ABCG2基因在非小细胞肺癌细胞耐药中的作用和机制探究

目的:分析ABCG2基因在多耐药非小细胞肺癌(non small cell lung cancer,NSCLC)细胞的表达变化及其可能参与的机制。方法:选择肺癌细胞A549及耐药A549进行细胞培养,分别给予顺铂及依托泊苷化疗药物治疗;取耐药A549细胞分为空白组(不处理)、对照组(给予siRNA对照)及siRNA-ABCG2组(给予siRNA-ABCG2)。采用CCK8法检测各组细胞的药物抑制率,采用Western blot法检测3组细胞中ABCG2蛋白表达情况。结果:2组细胞药物抑制率变化呈剂量依赖性,同剂量中耐药A549组药物抑制率明显低于A549组。耐药A549组细胞ABCG2蛋白表达水平明显高于A549组。3组细胞药物抑制率呈剂量依赖性,其中同剂量的siRNA-ABCG2组药物抑制率明显高于空白组及对照组。siRNA-ABCG2组细胞ABCG2、p-AKT、p-mTOR蛋白表达水平明显低于空白组及对照组,分别使用p-AKT、p-mTOR的激活剂后,可显著降低干扰ABCG2基因后导致的顺铂和依托泊苷抑制率的增加。结论:ABCG2通过调控PI3K/AKT信号通路在耐药A549的耐药性中发挥重要作用,沉默ABCG2基因可改善耐药A549细胞的耐药性,提示ABCG2可作为改善NSCLC细胞对顺铂及依托泊苷化疗药物的耐药性的潜在靶点。     

蟾毒灵通过抑制乏氧状态下的乳酸生成调节M2型巨噬细胞极化逆转结肠癌耐药

目的 探讨蟾毒灵(Bu)抑制乏氧状态下乳酸生成调节M2型巨噬细胞极化逆转结肠癌耐药的作用。方法 (1)将HCT116细胞分为常氧组(HCT116_N)、乏氧组(HCT116_H)和乏氧+BU组(HCT116_H+BU),常氧组给予RPMI1640培养基进行培养,乏氧组给予含200μmol·L^-1 CoCl₂的RPMI1640培养基进行培养,乏氧+BU组给予含25 nmol·L^-1 BU的RPMI1640培养基(含200μmol·L^-1 CoCl₂)进行培养。(2)用佛波酯(200 ng·mL^-1)将THP-1诱导48 h后成为M0巨噬细胞;将M0巨噬细胞分为空白组(M0)、常氧对照组(HCT116_N-Mφ)、乏氧模型组(HCT116_H-Mφ)、乏氧+乳酸抑制剂(Lactate inhibitor)实验组(HCT116_H+Lactat...     

白花蛇舌草抑制大肠癌耐药裸鼠移植瘤多条信号通路的活化

目的探讨白花蛇舌草(HDW)在体情况下对大肠癌耐药移植瘤的抑制作用及耐药相关信号通路活化的影响。方法采用雄性BALB/c裸鼠接种大肠癌5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药细胞HCT-8/5-FU构建皮下移植瘤动物模型,分为生理盐水(NS)组、HDW组和5-FU干预组,分别给予相应药物干预处理6周,通过测量移植瘤体积和称量移植瘤重量研究HDW对大肠癌耐药移植瘤生长的影响;采用Western Blot检测HDW对移植瘤细胞ERK、JNK、p38、PI3K/Akt信号通路活化的影响。结果构建的裸鼠大肠癌HCT-8/5-FU细胞移植瘤对5-FU具有耐药性,可作为大肠癌耐药研究的动物模型;HDW能显著抑制移植瘤的生长;HDW能抑制HCT-8/5-FU移植瘤细胞ERK、JNK、p38和PI3K/Akt等信号通路的活化。结论 HDW在体具有抑制大肠癌耐药移植瘤生长的作用,并可能通过抑制ERK1/2信号通路、JNK信号通路、p38信号通路、PI3K/Akt信号通路的活化逆转大肠癌耐药。     

