应用PCR—SSCP方法区分HLA DNA纯合基因型与杂合空…

在ＰＣＲ／ＳＳＯ分型的基础上，用一对ＰＣＲ引物扩增ＤＰＢ１基因后作ＳＳＣＰ分析，发现该方法能够确定那些用ＰＣＲ／ＳＳＯ方法只检出一个等位基因的样本为纯合基因或是含一个空白基因的杂合子，９个月用ＰＣＲ／ＳＳＯ方法只检出一个ＤＰＢ１等位基因的湖南汉族人样本中，用ＰＣＲ／ＳＳＣＰ方法发现１个样本表现为杂合子。     

我国彝族另一新的DR15(2)等位基因的核苷酸序列分析

目的对在用ＰＣＲ／ＳＳＯ方法作我国彝族群体样本ＨＬＡＤ区寡核苷酸分型中发现的１例ＤＲＢ１的杂合子进行等位基因序列分析。方法用ＤＲＢ基因类引物扩增该特殊的ＤＲＢ１杂合子细胞基因组的ＤＲＢ基因的第二外显子。扩增产物经纯化转染大肠杆菌ＪＭ１０１,克隆后再经酚／氯仿抽提后得到单链Ｍ１３ＤＮＡ。利用ＡＢＩ３７７测序仪自动测序。结果彝族这一特殊的ＤＲＢ１杂合子细胞的ＤＲＢ１基因阳性克隆,经序列分析证实了该ＤＲＢ１杂合子中一个等位基因确为ＤＲＢ１＊１２０２,与ＰＣＲ／ＳＳＯ分型一致;另一个新等位基因ＤＲＢ１＊１５Ｙ２（暂定）等位基因在第二外显子的４７位由编码苯丙氨酸的ＴＴＣ（ＤＲＢ１＊１５０２）变为编码酪氨酸的ＴＡＣ。结论在云南彝族样本中发现的ＤＲＢ１＊１５Ｙ２,其４７位由ＴＡＣ（酪氨酸）置换了相应于ＤＲＢ１＊１５０２的ＴＴＣ（苯丙氨酸）。在我国这样一个多民族国家中,就ＨＬＡ系统而言,可能还有更多新等位基因有待鉴定。这样有助于完善群体遗传资料     

HLA－DPB131个等位基因的PCR－RFLP高分辨分型

本文报道建立了一种基于ＰＣＲ－ＲＦＬＰ技术的ＨＬＡ－ＤＰＢ１分型方法。经计算机分析而选出１０个限制性内切酶，在３１个ＤＰＢ１等位基因组成的４９６个ＤＰＢ１基因型中，可唯一性分辨４８４个。用于确定ＤＰＢ１基因型的３３个多态性酶切片段有２９个在８种纯合／杂合子分型细胞ＤＮＡ的ＤＰＢ１分型中得到验证。经研究来自十个家系２３人的ＤＰＢ１等位基因分布，证实在等位基因和杂合性多态片段的分布上均符合孟德尔分离律。与目前其他ＰＣＲ－ＲＦＬＰ和ＰＣＲ－ＳＳＯＤＰＢ１分型系统比较，本分型系统在分辨的ＤＰＢ１等位基因数目和唯一性反应格局率方面居于领先，特别适用于异基因骨髓移植供者的选择。     

中国广东汉族群体HLAⅡ类基因多态性的研究

为探讨中国广东汉族群体ＨＬＡⅡ类基因多态性，采用ＰＣＲ／ＳＳＯ方法，随机选择１０２名广东籍汉族人进行了ＨＬＡⅡ类基因的ＤＮＡ分型。测定了包括ＨＬＡ－ＤＲＢ１，ＤＲＢ３，ＤＲＢ５，ＤＱＡ１，ＤＱＢ１和ＤＰＢ１等６个基因座位的等位基因。结果：共检出２３种ＤＲＢ１，３种ＤＲＢ３，４种ＤＲＢ５，８种ＤＱＡ１，１２种ＤＱＢ１和１２种ＤＰＢ１基因。该人群的ＨＬＡⅡ类等位基因多态性的典型性表现在ＨＬＡ－ＤＲＢ＊１２０２的不寻常优势和ＤＲＢ１＊０２单倍型的结构的高度复杂性。还发现了很高频率的一个近年才被正式命名的ＤＰ新型：ＨＬＡ－ＤＰＢ１＊２１０１，并且此型具有极不寻常的ＤＲＢ１＊１２０２－ＤＰＢ１＊２１０１的连锁不平衡。为分子流行病学研究提供了资料。     

