PTBP1通过PTEN/Akt通路调节结肠癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移

目的 ：探讨多聚嘧啶区结合蛋白1(PTBP1)通过蛋白激酶B(Akt)/磷酸酶与张力蛋白同源物（PTEN）通路调节结肠癌（CRC）细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。方法：将SW620细胞分为SW620组、si-NC组、si-PTBP1组、bp V(PTEN抑制剂)组、si-PTBP1+bpV组；检测SW620细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭情况及PTBP1、PTEN/Akt通路蛋白、凋亡蛋白、自噬蛋白表达；检测正常的结肠上皮细胞（FHC）以及SW620、SW480、HT29细胞PTBP1、PIK3、Akt、PTEN蛋白水平。结果：与FHC细胞相比，SW620、SW480、HT29细胞PTBP1、p-PI3K/PIK3、p-Akt/Akt蛋白水平显著上调，PTEN蛋白显著下调；与SW620组、si-NC组相比，si-PTBP1组PTBP1、p-PI3K/PIK3、p-Akt/Akt、Bcl-2蛋白水平、48 h吸光度值、细胞迁移和侵袭数量显著降低（P<0.05），细胞凋亡率、Bax、cleaved-Caspase-3、Beclin1、LC3-II/I、PTEN蛋白水平显著升高（P<...     

ERK1/2 MAPK通路在TIMP-1抑制高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞凋亡中的作用

目的 探讨细胞外信号调节激酶(ERK1/2)丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)通路在基质金属蛋白酶1组织抑制剂(TIMP-1)抑制高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞凋亡中的作用。 方法 将人正义、反义TIMP-1用脂质体法转染大鼠肾小球系膜细胞，并将细胞分为正常对照组、未转染组、空载体组、正义转染组和反义转染组。各组细胞分别用高糖(25 mmol/L)和(或)MEK(ERK1/2通路中的MAPK激酶)特异性抑制剂PD98059(50 μmol/L)刺激24 h。应用透射电镜观察细胞内部结构变化。Western 印迹观察磷酸化(p)的ERK1/2、P90rsk、Bad及总的P90rsk、Bad、Bcl-2蛋白的表达。 结果 加入PD98059后，各组细胞内可见凋亡小体形成、细胞皱缩、核固缩、染色体边集及膜泡样突变等现象，与未转染组比较，以反义转染组最明显，凋亡细胞数目最多；正义转染组细胞形态改变不十分明显，凋亡细胞数目相对较少。此外，加入PD98059后，ERK1/2、P90rsk、Bcl-2及Bad的磷酸化明显减少(P < 0.05)，ERK1/2和P90rsk的磷酸化以正义转染组最明显(P < 0.01)；总P90rsk、总Bad表达量在各组之间无显著差异。 结论 ERK1/2 通路在TIMP-1抑制高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞凋亡过程中起重要作用。     

miR-183作用于Ezrin抑制结肠癌细胞侵袭和迁移的研究

目的:探讨miR-183对结肠癌细胞SW620侵袭和迁移能力的影响及是否通过作用于其靶基因Ezrin来发挥作用。方法:采用脂质体转染细胞,高表达或沉默miR-183,用Transwell实验观察细胞侵袭和迁移能力的变化,用Western Blot分析细胞Ezrin蛋白表达的改变;通过共表达miR-18和Ezrin,以及共沉默miR-18和Ezrin,观察miR-183对细胞侵袭和迁移能力的影响的变化,进一步证实miR-183是否通过作用于其靶基因Ezrin来发挥作用。结果:高表达miR-183后,与对照组相比,细胞侵袭及迁移能力明显下降,Ezrin蛋白的表达水平降低(P0.01,P0.001);反之,沉默miR-183的表达,细胞侵袭和迁移能力明显增强,Ezrin蛋白的表达水平增高(P0.01);高表达miR-183和Ezrin蛋白,与对照组(仅高表达miR-183)相比,细胞侵袭和迁移能力增强(P0.05);沉默miR-183和Ezrin的表达,与对照组(仅沉默miR-183)相比,细胞侵袭和迁移能力降低(P0.001)。结论:miR-183能够抑制结肠癌细胞SW620的侵袭和迁移,且通过调控其靶基因Ezrin蛋白的表达发挥作用。     

