Irisin通过Sirt1/UCP2拮抗二氯化钴诱导的心肌损伤作用

目的 探讨肌肉因子Irisin调节胞内保护蛋白Sirt1和线粒体解偶联蛋白2(uncoupling protein 2,UCP2)在心肌缺氧过程中发挥的作用及具体机制。方法 以CoCl₂作用H9c2心肌细胞24 h,构建心肌细胞体外缺氧模型。实验分为6组：control组、Irisin 10 nmol·L^-1组、Irisin 20 nmol·L^-1组、CoCl₂模型组、CoCl₂+Irisin 10 nmol·L^-1治疗组、CoCl₂+Irisin 20 nmol·L^-1治疗组。CCK-8法检测细胞存活率，Flow cytometry测定细胞凋亡和线粒体膜电位，探针法指示细胞内活性氧(reactive oxygen species, ROS)高低水平，Western blot法检测细胞内Sirt1、UCP2、Bcl-2、Bax、cleaved-caspase3的表达水平。结果 心肌细胞H9c2缺氧模型组细胞活力下...     

TDP-43异常聚集在阿特拉津诱导多巴胺能神经元线粒体功能障碍中的作用

目的探讨阿特拉津(ATR)诱导TDP-43异常聚集对线粒体功能的影响。方法以大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12)作为多巴胺(DA)能神经元体外模型,采用不同浓度ATR(0、20、40和80μmol/L)处理细胞24 h,40μmol/L ATR处理细胞不同时间(0、12、24、36、48、60和72 h),CCK-8法检测细胞增殖活性;蛋白印迹(Western blot)检测细胞TH、DAT、VMAT2、Hsp60、Lonp1、YME1L1、CLPP、MFN1、MFN2、FIS1、OPA1、DRP1和TDP-43的表达水平;免疫荧光法观察细胞线粒体膜电位、线粒体数量、超氧化物阴离子及TDP-43在细胞中的表达和定位。结果ATR呈剂量和时间依赖性地抑制PC12细胞增殖活性(F=535.5,P<0.001;F=387.1,P<0.001)。与对照组相比,ATR染毒组TH、DAT和VMAT2蛋白水平明显降低(F=327.6,P<0.001;F=31.12,P<0.05;F=505.1,P<0.001),线粒体融合蛋白MFN1、MFN2和OPA1蛋白水平明显降低(F=38.53,P<0.001;F=8.781,P<0.05;F=60.01,P<0.001),线粒体分裂蛋白FIS1、DRP1蛋白水平明显升高(F=26.23,P<0.05;F=26.23,P<0.05),Lonp1、TDP-43、Hsp60、YME1L1和CLPP蛋白水平明显升高(F=102.7,P<0.001;F=58.8,P<0.001;F=241.6,P<0.001;F=241.6,P<0.001;F=20.06,P<0.05);TDP-43蛋白异常聚集,并向细胞浆弥散;超氧化物阴离子水平明显升高;线粒体数量及膜电位明显下降(F=73.371,P<0.001;F=22.65,P<0.001;F=167.7,P<0.001)。结论在本试验条件下,ATR染毒通过诱导TDP-43蛋白聚集和易位,激活线粒体未折叠蛋白反应,导致DA能神经元线粒体功能障碍。     

