金丝桃苷通过激活Keap1/Nrf2/HO-1通路保护小鼠GC-2细胞的氧化损伤

目的 从Keap1/Nrf2/HO-1通路角度研究金丝桃苷（Hyp）对H2O2所诱导的小鼠精母细胞（GC-2）氧化损伤的保护作用。方法 将GC-2细胞随机分为正常组、模型组、氮乙酰半胱氨酸组（阳性组,NAC,2.5 mmol/L)以及金丝桃苷组（50、100、200 μmol/L）,各组按剂量孵育48 h后,除正常组外其余各组细胞加入H2O（2 150 μmol/L）处理2 h,正常组给予等容量培养基。采用CCK-8法检测细胞的活力,流式细胞仪检测细胞凋亡水平,酶联免疫法检测超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）、过氧化氢酶（CAT）活力以及丙二醛（MDA）含量,Western blot和RT-qPCR检测Nrf2、Keap1、HO-1蛋白及mRNA的相对表达水平,免疫荧光法检测Nrf2核转位水平。结果 150 μmol/L H2O2干预2 h可制备GC-2细胞氧化损伤模型。与正常组比较,模型组GC-2细胞增殖率以及SOD、GSH、CAT活力显著降低,MDA含量、细胞凋亡率,Keap1和Nrf2 mRNA表达显著升高（P<0.05）以及Keap1蛋白表达水平显著升高（P<0.01）。与模型组比较,NAC组和金丝桃苷200 μmol/L组细胞增殖率和SOD、GSH-PX、CAT活力显著升高,MDA含量、细胞凋亡率显著下降（P<0.05）;金丝桃苷200 μmol/L组Keap1 mRNA表达显著下降,HO-1 mRNA表达显著升高（P<0.01）;金丝桃苷200 μmol/L组Nrf2核蛋白（NEs-Nrf2）以及HO-1的蛋白表达显著升高（P<0.05）,Keap1蛋白表达显著下降（P<0.01）;金丝桃苷组出现了明显的核转位现象（P<0.05）。结论 金丝桃苷可能通过激活Keap1/Nrf2/HO-1信号通路,对H2O2诱导的GC-2细胞氧化损伤具有保护作用。     

黄芪总苷对H_2O_2诱导的衰老心肌细胞氧化应激及PI3K/AKT通路的影响

【目的】观察黄芪总苷对H_2O_2诱导的衰老心肌细胞氧化应激及磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)通路的影响,探讨黄芪总苷对心肌细胞的保护作用。【方法】通过H_2O_2诱导大鼠心肌H9C2细胞,建立衰老心肌细胞模型。将造模后的细胞随机分成模型对照组,黄芪总苷低、中、高剂量组(剂量分别为10、20、40 mg/L),另设空白对照组。黄芪总苷低、中、高剂量组细胞分别给予对应质量浓度处理48 h,空白对照组和模型对照组不加黄芪总苷处理。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖能力,羟胺法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性,硫代巴比妥酸(TBA)检测丙二醛(MDA)含量,化学荧光法检测活性氧(ROS)含量,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测PI3K/AKT通路蛋白PI3K、AKT磷酸化水平。【结果】与空白对照组比较,模型对照组细胞存活率、SOD活性、p-PI3K/PI3K比值和p-AKT/AKT比值显著降低,MDA、ROS含量显著升高(P0.05);黄芪总苷低、中、高剂量组对上述指标有均显著改善作用,并呈剂量依赖性。【结论】黄芪总苷可减缓H_2O_2诱导的心肌细胞衰老,其机制可能与减轻氧化应激反应、激活PI3K/AKT通路有关。     

