艾叶醇提物对热敏通道TRPV1的影响

目的:探讨艾叶醇提物对热敏通道TRPV1的影响。方法:运用全细胞膜片钳技术,在转染人源TRPV1的HEK293细胞上,测量艾叶醇提物对细胞跨膜电流的影响。结果:全细胞膜片钳数据显示,艾叶醇提物可以激活TRPV1通道并产生较为明显的跨膜电流;与TRPV1激动剂辣椒素比较,艾叶诱发的电流密度、电流-电压的关系与其十分相似;在进行2个浓度测试中,艾叶生药3mg/ml与10mg/ml比较,10mg/ml的艾叶醇提物具有更强的激动剂效应,甚至超过了10μM辣椒素激动TRPV1所产生的电流。结论:艾叶醇提物中含有TRPV1激动剂,艾叶温经散寒、止痛功效的分子机制可能与其活化热敏通道TRPV1有关。     

羌活提取物对热敏通道TRPV1的影响

目的:探讨羌活水提物和醇提物对热敏通道TRPV1的影响。方法:在瞬转人源TRPV1的HEK293细胞上,运用膜片钳技术测量羌活提取物对细胞跨膜电流的影响。结果:羌活提取物可激活TRPV1通道产生明显的跨膜电流,该跨膜电流与TRPV1激动剂辣椒素诱发的电流在电流密度和电流-电压关系各方面均类似;羌活水提物在生药1 g/ml时稀释10倍左右,对跨膜电流的影响达到最大,并可以被TRPV1竞争性抑制剂辣椒素完全阻断。结论:羌活提取物中含TRPV1激动剂,该通道活化后产生的系列效应可能是羌活解表、止痛的重要分子机制。     

蛇床子止痒有效组分筛选及作用机制研究

目的:筛选蛇床子止痒的有效组分,并探讨其作用机制.方法:采用磷酸组胺致豚鼠瘙痒及低分子右旋糖酐致小鼠瘙痒模型,分别观察蛇床子醇提物、水提物及挥发油的止痒作用;通过其对组胺致离体回肠收缩的影响,探讨其作用机制.结果:蛇床子醇提物及挥发油可显著提高磷酸组胺致豚鼠致瘁闲,减少低分子右旋糖酐致小鼠瘙痒次数,缩短瘙痒时间,而水提物止痒作用不明显.醇提物及挥发油均能抑制磷酸组胺致离体回肠的收缩幅度.结论:蛇床子止痒的有效组分为其醇提物及挥发油,其止痒机制与拮抗组胺的释放相关.     

蛇床子提取物的镇静催眠作用

目的:比较蛇床子不同提取物的镇静催眠作用。方法:蛇床子用水、乙醇、石油醚分别提取制备,观察折合生药相当剂量水提物和等剂量挥发油、醇提物、总香豆素对小鼠自主活动和对戊巴比妥钠催眠剂量小鼠入睡潜伏期和睡眠时间的影响。结果:蛇床子醇提物、总香豆素能显著减少小鼠自主活动(P<0.05),延长小鼠睡眠时间(P<0.05,P<0.001),醇提物作用更为显著;蛇床子水提物、挥发油对小鼠自主活动、睡眠潜伏期和持续睡眠时间与空白对照组比较,无统计学意义。结论:初步确定蛇床子醇提物、总香豆素具有明显的镇静催眠作用,以醇提物作用较强。     

基于热敏通道TRPV1探讨中药甘遂止痛机理

目的探讨中药甘遂对热敏通道瞬时感受器电位香草素受体1(TRPV1)的影响。方法以电生理全细胞膜片钳技术检测不同浓度中药甘遂的75%乙醇提取物对瞬染人源TRPV1的HEK293细胞(hTRPV1/HEK293细胞)诱导产生的跨膜电流,运用TRPV1特异性拮抗剂辣椒平,观察其是否可以抑制中药甘遂诱导产生的跨膜电流,使用C57BL/6小鼠30只,观察在(0±2)℃冷板和(55±1)℃热板中小鼠冷痛、热痛行为潜伏期的变化。结果全细胞膜片钳实验显示在hTRPV1/HEK293细胞上甘遂75%乙醇提取物可以激活TRPV1通道产生明显的跨膜电流,该跨膜电流与TRPV1激动剂辣椒素诱发的电流在电流密度和电流-电压关系各方面均类似;量效实验显示10 mg·mL~(-1)甘遂醇提物能够激活hTRPV1/HEK293细胞诱导其产生明显的跨膜电流(P0.001)。10 mg·mL~(-1)甘遂醇提物产生的跨膜电流3 mg·mL~(-1),差异具有极显著统计学意义(P0.001)。TRPV1特异性拮抗剂辣椒平可以完全抑制10 mg·mL~(-1)甘遂醇提物诱导产生的跨膜电流;小鼠冷板和热板实验中,甘遂延长小鼠的冷痛和热痛行为潜伏期与剂量呈现一定的量效关系。与空白组小鼠对比,甘遂中、高剂量组和布洛芬阳性对照组小鼠冷痛行为潜伏期明显延长,差异具有统计学意义(P0.05,P0.001,P0.05)。甘遂中、高剂量组和布洛芬阳性对照组的热痛行为潜伏期明显延长(P0.05,P0.01,P0.05)。结论中药甘遂的75%乙醇提物中含有TRPV1的激动剂,甘遂所具备的止痛和抗炎功效可能是热敏通道TRPV1活化后产生的系列效应。     

