冬虫夏草对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞色素上皮衍生因子和血管内皮生长因子表达的影响

目的观察冬虫夏草对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞色素上皮衍生因子（PEDF）和血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响,探讨其肾脏保护的作用机制。方法35只8周龄清洁级雄性sD大鼠,体重260～280g,根据体重按随机数字表法分为正常血清组（n=18）、低剂量虫草提取液喂养组（5g·kg^-1·d^-1,n=8）和高剂量虫草提取液喂养组（10g·kg^-1·d^-1,n=9）,采用生理盐水及不同剂量虫草提取液灌胃8d后,分离静脉血提取对照血清及不同浓度的冬虫夏草含中药血清。体外培养HBZY-1大鼠肾小球系膜细胞,之后分别加入正常血糖正常血清[正常血糖组（NC组）：5．6mmol／L葡萄糖＋10％胎牛血清（FBS）＋1％正常大鼠血清]、高血糖正常血清[高血糖组（HG组）：30．0mmol／L葡萄糖＋10％FBS＋1％正常大鼠血清]、低剂量虫草含药血清[低药组（LD）：30．0mmol／L葡萄糖＋10％FBS＋1％低剂量虫草含药血清]和高剂量虫草含药血清[高药组（HD）：30．0mmol／L葡萄糖＋10％FBS＋1％高剂量虫草含药血清]进行培养,采用逆转录．聚合酶链反应（RT—PCR）测定各组细胞PEDF及VEGFmRNA的表达,酶联免疫吸附试验（ELISA）测定各组细胞上清液中PEDF及VEGF的水平。组间资料比较采用单因素方差分析,样本间资料比较采用t检验。结果与NC组相比,HG组PEDFmRNA表达明显下降（24h：0．375±0．011比0．507±0．008,t=16．828,P〈0．0l;72h：0．376±0．014比0．515±0．010,t=14．034,P〈0．01）,VEGFmRNA表达明显上升（24h：1．005±0．011比0．864±0．012,t=14．963,P〈0．01;72h：1．168±0．012比0．873±0．011,t=31．417,P〈0．01）;LD组和HD组PEDFmRNA表达较HG组显著上调（24h：0．505±0．018、0．639±0．012比0．375±0．011,F=354．719,P〈0．01;72h：0．612±0．023、0．700±0．019比0．376±0．014,F=97．82,P〈0．01）,VEGFmRNA表达明显下降（24h：0．838±0．014、0．767±0．017比1．005±0．011．F=79．55,P〈0．01：72h：0．923±0．016、0．784±0．012比1．168±0．012,F=244．28,P〈0．01）,且HD组疗效更明显。经对照血清及CS血清培养24、72h后,与NC组相比,HG组PDEF水平明显降低[24h：（267±8）比（303±10）ng／L,t=6．493,P〈0．01;72h：（265±27）比（338±42）ng／L,t=3．259,P〈0．01],VEGF明显升高[24h：（128±3）比（113±8）ng／L,t=3．737,P〈0．01;72h：（144±7）比（125±7）ng／L,t=4．215,P〈0．01;与HG组相比,LD组和HD组PEDF明显升高[24h：（297±12）、（296±26）比（267±8）ng／E,F=5．427,P〈0．01;72h：（323±20）、（332±33）比（265±27）ng／L,F=5．690,P〈0．01],VEGF明显降低[24h：（106±6）、（109±11）比（128±3）ng／L,F=5．738,P〈0．01;72h：（124±9）、（125±7）比（144±7）ng／L,F=7．878,P〈0．01]。结论冬虫夏草可能通过降低肾小球系膜细胞VEGF的表达,升高PEDF的表达,对肾脏起到保护作用。     

单纯葡萄糖筛查试验异常孕妇的胰岛素敏感性与β细胞功能变化

目的探讨单纯葡萄糖筛查试验（GCT）异常孕妇在孕期24～28周及产后6～12周胰岛素敏感性和胰岛B细胞功能。方法50gGCT异常而75g口服葡萄糖耐量试验（OGTT）正常者120例为单纯GCT异常组;50gGCT正常,75gOGTF亦正常者80名为正常对照组。采用稳态模式胰岛素抵抗指数（HOMA．IR）和胰岛素敏感指数（ISOGTF）评价胰岛素敏感性,稳态模式胰岛13细胞功能指数（HBCI）和30min净增胰岛素／30min净增血糖比值（△I30／△G30）评价胰岛β细胞分泌功能。比较孕期24～28周及产后6～12周的相关指标。统计学计量资料采用x±s表示,计数资料采用x2检验。结果（1）孕期24～28周,两组孕妇葡萄糖曲线下面积（AUCG）、糖化血红蛋白（HbAlC）和△I30／△G30比较差异无统计学意义;单纯GCT异常组空腹胰岛素（Fins）、HOMA—IR明显高于对照组（分别为14±6VS13±4,t=12．814;2．8±1．3VS2．5±0．9,t=11．7,均P〈0．01）;单纯GCT异常组ISOGTT低于对照组（0．8±0．6VS1．1±1．0,t=4．837,P〈0．05）;单纯GCT异常组胰岛13细胞功能指数（HBCI）低于对照组（369±301VS567±486,t=5．321,P〈0．05）;（2）单纯GCT异常组新生儿出生体质量高于对照组[（3．4±0．2）VS（3．2±0．1）kg,P〈0．01];（3）产后6～12周,单纯GCT异常组AUCG、HbAlc明显高于对照组[分别为30．7±2．6VS27．7±1．2,（5．6±0．3）％VS（5．3±0．2）％,均P〈0．01];单纯GCT异常组Fins、HOMA—IR明显高于对照组（分别为124-5VS11±3,P〈0．05：2．5±0．9VS2．2±0．6,P〈0．01）;单纯GCT异常组的ISOGTT低于对照组（1．0±0．6VS1．5±1．0．P〈0．01）;单纯GCT异常组HBCI低于对照组（1794-95VS307±165,P〈0．01）;（4）单纯GCT异常组产后有9．1％糖代谢异常者,对照组有1．2％糖代谢异常者,两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论单纯GCT异常者孕期和产后均存在更重的胰岛素抵抗和β细胞功能受损。单纯GCT异常产后糖代谢异常发生的风险增加。     