芪苈强心胶囊通过PI3K/AKT/GSK3β信号通路延缓氧化应激损伤心肌细胞线粒体途径凋亡

目的探讨芪苈强心胶囊对氧化应激损伤心肌细胞线粒体途径凋亡的作用及机制。方法动物实验:通过结扎SD大鼠左冠状动脉前降支建立心梗后慢性心力衰竭(慢性心衰)大鼠模型,按分组分别灌胃给予芪苈强心超微粉(QLQX)或生理盐水4周。彩超检测心功能,ELISA法及荧光法检测血清乳酸脱氢酶(LDH)释放水平、活性氧(ROS)表达水平及超氧化物歧化酶(SOD)活性,TUNEL检测心肌细胞凋亡率,Western印迹法测凋亡相关蛋白表达水平及信号通路相关因子p-AKT/AKT和p-GSK3β/GSK3β表达相对比。细胞实验:使用H9c2心肌细胞给予或不给予QLQX或PI3K抑制剂LY294002,然后暴露于H2O2中共孵育24 h,MTS检测H9c2细胞生存活性,检测LDH和ROS表达水平及SOD活性,QRT-PCR法检测血红素氧合酶(HO-1)和过氧化氢酶(CAT)mRNA表达水平。流式细胞术测H9c2细胞凋亡率,Western印迹法测凋亡相关蛋白及信号通路相关因子蛋白表达水平。同时评估线粒体分裂、线粒体通透性转运孔(m PTP)开放和线粒体膜电位(MMP)水平。结果动物实验结果显示,与假手术组相比,模型组大鼠血清LDH和ROS水平显著增加,SOD活性降低(P<0.01);心肌细胞凋亡率明显增加,促凋亡蛋白Bax、细胞色素c、凋亡蛋白酶激活因子1(Apaf-1)、活化胱天蛋白酶9、活化胱天蛋白酶3蛋白表达水平升高(P<0.01);Bcl-2蛋白表达水平、p-AKT/AKT及p-Gsk3β/Gsk3β蛋白表达相对比降低(P<0.01),心功能下降(P<0.01)。给予不同剂量QLQX后均不同程度降低心衰大鼠血清LDH释放水平和ROS表达水平,升高SOD活性(P<0.05);抑制心肌细胞凋亡率及促凋亡蛋白表达,升高Bcl-2蛋白表达、p-AKT/AKT和p-GSK3β/GSK3β相对比,提高心衰大鼠心功能(P<0.05)。细胞实验结果显示,与H2O2组相比,QLQX促进H2O2损伤H9c2心肌细胞24 h后细胞增殖,抑制LDH释放水平和ROS表达水平,升高SOD活性、HO-1及CAT mRNA表达水平(P<0.01);抑制H9c2细胞凋亡率,下调上述促凋亡蛋白表达水平,上调Bcl-2蛋白表达、p-AKT/AKT及p-Gsk3β/Gsk3β相对比(P<0.01)。同时,QLQX抑制H2O2损伤H9c2细胞线粒体分裂、mPTP开放及MMP下降(P<0.01)。然而,QLQX改善氧化应激诱导H9c2心肌细胞线粒体损伤及凋亡作用可被PI3K抑制剂LY294002阻断。结论 QLQX可能通过激活PI3K/AKT/Gsk3β通路延缓氧化应激损伤心肌细胞线粒体依赖性凋亡。     

蛇床子素通过PINK1/Parkin通路诱导HeLa细胞自噬

目的 探讨蛇床子素促进宫颈癌HeLa细胞发生自噬的潜在作用机制。方法 不同浓度蛇床子素(0、10、20、40、80、160、240、320 mg·L^-1)作用于HeLa细胞,MTT法检测蛇床子素对HeLa细胞增殖的抑制作用;透射电镜观察经蛇床子素干预的HeLa细胞形态;单丹磺酰尸胺(monodansylcadaverine, MDC)染色检测自噬水平;流式细胞术检测活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平;Western blot分析线粒体相关蛋白MFN1、DPR1表达水平;JC-1荧光探针检测线粒体膜电位变化;建立裸鼠宫颈癌体内移植瘤模型探讨蛇床子素对宫颈癌的抑制作用;Western blot检测PINK1、Parkin和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平。结果 蛇床子素能明显抑制HeLa细胞增殖;通过透射电镜观察,经蛇床子素干预的HeLa细胞有典型的自噬小体形成;MDC染色荧光强度增强,细胞发生自噬;线粒体融合蛋白MFN1表达下调,分裂蛋白DRP1表达上调;JC-1显示线粒体膜电位下降;流式细胞术检测结果显示细胞内ROS水平升高,且能被自噬...     