姜黄素影响Aβ_(25-35)诱导PC12细胞周期变化与细胞凋亡的可能机制

目的探讨姜黄素(curcum in,Cur)对β-淀粉样肽(25-35)[β-amyloidpeptide-(25-35),Aβ25-35]诱导体外血清饥饿培养的PC12细胞周期异常与凋亡保护作用的可能机制。方法5μmol.L-1Cur预处理同步于G0期的PC12细胞,加入终浓度为25μmol.L-1Aβ25-35处理0～20h,用RT-PCR和Western blot从mRNA及蛋白水平检测p21、CDK4、E2F1、bax的表达。结果与Aβ25-35诱导组比较,Cur保护组p21mRNA和p21蛋白的表达增加;CDK4、E2F1、baxmRNA和CDK4、Bax蛋白的表达降低。结论Cur可能通过上调p21的表达,下调CDK4、E2F1、bax的表达,对Aβ25-35诱导的PC12细胞周期异常与凋亡起保护作用。     

猫眼草黄素对破骨细胞分化及自噬作用的研究

目的 研究猫眼草黄素对破骨细胞分化的影响及自噬在其中的作用.方法 采用核转录因子-κB受体活化因子配体(RANKL)诱导小鼠单核巨噬细胞RAW264.7分化成破骨细胞,空白组给予完全培养基,模型组给予含50.0 ng/mL RANKL的培养基,A～F组给予不同水平猫眼草黄素(0.5、1.0、2.5、5.0、10.0、2...     

沉默miR-572经铁死亡在肾癌细胞凋亡、索拉非尼耐药中的作用机制

目的 探究沉默微小RNA-572(microRNA-572,miR-572)经铁死亡在肾癌细胞凋亡、索拉非尼耐药中的作用。方法 购买人肾癌细胞系786-0,常规培养后分为空白组、过表达组、沉默组,空白组、过表达组、沉默组分别加入常规细胞培养液做空白处理,miR-572过表达质粒、Lipofectamine 2000试剂行过表达转染,miR-572 siRNA、Lipofectamine 2000试剂行沉默转染,随后建立3组细胞耐药细胞株。观察各组细胞miR-572表达量、细胞凋亡、索拉非尼耐药性及p53-SAT1-ALOX15信号通路蛋白表达量。结果 与过表达组比较,沉默组miR-572表达量较低(P<0.05)。与过表达组比较,沉默组24 h、48 h肾癌细胞凋亡率较高(P<0.05)。与过表达组比较,沉默组IC50相对值较低(P<0.05)。与过表达组相比,沉默组p53、SAT1、ALOX15蛋白表达量较高(P<0.05)。结论 沉默miR-572可能通过激活p53-SAT1-ALOX15信号通路,进而激活铁死亡,促进肾癌细胞凋亡、抑制索拉非尼耐药。     

姜黄素对β-淀粉样肽(25-35)诱导去血清培养PC12细胞周期异常与细胞凋亡的影响

目的探讨姜黄素(Cur)对β-淀粉样肽(25-35)(βamyloid peptide-25-35,Aβ25-35)诱导体外去血清培养的PC12细胞周期异常与凋亡的影响.方法PC12细胞用常用的去血清培养使细胞同步于G0期,用MTT比色法分析细胞存活率,流式细胞仪检测分析细胞周期与凋亡,Hoechst33258荧光染色观察细胞核凋亡的形态学改变,RT-PCR和Western blot从mRNA及蛋白水平检测p21基因的变化.结果用不同终浓度(0,1.25,2.5,5,10,20 μmol·L-1)Cur预处理去血清培养的PC12细胞1 h,再用Aβ25-35处理24 h,细胞存活率增加;Aβ25-35引起的S期细胞百分率明显减少,凋亡率明显降低(P＜0.01),亚二倍体峰消失;核固缩、碎裂减少;p21 mRNA表达和P21蛋白表达增加.结论Cur可以影响Aβ25-35诱导的去血清培养PC12细胞周期分布及减少凋亡,可能与上调p21的表达有关.     

