当归芍药散及其含药血清对离体海马脑片拟缺血样损伤的作用

目的 :观察当归芍药散 (DSS)有无神经保护作用。方法 :采用停灌 /复灌、谷氨酸及过氧化氢诱导离体豚鼠海马脑片缺血样损伤模型 ,以乳酸脱氢酶 (LDH)释放率为指标 ,考察DSS及其含药血清的保护作用。结果 :DSS及其含药血清均可明显降低多因素所致离体豚鼠海马脑片损伤模型的LDH增加。研究提示 ,AD神经元退变和死亡与能量代谢障碍、自由基损害和谷氨酸过度激动等关系密切。结论 :DSS具有明显的神经保护作用 ,其机制可能与改善能量代谢、抗氧化及拮抗兴奋性氨基酸等有关。     

神经保护药和抗炎药对小鼠脑片缺氧缺糖/再灌损伤的作用

 目的 在离体脑片缺血性损伤模型上，建立筛选与评价神经保护药和抗炎药的方法。方法 小鼠离体脑片缺氧缺糖／再灌诱导（OGD/RP）的模型上，以2,3,5-三苯基氯化四氮唑（TTC）产物formazan定量测定评价脑片活性，观察不同药物离体给药或整体预给药7 d对脑片损伤的保护作用。结果 抗氧化剂依达拉奉、钙拮抗剂尼莫地平及神经生长因子可显著减轻脑片的缺血性损伤；半胱氨酰白三烯受体拮抗剂ONO-1078和孟鲁司特、糖皮质激素地塞米松及中枢抗炎药米诺环素无明显作用。整体给予地塞米松（0.2，2,5 mg·kg^-1）能减轻脑片对缺血损伤的程度；孟鲁司特仅大剂量给药（15 mg·kg^-1）有增强作用。结论 离体小鼠脑片TTC产物formazan定量分析评价药物抗缺血性损伤作用的方法，可用于初筛具有直接神经保护作用药物。     

血清药理学方法研究复方中药对癫痫大鼠离体脑片的作用

目的：观察对癫痫大鼠给予复方中药提取物后,其含药血清对离体海马脑片的作用。方法：癫痫大鼠每日2次灌胃给予复方中药提取物5、10、20g/kg,末次给药后60min取血,分离血清。将含药血清加到癫痫大鼠离体海马脑片系统,观察复方中药对癫痫大鼠海马脑片CAI区诱发场电位的影响。结果：灌胃给予复方中药提取物后,含药血清均能使癫痫大鼠海马脑片诱发场电位的幅度明显下降,同时场电位恢复正常的时间也明显缩短（P〈0.05）。结论：复方中药能降低癫痫大鼠海马脑片诱发场电位的幅度,提示复方中药具有抗癫痫作用。     

中药9602减轻谷氨酸毒性作用的实验研究

目的:探讨中药9602对脑缺血损伤保护的作用环节。方法:(1)大鼠整体脑缺血后进行海马组织谷氨酸含量测定;(2)用高浓度谷氨酸灌流离体海马脑片,观察 CA_1区群峰电位(PS)的变化及9602对其影响;(3)利用荧光指示剂 Fura-2,采用急性分离海马细胞观察9602对谷氨酸和 KCl 诱导的细胞内 Ca~(2 )升高的影响。结果:反复脑缺血再灌后30min,海马组织谷氨酸含量明显高于假手术组;高浓度谷氨酸灌流离体海马脑片后,CA_1区 PS 逐渐变小直至消失。9602显著降低海马组织内谷氨酸的含量;延长离体脑片由谷氨酸引起 PS 消失前时间,提高 PS 恢复的百分率,并可明显拮抗谷氨酸诱导的[Ca~(2 )]_i 的升高,但对 KCl 引起的[Ca~(2 )]_i 增高无抑制作用,提示9602可以阻断谷氨酸介导的 Ca~(2 )内流。结论:抗谷氨酸作用可能是9602对脑缺血损伤保护作用的环节之一。     

