生物力学因素在激素性股骨头坏死中对软骨细胞的作用

目的建立大鼠激素性股骨头坏死正常负重和超负重模型,探究力学因素在激素性股骨头坏死中对于软骨细胞的作用。方法4月龄健康Wistar大鼠随机分成实验组与对照组。臀肌注射地塞米松磷酸钠(20mg/kg),每周1次,共计8w。实验组,置于1km/h跑步机中,强迫动物跑动,形成股骨头坏死超负重模型;对照组,生理状态下正常负重。分别于2、4、6、8w处死大鼠,取右侧股骨头标本,行免疫组织化学法Bcl-2和MMP-1染色,比较不同组之间的累计光密度(IOD)值。取左侧股骨头行组织病理学检查。结果实验组Bcl-2和MMP-1累计光密度(IOD)与对照组比较,第4周起有明显统计学差异(P0.05)。实验组Bcl-2和MMP-1表达随激素注射时间增加有统计学意义(P0.05),q检验显示实验组Bcl-2和MMP-1表达从4w开始两两之间有统计学意义,8w时表达最多(P0.05)。实验组8w时病理学呈股骨头坏死表现。结论力学因素通过影响Bcl-2和MMP-1的生成,调节着软骨细胞的凋亡,促进软骨组织的改建。     

激素性股骨头坏死患者股骨头骨组织骨保护素NF-κB受体活化因子配基mRNA表达

目的 观察激素性股骨头坏死骨组织中骨保护素(osteoprotegerin,OPG)/NF-κB受体活化因子配基(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)mRNA表达情况,探讨长期应用激素导致股骨头坏死的另一病理机制. 方法 2007年3月-2008年3月,取35例激素性股骨头坏死患者的股骨头骨组织和21例股骨颈骨折患者股骨头骨组织,分别作为实验组和对照组.两组男女比例均为4:3;年龄41～70岁,其中实验组平均55.34岁,对照组平均55.33岁.实验组最近2年内接受皮质激素治疗超过3周或超过1周的大剂量冲击治疗,对照组未接受过超过1周的激素治疗.所有标本行多聚甲醛固定后石蜡包埋,HE染色及总RNA提取,采用实时定量PCR(real-time quantita-rive PCR,RTQ-PCR)技术检测OPG mRNA和RANKL mRNA的表达水平,并计算OPG mRNA和RANKL mRNA的比值. 结果 HE染色结果显示,实验组未见完整骨小梁和骨单位,可见不连续的骨碎片,碎片骨陷窝内骨细胞大部分消失,周围有大量炎性肉芽组织;对照组可见完整骨单位由板层骨构成,板层骨连续完整,围绕血管呈同心圆排列,小梁骨陷窝内可见骨细胞.RTQ-PCR检测显示,实验组OPG mRNA及RANKL mRNA分别为1.35 4±0.42及4.36 4±1.35,OPGmRNA/RANKL mRNA为0.34 4±0.16;对照组分别为1.78 4±0.63及3.49 4±1.02,OPG mRNA/RANKL,mRNA为0.54 4±0.20;实验组OPG mRNA表达水平明显低于对照组,而RANKL mRNA表达明显高于对照组,OPG mRNA/RANKL mRNA较对照组明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05). 结论 长期应用皮质激素致股骨头坏死可能与其调控OPG mRNA和RANKLmRNA表达有关.     

激素性股骨头坏死患者骨组织MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2蛋白的表达

目的观察激素性股骨头坏死患者股骨头骨组织中基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、基质金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）、基质金属蛋白酶组织抑制剂-2（TIMP-2）蛋白表达情况,探讨糖皮质激素对MMPs/TIMPs系统的影响,及其与股骨头坏死的相互关系。方法 2007年3月-2008年3月,取激素性股骨头坏死患者股骨头骨组织35例和股骨颈骨折患者股骨头骨组织21例,分别作为试验组和对照组。两组男女比例均为4：3;年龄41～70岁,其中试验组平均55.34岁,对照组平均55.33岁;试验组最近2年内接受过皮质激素治疗超过3周或超过1周的大剂量冲击治疗,对照组从未接受过超过1周的激素治疗。所有标本行多聚甲醛固定后石蜡包埋,HE染色及蛋白提取,采用蛋白免疫印迹（Westernblot）技术检测MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2蛋白的表达水平并求出MMPS/TIMPS比值。结果 HE染色：试验组未见完整的骨小梁和骨单位,可见不连续的骨碎片,碎片骨陷窝内骨细胞大部分消失,周围有大量炎性肉芽组织。对照组可见完整骨单位由板层骨构成,板层骨连续完整,围绕血管呈同心圆排列,小梁骨陷窝内可见骨细胞。Westernblot检测：激素组与对照组比较,MMP-2、MMP-9蛋白表达增高,TIMP-1、TIMP-2蛋白表达水平降低,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论长期应用糖皮质激素致股骨头坏死的效应可能与其调控MMPs/TIMPs系统表达有关。     