干扰素α联合利巴韦林治疗丙型肝炎病毒与人类免疫缺陷病毒混合感染

目的观察干扰素α联合利巴韦林对中国人丙型肝炎病毒（HCV）与人类免疫缺陷病毒（HIV）混合感染（HCV／HIV）患者的治疗效果及不良反应，并与其对单独HCV患者的治疗进行对比。方法10例HCV／HIV患者和17例HCV患者，以肌肉注射干扰素α5MU，隔日1次，口服利巴韦林0．3g，3次／d，动态观察两组的HCV RNA水平和HIV RNA水平，CD^4＋和CD8^＋ T淋巴细胞计数，主要的肝功能和血细胞指标，以及主要的不良反应。结果HCV／HIV患者与HCV患者治疗l2周和24周，HCV RNA较用药前平均分别下降1．14log（t-3．843，P〈0．01）和2．08log（f=6．564，P〈0．01），1．48log（f=6．438，P〈0．01）和2．33log（t=7．343，P〈0．01）;同时HIV RNA也较用药前平均下降了1．22log（t=3．662，P〈0．01）和1．73log（t=6．119，P〈0．01），但两组用药前后的CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞计数变化不大；27例患者的氨基转移酶除2例稍高以外其余均降至正常值。用药过程中部分病例发生流感样症状和消化道反应（多见于用药早期），白细胞总数和血红蛋白各有4例轻度下降；未发现明显精神神经异常和自身免疫疾病表现。结论以干扰素α联合利巴韦林治疗中国人HCV／HIV患者，用药24周的抗HCV效果不低于两种药物联合治疗单独HCV患者的效果，并有一定的抗HIV作用。两组的生化反应和不良反应差异无统计学意义。     

健康教育与2型糖尿病患者血糖控制和自我护理行为的相关性研究

目的了解我国糖尿病健康教育现状,探讨健康教育及其全面程度与2型糖尿病患者血糖控制及自我护理行为的相关性。方法2010年4至7月招募来自50个医学中心的5200例2型糖尿病患者,采用问卷和糖尿病自护行为量表（SDSCA）进行调查。根据其是否接受过糖尿病健康教育及接受教育的全面程度将患者分为：未接受过教育者（971例）、接受过1～2方面教育的患者（532例）、接受过3～4方面教育的患者（1001例）、接受过5—6方面教育的患者（2696例）。应用方差分析检验4组问计量资料的差异。结果四组患者的年龄（F=7．75,P〈0．05）、病程（F=32．86,P〈0．05）及部分并发症发生率存在显著差异。四组患者的血糖水平与血糖达标率均存在显著差异,其中接受5—6方面教育者空腹血糖（47．62％比36．81％,x^2=30．05,P〈0．05）、餐后2h血糖（49．03％比37．76％,x^2=29．40,P〈0．05）及糖化血红蛋白（34．94％比26．65％,x^2=11．82,P〈0．05）的达标率均显著高于未接受教育者。四组患者的自我护理行为评分存在显著差异,其中接受5～6方面教育者在饮食控制（4．5±1．5比3．6±1．7,t=0．818,P〈0．05）、运动锻炼（4．5±2．5比3．4±2．6,t=1．082,P〈0．05）、自我血糖监测（3．2±2．6比2．5±2．7,t：0．672,P〈0．05）、足部护理（4．8±1．8比3．7±1．8,t=1．033,P〈0．05）、用药方案（6．3±1．5比5．8±2．0,t=0．556,P〈0．05）自我护理评分均显著高于未接受教育者。结论我国糖尿病健康教育范围狭窄、内容欠全面。接受全面的糖尿病健康教育可能会帮助2型糖尿病患者控制血糖并形成更好的糖尿病自护行为习惯。     

