不同治法方药对激素性股骨头坏死鸡成骨 相关因子的影响

目的:通过观察健脾化痰、活血通络(健脾)与补肾壮骨、活血通络(补肾)2种不同治法方药对激素性股骨头坏死鸡成骨因子骨形成蛋白(BMP)2、转化生长因子(TGF)β1及其下游蛋白Smads的影响,比较探讨其防治股骨头坏死的作用机制.方法:48只来杭鸡经胸肌注射甲基氢化泼尼松建立激素性股骨头坏死模型后,随机分为模型组、健脾组和补肾组,另16只来杭鸡设为正常对照组,4个实验组在造模同时分别灌胃生理盐水和相应中药.给药8周和16周后取双侧股骨头,免疫组织化学法检测BMP2,TGFβ1和Smad4,7蛋白表达.结果:与正常组相比,模型组股骨头BMP2,TGFβ1和Smad4阳性细胞计数显著减少、Smad7明显增加;与模型组相比,健脾组8周时BMP2,TGFβ1和Smad4阳性细胞计数显著增多、Smad7明显减少,与补肾组在16周时的作用相类似.结论:健脾与补肾2种不同治法方药均能通过调节股骨头内成骨因子BMP2,TGFβ1和Smad4,7蛋白表达来促进股骨头的修复,防治股骨头坏死;健脾方药比补肾方药起效时间更早.     

不同治法方药对激素性股骨头坏死鸡股骨头OPGRANKLmRNA表达的影响

目的:观察比较健脾化痰、活血通络(简称健脾)与补肾壮骨、活血通络(简称补肾)2种治法对激素性股骨头坏死鸡股骨头骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、NF-κB受体活化因子配基(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)mRNA表达的影响,探讨2者防治股骨头坏死的分子机制。方法:64只来杭鸡,随机分为对照、模型、健脾和补肾组,除对照组外均胸肌注射甲基泼尼松琥珀酸钠(5.2 mg·kg-1),健脾及补肾组在造模同时ig给予相应中药(6,9 g·kg-1.d-1),连续16周。给药8周和16周后,分批处死动物,取双侧股骨头,原位杂交法检测股骨头内OPG,RANKL mRNA的表达情况,并计算其比值。结果:与正常组相比,模型组8周和16周时股骨头内OPG阳性细胞数显著减少,分别为(778±189),(696±108)个,RANKL分别为(717±164),(519±162)个,明显增多(P<0.01);与模型组相比,健脾方在8周就可以明显上调OPG阳性细胞数达(1 049±211)个,同时也降低RANKL阳性细胞数至(454±166)个(P<0.05或P<0.01),升高OPG/RANKL比值(P<0.05),而补肾组此时作用不明显,16周时作用比健脾组强(P<0.05)。结论:健脾化痰、活血通络和补肾壮骨、活血通络2种不同治法方药均可调节股骨头内OPG和RANKL的基因表达,这可能是其有效抑制破骨细胞分化、防治激素性股骨头坏死的作用机制之一;健脾化痰、活血通络方药起效时间相对较早。     

活血补肾汤对兔激素性股骨头坏死VEGF的影响

目的:探讨激素性股骨头坏死(SANFH)过程中血管内皮生长因子(VEGF)在股骨头局部的表达改变及活血补肾汤对VEGF表达的影响。方法:130只新西兰大白兔随机均分为正常对照组、激素造模组、高、中、低剂量中药治疗组,造模成功后,各组于给药后的4、8、12周分别处死后取一侧股骨头,免疫组化SP法测定VEGF含量,并行常规病理组织学检查。结果:第4周时,高、中、低剂量组及模型组明显低于正常对照组(P0.01)。即表达增强。第8周:高、中、低剂量中药组VEGF灰度值比模型组均显著降低(P0.01),即VEGF表达明显增强;12周时高、中、低剂量组的VEGF灰度表达值明显低于模型组(P0.01),即VEGF表达明显强于模型组。结论:激素可导致股骨头局部VEGF的表达明显降低(4周时有代偿性增高),活血补肾汤可显著提高VEGF的表达,促进血管及新骨生成。可能是其治疗激素性股骨头坏死的主要作用机制之一。     