基质金属蛋白酶9及TGF-β1 mRNA和蛋白在骨关节炎中的表达

目的 TGF-β1对骨关节炎(osteoarthritis,OA)关节软骨起保护作用,探讨OA中基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)、TGF-β1 mRNA和蛋白表达的相关性,为临床治疗OA寻找有效的干预靶点提供理论依据。方法取自愿捐赠的关节软骨及滑膜标本,其中OA患者60例(实验组),外伤截肢、交叉韧带断裂、盘状软骨损伤与半月板损伤患者20例(正常对照组)。行HE染色观察关节软骨与滑膜的病理组织学改变,免疫组织化学染色观测MMP-9及TGF-β1蛋白表达,原位杂交技术检测MMP-9及TGF-β1 mRNA表达;并进行相关性分析。结果 HE染色显示实验组关节软骨细胞固缩、坏死、排列紊乱,细胞外基质断裂,关节滑膜细胞肥大增生、淋巴细胞和单核细胞浸润,多数小血管增生;正常对照组软骨细胞排列整齐、基质染色均匀,滑膜组织无慢性炎症表现、无明显增生。两组均可见MMP-9、TGF-β1 mRNA和蛋白阳性表达,阳性细胞包括软骨细胞、滑膜衬里层细胞及滑膜下层的血管内皮细胞、成纤维细胞、炎性浸润细胞等。实验组MMP-9及TGF-β1 mRNA和蛋白表达均高于正常对照组(P<0.01)。实验组MMP-9 mRNA与蛋白表达成正相关(r=0.924,P=0.000),TGF-β1 mRNA及蛋白表达亦成正相关(r=0.941,P=0.000);实验组MMP-9及TGF-β1蛋白表达成负相关(r=—0.762,P=0.000),MMP-9 mRNA及TGF-β1 mRNA表达成负相关(r=?0.681,P=0.000)。结论 OA中TGF-β1的高表达下调了关节软骨与滑膜中MMP-9的表达,对OA关节软骨起保护作用,从而延缓OA进展。     

基质金属蛋白酶9及TGF-β_1 mRNA和蛋白在骨关节炎中的表达

目的 TGF-β1对骨关节炎(osteoarthritis,OA)关节软骨起保护作用,探讨OA中基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)、TGF-β1 mRNA和蛋白表达的相关性,为临床治疗OA寻找有效的干预靶点提供理论依据。方法取自愿捐赠的关节软骨及滑膜标本,其中OA患者60例(实验组),外伤截肢、交叉韧带断裂、盘状软骨损伤与半月板损伤患者20例(正常对照组)。行HE染色观察关节软骨与滑膜的病理组织学改变,免疫组织化学染色观测MMP-9及TGF-β1蛋白表达,原位杂交技术检测MMP-9及TGF-β1 mRNA表达;并进行相关性分析。结果 HE染色显示实验组关节软骨细胞固缩、坏死、排列紊乱,细胞外基质断裂,关节滑膜细胞肥大增生、淋巴细胞和单核细胞浸润,多数小血管增生;正常对照组软骨细胞排列整齐、基质染色均匀,滑膜组织无慢性炎症表现、无明显增生。两组均可见MMP-9、TGF-β1 mRNA和蛋白阳性表达,阳性细胞包括软骨细胞、滑膜衬里层细胞及滑膜下层的血管内皮细胞、成纤维细胞、炎性浸润细胞等。实验组MMP-9及TGF-β1 mRNA和蛋白表达均高于正常对照组(P<0....     

