFP/mGITRL,基因测序与GenBank中发表的序列完全一致,体外转染Lewis细胞,经G418筛选,体外传代30代以上,RT-PCR及流式细胞仪检测该细胞株稳定表达mGITRL。结论:成功构建了真核表达质粒pIRES2-eGFP/mGITRL,并在小鼠Lewis细胞中稳定表达,为进一步研究GITRL的生物学功能提供研究基础。     

Gadd45a表达质粒的构建及在人类T细胞中的表达

目的:构建Gadd45a表达质粒,并诱导该质粒在人类T细胞中的表达.方法:采用反转录PCR法从人胚胎干细胞中扩增Gadd45a的蛋白质编码框,将之克隆至pcDNA3.1载体后,利用电穿孔方法将构建好的表达质粒pcDNA3.1-Gadd45a和空白质粒pcDNA3.1分别转染至Jurkat细胞或正常人CD4+T细胞,分别...     

miR375表达质粒构建及表达研究

目的 寻找一种高效、简便的构建表达miRNA质粒的方法.方法 该研究用PCR 方法直接从小鼠gDNA扩增了包含miRNA375(miR375)前体序列在内的一个126 bp片段以构建质粒pAAv-miR375.该研究用pAAV-miR375转染Hela细胞48 h后,用定量RT-PCR方法和Northern bloc检测Heh细胞中miR375的表达.结果 转染了pAAV-miR375的Hela细胞中有miR375的表达,而在转染了空质粒pAAV-MCS和未转染的Hela细胞中没有检测到miR375的表达.结论 该研究所构建的pAAV-miR375质粒能够表达miR-NA375.作者介绍的这一种构建表达miRNA质粒的方法比以往的方法更快速、高效、简便和保证序列的正确性.     

TNIP1真核表达载体的构建及表达

目的构建肿瘤坏死因子α诱导蛋白3相互作用蛋白1(TNIP1)真核表达载体(p EGFP-N3-TNIP1),观察了解外源TNIP1蛋白的细胞内定位及其在He La细胞中的表达.方法应用RT-PCR从人外周血淋巴细胞中扩增TNIP1基因的开放阅读框(ORF),将目的片段亚克隆入p EGFP-N3中,筛选阳性克隆,提取质粒测序进行鉴定.将表达质粒转染He La细胞,荧光显微镜观察融合蛋白在细胞内的表达与定位,实时荧光定量PCR(q RT-PCR)和蛋白质免疫印迹分别从m RNA水平和蛋白水平来检测TNIP1在He La细胞中的表达情况.MTT实验检测细胞增殖情况、流式细胞仪检测细胞周期.结果重组质粒双酶切鉴定,在1.9 kb左右有明显的条带,DNA测序结果证实重组质粒p EGFP-N3-TNIP1中含有的目的基因片段与Gen Bank上登录号为BC014008.1的TNIP1基因序列完全一致;荧光倒置显微镜观察重组质粒转染He La细胞后有绿色荧光蛋白的表达,转染48 h后通过q RT-PCR和Western blot分别检测到TNIP1m RNA和蛋白质的表达,均较对照明显升高,外源性的TNIP1蛋白主要定位于细胞质中.结论成功构建了p EGFP-N3-TNIP1真核表达载体,外源表达的TNIP1蛋白主要分布于He La细胞的细胞质部分,过表达TNIP1蛋白不影响He La细胞的细胞周期及细胞生长存活.     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

妊娠晚期重度妊高征的监测

重度妊高征表现为高血压、蛋白尿、浮肿等症状 ,严重可以导致母婴死亡。对妊娠足月的重度妊高征 ,可以根据其临产与否及宫颈条件 ,立即决定其为阴道分娩或是剖宫产术。对于妊娠晚期的重度妊高征 ,因其胎龄不足月 ,胎儿生长发育及胎肺成熟度情况需通过一定时间的治疗 ,根据其病情变化来决定其治疗方案或终止妊娠的时机[1,2 ] 。这就需要我们对这一阶段的治疗进行监测 ,防止母儿并发症的发生。现将 2 0 0 0年至今我院收治妊娠晚期重度妊高征 30例的监测结果回顾分析如下。1　资料和方法1.1　研究对象　选择孕 31～ 36周重度妊高征 30例 ,其中 …     

80例局限性银屑病误诊原因分析

本文报告80例局限于小腿或手或足的银屑病。均经皮肤组织病理检查确诊。因部位比较特殊。受多种理化因素影响,使皮疹形态发生轻重程度不同的变化,常看不到典型损害,因而误诊为神经性皮炎,湿疹,慢性皮炎及癣等。作者对误诊原因进行了分析后,提出了鉴别诊断方法。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

降钙素原变化率的测定对细菌性肺炎的评估价值

目的 探讨降钙素原变化率的测定对细菌性肺炎的评估价值.方法 选取住院治疗的细菌性肺炎患者72例,根据治疗效果分为治疗有效组(有效组)47例和治疗无效组(无效组)25例,对治疗有效组和无效组中的降钙素酶原变化及影响肺炎治疗效果的危险因素进行分析.结果 有效组治疗后3天及治疗后7天的降钙素酶原显著低于无效组的患者(P＜0.05);年龄＞65岁、心功能≥3级、COPD、糖尿病、肺部双侧受累(X线示)、菌血症、感染性休克和3天内降钙素酶原变化率＜30％是影响细菌性肺炎治疗效果的危险因素;感染性休克、肺部双侧受累、3天内降钙素酶原变化率＜30％及心功能≥3级是影响细菌性肺炎治疗效果的独立危险因素.结论 测定降钙素原变化率对细菌性肺炎的疗效评估具有重要临床意义,可在临床推广应用.     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。