钩藤散含药血清对PC12细胞损伤的保护作用

目的:探讨钩藤散含药血清对PC12细胞损伤的保护作用。方法:分别采用谷氨酸及过氧化氢造成PC12细胞损伤模型,以MTT法及LDH活性观察钩藤散含药血清对PC12细胞损伤模型的影响。结果:发现钩藤散含药血清对PC12细胞损伤所致的细胞形态改变有明显的保护作用,可增强细胞活力,降低LDH活性。结论:钩藤散含药血清可对抗谷氨酸及过氧化氢造成的PC12细胞损伤,对细胞有明显的保护作用。     

益心康胶囊对整体及离体大鼠心肌肌纤维膜损伤的保护作用

目的：探讨益心康胶囊对整体及离体大鼠心肌纤维膜损伤的保护作用。方法：应用异丙肾上腺素（ISO）致心肌缺血和离体心脏停灌／再灌模型,观察整体缺血和离体再灌注对大鼠心肌肌纤维膜的损伤作用,评价中药复方－－益心康胶囊（H303）的保护作用。结果：两种损伤均可导致心肌细胞严重损伤,表现为血清LDH,CPK和MDA水平升高,心肌肌纤维膜磷脂分解产物游离脂肪酸（FFA）的增加,膜脂流动性和Na,K -ATPase活性降低,整体大鼠H303预先口服给药或离体在鼠心脏预先灌注后,可明显改善因缺血或再灌注所致的心肌细胞膜的损伤,能减轻整体大鼠血清脂质过氧化程度,降低血清酶水平,降低心肌肌纤维膜FFA含量,对膜脂流动性（LFU）也具有明显的改善作用,表现为显著降低荧光偏振度,微粘度值,明显增加LFU,对Na ,K-ATPase活性也具有一定的保护作用,结论：缺血或缺血再灌注可导致心肌细胞损伤,H303对生物膜的损伤具有明显的保护作用,即通过降低脂质过氧化等作用,使得生物膜结构得到保护,从而使膜酶活性,膜脂流动性得以维持。     

三七皂甙对大鼠海马脑片缺氧保护的保护作用

采用大鼠海马脑片缺氧模型，从细胞水平上探讨三七皂甙（Ｒｇ１）对神经细胞缺氧损伤的保护作用及其机理。实验结果显示，Ｒｇ１能提高神经细胞的耐缺氧能力，并对神经细胞缺氧损伤具有明显的保护作用，其作用机制与Ｒｇ１拮抗钙离子内流和对抗谷氨酸的毒性作用有密切关系。     

六味地黄汤及其活性组分含药血清对原代培养海马神经元的保护作用

目的：运用血清药理学方法观察六味地黄汤（LW）及其活性组分（CA4、CA4－3）含药血清对原代培养胚胎大鼠海马神经元的保护作用。方法：首先通过MTT法观察了LW及CA4、CA4－3对海马神经元存活的影响,进而采用流式细胞术观察LW及CA4、CA4－3对海马神经元线粒体膜电位的影响。结果：LW及CA4、CA4－3含药血清均可不同程度地提高海马神经元的存活率,并且稳定线粒体膜电位与其神经保护作用具有密切关系。     

复方灯盏花滴丸对谷氨酸致原代培养大鼠海马神经元凋亡的保护作用

目的:探讨复方灯盏花滴丸对谷氨酸致大鼠原代海马神经了亡凋亡的保护作用及其作用机制.方法:采用中药血清药理学方法,制备含药血清;实验分为空白对照组、模型组、尼莫地平组(0.05 g·kg~(-1)),复方灯盏花滴丸高、低剂量组(5.00,1.25 g·kg~(-1)).原代培养大鼠乳鼠大腑海马神经元,以谷氨酸(终浓度为500μmol·L~(-1))作用20 min复制损伤模型,以5%含药皿清干预,MTT法测定细胞存活率,榆测细胞内Ca~(2+)浓度,Hoechst33342和PI双染法荧光显微镜观察神经细胞形态学变化和细胞坏死和凋亡百分率,流式细胞仪检测细胞凋亡.结果:谷氨酸对原代培养的海马神经元有损伤作用,荧光显微镜观察到细胞核皱缩、碎裂及凋亡小体,海马神经元的存活率下降,坏死、凋亡明显高于对照组,复方灯盏花滴丸高、低剂量组和尼奠地平组能明显对抗谷氨酸引起的神经细胞形态改变,海马神经元存活率明显提高;复方灯盏花滴丸含药血清组细胞凋亡率较谷氨酸损伤组显著降低,细胞内钙超载明显减轻.结论:复方灯盏花滴丸对谷氨酸致大鼠海马神经元的凋亡具有保护作用,其作用机制可能与其能降低细胞内Ca超载有关.     