活血化瘀中药对激素性股骨头缺血坏死模鼠TGF-β1表达的实验研究

目的：观察活血化瘀中药对激素性股骨头缺血性坏死大鼠转化生长因子β1（TGF-β1）表达的影响,进一步探讨其防治激素性股骨头坏死的作用机制。方法：采用清洁级SD大鼠40只,随机分为空白组4只和模型组36只．模型组每周2次腹腔注射醋酸泼尼松龙24．5mg／kg,经6周诱导出早期激素性股骨头缺血坏死的模型,空白组每周2次腹腔注射同等剂量的生理盐水。6周后处死空白组4只和模型组4只,进行光、电镜观察,确定造模成功。随后将其余32只模型组大鼠再随机分为治疗组16只和对照组16只,分别灌服桃红四物汤和生理盐水,于灌胃后第6、8周检测血清中TGF-β1的含量;检测股骨头局部TGF-β1mRNA的转录及股骨头局部TGF-β1的表达。结果：①图像分析仪分析：治疗组股骨头局部TGF—β1较对照组表达明显增强,两组有明显差异（P〈0．01）。②血清TGF-β1含量检测：治疗组血清中TGF-β1的表达增强,与对照组相比有明显差异（P〈0．01）。③股骨头局部TGF-β1 mRNA的转录：治疗组在第6周时表达即增强,在第8周时表达又降低,而对照组在第6周时表达减少,在第8周时未检测到TGF-β1 mRNA的表达,两组有明显差异（P〈0．05,P〈0．01）。结论：活血化瘀中药可促进激素性股骨头缺血坏死模鼠股骨头局部TGF-β1 mRNA的转录水平以及股骨头局部TGF-β1的表达,促进坏死股骨头的修复。     

雷奈酸锶对大鼠激素性股骨头坏死的作用及其机制研究

[目的]研究雷奈酸锶对大鼠激素性股骨头坏死的作用及其机制。[方法]将60只Wistar大鼠采用激素造模法造模(每日腹腔注射强的松20 mg/kg,连续注射4周,同时灌胃阿莫西林溶液预防感染)。造模成功的大鼠随机分为对照组和实验组,对照组(生理盐水组)30只大鼠给予灌胃生理盐水;实验组(雷奈酸锶组)30只大鼠给予灌胃雷奈酸锶干预(900 mg/kg·d)。干预12周后处死大鼠取材,行HE、油红O染色;免疫组织化学染色检测两组股骨头内DKK-1、Wnt3a、GSK-3β、β-catenin、Rux-2及PPAR-γ2等表达水平。[结果]通过计算骨小梁空骨陷窝率得出对照组与实验组大鼠股骨头坏死发生率分别为66.67%(20/30)和56.67%(17/30)(P<0.05)。同时与对照组相比,给予雷奈酸锶干预的实验组脂肪细胞数量明显减少且其体积明显减小(P<0.05);免疫组织化学法结果显示实验组大鼠股骨头内DKK-1、PPARγ2的表达明显低于对照组,而实验组大鼠股骨头内Wnt3a、GSK-3β、β-catenin、Rux-2的表达明显高于对照组(P<0.05)。[结论]雷奈酸锶可以通过抑制大鼠激素性股骨头坏死模型的DKK-1过表达,激活经典Wnt信号通路,进而促进成骨分化及成骨活性,抑制其成脂分化,在一定程度上防治早期激素性股骨头坏死的发生和发展。     

激素性股骨头坏死患者骨髓基质细胞骨保护素/核因子kappa B受体活化因子配基蛋白表达的研究

目的观察激素性股骨头坏死患者骨髓基质细胞（bone marrow stroma cells,BMSCs）骨保护素（osteoprotegerin,OPG）/核因子kappa B受体活化因子配基（receptor activator of nuclear factor kappa B ligand,RANKL）蛋白表达情况,探讨长期应用激素导致股骨头坏死的另一病理机制。方法 2007年3月至2008年3月,取激素性股骨头坏死患者骨髓及股骨头骨组织35例（实验组）,股骨颈骨折患者骨髓及股骨头骨组织21例（对照组）。两组男女比例均为4：3;年龄41～70岁,实验组平均55.34岁,对照组平均55.33岁;实验组最近2年内接受过皮质激素治疗超过3周或超过1周的大剂量冲击治疗,对照组从未接受过超过1周的激素治疗。骨组织标本行多聚甲醛固定后石蜡包埋,HE染色。所取骨髓采用贴壁法分离培养骨髓基质细胞,采用蛋白免疫印迹（Western blot）技术检测骨髓基质细胞OPG和RANKL蛋白表达水平,并得出OPG/RANKL比值。结果 HE染色：实验组未见完整的骨小梁和骨单位,可见不连续的骨碎片,碎片骨陷窝内骨细胞大部分消失,周围大量炎性肉芽组织。对照组可见完整骨单位由板层骨构成,板层骨连续完整,围绕血管呈同心圆排列,小梁骨陷窝内可见骨细胞。骨髓基质细胞Western blot检测：实验组和对照组OPG/RANKL蛋白表达比分别为1.13±0.65和2.54±0.35,实验组明显低于对照组,有统计学差异（P〈0.05）。结论长期应用糖皮质激素致股骨头坏死可能与其调控骨髓基质细胞OPG和RANKL表达有关。     