柚皮素对大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用

目的 研究柚皮素预处理对大鼠缺血再灌注(I/R)心肌氧化损伤的作用及其分子机制.方法 32只成年雄性SD大鼠分为假手术组(SHAM组)、I/R组、柚皮素组、柚皮素+LY294002组(NL组).柚皮素组及NL组腹腔注射柚皮素(100 mg·kg-1·d-1),连续7 d后,NL组在结扎冠状动脉前30 min腹腔注射磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通道抑制剂LY294002(0.3 mg/kg),除SHAM组,其余3组大鼠均进行冠状动脉结扎30 min再灌注120 min,造模成功后处死各组大鼠,苏木素-伊红(HE)染色观察心肌组织病理变化,TUNEL法检测心肌组织凋亡情况,使用试剂盒检测血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)水平,Western blot测定心肌组织AKT、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、醌氧化还原酶1(NQO1)、核因子E相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶1(HO-1)的表达水平,逆转录PCR(RT-PCR)测定Nrf2、H O-1转录水平.结果 各组AKT表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05).与SHAM组比较,I/R组LDH、CK、心肌细胞凋亡率、MDA、ROS水平升高,而SOD活性降低(P<0.05).与I/R组比较,柚皮素组LDH、CK、心肌细胞凋亡率、MDA、ROS水平降低,而SOD活性、p-AKT、Nrf2、HO-1、NQO1表达水平升高(P<0.05).与柚皮素组比较,NL组LDH、CK、心肌细胞凋亡率、MDA、ROS水平升高,而SOD活性、p-AKT、Nrf2、HO-1、NQO1表达水平降低(P<0.05).结论 柚皮素调节PI3K/AKT/Nrf2通路减轻心肌I/R氧化损伤.     

成纤维细胞生长因子21对缺氧复氧心肌细胞的保护作用及机制研究

【摘要】 目的 探讨成纤维细胞生长因子21（FGF21）对缺氧复氧（H/R）心肌细胞的保护作用及对PI3K/AKT通路的影响。方法 重组腺病毒载体Ad FGF21诱导原代心肌细胞过表达FGF21。腺病毒转染心肌细胞后构建H/R损伤模型（3h缺氧联合3h复氧）。实验分为对照组（Con组）、H/R组、H/R+Ad GFP组、H/R+Ad FGF21组4组。心肌细胞存活率评估细胞损伤程度;SOD/MDA检测联合DHE荧光染色评估氧化应激反应（ROS）;流式细胞术评估细胞凋亡;Western blot检测相关蛋白水平。在机制探讨实验中给予PI3K/AKT抑制剂（LY294002）进行干预。结果 与Con组相比,H/R损伤后FGF21蛋白表达显著下调,并伴随心肌细胞活性降低、ROS与凋亡反应激活。腺病毒介导的心肌细胞过表达FGF21能够明显抑制H/R损伤,表现为细胞活力、ROS与凋亡反应均有不同程度改善。FGF21心肌细胞过表达能够增加PI3K/AKT磷酸化水平,而抑制PI3K/AKT通路后FGF21过表达介导的细胞保护功能被逆转。结论 FGF21主要通过PI3K/AKT依赖性途径改善心肌细胞H/R损伤。     

龙胆苦苷对过氧化氢诱导HepG2细胞氧化应激损伤的保护作用研究

目的对龙胆苦苷对过氧化氢(H_2O_2)所致HepG2细胞氧化损伤的作用及其机制进行研究。方法以800μmol/L H_2O_2损伤细胞6 h建立模型; CCK8法检测细胞存活率选取龙胆苦苷10、20、40μmol/L作为干预剂量;实验分为5组,即正常组、模型组和龙胆苦苷低、中、高剂量组,诱导成功后用微量法检测细胞内MDA含量变化,荧光共聚焦检测细胞内ROS水平,运用Westem blot法检测各组细胞Nrf2蛋白的表达,以及对细胞中Nrf2激活的分子机制进行硏究。结果与正常组比较,模型组MDA含量、ROS水平增加(P 0. 05),Nrf2蛋白表达量明显下调(P 0. 05)。与模型组比较,龙胆苦苷高剂量组MDA含量显著降低(P 0. 05),Nrf2蛋白表达量明显上调(P 0. 05)。结论龙胆苦苷预处理可提高细胞存活率,促进Nrf2核转移,Nrf2的表达变化与P13K/AKT通路有关,可增强体内抗氧化性应激系统、清除氧自由基、降低细胞凋亡。     