蛇床子的镇静催眠作用、宿醉反应和耐受性

目的研究蛇床子镇静催眠作用的有效性、宿醉反应和耐受性。方法观察蛇床子生药、醇提物对小鼠自主活动和对戊巴比妥钠催眠剂量潜伏期和睡眠时间的影响;观察蛇床子醇提物对小鼠醒后自主活动的影响,及其重复给药对自主活动和催眠实验的影响。结果蛇床子生药、65%、95%醇提物组小鼠自主活动次数显著低于空白对照组,且睡眠时间均显著长于空白对照组;地西泮、65%醇提物组小鼠睡前站立次数显著少于空白对照组;65%、95%醇提物组小鼠醒后活动次数均显著高于空白对照组;蛇床子生药、65%、95%醇提物组小鼠于给药第1、3、5、15天站立次数均少于空白对照组。对自主活动抑制作用是逐渐加强的,而地西泮对自主活动均数的影响在给药后的前5d逐渐减少,第15天次数增加。蛇床子各给药组睡眠时间均数随用药时间的延长而增加,而地西泮则反之。结论蛇床子镇静催眠作用显著,且宿醉反应和耐受性等较地西泮小。     

芫花对热敏通道瞬时感受器电位香草素受体1的影响

目的:通过电生理全细胞膜片钳技术和动物行为学实验观察芫花对热敏通道瞬时变体电位香草素受体1(TRPV1)的影响,并探讨其机制。方法:以电生理全细胞膜片钳技术检测不同浓度中药芫花的75%乙醇提取物对瞬染人源TRPV1的HEK293细胞(h TRPV1/HEK293细胞)诱导产生的跨膜电流,运用TRPV1特异性拮抗剂辣椒平,观察其是否可以抑制中药芫花诱导产生的跨膜电流;行为学检测使用雄性C57BL/6小鼠30只,将其分为空白组6只,芫花高剂量组6只,芫花中剂量组6只和芫花低剂量组6只,布洛芬组6只。芫花治疗组以低、中、高(0. 195,0. 39,0. 78 g·kg~(-1)·d~(-1)) 3个剂量进行灌胃,1 h后,观察在(0±2)℃冷板和(55±1)℃热板中小鼠冷痛、热痛行为潜伏期的变化。结果:全细胞膜片钳实验显示在h TRPV1/HEK293细胞上芫花75%乙醇提取物可以激活TRPV1通道产生明显的跨膜电流,该跨膜电流与TRPV1激动剂辣椒素诱发的电流在电流密度和电流-电压关系各方面均类似;量效实验显示,与细胞外液对比,10 g·L~(-1)芫花醇提物能够激活h TRPV1/HEK293细胞诱导其产生明显的跨膜电流(P 0. 01)。10 g·L~(-1)芫花醇提物产生的跨膜电流 3 g·L~(-1)(P 0. 01)。TRPV1特异性拮抗剂辣椒平可以完全抑制10 g·L~(-1)芫花醇提物诱导产生的跨膜电流;小鼠冷热板实验中,芫花延长小鼠的冷痛和热痛行为潜伏期,与剂量呈现一定的量效关系。冷板实验中,与空白组小鼠比较,芫花中剂量组小鼠冷痛行为潜伏期延长(P 0. 01),与空白组比较,芫花高剂量组冷痛时间也显著延长(P 0. 01),布洛芬组小鼠冷痛行为潜伏期较空白组延长(P 0. 01)。在热板实验中,与空白组比较,芫花高剂量组热痛行为潜伏期显著延长(P 0. 01),布洛芬组的热痛行为潜伏期明显延长(P 0. 05)。结论:芫花的75%乙醇提物中含有TRPV1的激动剂,芫花所具备的温性、止痛和抗炎功效可能是热敏通道TRPV1活化后产生的系列效应。     

香薷醇提物对热敏通道瞬时受体电位香草酸亚型1的影响

目的:探讨中药香薷75％乙醇提取物对小鼠内脏痛行为的影响及在体外对瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)通道的影响.方法:在福尔马林诱导的急性内脏痛模型小鼠上进行行为学实验,观察香薷醇提物干预后小鼠疼痛行为变化;运用全细胞膜片钳技术检测不同浓度的香薷醇提取物对瞬染人源TRPV1的HEK293细胞(TRPVl/HEK29...     