高脂通过线粒体通路诱导H9c2心肌细胞损伤

目的探讨高脂通过线粒体凋亡通路对H9c2心肌细胞的损伤作用。方法棕榈酸(0～0.4 mmol·L~(-1))刺激H9c2心肌细胞24 h和0.2 mmol·L~(-1)棕榈酸刺激H9c2心肌细胞(0～48 h);MTT法评估细胞生长状态;活性氧试剂盒检测细胞内活性氧水平;凋亡试剂盒检测细胞凋亡情况;线粒体膜电位试剂盒检测线粒体膜电位变化;免疫印迹法检测细胞内线粒体凋亡相关蛋白Cyt-C、Cleaved casepase-3、Bax、Bcl-2表达水平。结果棕榈酸刺激H9c2心肌细胞24 h,棕榈酸0.2、0.4 mmol·L~(-1)组细胞增殖率均出现明显下降;细胞内活性氧水平逐渐升高,线粒体膜电位下降,细胞凋亡增加。棕榈酸(0.2 mmol·L~(-1))刺激H9c2心肌细胞24、36、48 h均引起细胞增殖率明显下降。棕榈酸(0.4 mmol·L~(-1))刺激H9c2心肌24 h,线粒体相关蛋白Cyt-C、Cleaved casepase-3、Bax表达均明显增高(P <0. 05),而Bcl-2明显降低(P <0. 05)。结论线粒体凋亡信号通路可能对高脂所致H9c2心肌细胞损伤起重要作用。     

苦参碱对阿霉素所致H9c2心肌细胞损伤的保护作用及与线粒体Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶关系的研究

目的：研究苦参碱对阿霉素所致H9c2心肌细胞损伤的保护作用及其机制。方法：将H9c2心肌细胞培养,取2~3代细胞进行试验,共分为4组。对照组：接受生理盐水作为干预因素;阿霉素组：接受0.5 mg·L^-1阿霉素作为损伤模型;苦参碱+阿霉素组：接受0.5 mg·L^-1阿霉素和不同浓度苦参碱（50,150,200 mg·L^-1）作为干预因素;苦参碱组：接受不同浓度苦参碱（50,150,200 mg·L^-1）作为干预因素。以上各组相应干预24 h后,应用流式细胞仪检测H9c2心肌细胞凋亡水平,应用分光光度法检测线粒体Na⁺-K⁺-ATP酶、Ca²⁺-ATP酶活性,利用JC-1法检测线粒体膜电位。结果：与阿霉素组相比,苦参碱+阿霉素组H9c2心肌细胞凋亡显著减少、线粒体Na⁺-K⁺-ATP酶、Ca²⁺-ATP酶活性显著升高（P<0.05）、线粒体膜电位显著改善。结论：苦参碱对阿霉素所致H9c2心肌细胞有保护作用,减轻心肌细胞凋亡,改善线粒体膜电位、提高线粒体Na⁺-K⁺-ATP酶、Ca²⁺-ATP酶活性。     

槲皮黄酮对高糖诱导的心肌H9c2细胞凋亡和氧化应激的抑制作用

摘要：目的:观察槲皮黄酮对高糖刺激心肌H9c2细胞凋亡和活性氧（ROS）水平的影响。方法:体外培养H9c2细胞,并将其分为对照组、高糖组(25 mmol·L-1)、高糖+槲皮黄酮低浓度组(25 mmol·L-1+50μmol·L-1)、高糖+槲皮黄酮中浓度组(25mmol·L-1+100μmol·L-1)和高糖+槲皮黄酮高浓度组(25 mmol·L-1+200μmol·L-1)。CCK8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,DCFH-DA检测细胞内ROS水平,Western blot检测细胞中磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、p-PI3K、Akt（丝氨酸/苏氨酸激酶）和p-Akt蛋白表达;采用PI3K抑制剂LY294002和槲皮黄酮共同处理H9c2细胞后,检测了细胞凋亡率及ROS水平。结果:与对照组相比,高糖诱导的心肌H9c2细胞活力、PI3K和Akt磷酸化蛋白水平显著降低,细胞凋亡率和ROS水平显著增加（P<0.05）;槲皮黄酮可诱导高糖刺激的心肌H9c2细胞活力升高,细胞凋亡率和ROS水平降低,PI3K和Akt磷酸化蛋白水平明显上调（P<0.05）。LY294002能明显降低槲皮黄酮对H9c2细胞凋亡和ROS产生的抑制作用。结论:槲皮黄酮可通过调控PI3K/Akt信号通路改变高糖刺激心肌H9c2细胞活力的降低及凋亡率和氧化应激的增加。     