叉头状转录因子O1对游离脂肪酸诱导的人肝癌细胞株HepG-2胰岛素抵抗和脂质堆积作用的研究

目的研究叉头状转录因子O1（FoxO1）对游离脂肪酸介导的人肝癌细胞株（HepG-2）胰岛素抵抗和脂质堆积的作用以及对固醇调节元件结合蛋白-1c（SREBP-1c）mRNA和蛋白表达的影响。方法将HepG-2细胞培养后用普通培养基培养为对照组,用含5．0×10μmol／L软脂酸的培养基诱导为软脂酸组,诱导后转染空白质粒为空白质粒组,诱导后转染FoxO1siRNA质粒载体为FoxO1siRNA载体组。运用实时定量聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测FoxO1mRNA表达,噻唑蓝（M33＂）比色法检测细胞增殖,葡萄糖氧化酶法检测培养基中葡萄糖消耗量,油红O染色观察细胞脂质堆积;RT—PCR和Westernblot技术分别检测SREBP-1c mRNA表达量以及蛋白的表达量。各组间均值比较采用单因素方差分析,样本间比较采用t检验。结果软脂酸组较对照组细胞葡萄糖消耗量减少（1．174-0．56vsVS4．31±0．21,t=10．587,P〈0．01）、细胞中的脂质堆积增多、FoxO1mRNA升高（0．784-0．10vs0．51±0．12,t=3．629,P〈0．05）、SREBP-1cmRNA升高（0．71±0．17vs0．25±0．08,t=6．290,P〈0．05）、SREBP-1c蛋白升高（0．694-0．10vs0．41±0．07,t=4．797,P〈0．01）。转染FoxO1siRNA质粒载体后葡萄糖消耗量较软脂酸组增加（2．26±0．41vs1．17±0．56,t=3．144,P〈0．05）,FoxO1mRNA、SREBP-1cmRNA、SREBP-1c蛋白的表达较软脂酸组均减少且接近于对照组（分别为0．38±0．06vs0．784-0．10,t=7．164,P〈0．01;0．45±0．13vs0．71±0．17,t=2．479,P〈0．05;0．41±0．06vs0．694-0．10,t=4．797,P〈0．01）,细胞中的脂质堆积也较软脂酸组减少。结论抑制FoxO1的表达,可改善游离脂肪酸诱导的细胞胰岛素抵抗、减少肝脏细胞内脂肪变性,其机制可能是通过下调SREBP-1c的表达。     

丙型肝炎病毒核心蛋白下调沉默信息调节因子2相关酶1-AMP激活蛋白激酶信号通路活性致肝细胞能量代谢紊乱

目的 探讨沉默信息调节因子2相关酶1 (SIRT1)-AMP激活的蛋白激酶(AMPK)信号通路在HCV核心蛋白所致肝细胞能量代谢紊乱中的作用.方法 pcDNA3.1-core重组质粒转染HepG2细胞,流式细胞仪测定表达HCV核心蛋白的HepG2细胞的活性氧(ROS),液体闪烁计数仪测定ATP/ADP比例和AMPK α2酶活性,比色法测定烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化态与还原态之比(NAD+/NADH),荧光定量检测SIRT1酶活性,RT-PCR和Western印迹检测SIRT1、AMPK α2的表达.计量资料比较采用t检验.结果 Western印迹检测证实,HepG2细胞表达相对分子质量为22 000的HCV核心蛋白.与HepG2细胞相比,表达HCV核心蛋白的HepG2细胞ROS水平升高(1.0±0.1比4.0±0.5,t=14.411,P＜0.01);ATP/ADP比例无明显变化(8.2±2.2比9.3±2.8,t=0.757,P＞0.05);AMPK α2酶活性(0.8±0.2比0.2±0,t=7.345,P＜0.01)明显降低;NAD+/NADH比例明显降低(0.08±0.02比0.02±0,t=7.348,P＜0.01);SIRT1酶活性[(0.30±0.05) pmol·μg 1·min-1比(0.15±0.04) pmol·μtg-1·min-1,t=5.738,P＜0.01)]明显降低;SIRT1 mRNA(0.8±0.2比0.4±0.1,t=4.382,P＜0.01)和AMPK α2 mRNA(0.9±0.3比0.2±0,t=5.715,P＜0.01)表达明显降低;SIRT1蛋白(0.8±0.2比0.3±0,t=5.941,P＜0.01)和磷酸化AMPK蛋白(0.5±0.1比0.1±0,t=9.608,P＜0.01)水平明显降低.结论 HCV核心蛋白能下调SIRT1-AMPK信号通路活性,导致肝细胞能量代谢紊乱.     

学生罹患肺结核对其本人及同学心理健康状况影响的调查分析

目的分析学生罹患肺结核对其本人及同学心理健康状况的影响,为健康促进与干预策略的制定提供理论依据。方法选取珠海市肺结核专报系统中2015年1月1日至2017年12月31日登记的新发肺结核的大学（专）及中学（专）学生患者,及其所在班级全体学生作为调查对象,进行问卷调查。采用青少年《心理健康诊断测验（MHT）手册》进行问卷调查,共发放问卷4800份,合格问卷4351份,有效回收率为90．65％。其中,肺结核组128例,对照组4223名。结果肺结核组的心理健康水平明显低于对照组,具体表现在学习焦虑[分别为（6．69±2．13）分、（5．77±2．23）分;t=4．60,P〈0．01]、对人焦虑[分别为（5．74±2．34）分、（5．17±2．71）分;t=2．35,P=0．018]、孤独倾向[分别为（4．68±2．84）分、（3．94±1．94）分;t=4．15,P〈0．01]、过敏倾向[分别为（3．71±2．53）分、（3．15±2．04）分;t=3．04,P=0．002]、身体症状[分别为（2．88±2．91）分、（2．36±1．68）分;t=3．34,P〈0．01]、恐怖倾向[分别为（3．95±1．93）分、（3．40±1．65）分;t=3．66,P〈0．01]及总得分[分别为（34．97±13．97）分、（30．66±11．33）分;t=4．22,P〈0．01]。肺结核组中,男生心理健康水平总体优于女生[男生MHT总得分为（32．69±14．83）分,女生总得分为（37．56±11．03）分;t=2．09,P=0．030];中学（专）学生学习焦虑[（7．55±3．12）分]及冲动倾向得分[（4．67±2．99）分]高于大学（专）学生[分别为（6．13±2．11）分、（3．41±2．55）分;t值分别为-2．92、2．51,P值均〈0．05）;大学（专）学生对人焦虑得分[（6．58±2．80）分]高于中学（专）学生得分[（5．19±2．25）分]（t=3．11,P〈0．01）;未痊愈学生的对人焦虑[（6．34±2．19）分]、孤独倾向[（5．16±2．41）分]、过敏倾向[（4．33±1．98）分]的得分均高于痊愈学生[分别为（4．81±3．13）、（4．08±2．00）、（3．57±2．10）分;t值分别为-3．25、-2．53、-2．07,P值均〈0．051。结论罹患肺结核对学生的心理健康存在影响,应有针对性地及时进行准确干预,加强心理疏导和关怀。     