竹节香附素A抗炎作用的研究北大核心CSCD

目的在构建核转录因子-κB(NF-κB)通路报告基因模型后,研究竹节香附素A(RDA)抗炎的作用及其作用机制。方法用双荧光素酶报告基因技术,以p NF-kappa B-Luc(p NF-κB-Luc)、pr L-tk质粒转染RAW 264.7细胞,脂多糖(LPS)为激活剂,构建靶向NF-κB通路的报告基因模型,RDA和吡咯烷二硫氨基甲酸酯(PDTC)分别给药验证模型。空白组给予空白培养基,模型组给予含LPS的培养基,对照组给予含PDTC的培养基,实验组给予含RDA的培养基。用Western-blot技术检测RDA对细胞蛋白p65和IκBα表达的影响。结果当LPS浓度为10μg·m L^(-1),转染试剂量为2μL时,成功构建靶向NF-κB通路的报告基因模型。RDA能够降低转染后细胞内p65和IκBα亚基的磷酸化,显著抑制NF-κB信号通路。结论本文构建的模型具有快速、稳定、特异、高通量等特点,可用于抗炎活性成分筛选,确认RDA的抗炎机制与NF-κB通路有关。     

阿托伐他汀对肌细胞增强因子2A基因突变型血管平滑肌细胞的作用

目的 观察阿托伐他汀对肌细胞增强因子2A (MEF2A)基因突变型血管平滑肌细胞(VSMC)的作用.方法 将人主动脉血管平滑肌细胞分为3组:①WT组,转染野生型(WT) MEF2A质粒;②△21组,转染21碱基缺失突变型(△21) MEF2A质粒;③阿托伐他汀组,转染MEF2A△21质粒,并在实验前向该组细胞培养基中加入阿托伐他汀溶液至终浓度100 μmol·L-1.通过溴化噻唑基蓝四唑(MTT)法和Millicell小室观察VSMC的增殖和迁移变化,免疫印迹(Western blotting)检测VSMC内平滑肌α肌动蛋白、SM22α、骨桥蛋白、p38和ERK1/2丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)信号通路表达差异.结果 MEF2A基因△21突变可促进VSMC增殖、迁移和表型转化.而阿托伐他汀可抑制这些变化,并且明显下调磷酸化p38和ERK1/2信号通路表达.结论 阿托伐他汀通过作用于p38和ERK1/2 MAPK信号通路,以抑制MEF2A基因突变诱导的VSMC增殖、迁移和表型转化.     

野黄芩苷对血管紧张素Ⅱ诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞的增殖及ERK1/2、p38 MAPK信号通路的影响

目的:研究野黄芩苷对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞(CFs)的增殖及细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路的影响。方法:体外分离培养新生大鼠CFs,将细胞分为空白组(空白培养基)、AngⅡ组(10~(-7)μmol/L)、50μmol/L野黄芩苷组和AngⅡ(10~(-7)μmol/L)+5、10、20、50μmol/L野黄芩苷组,培养48 h后,采用CCK-8法检测细胞增殖能力。另取细胞分为空白组(空白培养基)、AngⅡ组(10~(-7)μmol/L)和AngⅡ(10~(-7)μmol/L)+5、10、20、50μmol/L野黄芩苷组,培养48 h后,检测细胞中Ⅰ型胶原(ColⅠ)、ColⅢ、α-平滑肌肌蛋白(α-SMA)m RNA表达和细胞培养液中羟脯氨酸(HYP)含量,以及细胞中ERK1/2、p38 MAPK磷酸化水平。结果:5、10、20、50μmol/L的野黄芩苷均能显著抑制AngⅡ诱导的CFs的增殖(P<0.05),显著下调AngⅡ刺激的CFs中ColⅠ、ColⅢ和α-SMA m RNA的表达(P<0.05),显著抑制AngⅡ刺激后细胞培养液中HYP含量的增加和细胞中ERK1/2、p38 MAPK的磷酸化(P<0.05),且具有一定的浓度依赖性。结论:野黄芩苷对AngⅡ诱导的CFs的增殖具有一定的抑制作用,其机制可能与抑制ERK1/2、p38 MAPK的磷酸化有关。     