田蓟苷调控p53/NOX4信号通路抗缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤的机制

目的:探究田蓟苷(tilianin, Til)预处理对缺氧/复氧(H/R)诱导的H9c2心肌细胞的保护作用。方法:体外培养H9c2心肌细胞，将其分为正常(Normal)组、模型(H/R)组、田蓟苷(Til)组、p53激动剂(Nutlin-3a)组、田蓟苷+p53激动剂(Til+Nutlin-3a)组，缺氧12 h再复氧6 h,建立H/R模型。CCK-8法测H9c2细胞活力，化学荧光法测ROS水平，试剂盒测LDH、MDA、SOD水平，JC-1法测线粒体膜电位(ΔΨ_m),Annexin-FITC/PI和Fluo-3 AM分别结合流式细胞仪检测细胞凋亡率和Ca²⁺荧光强度，RT-PCR测定p53、NOX4、Bax、Bcl-2 mRNA表达，免疫蛋白印迹法检测p53、NOX4、Bax、Bcl-2、Nrf2、HO-1蛋白表达，免疫荧光法测定p53、NOX4蛋白表达。结果:相较于H/R组，Til组H9c2细胞活力增强(P<0.01),ROS、LDH、MDA水平下降(P<0.01),SOD水平上升(P<0.01),ΔΨ_m     

抑制PARP-1表达在棕榈酸诱导大鼠心肌细胞凋亡中的保护作用

目的探讨抑制PARP-1表达缓解棕榈酸诱导的H9C2心肌细胞凋亡效果及其作用机制。方法取H9C2细胞随机分成正常组、PA组和抑制组。PA组接受0.4μmol/L PA干预,抑制组接受20 nmol/L PARP-1抑制剂+0.4μmol/L PA干预,正常组不接受任何干预。干预24 h后测定各组细胞凋亡情况、线粒体电位、ROS水平和凋亡相关蛋白。结果抑制组细胞存活抑制率明显高于PA组(P0.05)。ROS测定结果显示,抑制组ROS水平低于PA组。线粒体膜电位结果显示,抑制组细胞线粒体跨膜电位高于PA组,而弱于对照组。流式细胞仪检测结果显示,PA组活细胞率明显低于对照组(P0.01),而细胞凋亡率明显高于对照组(P0.01),抑制组活细胞率明显高于PA组(P0.01),而细胞凋亡率明显低于PA组(P0.01)。抑制组H9C2细胞的PARP-1蛋白表达(25.84±6.47)明显低于对照组(96.94±8.74)%和PA组(89.72±7.55)%(P0.05),抑制组H9C2细胞的Caspase-3蛋白(44.66±7.72)%和Bax蛋白(48.62±7.58)%表达明显低于PA组(95.44±12.58)%和(88.28±10.25)%(P0.05),但高于对照组H9C2细胞(23.45±6.25)%和(20.57±6.22)%(P0.05)。结论抑制PARP-1表达能缓解PA脂毒性引起H9C2心肌细胞凋亡,其作用机制可能为提升心肌细胞线粒体活性,抑制细胞ROS水平和细胞凋亡蛋白表达。     

Panax notoginseng saponin Rl attenuates allergic rhinitis through AMPK/DRP1 mediated mitochondrial fission北大核心CSCD