Klotho通过激活PI3K/AKT通路抑制肾小球系膜细胞内质网应激介导的细胞凋亡研究

目的 Klotho对高糖作用下肾小球系膜细胞凋亡的影响及作用机制。方法体外培养肾小球系膜细胞,高糖作用于肾小球系膜细胞诱导其凋亡,设置空白对照组、模型组(500μmol/L高糖处理)、不同浓度(50、100μg/L) Klotho组,LY295002(PI3K抑制剂)组(10μmol/L)。MTT法检测细胞的活力;流式细胞术检测细胞的凋亡率; ELISA检测细胞的培养液中TNF-α和IL-6的浓度变化; DHE检测ROS;特定试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH-PX)含量; Western blot法检测GRP78、CHOP、Caspase12表达水平以及AKT的磷酸化。结果高糖组能够显著降低肾小球系膜细胞活力,提高ROS及凋亡率,LDH、MDA含量显著增加,SOD、GSH-PX活性显著下降,同时诱导TNF-α和IL-6分泌及增加了GRP78、CHOP、Caspase12的表达,而P-AKT/AKT表达降低,差异有统计学意义(P<0. 01)。不同浓度Klotho和高糖同时作用于肾小球系膜细胞时,细胞存活率逐渐上升,ROS含量及凋亡率逐渐下降,LDH、MDA含量逐渐下降,SOD、GSH-PX活性随之上升,TNF-α和IL-6的含量及GRP78、CHOP、Caspase12表达下降,P-AKT/AKT增加,差异有统计学意义(P<0. 01)。LY295002组上述检测指标与Klotho组相反。结论 Klotho提升了高糖作用下肾小球系膜细胞活力,降低凋亡率,加强细胞抗氧化能力,减少细胞炎性反应,Klotho可能部分通过激活PI3K/AKT通路抑制细胞的内质网应激,从而对肾小球系膜细胞发挥保护作用。     

比索洛尔预处理对缺氧/复氧诱导的H9c2细胞损伤的影响

目的研究比索洛尔预处理对缺氧/复氧诱导的大鼠心肌细胞损伤的保护作用,并探讨该作用的机制。方法对大鼠心肌细 胞株（H9c2）进行缺氧复氧（6 h/2 h）,模拟大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,将H9c2细胞随机分成4组：正常对照组（control组）、缺 氧/复氧组（H/R组）、缺氧/复氧+比索洛尔预处理组（H/R+B组）、缺氧/复氧+比索洛尔预处理+PI3K/AKT阻滞剂LY294002组（H/ R+B+LY组）;分别采用MTT法检测心肌细胞活力,流式细胞仪法检测心肌细胞凋亡、ROS水平,Western免疫印迹法检测心肌 细胞p-AKT及p-GSK3β蛋白表达情况。结果与正常组相比,H/R组细胞活力下降,细胞凋亡率增加、ROS水平升高;经比索洛 尔预处理后,细胞活力明显提高,细胞凋亡率下降、活性氧水平降低,p-AKT/GAPDH、p-GSK3β/GAPDGH显著提高,而加入 PI3K/AKT阻滞剂LY294002后比索洛尔的保护作用消失。结论比索洛尔能减少缺氧/复氧所引起的氧化应激,对心肌细胞具 有明显的保护作用,其作用机制是通过激活PI3K/AKT/GSK3β通路而提高AKT、GSK3β磷酸化水平,减少ROS产生,增加细胞 的活性实现的。     