c-Met基因慢病毒载体的构建及其配体肝细胞生长因子对SW480细胞侵袭能力的影响

目的观察慢病毒介导的RNA干扰c-Met基因后肝细胞生长因子(HGF)对结肠癌细胞株SW480侵袭能力的影响。方法实验分为3组,正常对照组(NC组):正常目的细胞加sh RNA阴性对照病毒感染细胞(NC组又分为NC-20和NC-40 2个亚组,分别代表正常目的细胞感染sh RNA阴性对照病毒后在Transwell外室中分别加入浓度为20和40 ng/m L的HGF);c-Met基因敲除组(KD组):正常目的细胞加RNA干扰靶点病毒感染细胞(KD组又分为KD-20和KD-40 2个亚组,分别代表正常目的细胞感染目的基因sh RNA-c-Met病毒后在Transwell外室中分别加入浓度为20和40 ng/m L的HGF;KD1、KD2、KD3和KD4组分别表示针对目的基因不同的RNA干扰靶点,以挑选其中最有效的干扰靶点);空白对照组(CON组):正常目的细胞加未感染任何病毒的细胞。构建sh RNA-c-Met慢病毒表达载体,实时定量PCR(RT-PCR)筛选阳性克隆并测序鉴定;经慢病毒质粒包装后转染SW480细胞,转染48 h后,RT-PCR法检测SW480细胞中c-Met m RNA表达,Western blot法检测SW480细胞中c-Met蛋白表达水平;转染72 h后,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭能力。结果 sh RNA-c-Met慢病毒表达载体构建成功;sh RNA-c-Met显著下调了SW480细胞中c-Met m RNA的表达,并且RNA干扰靶点病毒感染细胞第4靶点时的基因敲减效率最高(81.4%),为最有效靶点。Western blot检测结果显示,KD组SW480细胞中c-Met蛋白表达明显低于NC组(P=0.015)和CON组(P=0.010),KD组SW480细胞凋亡率明显高于NC组(P0.001)和CON组(P0.001)。细胞转移率在KD组、KD-20组和KD-40组均分别明显低于NC组(P0.001)、NC-20组(P=0.015)及NC-40组(P=0.017);与NC组比较,NC-20组和NC-40组的细胞转移率明显升高(P0.001、P0.001),且NC-40组的细胞转移率明显高于NC-20组(P=0.005);同样,与KD组比较,KD-20组和KD-40组的细胞转移率均明显升高(P0.001、P0.001),KD-40组的细胞转移率明显高于KD-20组(P=0.014)。结论以c-Met为靶点的RNA干扰能明显下调结肠癌细胞株SW480中c-Met的表达,c-Met的表达下调能明显增加细胞凋亡且能降低HGF对SW480细胞侵袭能力的影响。     

人结肠癌细胞中高尔基磷蛋白3表达与Wnt信号通路的关系

目的:探讨人结肠癌细胞中高尔基磷蛋白3(GOLPH3)基因表达与Wnt信号通路活性的关系。方法:用RT-PCR方法检测4种人结肠癌细胞(HCT116、HT29、SW480、SW620)中GOLPH3mRNA的表达,选取GOLPH3高表达的细胞株行GOLPH3基因干扰,用RT-PCR检测干扰效果,然后用TOPFlash报告基因、平板克隆实验、Western blot法分别检测干扰后细胞Wnt信号通路活性、增殖活性以及GOLPH3与β-catenin表达的变化。结果:4种结肠癌细胞中SW620细胞的GOLPH3mRNA相对表达量最高;SW620细胞转染GOLPH3siRNA后GOLPH3 mRNA的相对表达量明显降低(P0.001);与未处理的SW620细胞比较,转染GOLPH3siRNA的SW620细胞Wnt通路转录活性明显降低(0.342 vs.1.000,P0.001)、癌细胞集落形成数明显减少(82.333 vs.207.333,P0.001)、GOLPH3与β-catenin蛋白表达均明显降低(0.260 vs.1.00;0.182 vs.1.00,均P0.001)。结论:人结肠癌细胞中GOLPH3的高表达可增加Wnt/β-catenin细胞信号通路活性,从而促进细胞增殖。结肠肿瘤;高尔基磷蛋白3;Wnt信号通路     