用血清药理学方法观察“李氏5号方”对原代培养皮层神经细胞谷氨酸损伤的保护作用

运用血清药理学方法,取新生小鼠大脑皮层进行体外神经细胞培养,建立离体的神经细胞谷氨酸损伤模型,通过形态学观察、ＭＴＴ 自动微量法研究“李氏５ 号方”对原代培养皮层神经细胞谷氨酸损伤的影响。研究结果表明“李氏５ 号方”水煎剂（ 含挥发油成分） 虽能抑制原代培养皮层神经细胞损伤,但作用不显著,而“李氏５ 号方”含药血清则能不同程度地抑制谷氨酸介导的神经损伤,并呈剂量依赖性。提示“李氏５ 号方”可拮抗兴奋性氨基酸神经毒性     

田麻益智颗粒对谷氨酸损伤的原代海马神经元的保护作用

目的:通过观察田麻益智颗粒含药血清对GLu损伤的胎鼠海马神经元的保护作用,探讨田麻益智颗粒对脑损伤神经元的保护机制。方法:取孕7 d Wistar大鼠的胎鼠海马,进行体外培养,并对培养的神经干细胞进行神经元鉴定。部分细胞开始贴壁,贴壁细胞呈圆形结果培养24 h后,大部分细胞己经贴壁生长:分化3 d后神经元胞体增大,突起延长并出现分枝,形成稀疏的网络,7d胞体大,突起长,分枝连接成网,相互联系增多细胞成熟。MTT结果表明,田麻益智颗粒含药血清保护组与Glu损伤模型组相比细胞活性明显升高(P<0.05)。平均值,田麻益智颗粒中剂量组对Glu损伤的神经元细胞保护作用与尼莫地平组的保护作用接近,优于正常组及模型组。说明田麻益智颗粒含药血清对Glu损伤海马神经元有保护作用。免疫荧光结果半定量分析结果标记CAMKII的神经元细胞中,统计分析结果表明正常组平均灰度值为148.6±9.88、保护组灰度值151.0±12.37低于Glu损伤组171.5±6.87(P<0.05),说明保护组中CAMKII的含量与正常组接近,并且较Glu损伤模型组少,中剂量组田麻益智颗粒对谷氨酸损伤神的海马神经元的有较好的保护作用。     

复方川贝颗粒含药血清对豚鼠离体气管平滑肌收缩功能影响随机平行对照研究

[目的]观察复方川贝颗粒含药血清对豚鼠离体气管平滑肌收缩功能影响。[方法]使用随机平行对照方法,将清洁级豚鼠12只按随机数字表法随机分为6组,用于制作含药血清：模型组,复方川贝颗粒低、中、高剂量组,二陈丸组,氨茶碱组,2只/组,雌雄各半。其余10只准备取气管制作气管螺旋条的豚鼠,根据抽签结果决定先后顺序。制作新鲜的豚鼠离体气管螺旋条,将其放入克氏液中,使用磷酸组胺（His）引发豚鼠气管螺旋条收缩。观测加入复方川贝颗粒含药血清后1,3,5min的解痉百分率。[结果]复方川贝颗粒含药血清中剂量组解痉率与模型组比较均有明显上升（P〈0.05）,复方川贝颗粒含药血清对His引起的气管平滑肌收缩反应具有拮抗作用,药物与标本接触5min后作用较好。[结论]复方川贝颗粒含药血清对His引起的气管平滑肌收缩反应具有一定拮抗作用。     