高糖环境下美罗华对B淋巴细胞株Ramos增殖的抑制作用

目的探讨在高糖状态下美罗华对B淋巴细胞周期、增殖和凋亡的影响。方法体外培养人B淋巴细胞株Ramos,将细胞分别以单纯5．5、10．0、15．0、25．0mmol/L葡萄糖培养或另外分别加入10mg／L美罗华培养,即分为葡萄糖组和美罗华组。以上两组培养3—7d,检测细胞增殖、凋亡及其周期情况。细胞增殖和活性以台盼蓝染色法测定。细胞凋亡和周期采用流式细胞技术检测。两组间数据比较采用配对t检验。结果5．5、10．0、15．0、25．0mmol/L葡萄糖组B淋巴细胞数量分别为（1．96±0．41）×10^6、（3．49±0．51）×10^6、（3．44±0．67）×10^6、（3．04±0．52）×10^6,凋亡率分别为5．0％±0．9％、4．0％±0．8％、6．2％±1．8％、7．6％±1．3％,S期比例分别为32％±6％、41％±8％、40％±7％、36％±6％;美罗华组细胞数量分别为（1．23±0．23）×10^6、（1．52±0．29）×10^6、（1．38±0．23）××10^6、（1．06±0．23）×10^6,细胞凋亡率则分别23．1％±3．2％、21．2％±4．2％、24．4％±4．8％、26．9％±6．0％,S期细胞比例则分别22％±4％、28％±5％、26％±4％、20％±5％。与葡萄糖组比较,美罗华组B细胞增殖在不同糖浓度亚组均显著减少（t=9．19、5．52、9．75、14．22,均P〈0．01）,细胞凋亡率显著增加（t：16．62、12．51、11．53、9．12,均P〈0．01）,S期细胞比率显著减少（t=5．87、5．19、9．91、7．73,均P〈0．01）。两组细胞增殖数量和S期比率均在10．0mmol/L葡萄糖时最高;两组细胞凋亡率均在25．0mmol/L葡萄糖时最多。结论美罗华通过抑制细胞周期以及促进细胞凋亡实现对B淋巴细胞增殖的抑制作用,其抑制作用在高糖状态下更为明显。     

姜黄素调控炎症对内皮细胞增殖凋亡的影响

目的明确姜黄素对炎症诱导的血管内皮细胞损伤的保护机制。方法将人单核／巨噬细胞系（THP-1）分为空白对照组、高脂高糖组、高脂高糖＋姜黄素预处理组（高脂高糖浓度为25mmol／L葡萄糖＋500μmol／L棕榈酸）,分别给予相应处理24h,更换培养基继续培养24h,利用酶联免疫吸附法（ELISA）检测上清及实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）分析THP-1细胞内肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）的表达,同时将上清作用脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）,HUVECs分为空白对照组、空对照条件培养基组、高脂高糖条件培养基组、姜黄素处理条件培养基组,并行噻唑蓝法（MTT）检测HUVECs增殖、流式细胞仪检测凋亡,Westernblotting分析磷酸化细胞外调节蛋白激酶（p-ERK）及B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）蛋白表达。组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果高脂高糖组THP-1细胞内受体相互作用蛋白140（RIPl40）、TNF-α和IL-6mRNA表达及上清中炎症因子TNF-α和IL-6浓度明显高于空白对照组（t=8．55、9．44、9．73、16．01、19．22,均P〈0．05）。相对于高脂高糖组,姜黄素预处理组THP-1细胞内RIPl40、TNF-α和IL-6mRNA表达及上清中TNF-α和IL-6浓度明显下降（t=3．59、5．96、5．59、6．95、23．91,均P〈0．05）;高脂高糖条件培养基组HUVECs细胞活力明显低于空对照条件培养基组（24h,1．22±0．07比1．85±0．14,t=6．58,P〈0．05;48h,1．72±0．02比2．49±0．09,t=10．08,P〈0．05）,而姜黄素处理条件培养基组能够改善高脂高糖条件培养基对HUVECs增殖的抑制作用（24h,1．22±0．07比1．72±0．11,t=2．13,P〈0．05;48h,1．72±0．02比2．33±0．11,t=6．92,P〈0．05）;与空对照条件培养基组比较,高脂高糖条件培养基组能够明显增加HUVECs凋亡率、p-ERK表达及降低Bcl-2表达（t=9．82、9．69、4．61,均P〈0．05）,姜黄素处理条件培养基组与高脂高糖条件培养基组比较,下调RIPl40表达后能明显降低HUVECs凋亡率、p-ERK表达及增加Bcl-2表达（t=6．35、7．17、3．26,均P〈0．05）。结论姜黄素能够通过抑制高脂高糖诱导的炎症来调控HUVECs的增殖凋亡。     