目的探讨三七皂苷(notoginsenoside R1,PNS-R1)是否通过AMP激活蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)/线粒体裂变关键蛋白(dynamin-related protein 1,DRP1)介导的线粒体裂变减轻过敏性鼻炎(allergic rhinitis,AR)。方法利用不同剂量PNS-R1治疗卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)诱导的AR小鼠,通过观察擦鼻、打喷嚏的过敏症状和鼻组织的HE染色探索PNS-R1在AR中的抑制作用。通过酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清IgE水平和鼻灌洗液(nasal lavage fluid,NLF)炎性细胞因子水平,Western blot检测凋亡相关蛋白。在体外,利用IL-13刺激人鼻黏膜上皮细胞(human nasal epithelial cells,HNEpC),观察细胞凋亡、线粒体膜电位、细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)和线粒体ROS(mtROS)生成、AMPK/DRP1,TXNIP/NLRP3炎症小体的表达水平以及DRP1易位情况。结果PNS-R1减轻了AR小鼠的过敏症状,HE染色炎性细胞减少,降低血清OVA特异性IgE水平以及NLF中IL-4、IL-6和IL-8的水平。在体外,PNS-R1上调IL-13刺激后的线粒体膜电位,降低ROS和mtROS生成、减少cleaved-caspase-3、Bax和上调Bcl-2表达,以AMPK依赖性方式下调DRP1磷酸化(Ser 616)和DRP1在线粒体膜上的易位,减少TXNIP/NLRP3表达。结论PNS-R1通过抑制AMPK/DRP1信号轴及随后的TXNIP/NLRP3信号轴保护线粒体的完整性,缓解AR。     

Salinomycin对乳腺癌阿霉素耐药细胞株MCF-7/DOX的增殖抑制作用及机制

目的本研究旨在探讨Salinomycin对乳腺癌阿霉素耐药细胞株MCF-7/DOX增殖和凋亡的影响及可能作用机制。方法 MTS实验检测Salinomycin对MCF-7/DOX细胞增殖的影响;Annexin V-FITC/PI染色检测Salinomycin对MCF-7/DOX耐药细胞凋亡的影响;DCFH-DA染色检测Salinomycin对MCF-7/DOX耐药细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)产生的影响;JC-1法测定细胞线粒体膜电位;Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白BAX、BCL-2、caspase-3和caspase-9的表达变化。结果 Salinomycin能明显抑制MCF-7/DOX耐药细胞增殖,且具有浓度依赖性;流式分析发现Salinomycin能够诱导MCF-7/DOX细胞凋亡,增加细胞内ROS水平,降低细胞线粒体膜电位;与对照组相比较,Salinomycin处理明显抑制BCL-2的表达,上调BAX、cleaved caspase-3和cleaved caspase-9的蛋白表达;抗氧化剂N-acetylcysteine(NAC)则逆转上述作用。结论 Salinomycin能够诱导MCF-7/DOX细胞凋亡,其机制可能与Salinomycin诱导ROS的产生,激活线粒体凋亡途径有关。     

柚皮苷保护H9c2心肌细胞对抗阿霉素诱导的心肌毒性

目的探讨柚皮苷(NRG)能否保护H9c2心肌细胞对抗阿霉素(DOX)诱导的心肌毒性。方法应用DOX处理H9c2心肌细胞建立DOX心肌损伤模型。CCK-8比色法测定细胞存活率;谷胱甘肽试剂盒检测GSSG/(GSSG+GSH)的比值;Hoechst 33258核染色法观察细胞凋亡的形态学和数量改变;Western blot法测定葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达水平;双氯荧光素(DCFH-DA)染色荧光显微镜摄片检测细胞活性氧(ROS)水平;罗丹明123(Rh123)染色荧光显微镜照像测定线粒体膜电位(MMP)。结果 DOX在3⁷μmol·L-1浓度范围内处理H9c2心肌细胞24 h,呈剂量依赖性降低细胞存活率,其中5μmol·L-1DOX能明显引起心肌细胞损伤,表现为使细胞存活率下降近50%,并呈时间依赖性上调GRP78蛋白的表达;1μmol·L-1NRG预处理60min可明显抑制5μmol·L-1DOX引起的心肌毒性作用,表现为细胞存活率升高,GSSG/(GSSG+GSH)的比值下降,凋亡细胞数目减少,GRP78表达被抑制,细胞内ROS产生及MMP丢失减少。结论 NRG能保护心肌细胞对抗DOX诱导的心肌细胞损伤,保护作用可能与其抗氧化应激及内质网应激有关。     