miR-1通过PI3K/Akt/mTOR信号通路对高糖诱导的H9c2心肌细胞自噬的影响

目的 探讨miR-1对高糖诱导的H9c2心肌细胞自噬及磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路的影响。方法H9c2细胞随机分为4组。正常组使用普通培养基培养,未转染;诱导组使用含33 mmol/L葡萄糖的培养基诱导,未转染;miR-1 NC组使用含33 mmol/L葡萄糖的培养基诱导,转染miR-1 NC;miR-1 inhibitor组使用含33 mmol/L葡萄糖的培养基诱导,转染miR-1 inhibitor。在加入葡萄糖诱导前48 h,使用Lipofectamine 3000转染试剂盒进行转染。实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测H9c2细胞和高糖诱导的H9c2细胞中miR-1表达水平;CCK-8法检测各组H9c2细胞增殖活性;蛋白免疫印记法（Western blot）检测各组H9c2细胞中Beclin1、p65、PI3K蛋白表达水平、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值以及AKT、mTOR蛋白磷酸化水平;生物信息学预测和双萤光素酶验证miR-1和PI3K的靶向关系。结果与正常组相比,诱导组的H9c2细胞中,miR-1表达水平显著升高（P<0.05）,PI3K蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。与正常组相比,诱导组H9c2细胞Beclin1蛋白表达、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著升高,自噬小体增多,细胞增殖率、p62蛋白表达以及PI3K、Akt、mTOR蛋白磷酸化水平显著降低（P<0.05）;与诱导组和miR-1 NC组相比,miR-1 inhibitor组H9c2细胞miR-1水平、Beclin1蛋白表达、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著降低,自噬小体减少,细胞增殖率、p62蛋白表达以及PI3K、Akt、mTOR蛋白磷酸化水平显著升高（P<0.05）;miR-1和PI3K间存在靶向关系。结论在高糖诱导的H9c2细胞中,miR-1表达水平升高,抑制miR-1,可通过靶向激活PI3K/Akt/mTOR信号通路,抑制高糖诱导的H9c2心肌细胞自噬。     

黄芩苷对糖尿病肾病小鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响*

目的 研究黄芩苷对核因子E2相关因子2-抗氧化反应元件（Nrf2-ARE）信号通路的影响,探讨黄芩苷对糖尿病肾病（DN）的治疗机制。方法 30只C57BL/6雄性小鼠随机分成空白对照组（对照组）、DN模型组（DN组）和黄芩苷干预组（干预组）,每组10只。通过腹腔注射链脲佐菌素复制DN模型并给予黄芩苷药物干预。ELISA法检测小鼠尿白蛋白。对肾小管上皮细胞进行分组：①高糖组：细胞在含25?mmol/L 葡萄糖的高糖培养基中培养。②激活组：细胞在高糖组处理的基础上,用Nrf2激活剂NK-252（20?μmol/ml） 预处理肾小管上皮细胞24?h。③黄芩苷组：细胞在高糖组处理的基础上,用黄芩苷（100?μmol/L）预处理肾小管上皮细胞24?h。④干扰对照组：高糖培养基中培养的细胞在加入黄芩苷的同时,通过Lipofectamine 2000对肾小管上皮细胞转染si-control（si-Nrf2的阴性对照）,24?h后收集细胞。⑤Nrf2干扰组：高糖培养基中培养的细胞在加入黄芩苷的同时,通过Lipofectamine 2000对肾小管上皮细胞转染si-Nrf2（Nrf2的小干扰RNA）,24?h后收集细胞。Western blotting检测Nrf2的表达水平,流式细胞仪检测肾小管上皮细胞凋亡状况。结果 与DN组比较,干预组小鼠的尿白蛋白水平降低、Nrf2的表达水平升高、ARE的活性增强,差异均有统计学意义（P?<0.05）,且干预组小鼠的肾小管扩张变形程度减轻。细胞实验中发现,与高糖组比较,加入Nrf2激活剂或黄芩苷后,均能激活Nrf2,上调ARE活性,降低丙二醛（MDA）表达水平,并抑制肾小管上皮细胞凋亡（P?<0.05）。同时,干扰Nrf2能逆转黄芩苷的作用,促进肾小管上皮细胞凋亡（P?<0.05）。结论 黄芩苷可能通过上调Nrf2-ARE信号通路抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡,发挥治疗DN的作用。     

波动性高糖诱导的内皮细胞凋亡与JNK信号转导途径

目的：观察波动性高糖对人血管内皮细胞凋亡的影响,并探讨其机制。 方法：波动性高糖（5.5或20 mmol/L）与恒定性高糖（20 mmol/L）作用于人脐静脉内皮细胞7 d,用Annexin V/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡率,Hoechst33258荧光染色观察凋亡形态学变化,比色法测定培养液中超氧化物岐化酶（SOD）活力和丙二醛（MDA）含量, Western 印迹测定磷酸化c-JunNH2-末端激酶（p-JNK）水平。结果：波动性高糖组的细胞凋亡率明显高于恒定性高糖组（P＜0.05）,且其培养液中SOD活力降低（P＜0.05）,MDA含量增加（P＜0.05）,细胞p-JNK水平增高（P＜0.05）。JNK特异性抑制剂SP600125应用后降低了波动性高糖诱导的细胞凋亡率（P＜0.05）。抗氧化剂维生素C应用后抑制了细胞内p-JNK水平的升高（P＜0.05）,降低了细胞凋亡率（P＜0.05）。结论：波动性高糖较恒定性高糖更易促发培养的人脐静脉内皮细胞凋亡,其机制可能与氧化应激水平增高,进而激活JNK信号转导途径有关。     