CUGBP1在结直肠癌组织中的表达及对细胞增殖和侵袭力的影响

目的 :探讨CUG连接蛋白1(CUGBP1)在结直肠癌组织中的表达,以及特异性沉默结直肠癌SW620细胞中CUGBP1基因表达对细胞增殖和侵袭力的影响。方法:选取2015年3月—2017年12月择期行手术治疗的结直肠癌患者107例,免疫组化法检测结直肠癌和癌旁组织中CUGBP1蛋白表达,培养人结直肠癌SW620细胞,分为干扰序列组、阴性对照组和对照组,实时荧光定量PCR技术检测细胞中CUGBP1基因,MTT法检测细胞增殖能力,Transwell小室检测细胞侵袭力。结果:结直肠癌组织中CUGBP1蛋白阳性表达率77.57%,高于癌旁组织的38.32%,差异有统计学意义(χ2=33.826,P=0.000);结直肠癌组织中CUGBP1蛋白表达与分化程度、TNM分期和淋巴结转移有关(P0.05);干扰序列组细胞中CUGBP1 m RNA相对表达量低于阴性对照组和对照组,差异有统计学意义(P0.05);干扰序列组细胞24h、48h、72h和96h时吸光度A值低于阴性对照组和对照组,差异有统计学意义(P0.05);干扰序列组侵袭细胞数少于阴性对照组和对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:CUGBP1蛋白在结直肠癌组织中呈高表达,特异性沉默结直肠癌SW620细胞中CUGBP1基因表达可有效抑制细胞增殖和侵袭力。     

高渗应激下ERK信号转导通路在兔髓核细胞凋亡中的作用

[目的]观察高渗透压对体外培养的兔髓核细胞凋亡的影响及细胞外信号调节激酶(ERK1/2)信号转导通路在此过程中的作用.[方法]用不同的渗透压梯度以及ERK1/2特异性抑制剂PD 98 059(50 μmol/L)分不同作用时间处理髓核细胞;流式细胞仪检测髓核细胞在不同处理组的凋亡情况,蛋白质免疫印迹技术检测各组ERK1/2和p- ERK1/2蛋白的表达情况;免疫荧光标记技术检测p- ERK1/2蛋白在髓核细胞内的分布情况.[结果]高渗透压(600 mOsm)培养基中兔髓核细胞凋亡显著增加,与对照组相比差异有统计学意义(P=0.013),并呈时间依赖性;PD98059预处理组与相应时间段同渗透压组相比,细胞凋亡进一步显著地增加(P=0.035);400 mOsm组及其抑制组在各时间段细胞凋亡均不明显;600 mOsm高渗透压显著激活p- ERK1/2的表达,并且在3h组表达水平最高,与对照组比较差异显著(P--0.027),而PD98059几乎阻断p- ERK1/2的表达;免疫荧光标记检测到p- ERK1/2在600 mOsm高渗组的细胞胞浆和胞核中均有分布.[结论]高渗透压(600 mOsm)应激下兔髓核细胞凋亡显著增加,而且激活的ERK1/2信号转导通路具有抵抗髓核细胞凋亡的作用;并且髓核细胞能够适应轻度增加的渗透压(400mOsm)环境.     