D-氨基葡萄糖衍生物诱导Eca-109细胞凋亡的机制

目的探讨2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖{2-[(3-carboxy-1-oxoprogy1)amino]-2-deoxy-D-Glucose,CO-PADG}诱导Eca-109细胞凋亡的机制。方法不同浓度COPADG作用于人食管癌Eca-109细胞24h,检测Eca-109细胞的抑制率、凋亡率、细胞内活性氧(reactive oxygen spe-cies,ROS)、线粒体跨膜电位。结果Eca-109细胞凋亡率与COPADG浓度呈正相关,r=1.0,P<0.01;Eca-109细胞线粒体膜电位水平与Eca-109细胞凋亡率相关,r=1.0,P<0.01;ROS水平与Eca-109细胞凋亡率呈正相关,r=1.0,P<0.01;ROS水平与Eca-109细胞线粒体膜电位水平呈负相关,r=1.0,P<0.01。结论COPADG可促进Eca-109细胞凋亡,提高Eca-109细胞内ROS水平,并降低线粒体膜电位。实验结果提示COPADG提高ROS,降低Eca-109细胞线粒体膜电位启动细胞凋亡通路促使Eca-109细胞凋亡,并且线粒体膜电位的下降是通过提高ROS实现的。     

丹酚酸A激活AKT/mTOR/4EBP1通路缓解脂多糖诱导的H9c2心肌细胞凋亡和氧化应激

目的探究丹酚酸A(Sal A)对脂多糖(LPS)诱导的氧化应激性损伤H9c2心肌细胞增殖、凋亡,以及蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/起始因子4E结合蛋白(4EBP1)通路相关蛋白表达的影响。方法用LPS诱导制备H9c2心肌细胞氧化应激性损伤模型,分别用含Sal A 5,10和20 mg·L^-1的DMEM培养基培养细胞24 h,加LPS 1 mg·L^-1继续孵育24 h。用5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色观察H9c2心肌细胞存活;采用流式细胞术检测H9c2心肌细胞凋亡和线粒体膜电位;用试剂盒检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)含量;Western印迹法检测胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶9、存活蛋白、Bax/Bcl-2,AKT、磷酸化AKT(p-AKT)、mTOR、p-mTOR、4EBP1和p-4EBP1蛋白表达水平。结果与细胞对照组比较,模型组EdU红色标记的细胞减少(P<0.05);与模型组比较,Sal A 5,10和20 mg·L^-1处理组EdU红色标记的细胞增多(P<0.05)。Sal A能降低培养液中LDH活性及细胞内MDA和GSH含量,增加胞内SOD活性(P<0.05),减少心肌细胞的凋亡率(P<0.05),降低心肌细胞线粒体膜电位的下降速度(P<0.05)。Sal A 10和20 mg·L^-1处理后,活化胱天蛋白酶3、活化胱天蛋白酶9和Bax/Bcl-2蛋白水平显著下调(P<0.05),存活蛋白水平显著上调(P<0.05);与细胞对照组比较,模型组AKT/mTOR/4EBP1磷酸化水平均显著降低(P<0.05)。与模型组比较,Sal A 10和20 mg·L^-1组AKT和mTOR磷酸化水平均显著升高(P<0.05)。结论Sal A通过激活AKT/mTOR/4EBP1通路、减少心肌细胞凋亡并降低心肌细胞线粒体膜电位的下降速度,减缓了LPS诱导的H9c2心肌细胞凋亡和氧化应激,表明Sal A对LPS造成的氧化应激损伤心肌细胞具有保护作用。     