姜黄素抑制棕榈酸诱导的巨噬细胞炎症反应的机制研究

目的探讨姜黄素抑制棕榈酸诱导的巨噬细胞炎症反应的作用机制。方法以0、250、500μmol／L棕榈酸干预小鼠巨噬细胞RAW264．724h,观察细胞形态,逆转录一聚合酶链反应（RT-PCR）检测细胞中受体相互作用蛋白140（RIPl40）、肿瘤坏死因子a（TNF-a）、白细胞介素-6（IL-6）mRNA水平,酶联免疫吸附实验（ELISA）检测上清中TNF-a、IL-6水平;噻唑蓝法（MTr）确定姜黄素作用RAW264．7细胞的最佳时间和浓度;细胞分为姜黄素组和对照组,分别给予20μmol／L姜黄素和二甲基亚砜（DMSO）预处理1h后,均给予500μmol／L棕榈酸作用24h,观察细胞形态并检测细胞中RIPl40、TNF-a、IL-6mRNA水平和上清中TNF-a、IL-6浓度。采用单因素方差分析和t检验对研究数据进行统计检验。结果500μmol／L棕榈酸组RIPl40mRNA表达较0μmol／L组显著升高（3．40±0．51比1．01±0．21,t=7．436,P〈0．01）;0、250、500μmol／L棕榈酸组TNF-amRNA（1．00±0．03、1．79±0．12、2．16±0．13）和蛋白[（197±25）、（371±10）、（485±17）ng／L]、IL-6mRNA（1．00±0．51、2．55±0．15、2．59±0．17）和蛋白[（953±66）、（1081±36）、（1182±18）ng／L]与棕榈酸剂量明显相关（F=99．308、187．049、152．958、26．594,均P〈0．01）;棕榈酸处理后,细胞变圆、皱缩甚至崩解;姜黄素作用RAW264．7细胞的最佳时间为1h,最佳浓度为20ixmol／L;姜黄素组与对照组相比,RIPl40mRNA（1．00±0．05比0．63±0．01,t=一13．79,P〈0．01）、TNF-amRNA（0．64±0．11比1．00±0．07,t=一4．532,P〈0．05）和蛋白[（322±12）比（485±17）ng／L,t=一13．577,P〈0．01]、IL-6mRNA（0．57±0．05比1．00±0．02,t=一14．167,P〈0．01）和蛋白[（241±47）比（1182±18）ng／L,t=一44．810,P〈0．01]均显著降低,而细胞形态正常,细胞问仍有连接融合。结论RIPl40可能参与姜黄素抑制棕榈酸诱导的炎症反应过程。     

下调NAD（P）H氧化酶4加重缺氧复氧心肌细胞损伤：线粒体SIRT3信号的关键作用

目的明确内源性NAD（P）H氧化酶4（Nox4）在心肌细胞缺氧／复氧（H／R）损伤中的作用并探讨其可能的机制。方法：以H,C2心肌细胞系为研究对象,建立H／R模型,将细胞分为对照组、NC-siRNA组、Nox4-siRNA组、H／R组、H／R＋NC-siRNA组和H／R＋Nox4-siRNA组。采用RNAi方法下调Nox4的表达,MTT比色法测定相对存活率、荧光素酶化学发光法测量ATP水平,MitoSOX荧光探针检测线粒体ROS,比色法测定NAD＋／NADH的比值,Western blot法测定Nox4和SIRT3表达水平。结果：与对照组相比,H／R组H。c,心肌细胞中Nox4蛋白的水平明显增加（P〈0．05）,相对存活率、ATP的水平明显降低（P〈0．05,P〈0．01）,而线粒体ROS生成明显增加（P〈0．01）,同时NAD＋／NADH的比值明显增加、SIRT3表达量明显降低（P〈0．05,P〈0．01）。与H／R组相比,H／R＋Nox4-siRNA组Nox4蛋白水平显著降低（P〈0．05）,相对存活率、ATP的水平进一步降低、线粒体ROS生成进一步增加（P〈0．05）,同时,NAD＋／NADH的比值明显降低（P〈0．01）、SIRT3蛋白水平进一步降低（P〈0．05）。结论：下调Nox4可加重H／R诱导的心肌细胞损伤和氧化应激,抑制线粒体能量生成,其心肌细胞保护机制可能是通过上调NAD＋／NADH的比值,增加SIRT3的表达而发挥作用。     

50例非心源性猝死患者心肺复苏后24小时内左室功能变化的临床研究

目的：研究心肺复苏后多器官功能障碍综合征（PR-MODS）患者在24h内左心室功能变化规律。方法：对急诊50例既往无心功能障碍的PRMODS患者，监测心肺复苏后12、24h左心室舒张末期容积（LVEDV）、收缩末期容积（LVESV）、射血分数（LVEF）和每搏输出量（SV）。将存活〉12h组与存活〈12h组比较。结果：存活〉12h组（36例）其LVEDV和LVESV高于正常值[（106．22±16．06）ml vs （70．0±20．0）ml，t=16．96，P〈0．01；（46．94±11．72）ml vs （24．0±10．0）ml，t=11．74，P〈0．01）]；且其12h内LVEDV和LVESV低于存活〈12h组（14例）[（112．58±16．06）ml vs（129．35±21．15）ml，t=3．03，P〈0．01；（51．56±14．12）ml vs （64．14±14．32）ml，t=2．82，P％0．01）]。存活〉12h组其LVEF和SV低于正常值[（48．78％±5．76％）vs 〉50％；（62．17±5．56）ml vs（71．3±9．97）ml ，t=7．74，P〈0．01）]；且12h内LVEF和SV高于存活〈12h组[（45．06％±6．62％）vs （39．43％±8．14％），t=2．53，P〈0．01；（56．31±7．10）ml vs（54．57±6．80）ml，t=0．78，P〈0．01）]。结论：PR-MODS患者左心功能均较正常低下，且存活时间与心脏损伤程度有关。     