β-蜕皮甾酮对高糖诱导的大鼠成骨细胞增殖、分化和凋亡的影响

目的探讨β-蜕皮甾酮对高糖诱导的大鼠成骨细胞增殖、分化和凋亡的影响及分子机制。方法将大鼠成骨细胞随机分为空白组(5.5 mmol·L-1葡萄糖)、模型组(25 mmol·L-1葡萄糖)、低、中、高剂量实验组(1,5,25μmol·L-1β-蜕皮甾酮+25 mmol·L-1葡萄糖)、p38 MAPK激活组(10μmol·L-1 anisomycin+25μmol·L-1β-蜕皮甾酮+25 mmol·L-1葡萄糖)、阴性对照组(与anisomycin等量的PBS+25μmol·L-1β-蜕皮甾酮+25 mmol·L-1葡萄糖)。细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡情况;用蛋白质印迹法检测Run相关基因2(RunX2)、碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)和磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK)蛋白表达。结果空白组、模型组、低、中、高剂量实验组、阴性对照组、p38 MAPK激活组大鼠成骨细胞活性分别为(102.41±5.34)%,(68.57±5.25)%,(75.36±7.06)%,(79.13±8.24)%,(83.20±8.89)%,(83.17±8.93)%,(71.11±6.16)%;细胞凋亡率分别为(4.23±0.56)%,(18.57±1.96)%,(13.08±1.34)%,(10.30±0.95)%,(8.25±1.08)%,(8.36±1.12)%,(16.48±1.56)%;RunX2蛋白表达水平分别为0.81±0.07,0.31±0.04,0.45±0.06,0.55±0.04,0.61±0.08,0.63±0.07,0.41±0.05;ALP蛋白表达水平分别为0.75±0.08,0.38±0.05,0.49±0.07,0.59±0.05,0.65±0.08,0.68±0.07,0.44±0.06;OCN蛋白表达水平分别为0.69±0.05,0.28±0.03,0.34±0.05,0.47±0.04,0.45±0.05,0.46±0.05,0.31±0.04;p-p38 MAPK蛋白表达水平分别为0.22±0.04,0.84±0.09,0.59±0.06,0.41±0.04,0.32±0.04,0.32±0.07,0.74±0.07;模型组与空白组相比,低、中、高剂量实验组与模型组相比,p38 MAPK激活组与阴性对照组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论β-蜕皮甾酮可能通过抑制p38 MAPK信号通路促进大鼠成骨细胞增殖、分化,抑制细胞凋亡。     

达原饮中芍药苷和黄芩苷在大鼠体内药动学研究

目的:建立同时测定大鼠血浆中芍药苷和黄芩苷浓度的高效液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)方法,并研究大鼠体内达原饮的药代动力学。方法:采用蛋白质沉淀法处理血浆样品,色谱柱为Inersil ODS柱(4.6 mm×50 mm,5μm),流动相为水-乙腈梯度洗脱,柱温为35℃;流速为0.5 mL·min^-1。质谱采用电喷雾离子源(ESI),选择离子反应监测(SRM)模式。结果:该方法准确度、精密度、回收率和基质效应均符合生物基质样品测试要求,芍药苷和黄芩苷的线性范围均为5~2000 ng·mL^-1。芍药苷和黄芩苷的药代动力学参数AUC为(2.300374×10^4±7.42703×10^3)、(2.3423881×10^5±6.678954×10^4)ng·mL^-1·min;T1/2z为(126.65±34.65)、(168.18±46.44)min;Tmax为(30.00±0)、(27.50±6.12)min;Cmax为(170.44±53.76)、(1645.42±464.35)ng·mL^-1。结论:建立的大鼠血浆中芍药苷和黄芩苷浓度测定的LC-MS/MS方法简便易行,准确灵敏,适用于达原饮在大鼠体内的药代动力学研究。     