甘油醛-3-磷酸脱氢酶核转位与高糖应激诱导的H9c2细胞凋亡密切相关

目的:探讨高糖应激是否引起心肌细胞中甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)核转位以及GAPDH核转位是否与细胞凋亡有关。方法:高糖培养H9c2细胞48 h后,收集细胞进行细胞凋亡的测定,用DCFH-DA荧光探针测定细胞中活性氧簇(ROS)的水平,用Western Blotting方法测定细胞质和细胞核中GAPDH以及细胞中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达,用细胞免疫荧光的方法测定GAPDH的核转位情况。结果:与低糖培养组相比,高糖培养组H9c2细胞凋亡率增高,ROS生成和iNOS表达增多,GAPDH由细胞质向细胞核转位;而线粒体呼吸链复合体I抑制剂鱼藤酮和iNOS抑制剂1400W均阻断GAP-DH的转位,并减少高糖诱导的H9c2细胞的凋亡。结论:高糖诱导H9c2细胞中GAPDH由细胞质向细胞核转位;鱼藤酮和1400W可抑制高糖Flavonoids诱导的细胞凋亡,这一作用与抑制GAPDH核转位有关。     

淫羊藿苷通过抑制Nod样受体家族蛋白3炎症小体相关蛋白表达抑制BV2小胶质细胞炎症反应

目的 研究淫羊藿苷(ICA)靶向Nod样受体家族蛋白3(NLRP3)炎症小体抑制BV2小胶质细胞炎症反应的作用机制。方法 用细菌脂多糖(LPS)+干扰素γ(IFN-γ)诱导小鼠BV2小胶质细胞,构建拟神经炎症反应的小胶质细胞模型。BV2细胞用DMEM高糖培养基培养,分为细胞对照组、ICA 10μmol·L^-1组、模型组及模型+ICA 5,10和20μmol·L^-1组。细胞对照和模型组加入DMEM高糖培养基培,ICA组加入ICA 10μmol·L^-1,模型+ICA组分别加入相应浓度的ICA,孵育24 h;随后模型和模型+ICA组加入LPS100μg·L^-1和IFN-γ 20μg·L^-1,细胞对照和ICA组用等体积培养基代替,孵育18 h;最后模型+ICA组加入相应浓度的ICA,其他各组加入等体积培养基,继续孵育24 h。用Luminex法检测细胞上清中白细胞介素3(IL-3)、IL-5、IL-17和单核/巨噬细胞趋化因子11(CCL11)含量;用细胞免疫荧光染色法检测CD16/C...     

坏死性凋亡和p38 MAPK通路的相互作用介导高糖引起的H9c2心肌细胞损伤

目的研究坏死性凋亡(necroptosis,Nec)和p38丝裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)通路的相互作用在高糖引起H9c2心肌细胞损伤中的作用。方法应用细胞计数盒检测心肌细胞存活率;双氯荧光素染色荧光显微镜照相法检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;罗丹明123染色荧光显微镜照相法测定线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP);蛋白质免疫印迹法测定RIP3蛋白(反映Nec的指标)和p38MAPK蛋白的表达水平。结果高糖(35 mmol·L~(-1)葡萄糖,HG)作用H9c2心肌细胞24 h可引起明显的细胞损伤,表现为细胞存活率降低,ROS生成及MMP丢失增多;应用100μmol·L~(-1)necrostatin-1(Nec-1,Nec特异性抑制剂)和HG共处理心肌细胞24 h或3μmol·L~(-1)SB203580(p38MAPK抑制剂)预处理心肌细胞60 min,再予HG作用24 h可减轻高糖引起的上述损伤。此外,HG作用心肌细胞1、3、6、9、12、24、36和48 h均能明显增加RIP3蛋白的表达水平,其中24 h时表达水平增加最明显。应用100μmol·L~(-1)Nec-1共处理或3μmol·L~(-1)SB203580预处理心肌细胞均能明显地抑制HG对RIP3蛋白表达的上调作用。另一方面,应用100μmol·L~(-1)Nec-1共处理心肌细胞能阻断HG对磷酸化(p)-p38MAPK表达的上调作用。结论 Nec和p38 MAPK通路的相互作用介导高糖引起H9c2心肌细胞损伤。     