三七总皂苷通过调控Wnt/β-catenin通路减轻家兔股骨头坏死

目的:探究三七总皂苷通过调控Wnt/β-catenin通路对家兔股骨头坏死的保护作用。方法:采用大剂量激素构建激素性股骨头坏死(SANFH)家兔模型成功后,随机分为模型组、洛伐他汀10 mg/kg组及三七总皂苷10、30、50 mg/kg组,6只/组,另取6只正常家兔作为正常对照组。分别灌胃给予相应药物或生理盐水,连续12周。检测家兔血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、钙(Ca)、磷(P)含量;血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、白细胞介素-33(IL-33)、白细胞介素-6(IL-6)含量。处死家兔,取出股骨头组织,采用HE染色观察家兔股骨头组织病理学改变及空骨陷窝率,采用Western blot法检测cl-CASP3、Bax、Bcl-2、Wnt3a、LRP5、β-catenin、RUNX2蛋白表达。结果:相比于空白对照组,模型组血清TC、TG、LDL、MDA含量及空骨陷窝率明显升高,而HDL、SOD、Ca及GSH-PX含量明显降低;相比于模型组,三七总皂苷30、50 mg/kg组及洛伐他汀血清TC、TG、LDL、MDA含量及空骨陷窝率明显降低,而HDL、SOD、Ca及GSH-PX含量明显升高。各组家兔血清P水平无明显差异。相比于空白对照组,模型组股骨头组织cl-CASP3、Bax蛋白表达上调,而Bcl-2、Wnt3a、LRP5、β-catenin、RUNX2蛋白表达明显下调;相比于模型组,三七总皂苷10、30、50 mg/kg组及洛伐他汀组股骨头组织cl-CASP3、Bax蛋白表达明显下调,而Bcl-2、Wnt3a、LRP5、β-catenin、RUNX2蛋白表达明显上调。结论:三七总皂苷可通过降低血脂、抑制炎症起到预防和缓解股骨头坏死进展的作用,而其作用机制可能与其能激活Wnt/β-catenin通路有关。     

活血通络汤对激素性股骨头坏死模型VEGF、TNF-α影响的研究

目的通过研究活血通络汤对激素性股骨头坏死(steroid induced avascular necrosis of femoral head,SANFH)模型中VEGF(vascular endothelial growth factor,血管内皮因子)、TNF-α(Tumor necrosis factor,肿瘤坏死因子α)的表达变化,来阐述活血通络汤对激素性股骨头坏死的作用机制。方法将192只日本大耳兔随机分组,模型组A、模型组B、模型对照组C、空白对照组D各48只,A、B、C组运用贺西京造模法造模。A组第2周开始喂服中药饲料,B组第3周开始喂服中药饲料,C、D组均喂服等量普通饲料,并于第2、5、8周末检测血中VEGF、TNF-α的含量,观察股骨头病理,计算空骨陷窝率。结果在不同时期比较,随实验时间的延长,在骨陷窝率方面,A组有下降趋势,B、C组均逐渐上升,但B组上升幅度小于C组;在血清VEGF方面,C组呈逐渐下降趋势,A组呈上升趋势,B组虽然呈下降趋势,但其下降幅度要明显小于C组;在血清TNF-α方面,C组逐渐上升,A、B组血清中TNF-α呈现下降趋势(第5周有升高)。结论激素可以导致血中VEGF的表达减弱,TNF-α的表达增强,活血通络汤具有抑制激素使VEGF表达减弱的趋势,下调TNF-α,从而缓解股骨头坏死进展,促进股骨头坏死的修复。     

骨蚀灵胶囊对兔早期激素性股骨头坏死骨组织VEGF mRNA表达的影响

目的:观察骨蚀灵胶囊对兔早期激素性股骨头坏死(SANFH)骨组织中VEGFmRNA表达的影响,探讨中药防治早期激素性股骨头坏死的可行性及其机理。方法:选用成年日本大耳白兔,随机分为3组:正常对照组、模型组和中药组。采用马血清和甲强龙联合应用的方法复制SANFH模型,中药组于激素注射完毕后第二天进行骨蚀灵胶囊灌胃治疗,4、8周分批处死动物,应用RT-PCR技术检测股骨头骨组织中VEGFmRNA表达的变化。结果:与正常组比较,模型组股骨头骨组织中VEGFmRNA表达明显降低,8周时较4周时降低明显,差异有统计学意义(P0.05);中药组VEGFmRNA表达较模型组明显升高,但仍未达到正常水平,差异有统计学意义(P0.05)。结论:增强股骨头骨组织VEGFmRNA表达是骨蚀灵胶囊有效治疗激素性股骨头坏死的作用机制之一。     