阿仑膦酸钠对长期应用糖皮质激素大鼠股骨头骨组织MMP/TIMP系统的影响

目的观察阿仑膦酸钠对长期应用皮质激素大鼠骨组织中基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、MMP-9及其特异性抑制因子基质金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）和TIMP-2mRNA表达的影响,探讨阿仑膦酸钠预防激素性股骨头坏死的效果及其作用机制。方法健康SD大鼠30只,雌雄各半,随机分为激素组、阿仑膦酸钠组和空白对照组,每组10只。激素组和阿仑膦酸钠组肌内注射醋酸泼尼松龙12.5mg/kg,每周2次,阿仑膦酸钠组同时给予阿仑膦酸钠5mg/kg灌胃,每周1次;对照组只给予相同体积生理盐水肌注。4周后取左侧股骨头骨组织石蜡包埋,HE染色,鉴定骨质疏松和股骨头坏死情况;取右侧股骨头骨组织提取总RNA,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2的mRNA表达水平。结果 MMP-2在激素组、阿仑膦酸钠组、对照组中的表达分别为0.15±0.04、0.13±0.07、0.09±0.03,MMP-9在三组中的表达分别为0.13±0.03,0.09±0.02和0.08±0.02;TIMP-1在三组中的表达分别为0.07±0.02,0.13±0.4和0.18±0.04;TIMP-2在三组中的表达分别为0.45±0.15,0.63±0.10和0.69±0.19。激素组与对照组比较,MMP-2、MMP-9mRNA表达增高,TIMP-1、TIMP-2mRNA表达降低,差异有统计学意义（P〈0.05）。阿仑膦酸钠组与对照组比较,仅MMP-2显著性差异。阿仑膦酸钠组与激素组比较,MMP-2、MMP-9mRNA表达降低,TIMP-1、TIMP-2mRNA表达增加,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论醋酸泼尼松龙上调大鼠骨组织中MMP-2、MMP-9mRNA的表达,下调TIMP-1、TIMP-2水平,使MMPs/TIMPs比值升高。阿仑膦酸钠可以拮抗皮质激素对MMPs/TIMPs系统的调控。     

Beclin 1和MAP1-LC3在家兔激素性股骨头缺血坏死中表达的实验研究

目的观察家兔激素性股骨头缺血坏死模型中自噬相关基因Beclin 1和微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1light chain 3,MAP1-LC3)的表达情况,探讨自噬在激素性股骨头缺血坏死中的作用。方法成年日本大耳白兔40只,随机分为实验组(n=28)与对照组(n=12)。实验组肌肉注射甲基强的松龙7.5mg/kg,2次/周,共8周;对照组肌肉注射生理盐水2mL/只,2次/周,共8周。8周后处死家兔,取双侧股骨头。左侧股骨头制成普通病理切片后进行HE染色,用免疫组化法检测Beclin 1和MAP1-LC3的表达;右侧股骨头迅速置于液氮中保存,蛋白提取后,采用Western blot方法检测股骨头中Beclin 1及MAP1-LC3蛋白的表达。结果 HE染色显示家兔激素性股骨头坏死模型制造成功。免疫组化:实验组Beclin 1和MAP1-LC3的阳性率分别为96.43%、92.86%,明显高于对照组16.67%、8.33%,差异具有统计学意义(P0.05)。Western blot检测:实验组与对照组比较Beclin 1及MAP1-LC3蛋白表达增高,差异具有统计学意义(P0.05)。结论肾上腺皮质激素造成的家兔早期股骨头缺血坏死模型中,自噬基因Beclin 1和MAP1-LC3的表达增高,表明自噬参与了激素性股骨头缺血坏死的发病。     