结肠癌组织miR-192和miR-23a水平的变化及其临床意义

目的:探究结肠癌组织中微小RNA(miR)-192和miR-23a水平变化及其临床意义。方法:收集2009年3月—2012年10月我院手术切除并经病理学检查确诊的结肠癌标本71例及肠息肉标本45例,采用原位杂交法检测结肠癌组织及肠息肉组织中miR-192和miR-23a水平,分析结肠癌组织中miR-192和miR-23a水平与临床病理特征的关系。选用结肠癌SW620细胞系作为研究对象,分为对照组、miR-192组及miR-23a组,其中对照组不作处理,miR-192组及miR-23a组细胞分别进行miR-192及miR-23a转染,采用Transwell实验检测3组结肠癌细胞的侵袭能力。结果:结肠癌组织中miR-192水平明显低于肠息肉组织(P0.05),miR-23a水平明显高于肠息肉组织(P0.05);miR-192及miR-23a水平与结肠癌浸润深度、淋巴结转移情况及Dukes分期有关(P0.05);结肠癌组织中miR-192表达水平与miR-23a表达水平呈负相关(r=-0.805,P0.05)。miR-192组结肠癌细胞相同时间内穿过小室数明显低于对照组及miR-23a组,miR-23a组结肠癌细胞相同时间内穿过小室数明显高于对照组(P0.05)。结论:结肠癌组织中miR-192水平下降,miR-23a水平上调;miR-192和miR-23a表达水平与浸润深度、淋巴结转移情况及Dukes分期有关;结肠癌组织中miR-192和miR-23a水平呈负相关;miR-192抑制结肠癌细胞侵袭能力,miR-23a能增强结肠癌细胞侵袭能力。     

胰岛素样生长因子1对结肠癌细胞凋亡的影响及其机制研究

目的研究胰岛素样生长因子1(IGF-I)通过磷酯酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI-3K/Akt)信号通路对结肠癌细胞株SW480凋亡率的影响及凋亡抑制蛋白survivin表达水平的变化。方法在培养结肠癌SW480细胞株时,采用不同浓度的IGF-I不同时间作用于SW480细胞,然后采用Western blot检测凋亡抑制蛋白survivin表达变化。100 ng/mL IGF-I作用于SW480细胞2 h内,Westernblot检测Akt的磷酸化表达变化;Akt特异性抑制剂LY294002处理前后,利用Western blot检测Akt磷酸化表达的变化,Western blot及细胞免疫荧光检测survivin表达的变化,流式细胞术检测细胞凋亡率的改变。结果IGF-I能上调SW480细胞的survivin表达,且其表达水平与IGF-I的作用时间、浓度呈依赖性(IGF-I作用SW480细胞不同时间后,survivin蛋白表达显著升高,并在12 h时达到峰值,所有实验组survivin蛋白的表达均显著高于对照组;IGF-I浓度为100 ng/mL时,survivin蛋白的表达达到顶峰);IGF-I快速激活SW480细胞中PI-3K/Akt信号通路(IGF-I作用SW480细胞15,30 min后,p-Akt蛋白的表达达到高峰);IGF-I能通过PI-3K/Akt信号通路上调SW480细胞survivin的表达;IGF-I能通过PI-3K/Akt信号通路抑制SW480细胞凋亡[利用流式细胞术检测空白组、刺激组、阻断组各组SW480细胞的凋亡率,分别为(5.18±0.415)%,(0.85±0.052)%,(3.15±0.411)%,各组之间差异有统计学意义(P0.05)]。结论IGF-I可通过PI-3K/Akt通路诱导survivin表达,从而抑制结肠癌细胞SW480的凋亡。     

下调盘状结构域蛋白1表达对前列腺癌PC-3细胞生物学行为的影响

目的观察下调盘状结构域蛋白1(DDR1)对前列腺癌PC-3细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响并探讨其可能的机制。方法采用免疫组织化学法检测前列腺组织中DDR1的表达情况。将PC-3细胞分为3组,实验组转染DDR1-shRNA重组质粒,对照组转染小干扰RNA,未转染组为正常细胞,采用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞的增值能力,TUNEL法检测细胞的凋亡,Transwell小室检测细胞的侵袭能力变化,Western blot法检测细胞内DDR1、AKT、基质金属蛋白酶2(MMP-2)及bcl-2蛋白表达的变化。结果 DDR1蛋白的表达与前列腺癌患者的年龄、前列腺体积及总前列腺特异抗原(TPSA)无关(P0.05),与Gleason评分、淋巴结转移及分期有关(P0.05)。与未转染组及对照组相比,实验组的细胞凋亡率增高、增殖受到抑制、侵袭能力减弱,细胞内DDR1、AKT、MMP-2及bcl-2蛋白表达水平均降低。结论 DDR1蛋白表达与前列腺癌的进展相关,下调其表达可抑制前列腺癌PC-3细胞的恶性生物学行为,这可能与AKT、MMP-2及bcl-2蛋白表达的变化相关。     