血清γ-谷氨酰转肽酶水平与2型糖尿病周围神经病变的关系

目的探讨2型糖尿病患者血清γ-谷氨酰转肽酶（GGT）水平与糖尿病周围神经病变（DPP）的关系。方法随机选择2010年1月至2011年12月于南京军区总医院内分泌科就诊的159例2型糖尿病患者,检测身高、体重、空腹血糖（FBG）、糖化血红蛋白（HbAlc）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、GGT、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）、血脂水平等数据。根据密西根评分系统及神经传导速度将患者分为有周围神经病变组（DPP组）和无周围神经病变组（无DPP组）,其中DDP组患者82例,平均年龄（57±13）岁,无DPP组患者77例,平均年龄（56±12）岁。同时将患者按GGT水平分为：A组（GGT≤50U／L）、B组（GGT〉50U／L）,其中A组115例,平均年龄（56±14）岁,B组44例,平均年龄（58±13）岁。样本均数比较采用t检验,采用多因素logistic回归分析DPP的危险因素。结果与无DPP组相比,DPP组患者体重[（69±13）比（66±9）kg,t=1．854,P〈0．05]、血清GGT[（32±25）比（18±9）U／L,t=4．310,P〈0．01]、ALT[（24±17）比（19±7）U／L,t=2．304,P〈0．05]、甘油三酯[（2．5±2．0）比（1．4±0．9）mmol／L,t=4．165,P〈0．01]、HbAlc[（9．4±3．0）％比（8．6±1．9）％,t=-1．727,P〈0．05]显著增高。A组患者ALT、AST显著低于B组[（16±11）比（34±17）U／L和（17±7）比（29±15）U／L;t=3．721、2．669,P〈0．05],同时A组患者的胫神经运动传导速度（MCV）、腓总神经运动传导速度（MCV）及腓总神经感觉传导速度（SCV）均优于B组[（45．4±5．0）比（40．3±5．6）m／s、（47．3±4．8）比（40．2±5．4）m／s和（48．4±5．1）比（41．3±9．7）m／s,t=4．031、4．110、4．006,P〈0．05]。对在DPP组和无DPP组间差异有统计学意义的5个指标与DPP再进行多因素logistic回归分析发现,只有血清GGT与DPP的发生显著相关（优势比为1．10,P〈0．05）。结论血清高GGT水平与2型糖尿病患者周围神经病变的发生存在一定相关性,是周围神经病变的可能危险因素。     

动力相关蛋白-1参与糖皮质激素诱导的胰岛β细胞凋亡

目的探讨动力相关蛋白-1（DRP-1）对糖皮质激素诱导的胰岛13细胞凋亡的影响。方法采用地塞米松（Dex）处理大鼠胰岛13细胞系INS-1细胞，通过亚G1（Sub-G1）法检测细胞凋亡，Westernblotting检测DRP-1的表达。利用四环素诱导表达系统在INS-1细胞构建可诱导表达野生型DRP-1（DRP-1wt）基因和突变型DRP-1（DRP-1 k38A）基因的稳转细胞系，并用细胞免疫荧光和Westernblotting验证强力霉素（Dox）对转染基因的可诱导性。采用TUNEL法分析在Dex处理情况下，DRP-1wt基因或DRP．1k38A基因表达对Dex诱导的胰岛B细胞凋亡的影响，并同时测定相应细胞凋亡蛋白酶Caspase-3活性及细胞内活性氧（ROS）的变化情况。多组间均数比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用t检验。结果不同浓度Dex处理组细胞凋亡率[（15．7±4．2）％、（30．4±3．3）％、（61．6±5．4）％]明显高于未处理组[（3．3±1．3）％，t=6．44、14．07、30．26，均P〈0．05]；200nmol／LDex处理24、48及96h后细胞凋亡率[（10．6±1．2）％、（15．1±4．6）％、（42．6±9．8）％]明显高于处理0h组[（2．4±1．3）％，t=2．99、4．63、14．66，均P〈0．05]。Westernblotting显示Dex可诱导胰岛β细胞DRP-1基因的表达。DRP-1wt基因表达能够显著促进Dex诱导的β细胞凋亡[（53．8±7．2）％比（16．2±3．2）％，t=10．02，P〈0．05]，而DRP-1k38A基因表达反而抑制Dex诱导的B细胞凋亡[（6．2±1．1）％比（14．5±1．8）％，t=10．63，P〈0．05]。DRP-1wt基因表达能够促进Dex诱导的caspase-3活化[（1979±132）比（921±182），t=11．13，P〈0．05]及ROS产生[（772±62）比（290±56），t=13．66，P〈0．05]，而DRP-1k38A基因表达反而抑制了Dex诱导的caspase-3活化[（506±47）比（681±44），t=5．25，P〈0．05]及ROS产生[（235±14）比（309±44），t=3．86，P〈0．05]。结论DRP-1参与了糖皮质激素诱导的胰岛β细胞凋亡。     

尿路上皮癌相关基因1对3T3-L1脂肪细胞丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶信号通路的影响