八味沉香散含药血清对H9c2细胞氧糖剥夺损伤的保护机制研究

目的 研究八味沉香散含药血清对H9c2细胞氧糖剥夺损伤的保护机制。方法 将H9c2细胞分为空白组、模型组和八味沉香散低、中、高剂量组（含药血清剂量依次为2.5、8、12 g/kg）。体外培养H9c2细胞并建立氧糖剥夺损伤模型,含药血清干预后检测细胞存活率,观察细胞形态,检测生化指标乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、呼吸链复合酶Ⅰ（ComplexⅠ）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和丙二醛（MDA）水平,检测细胞内活性氧（ROS）含量、线粒体膜电位和细胞凋亡情况,检测氧化应激相关蛋白[Kelch样ECH关联蛋白1(Keap1)、核转录因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)、NADH氧化还原酶辅酶10(Ndufa10)、硫氧还蛋白（Trx）]、凋亡相关蛋白[B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、胱天蛋白酶3(Caspase-3)和细胞色素C(Cytc)]的表达。结果 与空白组比较,模型组细胞形态破损,LDH、CK和MDA水平均显著升高（P<0.01）,CAT、ComplexⅠ、SOD...     

黄芪对高糖诱导的血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

目的 研究黄芪在高糖诱导的血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖和迁移中的作用及其机制。方法 取VSMCs随机分为对照组（普通培养）、高糖组(25mmol·L^-1葡萄糖)、实验组(25 mmol·L^-1葡萄糖+40μg·m L^-1黄芪)、第1转染组(转染阴性对照寡核苷酸+25 mmol·L^-1葡萄糖+40μg·ml^-1黄芪)、第2转染组(转染miR-18a-5p模拟物+25 mmol·L^-1葡萄糖+40μg·m L^-1黄芪)。以细胞计数试剂盒8（CCK-8）法检测细胞的存活率;以划痕实验检测细胞迁移情况;以实时定量反转录聚合酶链反应（qRT-PCR）法检测miR-18a-5p的表达;以蛋白质印迹法检测线粒体融合蛋白2 （MFN2）蛋白的表达。结果 对照组、高糖组和实验组VSMCs存活率分别为（100.00±10.00）%,（188.24±18.17）%和（123.52±12.66）%;VSMCs迁移率分别为（15.16±1.64）%,（53...     

依达拉奉保护H9c2心肌细胞对抗阿霉素的心肌毒性作用

目的探讨新型的自由清除剂依达拉奉(edaravone,EDA)能否保护H9c2心肌细胞对抗阿霉素(doxorubicin,DOX)引起的损伤。方法应用DOX(5μmol·L-1)处理H9c2心肌细胞建立DOX心肌毒性损伤模型。CCK-8比色法测定细胞存活率;Hoechst 33258核染色法观察细胞凋亡的形态学和数量改变;双氯荧光素(DCFH-DA)染色荧光显微镜照像检测细胞活性氧(ROS)水平;罗丹明123(Rh123)染色荧光显微镜照像测定线粒体膜电位(MMP);Western blot法测定caspase-3蛋白的表达水平。结果应用20、40、80μmol·L-1EDA分别预处理H9c2心肌细胞60 min,可明显地抑制5μmol·L-1DOX引起的细胞毒性,使细胞存活率升高,其中40μmol·L-1EDA的保护作用最大;应用40μmol·L-1EDA分别预处理心肌细胞30、60、90、120 min,可明显地抑制DOX引起的细胞毒性,其中预处理60 min的保护作用最大;此外,在5μmol·L-1DOX处理H9c2心肌24 h前,应用40μmol·L-1EDA预处理60 min可明显抑制DOX引起的心肌损伤作用,表现为抑制DOX引起的细胞内ROS生成增多及抑制DOX的致细胞凋亡作用(使凋亡细胞数目减少和cleaved caspase-3表达下调)和MMP的损伤作用。结论EDA能保护H9c2心肌细胞对抗DOX诱导的心肌毒性,此保护作用可能与其抑制ROS生成及减轻DOX对MMP的损伤有关。