miR-338-5p在结直肠癌组织中的表达及其对结肠癌细胞增殖的影响

目的探讨miR-338-5p在结直肠癌组织中的表达状况,以及miR-338-5p过表达对结肠癌细胞系HCT116和SW620增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法使用实时定量PCR方法检测miR-338-5p在40例临床诊断为结直肠癌患者配对癌组织及癌旁组织中的表达情况。随后使用miR-338-5p-mimics转染结肠癌细胞系HCT116和SW620,确认过表达成功后,分别使用CCK-8法、FITC-AnnexinV．PI法及Propidiumiodide法检测肿瘤细胞的增殖、凋亡和细胞周期的改变。结果①miR-338-5p在结直肠癌组织中的表达明显低于其在相应的癌旁组织中的表达（P〈0．01）。②与转染阴性对照比较,转染miR-338．5p．mimics后,HCT116和SW620细胞增殖能力明显减弱（P〈0．01）,凋亡率明显增加[HCT116细胞：（11．43±0．67）％比（7．98±0．36）％,P〈0．01;SW620细胞：（10．5±0．2）％比（7．93±0．5）％,P〈0．01],诱导HCT116和SW620细胞G1期阻滞[HCT116细胞：（80．41±1.34）％比（64．87±1．83）％,P〈0．01;SW620细胞：（68．76±0．41）％比（54．89±0．78）％,P〈0．01]。结论miR-338-5p可能作为抑癌基因在结直肠癌中发挥作用,并对细胞增殖、凋亡和周期有显著影响。     

ERK1/2对高糖环境下足细胞凋亡的作用及来氟米特对其的影响

目的：观察ERK1/2对高糖环境下足细胞凋亡的作用及来氟米特对其的影响。方法：培养的人足细胞分为正常糖组、高渗对照组、高糖组,高糖组按不同刺激时间又分为0.5h、1h、6h、12h、24h5组,应用Western印迹分析法检测各组足细胞ERK1/2信号途径中ERK1/2蛋白活化的变化。足细胞凋亡检测：将足细胞分为高糖对照组、抑制剂组、抑制剂＋来氟米特（A771726）组、A771726组,将以上各组足细胞培养24h后,分别进行ERK1/2信号途径的检测同前及流式细胞仪检测足细胞的凋亡率。结果：高糖组30min可以活化ERK1/2蛋白,6h开始达高峰,持续活化到24h开始降至基础水平。正常糖及高渗对照组未能活化ERK1/2。与高糖组相比,ERK1/2蛋白抑制剂（PD98059）抑制了ERK1/2的磷酸化,使磷酸化的ERK1/2（P-ERK1/2）蛋白表达明显减少（P〈0.01）,从而影响了下游多种核转录因子的活化,影响目的基因的表达而增加了足细胞的凋亡（P〈0.01）。A771726可以增加P-ERK1/2的表达量（P〈0.01）,从而减少足细胞的凋亡（P〈0.05）。而PD98059可以影响A771726的作用,使其对足细胞的保护作用减弱,其凋亡率比高糖组明显增加（P〈0.01）。结论：ERK1/2信号途径参与了来氟米特对足细胞的保护作用。     

体外转染KISS-1基因对SW480细胞系侵袭和迁移力的影响

目的 探讨人肿瘤转移抑制基因KiSS-1对人结肠癌SW480细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响.方法 将携有KISS-1基因的重组真核表达质粒pRc/CMV2-KISS-1转化大肠杆菌DH5et并扩增,抽提纯化质粒并进行酶切鉴定,pRc/CMV2-KISS-1体外转染SW480细胞(SW480-FH1T),筛选稳定转染的细...     