补肾方对激素性股骨头坏死大鼠的骨修复作用

目的:观察补肾方对激素性股骨头坏死(SONFH)大鼠股骨头骨修复的作用。方法:雄性Wistar大鼠随机分为正常组,模型组,补肾方高、中、低剂量组和阳性药健骨生丸组。除正常组外其余各组臀肌注射21 mg·kg-1甲泼尼龙琥珀酸钠,1 d 1次,连续3 d,建立单纯性糖皮质激素股骨头坏死模型。各给药组从第4天开始,分别给予5.3,10.6,21.2 g·kg-1的补肾方和1.68 g·kg-1健骨生丸,给药6周后取血和股骨头,HE染色观察股骨头组织的病理学改变,Micro-CT扫描观察股骨头骨形态变化并进行骨计量学分析,ELISA检测血清骨形成标志物骨钙素(BGP)和降钙素(CT)含量。结果:模型组大鼠股骨头表现出大量空骨陷窝和脂肪细胞、骨小梁变窄或断裂、骨髓腔内血细胞减少、可见大量坏死区等组织病理学改变;还可见股骨头塌陷、骨质减少、骨小梁稀疏等影像学改变,骨体积分数、骨小梁厚度、骨小梁模式因子、骨小梁数量、骨密度等骨计量学参数降低而骨小梁分离度升高,血清BGP和CT含量也显著降低;与模型组比较,补肾方中、高剂量组能明显改善大鼠股骨头组织病理学改变程度,补肾方高、中、低剂量组均显著抑制骨坏死程度,中、高剂量组还显著升高血清BGP和CT的含量(P0.05,P0.01);健骨生丸组的作用与补肾方中剂量组的作用相当。结论:补肾方组能明显改善SONFH大鼠股骨头组织病理学和影像学改变,增加血清中BGP及CT的含量,这一促进骨修复的作用可能是其防治激素引起的股骨头骨坏死的机制之一。     

基于中医“治未病”理论探讨骨蚀灵胶囊预防激素性股骨头坏死的实验研究

目的:探讨激素诱导股骨头坏死发生发展过程中脂质代谢的变化规律,以及早期给予中药干预的作用效果及机制,寻求有效预防激素性股骨头坏死的新思路。方法:通过激素诱导股骨头坏死实验兔模型,实验分正常组、模型组、西药组、中药组,分组给药,于给药后3、5周测定各组家兔血脂;同时观察局部股骨头骨组织形态学的相应改变。结果:3周时,与正常对照组比较,模型组、中药组、西药组兔血清TC、TG、LDL均明显升高(P0.01),HDL明显降低(P0.05),与模型组比较,中西药组血脂无明显变化;5周时,中药组、西药组血清中的TC、TG、LDL开始明显降低,明显低于模型组(P0.05),但仍高于正常组(P0.05)。光镜观察模型组兔股骨头骨组织有骨坏死表现,中西药组病变不明显。结论:脂质代谢是激素诱发股骨头坏死的重要病理基础之一;中药通过调节脂质代谢可以早期预防激素性股骨头坏死;体现其多"靶点"整合调节作用,且毒副作用小。     

金骨片防治激素性股骨头坏死对VEGF和BMP-2表达的影响

目的:探讨金骨片防治激素性股骨头坏死过程中血管内皮生长因子和骨成型蛋白2表达的影响及促进骨折愈合的作用机理。方法:将日本大耳兔分为5组,正常组、模型组、阳性对照组、高剂量组、低剂量组;除正常组外,其余各组给予甲基强的松龙10mg/kg注射,同时对阳性对照组、高剂量组、低剂量组给予相应的药物防治干预,7周后处死动物采用组织病理学观察和免疫组织化学方法检测,分析5组动物股骨头VEGF和BMP-2的表达。结果:免疫组织化学染色显示,正常组VEGF和BMP-2的表达高于其他组,差异有显著性意义(P<0.05);高剂量组和阳性对照组的VEGF和BMP-2的表达明显强于低剂量组和模型组,差异有显著性意义(P<0.05);低剂量组强于模型组,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:金骨片防治激素性股骨头坏死过程中促进VEGF和BMP-2表达,这可能是金骨片防治激素性股骨头坏死作用的机制之一。     