胡桃醌通过PI3K/AKT途径促进前列腺癌LNCaP细胞氧化应激

目的 探讨胡桃醌对人前列腺癌LNCaP细胞的杀伤活性与其诱导氧化应激反应的相关性及机制.方法 采用 0、6.25、12.5、25、50和100 μmol/L胡桃醌作用前列腺癌 LNCaP细胞,MTT法检测不同剂量胡桃醌对LNCaP细胞生长抑制影响;胡桃醌联合抗氧化剂NAC作用细胞后,DCFH-DA作为荧光探针,用荧光酶标法检测活性氧(ROS);胡桃醌联合PI3K/AKT通路抑制LY294002作用细胞后,Western blot法检测p-AKT、AKT和Nrf2蛋白表达变化.结果 与阴性对照组比较,胡桃醌浓度在12. 5 μmol/L或以上显著抑制前列腺癌细胞生长(P＜0. 05, P＜0. 01).胡桃醌能够促进细胞ROS含量(P＜0. 01);胡桃醌联合抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)导致ROS含量下降(P＜0. 05),细胞存活率升高(＜0. 01).胡桃醌抑制p-AKT的表达,NAC能够恢复胡桃醌抑制的p-AKT表达.胡桃醌能够抑制细胞核Nrf2的表达,与PI3K/AKT抑制剂LY294002联合使用进一步抑制了 Nrf2的表达.结论 胡桃醌能够抑制前列腺癌LNCaP细胞增殖,作用的机制可能与促进ROS产生从而抑制PI3K/ AKT途径,导致Nrf2表达下降有密切关系.     

含活血通络方血清对高糖诱导人视网膜血管内皮细胞增殖作用的研究

目的 探究含活血通络方血清调控IncRNA MEG3对高糖诱导人视网膜血管内皮细胞（human retinal microvascular endothelial cells,hRMECs）增殖及凋亡的影响作用。方法 选取20只SD大鼠,采用随机数字表法对10只大鼠灌胃活血通络方,10只灌胃等量生理盐水。灌胃结束1h后制备相应血清。分别采用5mmol/L葡萄糖或30mmol/L的D-甘露醇、葡萄糖溶液对hRMECs细胞进行诱导24h。按照诱导情况将细胞分为正常对照组（5mmol/L葡萄糖,n=6）、等渗组（30mmol/L D-甘露醇,n=6）、高糖组（30mmol/L葡萄糖,n=6）、高糖+2.5%含药血清组（n=6）、高糖+7.5%含药血清组（n=6）、高糖+10%含药血清组（n=6）,相应血清干预24h。采用CCK-8法、酶联免疫吸附法检测细胞增殖情况及丙二醛（malondialdehyde,MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）含量;采用实时荧光定量聚合酶链反应（quantitative real-time fluorescence polymerase chain reaction,qRT-PCR）测定细胞IncRNA-MEG3 mRNA表达,采用流式细胞术测定细胞凋亡情况;采用蛋白免疫印迹法检测NOX4、VAV2、血管表皮生长因子受体（vascular epidermal growth factor receptor,VEGFR）、磷脂酰肌醇3-激酶（phosphoinositide 3-kinase,PI3K）、p-PI3K、蛋白激酶B（protein kinase B,AKT）、p-AKT、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）、p-mTOR蛋白表达情况。结果 与正常对照组比较,高糖组细胞增殖率下降,MDA含量增加,GSH-Px含量降低,凋亡增加,IncRNA-MEG3 mRNA表达降低,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR、NOX4、VAV2、VEGFR蛋白表达均升高,差异均有统计学意义（P<0.05）。与高糖组比较,高糖+7.5%含药血清组和高糖+10%含药血清组细胞增殖率增加,MDA含量降低,GSH-Px含量升高,IncRNA-MEG3表达升高,差异均有统计学意义（P<0.05）;高糖+2.5%含药血清组、高糖+7.5%含药血清组、高糖+10%含药血清组的细胞凋亡下降,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR、NOX4、VAV2、VEGFR蛋白表达降低,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 含活血通络方血清可介导IncRNA-MEG3调控相关蛋白表达来减少高糖诱导hRMECs细胞的凋亡。     