姜黄素对结核小鼠复发及p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路的影响

目的研究姜黄素对结核小鼠复发及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路的影响。方法将45只C57BL/6小鼠随机分为模型组(n=15)、实验组(n=15)和对照组(n=15),所有小鼠均尾静脉注射结核分枝杆菌H37RV(1×10⁷ CFU·mL^-1)0.1 mL。4周后,实验组腹腔注射异烟肼10 mg·kg^-1+姜黄素60 mg·kg^-1,对照组腹腔注射异烟肼10 mg·kg^-1,模型组腹腔注射等量生理盐水,qd,连续干预4周。4周后各组小鼠均每周腹腔注射肿瘤坏死因子-α(TNF-α)抗体50μg,每天1次,连续4周。分别于药物干预结束后及诱导结束后用分枝杆菌中性罗氏培养管检测小鼠肺、脾组织荷菌量;以苏木精-伊红(HE)染色法观察各组小鼠肺组织病理学形态;以蛋白质印迹(WB)法检测小鼠肺组织中p-p38 MAPK蛋白的表达水平。结果药物干预结束后,模型组、对照组和实验组小鼠肺组织中荷菌量分别为(3.68±1.15),(1.13±0.12),(1.02±0.29)LgCFU·mL^-1,脾组织中荷菌量分别为(4.26±0.39),(2.12±0.13),(2.05±0.11)LgCFU·mL^-1,与模型组比较,实验组和对照组小鼠肺、脾组织中荷菌量均明显降低(均P<0.05),但实验组和对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。诱导结束后,模型组、对照组和实验组小鼠肺组织中荷菌量分别为(4.43±0.29),(4.03±0.10),(3.72±0.09)LgCFU·mL^-1,脾组织中荷菌量分别为(4.53±0.44),(3.97±0.22),(4.05±0.21)LgCFU·mL^-1,小鼠肺组织中小肉芽肿面积比分别为(8.65±0.32)%,(4.21±0.36)%,(3.98±0.52)%,小鼠肺组织中p-p38 MAPK蛋白相对表达量分别为1.47±0.33,1.13±0.35,0.76±0.25,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论姜黄素可通过降低p38 MAPK信号通路蛋白表达而抑制小鼠结核复发。     

HPLC法同时测定甲硝唑含漱液中甲硝唑和羟苯乙酯含量

目的建立同时测定甲硝唑含漱液中甲硝唑和羟苯乙酯含量的方法。方法高效液相色谱法,选用phenomenex-C18（4.6×250mm,5μm）柱,以乙腈∶水（25∶75）为流动相,检测波长为255nm。结果甲硝唑和羟苯乙酯的回归方程分别为：Y=1.3892×10^4X-1.068226×10^4（r=0.9999,n=9）和Y=1.092077×10^5X-2.022870×10^4（r=0.9999,n=9）;线性范围分别为2.7-270.8μg.mL^-1和0.2-53.0μg.mL^-1;平均回收率分别为104.5%和98.3%。结论所用方法简便快速,结果准确可靠,可作为甲硝唑含漱液的质量控制方法。     