应用PCR／ASO探针技术分析21羟化酶B基因两个突变位点

应用ＰＣＲ／ＡＳＯ探针技术检测了１２例无血缘关系的先天性肾上腺皮质增生症患儿的２１羟化酶功能基因Ｂ的ＣＤ１７２Ｉｌｅ→Ａｓｎ和ＣＤ３１８Ｇｌｎ→０两种突变类型，发现在１２例ＣＡＨ患儿中７例携带ＣＤ１７２突变，患儿均属单纯男性化型，其中１例为该突变纯合子，６例为杂合子，计算得该突变占所分析的ＣＹＰ２１－Ｂ基因总数的３３．３％（８／２４）；而ＣＤ３１８突变的发生率较低，只检出１例男性化伴失盐型患儿为此     

HLA－DRB1等位基因与中国湖北汉族人SLE关联的研究

在国内首次借助ＰＣＲ／ＳＳＰ技术对５２例湖北汉族人ＳＬＥ患者进行了ＨＬＡ－ＤＲＢ１基因型别分析。结果发现，实验组ＨＬＡ－ＤＲＢ１＊０３０１基因频率为２４％，表型频率为４４．２％，ＲＲ＝４．７６，χ２＝２１．２，Ｐ＜０．０１；其它等位基因频率在实验组与对照组间差异无显著性。该结果提示ＨＬＡ－ＤＲＢ１＊０３０１基因与ＳＬＥ有关联     

HLA—DRB1等位基因与中国湖北汉族人SLE关联的研究

在国内首次借助ＰＣＲ／ＳＳＰ技术对５２例湖北汉族人ＳＬＥ患者进行了ＨＬＡ－ＤＲＢ１基因型别分析。结果发现，实验组ＨＬＡＷ－ＤＲＢ１＊０３０１基因频率为２４％，表型频率为４４．２％，ＲＲ＝４．７６，ｘ＾２＝２１．２，Ｐ〈０．０１；其它等位基因频率在实验组与对照组间差异无显著性。该结果显示ＨＬＡ－ＤＲＢ１＊０３０１基因与ＳＬＥ有关联。     

HLA—DPB131个等位基因的PCR—RFLP高分辨分型

本文报道建立了一种基于ＰＣＲ－ＲＦＬＰ技术的ＨＬＡ－ＤＰＲＢ１分型方法。经计算机分析而选出１０个限制性内切酶，在３１个ＤＰＢ１等位基因组成的４９６个ＤＰＢ１基因型中，可唯一性分辨４８４个。用于确定ＤＰＢ１基因型的３３个多态性酶切片段有２９个在８种纯合／杂合子分型细胞ＤＮＡ的ＤＰＢ１分型中得到验证。     

用PCR—SSP方法研究广西壮族HIL—DQA1和B1基因多态性

目的 检测广西壮族ＨＬＡ－ＤＱＡ１，Ｂ１基因的多态性。方法 应用ＰＣＲ－ＳＳＰ方法对１４０名健康、无血缘关系广西壮族人的ＨＬＡ－ＤＱＡ１和ＤＱＢ１进行基因分型。结果 共检出７个ＤＱＡ１等位基因和１６个ＤＱＢ１等位基因。在检出的ＤＱＡ１等位基因中，０３０１的基因频率最高（３５％），０４０１的基因频率最低（１．１％）。在ＤＱＢ１等基因中，０６０１（２２．１％），０３０１（２０．７％），０５０１（１３．     

HLA-DRB1*10与中国人慢性乙肝关联

目的研究ＨＬＡ－ＤＲＢ１基因与乙肝的关联,探讨可能由病毒感染继发的自身免疫反应导致疾病发展的主要原因,为乙肝的病因学及预后估计提供免疫学方面的资料。方法在我国北方地区随机选择５４名慢性乙肝患者,用ＰＣＲ／ＳＳＰ方法进行ＨＬＡ－ＤＲＢ１等位基因分型,对照组为同地区９２名健康人。采用疾病和ＨＬＡ相关分析软件进行数据处理。结果病人组ＨＬＡ－ＤＲＢ１＊１０基因频率明显增高为２５．９％（ＲＲ＝１０．３８,Ｐｃ＝０．００１）,其它等位基因频率在实验组与对照组间差异无显著性。结论ＨＬＡ－ＤＲＢ１＊１０基因与中国北方人群慢性乙肝关联     