清心安神方含药血清对离体心室肌细胞内向钾电流（Ik1）的影响

目的：观察清心安神方含药血清对豚鼠离体心室肌细胞内向钾电流（Ik1）。方法：分离豚鼠的心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术电流钳模式记录动作电位,观察含40%的空白血清及含药血清的细胞外液灌流对 Ik1的影响。结果：清心安神方含药血清对豚鼠心室肌细胞内向钾电流（Ik1）影响：40%含药血清组对IKl内向电流成分影响为：40%含药血清组从（-30.68±10.39）pA/pF抑制为（-21.03±3.47）pA/pF（n=7 P〈0.05）。结论：清心安神方含药血清对大鼠心室肌细胞IKl内向成份有抑制作用,呈浓度依赖性。     

金丝桃苷对离体缺氧/缺糖再灌注脑损伤的保护作用

 目的研究金丝桃苷对离体缺氧缺糖/再灌注脑损伤的保护作用。方法小鼠离体脑片缺氧缺糖/再灌注(OGD/RP)诱导的模型上,以2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)产物formazan定量测定脑片活性,同时计数单位面积脑片皮层和纹状体区的存活神经元。新生大鼠原代培养神经元OGD/RP损伤后测定乳酸脱氢酶(LDH)释放和噻唑蓝(MTT)液比色吸光度,评价神经元活性。观察不同浓度的金丝桃苷对于离体脑损伤的保护作用。结果金丝桃苷可有效减轻OGD/RP对脑片的缺血性损伤,并对于OGD/RP原代神经元具有显著的保护作用。结论金丝桃苷对离体缺氧缺糖/再灌注脑损伤具有明显的保护作用,此作用可能与其抗自由基生成、抑制Ca²⁺内流及脂质过氧化物形成有关。     

补肾方含药血清促进PC12细胞增殖及其拮抗谷氨酸神经毒作用的研究

目的:运用中药血清药理学方法研究补肾复方含药血清(BS)促进体外培养的PC12细胞增殖及其拮抗谷氨酸兴奋性神经毒损伤的作用.方法:以MTT法观察BS对体外培养的PC12细胞活力的影响及其拮抗谷氨酸损伤的作用,采用流式细胞术观察BS对谷氨酸所诱导PC12细胞凋亡的影响.结果:BS含药血清可以增强PC12细胞活力,拮抗谷氨酸的兴奋性神经毒作用且在20%浓度时作用最强,并且能够抑制谷氨酸诱导的PC12细胞早期凋亡.结论:补肾方BS可能具有神经保护作用.     

补肾方含药血清拮抗谷氨酸兴奋性神经毒作用及其机制的初步研究

目的：研究补肾复方含药血清(BS)对谷氨酸诱导凋亡PC12细胞的保护作用；并观察BS对谷氨酸诱导凋亡的PC12细胞胞浆内钙信号转导机制的影响。方法：采用MTT法测定谷氨酸致损伤后PC12细胞的存活力；采用荧光显微镜技术观察BS对谷氨酸所诱导PC12细胞凋亡的影响；以流式细胞术观察BS对谷氨酸诱导凋亡的PC12细胞胞浆内游离钙离子浓度的影响；运用蛋白免疫印迹(Western—blotting)技术观察BS对凋亡的PC12细胞CaMKⅡ的影响。结果：20％浓度BS含药血清可以拮抗谷氨酸的兴奋性神经毒作用，抑制PC12细胞凋亡；加％浓度BS含药血清能够拮抗谷氨酸诱导凋亡的PC12细胞胞浆内钙离子浓度的升高，抑制CaMKⅡ的磷酸化水平增高。结论：BS含药血清具有拮抗谷氨酸兴奋性神经毒的作用，其神经保护作用的机制可能与减轻钙超载，调控钙信号通路关键信号分子的磷酸化有关。     