Dexmedetomidine Attenuates High Glucose-induced HK-2 Epithelial-mesenchymal Transition by Inhibiting AKT and ERK

Objective To explore the protective effects of dexmedetomidine(Dex) against high glucose-induced epithelial-mesenchymal transition in HK-2 cells and relevant mechanisms.Methods HK-2 cells were exposed to either glucose or glucose+Dex for 6 h. The production of ROS,morphology of HK-2 cells, and cell cycle were detected. Moreover, the expression of AKT, p-AKT, ERK, pERK, PI3 K, E-Cadherin, Claudin-1, and α-SMA were determined and compared between HK-2 cells exposed to glucose and those exposed to both glucose and Dex with or without PI3 K/AKT pathway inhibitor LY294002 and ERK pathway inhibitor U0126.Results Compared with HK-2 cells exposed to high level of glucose, the HK-2 cells exposed to both high level of glucose and Dex showed:(1) lower level of ROS production;(2) cell morphology was complete;(3) more cells in G1 phase;(4) lower expression of p-AKT, p-ERK and α-SMA, higher expression of ECadherin and Claudin-1. PI3 K/AKT inhibitor LY294002 and ERK inhibitor U0126 decreased the expression of p-AKT, p-ERK and α-SMA, and increased the expression of E-Cadherin and Claudin-1.Conclusion Dex can attenuate high glucose-induced HK-2 epithelial-mesenchymal transition by inhibiting AKT and ERK.     

N-乙酰半胱氨酸对辐照引起的大鼠肠隐窝上皮细胞损伤的减轻作用

目的研究N-乙酰半胱氨酸(NAC)对辐照引起的肠隐窝上皮细胞IEC-6的损伤的防护作用及可能机制。方法将IEC-6细胞分为3组:正常组(无辐照),辐照组(6 Gy辐照)和NAC治疗组(6 Gy辐照+NAC 10 mg/mL)。IEC-6细胞辐射损伤模型采用总剂量为6 Gy的钴-60照射,用DCFH-DA测定细胞内的活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)的含量以及超氧化物歧化酶(SOD)的活力,用Annexin V-FITC和碘化丙啶进行细胞凋亡的检测,同时用Hoechst 33342进行细胞凋亡的检测,同时进一步检测IEC-6细胞的增殖能力。结果 NAC减少了辐照引起的ROS和MDA的过量产生以及SOD的过度消耗,同时流式细胞仪和核染色的结果显示,NAC抑制了辐照引起的细胞凋亡和增殖活力的下降。结论 NAC可以减轻辐照引起的IEC-6细胞的损伤。     

肝细胞损伤模型中银杏内酯A保护机制及对Nrf2-抗氧化酶的影响

目的 探讨银杏内酯A对四氯化碳(CCl4)诱发的HepG2细胞损伤是否具有保护作用,并观察其对核因子E2相关因子2(Nrf2)调控的抗氧化酶的作用.方法 采用CCl4诱发HepG2细胞损伤,并予以不同剂量的银杏内酯A对其进行干预治疗,MTT法检测细胞活性,ELISA法检测细胞培养液中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)浓度,并观察细胞8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)、丙二醛(MDA)、Nrf2、血红素氧合酶1 (HO-1)、谷胱甘肽(GSH)水平.进而采用PI3K/Akt、MAPK通路拮抗剂干预,探索介导银杏内酯A发挥作用的上游通路.结果 与对照组比较,CCl4组HepG2细胞活性降低,细胞培养液AST、ALT浓度增加,细胞8-OHdG、MDA水平升高(P＜0.05).而与CCl4组比较,银杏内酯A可剂量依赖性的升高HepG2细胞活性,降低AST、ALT浓度,降低8-OHdG、MDA水平,同时显著升高Nrf2、HO-1、GSH水平(P＜0.05).此外,PI3 K/Akt拮抗剂LY294002与p38拮抗剂SB203580显著减弱了银杏内酯A对HepG2细胞的保护作用,并抑制了银杏内酯A对Nrf2、HO-1、GSH表达的上调作用(P＜0.05).结论 银杏内酯A对CCl4诱发的HepG2细胞损伤具有保护作用,其机制之一可能与通过PI3K/Akt、p38通路上调Nrf2、HO-1、GSH表达、抑制氧化应激反应有关.     