目的：观察长链非编码RNA（lncRNA）尿路上皮癌相关基因1（UCA?1）对3T3?L1脂肪细胞丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（Akt）信号通路及糖代谢的影响。方法通过转染UCA?1过表达质粒或UCA?1特异性siRNA干预3T3?L1脂肪细胞中UCA?1的水平,western blotting检测Akt信号通路相关蛋白磷酸化水平的变化,通过2?脱氧?3H?D?葡萄糖掺入法检测细胞的葡萄糖摄取能力。两组之间比较用t检验,多组之间比较采用单因素方差分析。结果随着3T3?L1前脂肪细胞诱导分化为成熟的脂肪细胞,UCA?1的mRNA水平逐渐升高,第6天时为诱导前的（3.48±0.09）倍（t=12.093,P<0.01）;过表达UCA?1可增加3T3?L1脂肪细胞中Akt及FOXO1的磷酸化水平[分别为p?AKT（S473）：2338±59比1103±42;p?AKT（T308）：3565±45比1524±34,p?FOXO1：2190±31比912±21,t=16.390、13.025、10.544,均P<0.01];而利用特异性siRNA沉默UCA?1,可降低细胞中Akt及FOXO1的磷酸化水平[分别为p?AKT（S473）：540±34比1090±22;p?AKT（T308）：805±18比1409±26;p?FOXO1：459±31比2444±29,t=11.045、9.527、16.899,均P<0.01];未给予胰岛素刺激时,过表达UCA?1可增加细胞的葡萄糖摄取能力（2.21±0.09）倍（t=5.922,P<0.05）,沉默UCA?1可使细胞的葡萄糖摄取能力降低66%以上（t=5.557,P<0.05）;而给予胰岛素刺激时,过表达UCA?1可增加细胞的葡萄糖摄取能力（3.25±0.12）倍（t=5.709,P<0.05）,沉默UCA?1可使细胞的葡萄糖摄取能力降低77%以上（t=6.567,P<0.05）。结论 UCA?1可激活3T3?L1脂肪细胞Akt信号通路,并促进其葡萄糖摄取能力。     

抗结核药物相关性肝损伤患者外周血辅助性T淋巴细胞17／调节性T淋巴细胞比率的变化及其意义北大核心CSCD

目的观察肺结核抗结核化学治疗后药物性肝损伤患者外周血Th17／Treg比率的变化,并探讨其与肝功能的关系。方法选取2013年2月至2015年3月遵义医学院附属医院诊断为继发性肺结核的肝功能正常的住院患者90例,抗结核化学治疗2周后,21例患者ALT和（或）AST≥2×正常值上限（ULN）,作为伴有肝损伤的肺结核组;其余69例ALT和（或）AST〈2×ULN,作为不伴肝损伤的肺结核组。抗结核化学治疗前抽取外周血检测Th17／Treg比率和肝脏生物化学指标,2周后复查,比较两组抗结核化学治疗前后Th17／Treg比率的变化及其与ALT、AST的相关性。数据采用t检验,相关性检验采用Pearson相关性分析。结果抗结核化学治疗前,两组间Th17、Treg及Th17／Treg比率的差异均无统计学意义（均P〉0．05）。抗结核化学治疗2周后,伴肝损伤的肺结核组和不伴肝损伤的肺结核组Th17[（2．522±0．388）／mL比（2．075±0．369）／mL,t=3．633,P〈0．01;（2．326±0．348）／mL比（1．929±0．402）／mL,t=6．468,P〈0．01）]和Th17／Treg比率（0．618±0．104比0．489±0．107,t=3．553,P〈0．01;0．554±0．108比0．450±0．098,t=6．353,P〈0．01）均较治疗前升高,差异有统计学意义,而Treg治疗前后变化不明显（均P〉0．05）;伴肝损伤的肺结核组Th17（t=2．203,P〈0．05）及Th17／Treg比率（t=2．345,P〈0．05）均较不伴肝损伤的肺结核组显著升高,差异有统计学意义。Th17／Treg比率与AI．T呈正相关（r=0．849,P=0．044）,与AST无明显相关性（P〉0．05）。结论Th17／Treg比率的变化与肺结核抗结核化学治疗后药物性肝损伤有关。     

应用高葡萄糖钳夹技术评估高糖喂养小鼠胰岛细胞功能

目的利用高葡萄糖钳夹技术探讨高糖喂养小鼠胰岛B细胞功能。方法将16只4周龄C57BL／6J品系小鼠随机数字表法分为2组（各8只）,分别用高糖与普通饲料喂养,8周后行腹腔葡萄糖耐量实验比较2组小鼠葡萄糖耐量,行胰岛素耐量实验比较2组小鼠外周组织对胰岛素的敏感性,应用高葡萄糖钳夹技术比较模型小鼠在体胰岛β细胞第1时相和第2时相胰岛素分泌改变。钳夹实验结束3～4d后麻醉动物,取小鼠肝脏,利用庚烷-异丙醇-吐温的方法提取肝脏内甘油三酯及总胆固醇。组间数据比较采用t检验。结果喂养10周时,高糖组小鼠体质量[（18．0±0．8）g]低于普食组[（23．6±0．5）g],2组差异有统计学意义（扭5．595,P〈0．05）。高糖组糖耐量曲线下面积为（103±3）mmol／L,显著高于普食组的（91±3）mmol／L（t=2．487,P〈0．05）。普食组葡萄糖利用指数（KITT）与高糖组差异无统计学意义（分别为0．53±0．08和0．54±0．14,t=2．360,P〉0．05）。高葡萄糖钳夹显示,高糖组第1时相胰岛素水平较普食组下降了49．6％[分别为（0．71±0．26）和（I．41±0．44）μg/L;t=2．943,P〈0．05];高糖组平均葡萄糖输注率为（6．8±2．2）mg·kg-1·min-1,也较普食组的（20．2±2．3）mg·kg-1·min-1降低了66．3％（t=4．206,P〈0．05）。结论高糖喂养早期（8周）,小鼠发生葡萄糖耐量降低,主要为胰岛β细胞第1时相胰岛素分泌减弱所致,并非外周胰岛素敏感性改变引起。     