LC-MS/MS法测定不同给药方式下炎琥宁在比格犬体内浓度及药代动力学研究

目的建立比格犬血浆中炎琥宁的LC-MS/MS测定方法,研究注射给药和口服给药在比格犬体内的药代动力学特征。方法用单剂量、两制剂、两周期、空腹、交叉试验设计,比格犬6只随机分为2组,分别注射和口服给予20 mg·kg-1炎琥宁。采集不同时间点的血液样本,经沉淀蛋白后,进行LC-MS/MS分析。以乙腈-0.5%甲酸水梯度洗脱,用ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱分离,选用电喷雾离子源,炎琥宁用负离子模式,卡马西平(内标)用正离子模式,选择多反应监测模式测定炎琥宁的血药浓度,用WinNonlin 6.0软件计算相关药代动力学参数。结果在10.0~1.0×10^5 ng·mL^-1(r=0.9975)内,炎琥宁与内标的峰面积与浓度呈良好的线性关系,定量下限为10.0 ng·mL^-1。比格犬血浆中炎琥宁的药代动力学参数:炎琥宁注射给药组比格犬的t1/2为(2.56±0.72)h,Cmax为(7.02×10^4±6691.65)ng·mL^-1,AUC0→∞为(1.39×10^4±1568.66)ng·mL^-1·h,Vd为(44.50±14.06)L·mg^-1;炎琥宁口服给药组比格犬的t1/2为(1.76±0.56)h,Cmax为(351.65±138.53)ng·mL^-1,AUC0→∞为(587.19±266.48)ng·mL^-1·h,Vd为(1252.30±575.81)L·mg^-1,口服绝对生物利用度为(4.16±1.55)%。结论本研究首次建立了适合于炎琥宁在比格犬体内的药代动力学研究的LC-MS/MS分析方法,为体内药代动力学研究提供基础。炎琥宁注射给药与口服给药药代动力学特征具有一定差异,可为炎琥宁新剂型的研究提供一定的参考。     

胡桃醌通过p38/JNK MAPK信号通路调控口腔鳞癌Tac8113细胞增殖和凋亡

目的:探讨胡桃醌通过p38/c-Jun氨基末端激酶(JNK)丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路调控口腔鳞癌Tac8113细胞增殖和凋亡。方法:体外培养口腔鳞癌Tac8113细胞,分别给予终浓度为0,5,10,20μmol·L^-1的胡桃醌,继续培养24 h,检测细胞增殖、细胞凋亡和活性氧(ROS)水平,同时检测Tac8113细胞中p38、p-p38、JNK、p-JNK和Caspase-3蛋白表达水平。结果:与空白对照组比较,给予胡桃醌处理后,Tac8113细胞增殖率降低,Tac8113细胞凋亡率和ROS水平增加(P<0.05),且随着胡桃醌剂量增加,细胞增殖率、凋亡率和ROS变化越显著(P<0.05)。与空白对照组比较,给予胡桃醌处理后,Tac8113细胞p38和JNK蛋白表达变化不显著(P>0.05);p-p38、p-JNK和Caspase-3蛋白表达增加(P<0.05),且随着胡桃醌剂量增加,增加越显著(P<0.05)。结论:胡桃醌可能通过激活p38/JNK MAPK信号通路来诱导Tac8113细胞凋亡,从而达到抑制Tac8113细胞的目的。     