柴胡皂苷B通过Nrf2/ARE信号缓解Caco-2细胞氧化损伤

目的 探讨柴胡皂苷B（saikosaponin B,SSB）对棕榈酸（palmitic acid,PA）和脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）联合诱导的人结直肠腺癌细胞（Caco-2）屏障损伤的保护作用及潜在机制。方法 利用Caco-2细胞构建肠道屏障模型,采用随机数字表法将细胞分为对照组（CON组,n=6）,模型组（PA+LPS组,n=6）和柴胡皂苷B干预组（PA+LPS+SSB组,n=6）,通过测量跨膜电阻（transepithelial electrical resistance,TEER）值和紧密连接蛋白的表达水平,评价SSB对Caco-2细胞屏障损伤的保护作用。通过检测活性氧（reactive oxygen species,ROS）和脂质过氧化物含量评估细胞氧化压力。通过定量聚合酶链反应和蛋白质免疫印迹法检测SSB对Nrf2/ARE信号通路相关基因及蛋白的表达水平的影响。通过敲降Nrf2验证SSB改善细胞屏障功能是否通过Nrf2/ARE途径。结果 PA+LPS+SSB组Caco-2细胞的TEER值、ZO-1和Occludin-1的蛋白水平显著高于PA+LPS组（P<0.05）。PA+LPS组细胞内丙二醛（malondialdehyde,MDA）、4-羟基壬烯醛（4-hydroxynonenal,4-HNE）、蛋白羰基含量（protein carbonyl content,PCC）和ROS含量均显著高于对照组（P<0.05）,PA+LPS+SSB组的4-HNE、MDA、ROS含量和PCC均显著低于PA+LPS组（P<0.05）。PA+LPS+SSB组细胞内Nrf2和p-Nrf2的蛋白水平、Nqo1和Ho-1的mRNA水平、过氧化氢酶（catalase,CAT）和超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）酶活性均显著高于PA+LPS组（P<0.05）。PA+LPS+SSBsiNrf2组细胞中ZO-1和Occludin-1的蛋白水平和转录水平均显著低于PA+LPS+SSB组（P<0.05）,ROS、4-HNE、MDA含量和PCC均显著高于PA+LPS+SSB组（P<0.05）。结论 SSB通过激活Nrf2/ARE信号通路增加了肠上皮细胞的抗氧化能力,抑制了PA和LPS引起的Caco-2细胞氧化应激和屏障损伤,对肠上皮细胞具有良好保护作用。     

淫羊藿苷改善高糖培养乳鼠心肌细胞活性的线粒体相关机制

目的研究淫羊藿苷对抗体外高浓度葡萄糖诱导乳鼠心肌细胞的损伤及其潜在的线粒体相关机制。方法SD乳鼠心肌细胞分别在含5.5mmol／L葡萄糖（正常对照组）、5．5mmol／L葡萄糖＋20.0mmol／L甘露醇（高渗对照组）、25.5mmol／L葡萄糖（高糖损伤组）、25.5mmol／L葡萄糖＋10μmol／L淫羊藿苷（低剂量淫羊藿昔保护组）和25.5mmol／L葡萄糖＋100μmol／L淫羊藿苷（高剂量淫羊藿苷保护组）的培养基中进行原代培养48h后,检测细胞活力、细胞培养上清液乳酸脱氢酶（LDH）含量、细胞活性氧自由基（ROS）生成、超氧化物歧化酶（SOD）活性,同时检测心肌线粒体跨膜电位,并检测线粒体通透性转换孔（MPTP）开放值。结果与正常对照组比较,高糖培养组心肌细胞活性、细胞SOD活性及心肌线粒体跨膜电位水平均显著下降（P〈0．01）,而培养上清液LDH含量、细胞ROS生成及心肌细胞MPTP开放值则明显升高（P〈001）。淫羊藿苷干预减轻了高糖对心肌细胞各项指标的损伤,尤其是高剂量淫羊藿苷保护组的细胞活性、LDH漏出量、ROS生成值、SOD活性、MPTP开放值、线粒体跨膜电位均有明显改善。高渗对照组各项指标与正常对照组相比差异无统计学意义。结论淫羊藿苷对体外高糖培养乳鼠心肌细胞具有保护作用,其作用机制可能通过提高细月旬抗眚化能力．减少ROS诱导的心肌MPTP开放程度．维持线粒体正常跨膜电位而实现的。     