整合素αvβ6调控结肠癌细胞转录因子Ets-1表达的分子机制研究

目的:探讨整合素αvβ6对核转录因子Ets-1表达的影响,明确αvβ6-ERK2直接连接在该过程中发挥的作用。方法:流式细胞仪检测各结肠癌SW480细胞表面αvβ6的表达;采用Westernblotting法分别检测ERK表达、活化水平和Ets-1的表达水平。结果:SW480β6和SW480β6Del.mutant细胞均表达αvβ6;SW480β6细胞Ets-1的表达量较SW480细胞明显增多(P<0.05),同时ERK的磷酸化水平(p-ERK)也明显升高,而总ERK(t-ERK)表达水平二者无明显差异;SW480β6Del.mutant细胞ERK2的磷酸化水平较SW480β6细胞明显降低;SW480β6Del.mutant细胞和PD98059处理的SW480β6细胞Ets-1的表达水平明显低于对照组(P<0.05)。结论:整合素αvβ6通过αvβ6-ERK2直接连接提高ERK2的磷酸化水平,从而促进结肠癌SW480细胞核转录因子Ets-1表达。     

原花青素对人结肠癌细胞SW620增殖和凋亡的影响

目的:观察葡萄籽提取物原花青素对人结肠癌细胞株SW620细胞增殖和凋亡的影响。方法:SW620细胞与20、40、60、80μg/mL的原花青素共同孵育24h～8d,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术分析细胞凋亡情况,分光光度法检测Caspase-3酶活性。结果:不同浓度(20～80μg/mL)的原花青素对SW620细胞的生长有明显的抑制作用,呈现出一定的剂量依赖性;含原花青素20、40、80μg/mL的观察组细胞凋亡发生率分别为6.9%、18.6%及22.9%,不含药的对照组细胞凋亡发生率为1.3%。SW620细胞与含药(40μg/mL)或不含药的培养基共同培养48h或72h,对照组细胞几乎无法检出Caspase-3酶活性,而给药组细胞活性显著增加。结论:原花青素在体外可呈浓度依赖性抑制人结肠癌细胞株SW620的增殖并通过Caspase-3通路促进其凋亡。     

LIGHT／INF—γ基因配比转染HepG2细胞对其凋亡及Fas／FasL系统表达的影响

目的：观察脂质体介导的LIGHT和IFN—γ配比转染HepG2细胞后对其凋亡及Fas和FasL表达的影响。方法：将HepG2细胞分为LIGHT单独转染组、LIGHT和IFN—γ联合转染组和空白对照组，以脂质体为中介转染HepG2细胞；分别于转染后12、24和48h收集HepG2细胞，流式细胞术检测转染后HepG2细胞的凋亡率及Fas和FasL的表达。结果：LIGHT基因转染HepG2细胞能明显促进其凋亡，随时间延长凋亡率增加；Fas和FasL在HepG2细胞高表达，以Fas升高程度显著。结论：LIGHT和IFN—γ联合转染HepG2，其凋亡效果优于LIGHT单独转染，主要是通过上调Fas的表达来促进HepG2细胞凋亡。     

siRNA沉默VEGF基因对肾癌细胞增殖与凋亡的影响

目的：探讨siRNA干扰血管内皮生长因子（VEGF）基因对人肾细胞癌细胞株（ACHN）细胞增殖与凋亡的影响.方法：化学合成针对VEGF的小干扰RNA,通过脂质体转染至ACHN中,利用Western印迹法检测细胞内VEGF的表达,采用台盼蓝拒染法测定细胞生长曲线,用MTT比色分析法检测细胞增殖抑制率（IR）,用TUNEL方法检测细胞凋亡率（AR）.结果：生长曲线提示,与空白对照组及阴性对照组相比,siRNA1组、siRNA2组ACHN细胞的生长明显减慢 在24 h、48 h、72 h,siRNA1的增殖抑制率为10.6%、18.0%、27.1%,siRNA2增殖抑制率为18.9%、32.7%、40.3%,均高于空白对照组及阴性对照组（P〈0.05） siRNA1组的细胞凋亡率为10.7%、15.2%、20.3%,siRNA2组的细胞凋亡率为17.3%、26.2%、37.4%,均高于空白对照组及阴性对照组（P〈0.05） siRNA1组、siRNA2组VEGF蛋白表达水平明显低于空白对照组及阴性对照组,其中siRNA2对ACHN细胞的IR、AR和VEGF蛋白表达的抑制作用均显著高于siRNA1组（P〈0.05）.结论：VEGF在肾癌的发生发展中起着重要作用,化学合成的VEGF-siRNA能特异性抑制肾细胞癌ACHN细胞株中VEGF的表达,抑制细胞生长增殖,促进细胞凋亡.对于VEGF基因高表达的肾细胞癌患者,针对VEGF的RNAi技术有望成为肾细胞癌新的基因治疗手段.     