移植肾组织TGF-β1和MMP-2表达及IV型胶原沉积与慢性移植肾肾病的关系

目的 探讨移植肾组织中转化生长因子β1(TGF-β1)和基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达及IV型胶原沉积与慢性移植肾肾病(CAN)的关系.方法 对18例CAN患者进行了移植肾切除术.光镜下观察切除的肾组织标本并根据其纤维化的程度进行分期,用免疫组织化学技术和图像分析法检测移植肾组织中TGF-β1和MMP-2表达量及IV型胶原沉积情况,并分析患者血肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)的水平与移植肾纤维化程度的关系.结果 随着患者移植肾纤维化程度的加重,血清肌酐、尿素氮及肾组织中TGF-β1、IV型胶原基因表达量均增加,MMP-2表达量于移植肾纤维化早期明显升高,并随移植肾纤维化程度加重而逐渐降低.结论 移植肾组织中TGF-β1表达量增高及IV型胶原沉积可以促进CAN的进程,而MMP-2则可抑制其进展.     

股骨头坏死关节软骨金属蛋白酶的表达

目的 探讨金属蛋白酶在股骨头坏死过程中导致关节软骨破坏的作用。方法 临床上采集激素性股骨头坏死、原发性髋关节骨性关节炎及新鲜股骨头／颈骨折患者股骨头关节软骨，切片后进行免疫组化检测MMP-1、MMP-13及TIMP-1的表达。结果 股骨头坏死、原发性髋关节骨性关节炎关节软骨均有较强的MMP-1、MMP-13表达及TIMP-1较低水平的表达。结论 金属蛋白酶在股骨头坏死关节软骨的破坏过程中起着重要的作用。     

转化生长因子-β1在糖尿病骨折延迟愈合大鼠中的表达

目的 观察转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达,探讨其对糖尿病骨折延迟愈合的影响.方法 70只大鼠随机分为对照组和链脲佐菌素按60 mg/kg诱导的糖尿病组,血糖>11.2mmol/L为诱导成功.均造成左侧胫骨骨折,于1、2、3、4、6、8周摄X片,取骨痂苏木素-伊红(HE)染色,免疫组织化学和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测骨痂及血清TGF-β1.结果 X片和HE染色均示实验组较对照组骨形成滞后;实验组4周TGF-β1表达达高峰,迟于对照组3周,3周灰度值:实验组189.59±2.76,对照组166.74±1.33(P<0.05),3周血清含量:实验组(12.05±1.56) μg/L,对照组(17.48±0.56)μg/L(P<0.05).结论 糖尿病大鼠骨折后血清及骨痂TGF-β1减少是致其延迟愈合的原因之一.     

激素性股骨头坏死与凝溶紊乱的实验研究

目的：观察激素性股骨头坏死家兔模型的血液凝溶功能变化,探讨激素性股骨头坏死的发病机理。方法：健康雄性成年家兔36只,随机分为对照组（注射生理盐水）,实验组（冲击注射地塞米松）。检测血脂、血浆组织纤溶酶原激活物（tPA)、纤溶酶原激活物抑制物（PAI）、血栓素A2（TXA2）、前列环素（PGI）的阶段性变化。观察实验35、70d双侧股骨头的病理变化。结果：实验组15d甘油三脂、总胆固醇、TXA2／PGI比值均显著高于对照组。实验30、60d,实验组tPA／PAI比值显著低于对照组。实验组35、70d双侧股骨头软骨下区骨陷窝空虚率均较对照组显著增高。结论：地塞米松冲击应用可引起家兔血液高凝、低纤溶。血液凝溶功能紊乱可能参与兔激素性股骨头坏死的发病。     

激素致股骨头骨细胞坏死、凋亡及对bcl-2表达影响的实验研究

目的：探讨激素性股骨头坏死的发病机制。方法：选用健康成年大白鼠30只，体重约200g，随机分为实验组(冲击注射地塞米松)和对照组。实验8周处死动物，取股骨头作骨细胞组织病理学、超微结构观察，并用TUNEL及免疫组化技术分别检测骨细胞凋亡和bcl-2表达情况。结果：光镜下实验组较对照组股骨头骨小梁变细、稀疏、空骨陷窝明显增多，脂肪细胞增大。电镜下实验组骨细胞体积缩小，核固缩，线粒体及高尔基体肿胀，染色质边聚较多见。实验组凋亡骨细胞增多，bcl-2表达骨细胞轻度增加。结论：激素性股骨头坏死是骨细胞凋亡和坏死共同作用的结果。     