2型糖尿病合并胃癌行胃切除后不同消化道重建对血糖代谢的影响

目的探讨2型糖尿病合并胃癌行胃切除后不同消化道重建方式对2型糖尿病患者血糖代谢的影响。方法选取2008年1月至2012年1月在第二军医大学长海医院普外科就诊的胃癌合并2型糖尿病的胃切除患者66例为研究对象,按照胃肠道重建方式进行分组,分为胃远端大部切除术并行毕Ⅰ式吻合组（A组,26例）和胃远端大部切除术并行毕Ⅱ式吻合组（B组,40例）。观察2组患者术前年龄、病程、体质指数（BMI）、糖化血红蛋白（HbA1c）、胰岛素剂量、空腹血糖（FPG）、餐后2h血糖（2hPG）,比较2组患者术后1周及3个月FPG、2hPG的变化。组间比较采用方差分析。结果A组手术前后FPG和2hPG差异均无统计学意义（均P〉0．05）。B组术后1周、术后3个月FPG及2hPG与术前比较差异均有统计学意义[分别为FPG：（7．0±0．6）比（6．1±0．4）比（10．2±1．0）mmol／L,F=4．25,P〈0．05;2hPG：（8．8±0．1）比（7．3±1．1）比（11．4±1．8）mmol／L,F=3．87,P〈0．05];同时B组术后1周及术后3个月FPG及2hPG与A组比较差异均有统计学意义[分别为FPG：术后1周为（7．0±0．6）比（10．0±0．7）mmol／L,t=5．35,P〈0．05;术后3个月为（6．1±0．4）比（9．8±0．7）mmol／L,t=4．78,P〈0．05;2hPG：术后1周为（8．8±0．1）比（12．3±0．5）mmol／L,t=6．12,P〈0．05;术后3个月为（7．3±1．1）比（11．7±0．6）mmol／L,江6．78,P〈0．05]。结论胃远端大部切除术行毕Ⅱ式吻合重建对胃癌合并2型糖尿病患者的高血糖有明显的缓解作用。     

利拉鲁肽在体内外调节microRNA促进胰岛β细胞增殖

目的探讨利拉鲁肽对db／db小鼠胰腺及大鼠胰岛细胞瘤细胞系INS-1中microRNA表达的影响。方法将20只4周龄雄性db／db小鼠按随机数字表法分为对照组和利拉鲁肽组（每组10只）。分别给予0．1ml生理盐水或300ng／g利拉鲁肽皮下注射,每E12次。8周后测定糖化血红蛋白,行腹腔注射葡萄糖耐量试验（TPGTT）。8周末处死小鼠,免疫组化法分析小鼠胰腺B细胞增殖水平;实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）测定小鼠胰腺microRNA（miR．375和miR-34a）的表达。INS-1细胞分别给予0．5mmol/L棕榈酸培养0、48、72h或100nmol／L利拉鲁肽预处理12h后,给予0．5mmol／L棕榈酸培养72h,RT—PCR测定miR-375和miR-34a表达水平。采用t检验及方差分析进行组间数据比较分析。结果与对照组相比,利拉鲁肽组小鼠糖化血红蛋白水平降低（分别为7．3％±0．3％和4．7％±0．6％,t=16．47,P〈0．01）;IPGTT血糖曲线下面积降低[分别为（4568-4-197）和（1927±127）mmol·L-1·min-1,t=26．53,P〈0．05];胰岛素曲线下面积增加[分别为（1080±247）和（2818±378）μg·L-1·min-1,t=7．73,P〈0．05]。免疫组化法显示,与对照组相比,利拉鲁肽组小鼠胰岛素阳性面积增加（分别为1．40±0．30和0．37±0．09,t=19．14,P〈0．01）,Brdu染色阳性细胞比例增加（分别为2．40％±0．22％和0．73％±0．10％,t=4．97,P〈0．01）。利拉鲁肽组小鼠胰腺miR-375与miR-34a表达较对照组分别降低50％（分别为1．1±0．3和2．2±0．5,t=3．08,P〈0．05）和71％（分别为1．1±0．3和3．8±1．2,t=2．80,P〈0．05）。棕榈酸培养使INS-1细胞miR-375表达呈剂量、时间依赖性增加,利拉鲁肽可抑制棕榈酸诱导的miR-375表达（F=7．20,P〈0．01）。结论microRNA可能是利拉鲁肽调节β细胞增殖的靶点之-。     

罗格列酮对糖尿病大鼠心肌纤维化及炎症因子表达的影响

目的探讨盐酸罗格列酮（RGZ）对糖尿病（DM）大鼠心肌纤维化及炎症因子表达的影响。方法30只实验大鼠分正常对照（NC）组（n=8）、DM组（n=11）、RGZ组（n=11）,用药12周。测血糖、体重、HbA1C、心脏重量、左室心肌胶原含量、血清单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平、心肌结缔组织生长因子（CTGF）表达的变化,观察心肌细胞超微结构。结果与NC组相比,DM组大鼠左室心肌组织胶原含量明显升高（16％±2％vs10％±3％,P〈0．01）,存在心肌间质纤维化;DM组MCP-1、TNF-α水平、心肌CTGF表达明显升高（分别为34．2±3．9vs17．5±2．8,9．8±2．5vs5．0±1．4,154士19vs98±16,P均〈0．01）;RGZ治疗后,左室心肌组织胶原明显下降（12％±3％w16％±2％,P〈0．05）,MCP-1、TNF-α水平及心肌CTGF表达明显降低（分别为20．2±3．2讲34．2±3．9,P〈0．01;6．5±2．12759．8±2．5,P〈0．01;121±16vs154±19,P〈0．05）。结论RGZ能明显抑制DM大鼠心肌间质纤维化,并能降低MCP-1、TNF-α水平及心肌CTGF的蛋白表达。