补气益肾活血法对股骨头坏死模型大鼠血浆及血清指标的影响

目的:研究补气益肾活血法对股骨头坏死模型大鼠血浆凝血酶原时间(PT)、组织性纤溶酶原激活剂(t-PA)及血清血管内皮生长因子(VEGF)、总胆固醇(TCH)、低密度脂蛋白(LDL)的影响。方法:以随机抽签法将60只SD大鼠分成对照组、模型组以及观察组。模型组与观察组制作股骨头坏死模型,成功后,观察组另实施补气益肾活血法治疗。比较3组股骨头密度,血清磷、钙水平,血浆PT、t-PA,血清VEGF、TCH、LDL。结果:模型复制后模型组股骨头密度低于对照组,观察组高于模型组(均P<0.05)。模型复制后模型组血清磷、钙低于对照组,观察组高于模型组(均P<0.05)。模型复制后模型组血浆PT、t-PA低于对照组,观察组高于模型组(均P<0.05)。复制后模型组血清VEGF低于对照组,而TCH、LDL高于对照组;观察组血清VEGF高于模型组,而TCH、LDL低于模型组(均P<0.05)。结论:补气益肾活血法可显著改善股骨头坏死模型大鼠的股骨头密度,同时可改善血浆PT、t-PA及血清VEGF、TCH、LDL,值得推广。     

祛痰逐瘀法预防家兔激素性股骨头坏死的病理学评价

目的：从病理学角度评价祛痰逐瘀法预防家兔激素性股骨头坏死的疗效。方法：按体质量均衡原则将30只健康SPF级新西兰家兔随机分为4组：正常组（A组）6只,模型组（B组）8只,低剂量组（C组）8只,高剂量组（D组）8只。A、B组予生理盐水灌胃,10 mL.kg-1;C、D组分别以0.36 g.mL-1和0.72 g.mL-1的自拟祛痰逐瘀方混悬液灌胃,10 mL.kg-1。各组给药均每天1次,连续用药3周。第4周起在继续上述处理的同时,在B、C、D组家兔左侧大腿内侧肌肉注射甲泼尼龙琥珀酸钠,20 mg.kg-1,每天1次,连用3周。药物干预结束后处死各组家兔取股骨制作切片,光学显微镜下观察骨髓及骨小梁坏死情况,并应用Im age-Pro P lus 6.0软件计算股骨头坏死率和坏死面积。结果：①各组股骨头坏死面积比较,差异有统计学意义（F=21.104,P=0.000）。组间两两比较：C、D组与A组比较,差异无统计学意义（P=0.446,P=0.368）;A、C、D组坏死面积均小于B组（P=0.000,P=0.000,P=0.000）;C、D组差异无统计学意义（P=0.901）。②股骨头坏死率。各组股骨头坏死率比较,差异有统计学意义（F=18.029,P=0.000）。组间两两比较：C、D组与A组比较,差异无统计学意义（P=0.485,P=0.356）;A、C、D组坏死率均小于B组（P=0.000,P=0.000,P=0.000）;C、D组差异无统计学意义（P=0.828）。结论：从病理学角度来看,应用祛痰逐瘀法可有效预防家兔激素性股骨头坏死的发生。     

激素性股骨头坏死易感基因的研究进展

糖皮质激素类药物应用广泛,但长期或大剂量使用易发生严重的不良反应,其中激素诱导性股骨头坏死(steroid-induced osteonecrosis of femoral head, SONFH)因骨细胞和骨髓渐进性坏死,最终导致股骨头结构改变及塌陷,致残率高,严重降低患者的生活质量。目前SONFH的预防和治疗手段有限,且发生机制尚不清楚。近年来发现SONFH的发生与血液凝溶系统、脂质代谢、药物代谢转运系统等相关基因的遗传多态性密切相关。本研究通过综述近年来与SONFH相关的基因组学研究,为筛选SONFH的易感人群提供重要的遗传学参考,为SONFH的预防和治疗提供可能的靶点。     