犬尿道瘢痕组织中TGF—β1和MMP-1表达的研究

目的探讨犬尿道瘢痕组织中转化生长困子β1（TGF-β）和基质金属蛋白酶-1（MMP1）的表达及其意义。方法选取12只健康雄性成年犬，采用小儿电切镜制作犬尿道狭窄动物模型，应用免疫组织化学方法检测犬尿道狭窄段瘢痕组织中TGF-β1和MMP-1的表达，以实验组犬尿道狭窄远端2cm处正常尿道组织作为对照组。结果TGF-β1在实验组犬尿道瘢痕组织与对照组的阳性表达率分别为100．00％与18．18％，两者差异具有统计学意义（P〈0．05）；MMP-1在实验组犬尿道瘢痕组织与对照组的阳性表达率分别为63．64％与9．09％，两者差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论TGF-β1和MMP-1与犬尿道瘢痕形成关系密切。     

转化生长因子-β1诱导骨髓间充质干细胞向髓核样细胞转化的研究

目的 探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)向髓核样细胞分化的可能性.方法 密度梯度法分离培养兔BMSCs,取BMSCs(P3).实验组:含TGF-β1的诱导培养基,对照组:不含TGF-β1诱导培养基,体外培养两周.阿尔新蓝法(Alcian blue)检测培养基内葡糖胺聚糖(GAG)含量.培养第14天,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测髓核样细胞Ⅱ型胶原(CollagenⅡ)及聚集蛋白多糖(Aggrecan) mRNA基因表达.免疫组织化学法测定CollagenⅡ的含量变化.结果 GAG检测结果显示,第7、10、13天实验组GAG含量均显著高于对照组(P＜0.01).实验组CollagenⅡ免疫组织化学染色阳性,表达量较对照组高.Real-time PCR结果证实:实验组CollagenⅡ和Aggrecan mRNA表达水平较对照组显著增高(P＜0.01).结论 TGF-β1能明显增加BMSCs向髓核样细胞分化的诱导生物活性,促进BMSCs向髓核样细胞定向分化.     

骨保护素/骨保护素配体在大鼠创伤性股骨头坏死中的表达及意义

[目的]探讨大鼠创伤性股骨头坏死模型中OPG/OPGL蛋白表达及意义。[方法]6个月龄SD大鼠32只,雌雄不限。分组:实验组按术后1、2、4、6周4个时间点将动物随机分成4组,每组8只。对照组采用自身非实验侧股骨头做正常对照。采用圆韧带离断方法制备大鼠创伤性股骨头坏死动物模型;分别于术后1,2,4,6周处死动物。光镜下观察股骨头坏死病理形态学改变;采用CM IAS真彩色医学图像分析系统检测骨髓腔内脂肪组织与造血组织比值并计数骨组织内空骨陷窝百分率;免疫组化技术检测OPG/OPGL蛋白在股骨头坏死组织中的表达。[结果]成功的复制出大鼠股骨头坏死进展期模型,呈现出典型股骨头坏死不同时期病理改变;股骨头坏死不同时期实验组空骨陷窝百分率高于对照组(P0.05);实验组骨髓腔内脂肪组织与造血组织的面积比值高于对照组(P0.05);免疫组化检测结果显示实验组OPG蛋白在股骨头坏死不同时期表达的光密度值(OD值)均明显低于对照组(P0.05);OPGL蛋白表达高于对照组(P0.05)。[结论](1)本实验成功复制了大鼠股骨头坏死模型并在一定程度上反映了股骨头坏死的病理变化过程;(2)股骨头坏死局部OPG、OPGL表达水平与病变严重程度密切相关,OPG表达随病程的延长逐渐降低;而OPGL表达水平则相反。提示OPG的过度表达可抑制破骨细胞功能,减少骨吸收;反之则促进骨吸收。如能提高坏死局部OPG浓度可以抑制骨丢失,将有助于股骨头修复,可能为股骨头坏死的早期治疗提供新方法。     