PI3K/AKT介导的凋亡信号通路在百草枯中毒致心脏损伤中的作用

目的探讨PI3K/AKT介导的凋亡信号通路在百草枯(PQ)中毒致心脏损伤中的作用。方法2019年7月—2020年1月于中国医科大学附属盛京医院本溪基地实验中心进行实验。选取健康成年雄性SD大鼠20只按随机数字表法均分为2组,百草枯中毒组(PQ组,10只)和对照组(10只)。百草枯中毒组大鼠予以一次性腹腔注射百草枯溶液20 mg/kg,对照组给予等量生理盐水。48 h后处死大鼠并心脏采血及收集心脏组织标本。HE染色观察2组大鼠心脏组织病理变化;检测2组大鼠血清CK、LDH水平,心脏组织SOD、MDA水平及PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、Bcl2、Bax、Caspase-3相关蛋白的表达水平。结果与对照组比较,PQ组心脏结构完整性破坏,心脏损伤明显。PQ组血清CK及LDH水平明显高于对照组(t/P=67.304/0.001、33.619/0.001),且PQ组大鼠心肌组织中SOD水平下降,MDA水平显著升高(t/P=18.339/0.001、31.568/0.001)。PQ组大鼠在PQ暴露48 h后p-PI3K、p-AKT、Bcl-2表达水平明显下调(t/P=30.369/0.001、13.751/0.001、33.100/0.001),Bax、Caspase-3表达明显上调(t/P=13.765/0.001、12.649/0.001)。结论在百草枯中毒诱导心脏损伤中,PI3K/AKT介导的Bcl-2抗凋亡信号通路被抑制,进而导致促凋亡因子Bax和Caspase-3的表达上调,介导了心肌细胞的凋亡及心脏损伤。     

黄芪甲苷对糖尿病大鼠肝损伤保护作用及其机制研究

目的 探讨黄芪甲苷(AS-Ⅳ)对糖尿病大鼠肝脏损伤的保护作用及其可能机制.方法 采用腹腔注射链脲佐菌素诱导建立糖尿病大鼠模型.将造模成功的糖尿病大鼠随机分为对照组、模型组、罗格列酮组(1.25 mg/kg)、AS-Ⅳ组(20、40、80 mg/kg).连续灌胃给药6周,于给药前测空腹血糖,处死,取肝脏,称肝湿重,计算肝脏指数;采用ELISA法测定各组大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性;试剂盒检测肝脏组织中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)和丙二醛(MDA)含量变化;HE染色观察肝组织病理形态学变化;免疫组化法检测肝脏组织中胰岛素受体底物2(IRS-2)的表达;Western blot法检测磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)和葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)的表达水平.结果 与对照组相比,模型组大鼠肝脏指数、空腹血糖、空腹血清胰岛素、血清AST、ALT、三酰甘油、总胆固醇、高密度脂蛋白水平、肝脏组织中MDA含量均明显升高(P＜0.01),T-SOD与GSH-Px降低(P＜0.01),肝病理损伤明显,同时肝组织中IRS-2、PI3K、p-AKT、GLUT4蛋白表达减少.与模型组相比,AS-Ⅳ(20、40、80 mg/kg)组能明显改善上述指标的变化,使肝组织损伤减轻,并增加IRS-2、PI3K、p-AKT、GLUT4蛋白表达.结论 AS-Ⅳ对糖尿病大鼠肝损伤有保护作用,其机制可能与抗氧化、上调肝脏PI3 K/AKT信号通路有关.