用于研究DLA－DRB1基因分型的寡核苷酸引物对的选择

我们用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ法研究ＤＬＡⅡ类基因。为寻找合适的引物，用四对不同的引物：ＤＬＡ－ＤＲ－ＳＰ／Ｓｔｏｐ，ＤＬＡ－ＤＲ－ＳＰ／Ｐ３，ＨＬＡ－ＤＲＢ－ＧＨ４６／５０及ＨＤＡ－ＤＲＢ－ＡＭＰ－Ａ／Ｂ进行了一系列扩增。只有引物对ＨＬＡ－ＤＲＢ－ＡＭＰ－Ａ／Ｂ获得了满意的结果。其类似核苷酸序列在ＤＬＡ－ＤＲＢｃＤＮＡ的核苷酸序列内被发现，特异性也为Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交分析所证实。内切酶ＨａｅⅢ和ＨｉｎｆⅠ酶解后显示出ＤＬＡ－ＤⅡ类基因高度的多态性和等位基因特异的多态性带型。揭示该引物对是目前用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ法研究ＤＬＡ－ＤＲＢ１基因较理想的、实用的引物。     

上海地区多发性硬化症与HLAⅡ类基因和抗原处理相？…

探讨上海人群中ＨＬＡⅡ类基因和抗原处理相关基因与多发性硬化症的相关性。方法,用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ和ＰＣＲ－ＳＳＯ技术对２１名上海地区无血缘关系的ＭＳ患者和８９名正常人作ＨＬＡⅡ类（ＨＬＡ－ＤＲＢ１,－ＤＱＡ１和－ＤＱＢ１）和抗原处理相关基因（ＴＡＰ１,ＴＡＰ２和ＬＭＰ２）分型。结果患者组ＤＲＢ１＊０４０５、Ｔ 克＊０５０２（Ｐ＝０．００２５）等位基因ＤＲＢ１＊０４０５－ＤＱＡ１＊０３０１－ＤＱＢ１＊     

中国南方汉族人群HLA—DQA1位点多态性与系统性红斑狼疮易感…

应用多聚酶链反应／序列特异寡核苷酸探针杂交（ＰＣＲ／ＳＳＯＰＨ）方法，探讨了我国东南沿海汉族人群ＨＬＡ－ＤＱＡ１等位基因多态性与系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）的易感性关系，对５０例ＳＬＥ患者和６７例健康人对照血样本分析，表明ＳＬＥ患者具有显著高的ＤＱＡ１＊０１０２等位基因频率，ＯＲ＝４６．０４，Ｐ＜０．００１，可能是一易感等位基因，而ＤＱＡ１＊０５０１在病例与对照中呈相反结果，ＯＲ＝０．０４２，Ｐ＝０。     

原发性IgA肾炎与HLA-DQB1等位基因遗传多态性的研究

应用ＰＣＲ／ＳＳＯ方法对５１例经肾穿刺证实ＩｇＡ肾病虱和９６名健康对照人员进行了ＨＬＡ－ＤＱＢ１等位基因分型。结果显示ＩｇＡＮ患者组中ＤＱＢ１＾＊０３０２基因频率明显高于正常对照组；ＩｇＡＮ患者组中ＤＲ４，ＤＱＢ１＾０３０３均为阳性的表型频率也明显高于对照组，而ＤＲ４阳性，ＤＱＢ１＾０３０２阴性的表型频率在两组中无差异。     

新疆维族人群HLA—DR—DQ单倍型研究

为了解ＨＬＡ第２类基因（ＨＬＡ－ＤＲ－ＤＱ，－ＤＰ位点）在中国人群中的分布情况，应用ＰＣＲ／ＳＳＯ方法对新疆的主要民族维吾尔族人９２例进行了ＨＬＡ－ＤＲＢ１、ＤＲＢ３、ＤＲＢ５和ＤＱＡ１、ＤＱＢ１五位点等位基因进行了分析，计算了它们在该人群中的分布频率，推导了ＤＲ－ＤＱ五位点单倍型的结构及分布。通过与世界各主要人种和中国北方汉族的比较，证明维族在中华民族有共同基因背景的基础上，还表现出与西方人种有一定程度的血缘交流。为研究古丝绸之路人口迁移对中国维族遗传特征的影响提供了资料。     