长期应用糖皮质激素对大鼠股骨头骨组织骨保护素/NF-κB受体活化因子配基-基质金属蛋白酶/基质金属蛋白酶组织抑制剂系统的影响

目的观察长期应用糖皮质激素对大鼠股骨头骨组织中骨保护素(osteoprotegerin,OPG)/NF-κB受体活化因子配基(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)-基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)/基质金属蛋白酶组织抑制剂(tissue inhibitor of matrix metalloproteinase,TIMP)系统的影响,探讨其导致股骨头缺血性坏死(avascular necrosis of femoral head,ANFH)的相关机制。方法健康SD大鼠40只,雌雄各半,体重250～300g;随机分为高、中、低剂量激素组和对照组,每组10只。高、中、低剂量激素组动物分别给予肌肉注射醋酸泼尼松龙25.0、12.5、7.0mg/kg,每周2次,共4周;对照组给予等量生理盐水。注射期间观察大鼠一般情况,于4周注射完毕后取各组大鼠左侧股骨头行组织学观察,鉴定骨坏死情况;取右侧股骨头骨组织提取总RNA,RT-PCR检测OPG、RANKL、MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2mRNA表达水平。结果注射醋酸泼尼松龙后高剂量激素组4只、中剂量激素组1只于第23～26天因饮食减少、体重下降最终致全身衰竭死亡。HE染色可见各激素组骨小梁和骨单位完整性不同程度破坏,形成不连续的骨碎片,部分骨陷窝内骨细胞消失,被炎性肉芽组织取代;对照组可见骨单位完整,板层围绕血管呈同心圆排列,大多数骨小梁陷窝内可见骨细胞。高、中、低剂量激素组及对照组ANFH发生率分别为83.3%(5/6)、66.7%(6/9)、30.0%(3/10)、0(0/10)。RT-PCR检测示,各激素组与对照组比较,OPG、TIMP-1、TIMP-2mRNA表达均降低,差异有统计学意义(P<0.05),并且随激素用量增加呈下降趋势;各激素组间OPG mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05);中、低剂量激素组间TIMP-1、TIMP-2mRNA表达比较差异无统计学意义(P>0.05),但明显高于高剂量激素组(P<0.05)。各激素组与对照组比较,RANKL、MMP-2、MMP-9mRNA表达均增高,并且随激素用量增加呈上升趋势,其中高、中剂量激素组显著高于对照组(P<0.05);高、中剂量激素组间RANKL mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05),但显著高于低剂量激素组(P<0.05);中、低剂量激素组间MMP-2、MMP-9mRNA比较差异无统计学意义(P>0.05),但均低于高剂量激素组(P<0.05)。结论长期应用糖皮质激素致ANFH坏死的效应可能与其调控OPG/RANKL-MMP/TIMP系统表达有关。     

预防性使用多孔纳米硒材料Se@SiO_2缓解激素性股骨头坏死的实验研究

[目的]探究预防性使用多孔纳米硒材料Se@SiO_2能否抑制激素性股骨头坏死(SANFH)的发生。[方法]体外实验:选取SPF级4周龄SD大鼠2只,提取、培养并鉴定股骨头软骨细胞,利用细胞增殖与活性检测试剂(CCK-8)检测Se@SiO_2在应用浓度下对软骨细胞活性的影响,再利用活性氧试剂盒检测Se@SiO_2对软骨细胞抗氧化应激作用的影响。体内实验:选取SPF级8周龄SD大鼠24只,随机选取12只SD大鼠作为实验组,每2 d腹腔注射1mg/kg Se@SiO_2共2周,之后24只大鼠利用静脉给予甲强龙建立激素性股骨头坏死动物模型,通过股骨头软骨组织IL-1β、MMP-13的表达和HE染色切片评估预防性使用Se@SiO_2对股骨头软骨组织坏死的改善作用。[结果](1)Se@SiO_2在应用浓度下对股骨头软骨细胞无明显细胞毒性,并且加入Se@SiO_2干预可有效清除软骨细胞活性氧水平;(2)提前加入Se@SiO_2干预2周后股骨头软骨组织IL-1β、MMP13表达明显下降,HE染色显示提前使用Se@SiO_2干预能有效改善SANFH程度。[结论]提前2周给予Se@SiO_2,能改善SANFH程度。