麦冬多糖MDG-1对鼠实验性心肌缺血的保护作用

目的研究麦冬多糖（MDG-1）对鼠离体心脏缺血再灌注损伤和皮下注射异丙肾上腺素致急性心肌缺血的保护作用。方法在离体实验中,采用Langendorff豚鼠离体心脏缺血再灌注模型,将豚鼠随机分为缺血再灌注损伤组（IRI）、阳性对照组（果糖二磷酸钠,FDP）和MDG-1给药组。阳性对照组和MDG-1给药组各设10^-6～10^-4g／mL3个剂量,分别测定缺血再灌注后不同时间的心脏收缩幅度、心率、冠脉流量。在整体动物实验中,采用大鼠皮下注射异丙肾上腺素致急性心肌缺血的模型,分别给予大鼠口服MDG-110、20、40mg／kg,以普奈洛尔为阳性对照,分别设置模型组和正常对照组,观察心电图ST段位移和血浆乳酸脱氢酶（LDH）的活性。结果在离体实验中,不同剂量的MDG-1可以增加离体心脏缺血再灌注后的冠脉流量（P〈0．01）,较快恢复心脏收缩幅度（P〈0．01）,抑制由缺血再灌注引起的心率加快（P〈0．01）。在整体实验中,给予大鼠口服40mg／kgMDG-1可以抑制异丙肾上腺素导致的心肌缺血大鼠血浆LDH活性的升高（P〈0．05）,而对心电图ST段位移无显著的影响（P〉0．05）。结论MDG-1具有拮抗豚鼠离体心脏缺血再灌注损伤的作用,口服MDG-1对异丙肾上腺素所致大鼠心肌缺血损伤具有一定的保护作用。     

鲜姜有效部位对H2O2致血管内皮细胞ECV-304氧化损伤的保护作用

目的研究鲜姜有效部位对离体培养的血管内皮细胞ECV-304氧化损伤的保护作用。方法取健康大鼠每日ig不同剂量(200、400、800mg/kg)鲜姜有效部位或洛伐他汀(40mg/kg),共4d,取含药血清作为受试药物。采用H2O2建立离体培养的ECV-304细胞氧化应激的损伤模型,测定细胞存活率、内皮细胞培养液中LDH、MDA水平及细胞中MDA水平。结果鲜姜有效部位含药血清能够显著提高H2O2损伤的内皮细胞的存活率,降低受损内皮细胞培养液中LDH,并减少细胞培养液及细胞中MDA。结论鲜姜有效部位具有较强的抗氧化能力及内皮细胞保护作用,可减轻内皮细胞的氧化损伤。     

聪圣胶囊对拟缺血再灌注大鼠原代培养皮层神经细胞的保护作用

目的：研究聪圣胶囊对大鼠原代培养皮层神经细胞拟缺血再灌注损伤的影响。方法：采用血清药理学和流式细胞仪的方法，观察聪圣胶囊含药血清对缺糖缺氧（3h）拟缺血再灌注（0，3，6，18h）损伤神经细胞乳酸脱氢酶（LDH）漏出及神经细胞凋亡率的影响。结果：聪圣胶囊含血清（2，4，8g/kg）可抑制缺糖-缺氧3h再灌（0，3，6和18h）引起的神经细胞内LDH的释放。降低缺糖-缺氧3h再灌18h导致的凋亡细胞率。结论：聪圣胶囊可减轻缺血性脑损伤。     

六味地黄方含药血清对氧化低密度脂蛋白损伤血管内皮细胞的保护作用

目的：观察六味地黄方大鼠含药血清对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）损伤血管内皮细胞（VEC）的保护作用。方法：以MTT法观察人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的活力和流式细胞仪测定内皮细胞凋亡率,并通过测定胞内丙二醛（MDA）含量及细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）、一氧化氮（NO）含量与超氧化物歧化酶（SOD）活力,探讨六味地黄方对血管内皮细胞损伤的保护作用及机制。结果：六味地黄方含药血清能促进ox LDL损伤的血管内皮细胞增殖、抑制ox LDL造成的内皮细胞凋亡、降低胞内MDA含量、减少细胞LDH释放量,提高SOD活力及NO含量。结论：六味地黄方对氧化低密度脂蛋白损伤的血管内皮细胞有一定的保护作用。