通络生骨方治疗激素性股骨头坏死的回顾性临床研究

目的:观察通络生骨方治疗激素性股骨头坏死筋脉凝滞证的临床疗效。方法:回顾性分析2010年2月至2013年6月收治住院的随访24个月以上的ARCO分期Ⅱ-Ⅲ期的108例激素性股骨头坏死患者,将行通络生骨方治疗者设为治疗组(54例),行健骨生方治疗者设为对照组(54例),依据Harris评分法,对治疗后患者的疼痛程度、关节功能、关节畸形、关节活动度依次评分,并计算其总分;观察X线片并记录其股骨头坏死的修复等级及治疗期间药物不良反应发生情况。结果:治疗组Harris评分的优良率与对照组接近,差异无统计学意义(P0.05);治疗组在改善关节活动度、关节畸形,缓解疼痛及Harris总评分方面优于对照组(P0.05);影像学资料表明,治疗组死骨总吸收率、死骨明显吸收率、新骨总形成率、新骨明显形成率均高于对照组(81.48%、64.81%;51.85%、35.19%;83.33%、61.11%;51.85%、31.48%,P0.05);2组患者在治疗期间药物不良事件发生率较低,且能自行缓解。结论:通络生骨方治疗ARCOⅡ-Ⅲ期激素性股骨头坏死安全有效,可考虑在早中期激素性股骨头坏死患者中推广。     

激素性股骨头坏死易感基因的研究进展

糖皮质激素类药物应用广泛,但长期或大剂量使用易发生严重的不良反应,其中激素诱导性股骨头坏死(steroid-induced osteonecrosis of femoral head, SONFH)因骨细胞和骨髓渐进性坏死,最终导致股骨头结构改变及塌陷,致残率高,严重降低患者的生活质量。目前SONFH的预防和治疗手段有限,且发生机制尚不清楚。近年来发现SONFH的发生与血液凝溶系统、脂质代谢、药物代谢转运系统等相关基因的遗传多态性密切相关。本研究通过综述近年来与SONFH相关的基因组学研究,为筛选SONFH的易感人群提供重要的遗传学参考,为SONFH的预防和治疗提供可能的靶点。     

浅析激素性股骨头坏死的“瘀、虚、痰”理论

本文在综述了激素性股骨头坏死疾病的发病机制基础上,认为激素性股骨头坏死中存在＂瘀、虚、痰＂病机特点。因邪气（即激素）致瘀、致虚、生痰,瘀、虚、痰三者紧密关联,相互影响,共同存在于激素性股骨头坏死疾病的发生、发展过程中。掌握＂瘀、虚、痰＂理论有助于认识激素性股骨头坏死的病机特点,为本病的临证选方用药、预后康复等方面提供指导意义。然而,激素性股骨头坏死的＂瘀、虚、痰＂理论所涉及的内容十分丰富,有待我们进一步研究和充实。     