L型钙通道介导垂体腺苷酸环化酶激活肽38对大鼠胰岛素分泌的促进作用及其机制研究

目的研究垂体腺苷酸环化酶激活肽38(PACAP38)对大鼠胰岛素分泌的影响及其机制。方法 (1)将大鼠胰岛和胰岛细胞分为4组:正常组(2.8 mmol·L^-1葡萄糖)、模型组(8.3 mmol·L^-1葡萄糖)和低,高2个剂量实验组(模型组+1,10 nmol·L^-1 PACAP38),测定不同干预下的胰岛素分泌量。(2)将大鼠胰岛和胰岛细胞分为5组:正常组、模型组、高剂量实验组、阿折地平(L型钙通道阻滞药)组(模型组+0.1μmol·L^-1阿折地平)和联合组(阿折地平组+高剂量实验组),用胰岛素分泌实验和钙成像技术分别检测阿折地平干预下胰岛素分泌量和β细胞内Ca^2+浓度(F-F0值)水平。结果 (1)正常组、模型组和低、高2个剂量实验组的胰岛素分泌量分别为(86.74±4.05),(165.63±5.26),(175.03±5.21)和(209.28±4.13)μu·mL^-1,模型组与正常组相比,胰岛素分泌量明显增加,差异有统计学意义(P<0.01);高剂量实验组与模型组相比,胰岛素分泌显著增加,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)正常组、模型组、高剂量实验组、阿折地平组和联合组的胰岛素分泌量分别为(46.93±4.58),(79.11±8.02),(135.65±3.68),(72.78±7.95),(78.51±5.13)μu·mL^-1;这5组的Ca^2+浓度分别为3.00×10^-2±0.12,6.57×10^-2±0.35,1.40×10^-1±0.46,7.71×10^-2±0.42,8.00×10^-2±0.43,上述指标:模型组与正常组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01);高剂量实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.001);联合组与高剂量实验组比较,差异均有统计学意义(均P<0.001);阿折地平与模型组比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论 PACAP38通过作用于L型钙通道,使β细胞内Ca^2+浓度升高,最终促进胰岛素分泌。     

生长抑素与乌司他丁联合肠内营养治疗重症急性胰腺炎患者的临床研究

目的观察生长抑素与乌司他丁联合肠内营养对重症急性胰腺炎(SAP)患者血管内皮功能及肠黏膜屏障的影响。方法将102例SAP患者,随机分为对照组和试验组,各51例。2组均予生长抑素6 mg,用微量泵进行24 h持续静脉滴注,乌司他丁起始剂量每次10万单位,溶于5%葡萄糖注射液或0.9%NaCl注射液500 mL中静脉滴注,每次1~2 h,每天1~3次,根据患者状况改善情况逐渐减量。对照组给予常规静脉营养支持;试验组给予肠内营养支持。2组均治疗2周。比较2组患者治疗前后炎性因子、血管内皮功能、肠黏膜屏障指标、白蛋白、淀粉酶及急性生理与慢性健康评分(APACHE-Ⅱ)。结果治疗后,试验组白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血栓素B2(TXB2)、血管性血友病因子(vWF)、内皮素(ET)、D-乳酸、二胺氧化酶(DAO)、果糖/甘露醇(L/M)、淀粉酶及APACHE-Ⅱ、白蛋白(ALB)和一氧化氮(NO)水平分别为(18.94±4.05)pg·mL^-1,(22.73±4.29)pg·mL^-1,(15.53±3.31)pg·mL^-1,(211.52±11.24)pg·mL^-1,(103.73±14.83)%,(102.51±11.06)pg·mL^-1,(5.27±6.51)μg·mL^-1,(2.05±0.96)U·mL^-1,0.13±0.05,(428.59±52.35)U·L^-1,6.63±2.11,(4.24±1.18)g·L^-1,(10.71±3.94)U·mL^-1。对照组的上述指标分别为(27.51±6.27)pg·mL^-1,(36.58±5.61)pg·mL^-1,(19.15±4.08)pg·mL^-1,(274.94±13.08)pg·mL^-1,(151.62±14.85)%,(122.82±12.59)pg·mL^-1,(8.14±7.29)μg·mL^-1,(3.41±1.02)U·mL^-1,0.22±0.09,(861.81±74.83)U·L^-1,8.54±2.28,(2.65±1.09)g·L^-1,(5.62±2.08)U·mL^-1,差异均有统计学意义(均P<0.05)。对照组和试验组的药物不良反应发生率分别为3.92%和0,组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论生长抑素与乌司他丁联合肠内营养可以有效抑制SAP患者体内炎症反应,促进血管内皮功能的恢复和肠黏膜屏障的修复。     