北方汉族HLA-DRB1、DQB1基因多态性的研究

目的从基因水平了解北方汉族ＨＬＡ－ＤＲＢ１、ＤＱＢ１多态性分布,获得更完整、更准确的遗传学数据。方法应用ＰＣＲ－ＳＳＰ方法对１０７名北方汉族健康人进行了ＨＬＡ－ＤＲＢ１、ＤＱＢ１等位基因分型。结果鉴定了１４个ＤＲＢ１等位基因,９个ＤＱＢ１等位基因,包括了ＤＲ、ＤＱ位点的全部血清学特异性。结论提供了一套比较完整准确的ＤＲＢ１、ＤＱＢ１等位基因的基因频率和连锁不平衡参数。对群体遗传和疾病关联的研究具有重要的意义。     

Wilson病家系ATP7B基因第18外显子突变及多态

目的：检测中国人Ｗｉｌｓｏｎ病（ＷＤ）基因的第１８外显子（ｅｘｏｎ１８）突变及多态。方法：应用多聚酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）技术，分析１６个ＷＤ家系５４例个体和１８例正常人ＡＴＰ７Ｂ基因ｅｘｏｎ１８分子结构改变。结果：在ＷＤ家系中发现有３种单链构象，其中１种为正常构象，１种为突变，另１种可能为正常ＤＮＡ多态；１７例ＷＤ患者及其３７例一级亲属中分别检出突变者１０例和１１例，突变率分别为２９．４％和１４．９％。其中一级亲属检出的突变者中有３例经血清铜氧化酶及眼科Ｋ－Ｆ环检查证实为ＷＤ症状前患者。结论：ｅｘｏｎ１８是中国人ＷＤ基因突变热点之一，大多数ＷＤ患者为复合杂合子；应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术分析ｅｘ－ｏｎ１８是一种有效的ＷＤ基因筛选方法，也可为无家族史的ＷＤ可疑者提供诊疗依据     

用PCR单链构象多态性快速判别个体间HLA－DP相容性并检出新等位基因

先确定和比较ＨＬＡ纯合细胞ＤＰＡＩ和ＤＰＢＩ基因ＰＣＲ扩增产物的单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ），然后分析了２０对无血缘关系个体单链ＤＮＡ及其两两混合状态下的构象多态性变化，在分子水平测定异体间ＤＰ匹配性，并和已有的ＤＰ基因分型（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）格局相比较，结果表明，ＲＦＬＰ不同的个体其ＳＳＣＰ必定不同；而ＲＦＬＰ相同的个体，ＳＳＣＰ一般相同，但有例外。从例外个体异常的ＳＳＣＰ格局中发现了新ＤＰ等位基因。本研究证实ＰＣＲ－ＳＳＣＰ在检测等位基因之间微小差异方面十分敏感，并具有简单、快速、经济等优点，对移植中的ＤＰ交叉配型有实际应用价值。     

用PCR-SSP方法研究广西壮族HLA-DQA1和B1基因多态性

目的　检测广西壮族ＨＬＡＤＱＡ１ ,Ｂ１ 基因的多态性。方法　应用ＰＣＲＳＳＰ 方法对１４０ 名健康、无血缘关系广西壮族人的ＨＬＡＤＱＡ１ 和ＤＱＢ１ 进行基因分型。结果　共检出７ 个ＤＱＡ１ 等位基因和１６ 个ＤＱＢ１ 等位基因。在检出的ＤＱＡ１ 等位基因中,０３０１ 的基因频率最高（３５ ％ ） ,０４０１ 的基因频率最低（１ ．１ ％ ） 。在ＤＱＢ１ 等位基因中,０６０１（２２ ．１ ％ ） ,０３０１（２０ ．７ ％ ） ,０５０１（１３ ．９ ％ ） 最为常见。未检出的等位基因包括ＨＬＡＤＱＡ１ ＊ ０２０１ ,０３０２ ,０６０１ ,ＤＱＢ１ ＊ ０６０３ ,０６０５ 和０６０８ 。结论　广西壮族ＨＬＡＤＱＡ１ ,Ｂ１ 基因的多态性不仅有中华民族的特点,而且也有其独特性。     

原发性肝细胞癌1号染色体杂合子丢失的初步研究

目的 分析原发性肝细胞癌（ＨＣＣ）１号染色体短臂（１ｐ）上１０个位点等位基因杂合子丢失（ＬＯＨ）,以期寻找１ｐ上可能存在的与ＨＣＣ发生有关的肿瘤抑制基因的缺失区域。方法 用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法分析３８例ＨＣＣ的１号染色体短臂１０个位点微卫星多态性标记的ＬＯＨ。所有患者均做ＨＢＶ５项检测和ＨＣＶ血清抗体的ＥＬＩＳＡ法检测。结果 在８４．２％（３２／３８例）的ＨＣＣ组织中检出染色体１ｐ片段的ＬＯ