基于网络药理学方法探究补肾活血汤治疗激素性股骨头坏死的作用机制

目的:探讨补肾活血汤治疗激素性股骨头坏死(steroid-induced osteonecrosis of the femoral head,SONFH)的作用机制。方法:通过中医药整合药理学网络计算研究平台(integrative pharmacology-based network computational research platform of Traditional Chinese Medicine,TCMIP)v2.0预测、筛选补肾活血汤组方中14味中药的作用靶标,通过GeneCards、CTD和OMIM数据库查询SONFH的疾病靶点。根据获取的药物靶标和疾病靶点,进一步利用TCMIP v2.0中医药关联网络分析模块构建"药物靶标-疾病靶点"相互作用网络,根据网络拓扑特征值筛选补肾活血汤治疗SONFH的核心作用靶点。利用GO和KEGG数据库,采用富集算法挖掘上述方剂核心作用靶点的生物学功能和通路信息。结果:共获得891个补肾活血汤药物靶标和365个SONFH疾病靶点。经"药物靶标-疾病靶点"相互作用网络分析,最终筛选出31个补肾活血汤治疗SONFH核心靶点,GO功能分析富集出生物过程532条、分子功能29条,KEGG信号通路富集分析出相关通路共12条,主要涉及炎症免疫调节(chemokine signaling pathway,Toll-like receptor signaling pathway,NOD-like receptor signaling pathway,leukocyte transendothelial migration,Complement and coagulation cascades,cytokine-cytokine receptor interaction)、血管新生及血液循环调节(VEGF signaling pathway)、神经系统调节(neuroactive ligand-receptor interaction)和细胞功能调节(apoptosis,regulation of actin cytoskeleton)等方面。结论:结合SONFH的病理机制,排除缺乏特异性的信号通路,我们推测补肾活血汤可能通过调节TLR4/NF-κB和VEGF信号通路发挥补肾壮骨、活血化瘀的功效,这可能是其治疗SONFH的作用机制之一。     

酸枣仁提取物对热环境下雏鸡体温与增重的影响

目的:验证酸枣仁提取物降低热环境下雏鸡体温的作用,研究其防暑降温功能.方法:90只1日龄三黄雏鸡随机分为空调对照组、热处理组、酸枣仁组,酸枣仁组鸡饲料中添加酸枣仁提取物1000 g/吨.分别于1、14、35、42日龄时测量鸡直肠温度,35、56日龄称取体重.结果:酸枣仁组鸡平均体温在14、35、42 R龄时显著低于热处理组(P<0.05);35、56日龄酸枣仁组平均日增重高于热处理组(P<0.05).结论:酸枣仁提取物能降低热环境下雏鸡体温,促进增重.     

骨炎定对鸡膝关节骨性关节炎氧自由基代谢的影响

目的研究骨炎定对鸡实验性膝关节炎氧自由基代谢的影响，探讨骨炎定防治骨性关节炎的机理。方法选取鸡40只，随机分成正常组、模型组、骨炎定低剂量组、骨炎定高剂量组和芬必得组。骨炎定低剂量组、骨炎定高剂量组分别灌胃5g／kg、10g／kg药物，芬必得组灌胃0．15g／kg药物。分别测定各组血清超氧化物歧化酶活性和丙二醛含量。结果模型组鸡血清超氧化物歧化酶活性下降，与正常组比较有显著性差异（P〈0．05）。骨炎定低剂量组、高剂量组能提高骨性关节炎鸡血清SOD活性，与模型组、正常组比较均有极显著性差异（P〈0．01），芬必得组和正常组无显著性差异（P〉0．05）。模型组鸡血清含量MDA上升，与正常组比较有极显著性差异（P〈0．01）。骨炎定低剂量组、高剂量组能降低骨性关节炎鸡血清MDA含量，与模型组比较有显著性差异（P〈0．01～0．05），芬必得组与正常组无显著性差异（P〉0．05）。结论骨炎定可通过提高实验性膝关节炎鸡血清SOD活性，清除体内过剩自由基，降低血清MDA含量，防治氧自由基对患病关节的损伤，达到治疗骨性关节炎的目的。     

复方丹参注射液预防激素性股骨头坏死的初步研究

为验证活血化瘀药物复方丹参注射液是否有拮抗激素致股骨头坏死的作用 ,并探讨其作用机理。以成年Rose鸡 3 0只 ,通过大量肌肉注射醋酸泼尼松的方法造模 ,并随机分为 3组。A组 14只 ,每只肌肉注射醋酸泼尼松 5mg·kg-1,每周 2次。B组 10只 ,激素用法同A组 ,同时加用复方丹参注射液 0 .5ml·kg-1肌肉注射 ,每天 1次 ,每周 5次。C组 6只 ,作为空白对照。分别于用药后 3、6、12周分批处死动物 ,处死前抽取静脉血测定血清血脂水平并进行血液流变学检查 ;处死后取双侧股骨头及肝组织进行组织学检查。通过三组对比 ,结果发现丹参注射液对激素诱导的股骨头坏死有较好的预防作用 ,其作用机理可能是调节了脂代谢紊乱和改善了股骨头的微循环。