隐丹参酮对脑缺血再灌注损伤神经元细胞凋亡的作用

目的探讨隐丹参酮(CTs)抑制c-Jun氨基末端激酶/p38丝裂原活化蛋白激酶(JNK/p38 MAPK)信号通路对脑缺血再灌注损伤(CIRI)神经元细胞凋亡的作用。方法将30只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和实验组,每组10只,模型组和实验组参照改良Longa法制备CIRI模型。造模成功后,实验组腹腔注射CTs溶液(20 mg·kg^-1);模型组和假手术组均腹腔注射等量0.9%NaCl。3组大鼠每天给药1次,连续给药2周。治疗2周后检测各组大鼠的神经功能缺损评分。取新生乳鼠分离大脑皮质神经元细胞,分为正常组、模型组和实验组。实验组用含5μmol·L^-1 CTs的完全培养基预处理,模型组和正常组均用不含CTs的完全培养基预处理,培养24 h后,模型组和实验组建立氧糖剥夺/复氧糖(OGD/R)模型。用噻唑蓝法测定各组细胞的存活率,用TUNEL法检测各组细胞凋亡结果,用Western Blot检测JNK/p38 MAPK信号通路的磷酸化水平。结果与模型组相比,假手术组和实验组的神经功能缺损评分均显著下降[(0.37±0.07),(1.62±0.15)vs(2.63±0.23)分,均P<0.05]。与模型组比较,正常组和实验组的神经元细胞存活率均显著升高[(99.94±7.95)%,(72.37±6.42)%vs(48.57±4.63)%,均P<0.05],凋亡率均明显下降[(6.37±1.22)%,(13.65±2.71)%vs(26.75±4.82)%,均P<0.05],p-JNK相对表达量均明显下降[0.39±0.03,0.45±0.05 vs 0.82±0.08,均P<0.05],p-p38相对表达量均明显下降[0.48±0.04,0.63±0.06 vs 1.25±0.12,均P<0.05]。结论CTs可能通过抑制JNK/p38 MAPK的磷酸化,抑制神经元细胞凋亡,从而改善CIRI大鼠的神经功能。     

屈头鸡果对内毒素致小鼠急性肺损伤的保护作用

目的研究屈头鸡果在内毒素致小鼠急性肺损伤中的作用及其机制。方法将40只SPF级雄性BALB/c小鼠分为正常组、对照组、模型组和实验组,每组各10只。经鼻滴入20 mg·kg^-1脂多糖构建内毒素致小鼠急性肺损伤模型,其中对照组和实验组分别灌胃屈头鸡果2.16 g·kg^-1,正常组和模型组灌胃等量生理盐水。观察各组小鼠肺组织病理学并进行肺损伤评分,比较各组小鼠肺泡灌洗液白细胞介素(IL)-2、IL-4、IL-5、干扰素(IFN)-γ、胱天蛋白酶(caspase)-3和caspase-9水平。结果正常组、对照组、模型组和实验组小鼠肺损伤评分分别(1.25±0.22),(1.10±0.31),(7.26±1.27),(4.31±1.05)分;IL-2分别为(103.35±5.53),(101.98±6.37),(57.25±5.29),(79.64±4.78)pg·mL^-1;IFN-γ分别为(79.76±4.69),(83.14±4.98),(41.51±5.14),(67.91±4.42)pg·mL^-1;IL-4分别为(23.17±2.16),(21.86±2.62),(59.01±3.86),(38.89±3.28)pg·mL^-1;IL-5分别为(59.32±3.17),(61.60±4.76),(93.98±5.22),(74.14±4.77)pg·mL^-1;caspase-3分别为(31.48±3.12),(33.01±4.31),(97.66±5.85),(59.14±4.55)pmol·L^-1;caspase-9分别为(55.21±4.67),(53.39±5.22),(108.81±6.24),(77.53±5.85)pmol·L^-1,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论屈头鸡果可有效改善内毒素致小鼠急性肺损伤,其作用机制可能与调控Th1/Th2平衡有关。