聚酰胺树形分子递送Survivin反义寡核苷酸诱导结肠癌细胞凋亡的研究

目的 观察聚酰胺(PAMAM)树形分子高聚合物介导Survivin反义寡核苷酸(Sur-vivin-asODN)转染结直肠癌SW620细胞的可行性以及对结直肠癌SW620细胞凋亡的影响.方法 制备PAMAM反义基因复合物和阳离子脂质体反义基因复合物,透射电镜观察复合物的形态,激光散射粒径分析仪测定粒径,zeta电位分析仪测定zeta电位,离心法和紫外分光分度仪测定复合物的的包封率、载药率和体外DNA释放速度.将上述两种基因转染复合物转染结直肠癌细胞,测定其转染效率;检测转染后细胞中Survivin蛋白的表达和细胞的凋亡率.结果 PAMAM-Survivin-asODN复合物的粒径小于脂质体-Survivin-asODN复合物的粒径(P<0.01),但zeta电位高于后者(P<0.05);基因载药率、包封率两组差异无统计学意义;PAMAM对DNA持续释放14 d,但脂质体只持续5 d.PAMAM.Survivin-asODN转染结直肠癌细胞的效果强于脂质体-SurvivinasODN(P<0.05).转染后结直肠癌细胞Survivin蛋白的表达低于脂质体复合物(P<0.05),细胞的凋亡率高于脂质体复合物(P<0.05).结论 PAMAM能将Survivin-asODN高效递送到结直肠癌SW620细胞,降低Survivin蛋白表达并诱导结直肠癌细胞凋亡.     

SLP-2对前列腺癌PC-3细胞增殖和早期凋亡的影响

目的探讨SLP-2（stomatin-like protein2）基因对人前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响。方法合成和构建SLP-2沉默和过表达载体,用Lipofectamine TM2000分别转染5组人前列腺癌PC-3细胞：pcDNA3．1-SLP-2组,空质粒pcDNA3-1组,siRNA—SLP-2组,siRNA阴性对照组以及空白对照组。采用Q-PCR和Western-Blot分别检测PC-3细胞中SLP-2的mRNA和蛋白表达量;用细胞计数试剂盒（CCK-8）检测PC-3细胞增殖;采用细胞线粒体膜电位JC-1试剂盒检测PC-3细胞的早期凋亡情况。结果转染pcDNA3．1-SLP-2质粒和siRNA-SLP-2后PC-3细胞SLP．2基因mRNA表达水平分别为（324．884±16．508）和（0．195±0．016）,蛋白表达水平分别为（5．013±0．284）和（0．296±0．011）,与空白对照组相比差异均有统计学意义（P〈0．05）;转染pcDNA3-1-SLP-2基因48h、72h、96h后Pc。3细胞增殖吸光度值（OD值）分别为（0．714±0．007）、（1．103±0．018）、（1．348±0．018）,均显著高于空白对照组（P〈0．05）。采用siRNA沉默SLP．2基因48h、72h、96h后PC-3细胞增殖率分别为（0．571±0．004）、（0．875±0．010）、（1．044±0．008）,均显著低于空白对照组（P〈0．05）;细胞凋亡结果显示,转染pcDNA3．1-SLP．2和siRNA-SLP-2的PC-3细胞早期凋亡率分别为（2．433±0．577）和（9．197±0．602）,与空白对照组（4．993±0．710）相比差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论SLP-2可促进人前列腺癌PC-3细胞的增殖,并抑制细胞的早期凋亡。