蛇床子毒性效应谱及剂量-反应关系研究

目的:研究蛇床子醇提物急性毒性和长期毒性效应谱及剂量-反应关系表现特点。方法:每剂量组用10只小鼠观察14天,计算出半数致死量,同时观察其毒性反应;大鼠灌胃给予蛇床子醇提物9.00、4.50、2.25g原生药/kg,连续给药90天,恢复14天,观察大鼠在此期间的一般状况,及对血液细胞学、血液生化学、脏器系数的影响。结果:蛇床子醇提物毒性反应表现为自发活动减少、呼吸急促、闭目、步态不稳、震颤,半数致死量为17.45g原生药/kg,95%可信区间15.72～19.36g原生药/kg。长期毒性试验中,各组大鼠一般状况未见明显异常变化,血液学指标红细胞、红细胞分布宽度、血小板、白细胞、淋巴细胞、血小板分布宽度呈一过性变化,无明显的量效关系,其余指标未见明显差异。血液生化学指标显示,大剂量组在给药90天时总胆固醇值升高,停药后未恢复。尿素氮、总胆红素、总蛋白、总胆固醇、钠离子、肌酐、谷酰转移酶在给药期间呈一过性变化,无明显的量效关系。脏器系数结果显示,给药30、90天各剂量组肝脏系数升高,停药后未恢复。结论:蛇床子醇提物小鼠灌胃给药半数致死量17.45g原生药/kg,为临床剂量的116倍。连续给药90天对大鼠的一般状况、血液学指标、血液生化有一定影响,对各剂量组肝脏脏器系数有影响,提示蛇床子醇提物可能对肝脏产生毒作用,应加以关注。     

二仙汤水提物、醇提物对小鼠脾脏和卵巢细胞作用的比较研究

目的:比较二仙汤水提物、醇提物对小鼠脾脏和卵巢细胞的调节作用。方法:取小鼠脾脏和卵巢分别制备脾单个核细胞和卵巢颗粒细胞于体外培养,分别加入二仙汤水提物、醇提物,以香菇多糖水溶剂为阳性对照,空白组为阴性对照。采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞上清液中IL-1、E_2的浓度。荧光实时定量PCR检测脾单个核细胞上雌激素受体(ERα、ERβ)、卵巢颗粒细胞上IL-1受体(IL-1R)的mRNA表达水平。流式细胞术检测ERα、IL-1R的分子水平。结果:二仙汤水提物组、醇提物组均可提高细胞培养上清液中IL-1、E_2的含量(P<0.01或P<0.05),但两组之间相比无差异(P>0.05);水提物组、醇提物组均可上调脾单个核细胞上ERα的mRNA表达(P<0.01),且水提物组ERα的mRNA表达水平明显高于醇提物组(P<0.01);水提物组、醇提物组均可刺激卵巢颗粒细胞表面IL-1R分子的表达(P<0.05),两组之间相比无差异(P>0.05)。结论:二仙汤水提物、醇提物均可直接作用于小鼠脾脏和卵巢细胞,对免疫和内分泌功能均有较好的促进作用,水提物的作用效果可能优于醇提物。     

基于UPLC-Q-TOF-MS/MS结合网络药理学及分子对接研究益母草水提物治疗动脉粥样硬化的作用机制

[目的] 本研究利用超高压液相色谱串联四级杆飞行时间质谱（UPLC-Q-TOF-MS/MS）技术结合网络药理学及分子对接的方法,探究益母草水提物抗动脉粥样硬化的物质基础与分子机制。[方法] 首先依据UPLC-Q-TOFMS/MS表征与鉴定益母草水提物主要化学成分,通过中药系统药理学数据库与分析平台、SwissTargetPrediction数据库预测其作用靶点,并与在GeneCards数据库、OMIM数据库和DisGeNET数据库中获取的动脉粥样硬化相关靶点交集获得核心靶点。其次通过String数据库构建蛋白互作网络,导入Cytoscape3.7.1软件构建蛋白互作网络和“相关活性成分-潜在作用靶点”网络并进行拓扑结构分析。通过DAVID数据库对靶点基因进行GO功能富集分析和京都基因和基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。最后通过AutoDockTools将关键活性成分与核心靶点进行分子对接。[结果] 本研究获得益母草水提物治疗动脉粥样硬化的可能相关活性成分7个,潜在作用靶点259个。益母草水提物活性成分可能通过调控白细胞介素（IL）-6、肿瘤坏死因子（TNF）、IL-1β、血管内皮生长因子A（VEGFA）和c-myc等核心靶点及磷脂酰肌醇3激酶蛋白激酶B（PI3K/Akt）、TNF、低氧诱导因子-1（HIF-1）等信号通路达到抗动脉粥样硬化的作用。[结论] 本研究基于UPLC-Q-TOF-MS/MS技术,通过网络药理学方法发现益母草抗动脉粥样硬化可能是通过多靶点、多成分起作用,为进一步开展相关实验提供依据。     

基于药效团和分子对接探究诃子制草乌通过瞬时受体电位香草酸1介导的减毒机制

目的：本研究利用药效团、分子对接及实时反转录PCR（RT-PCR)方法探究诃子制草乌通过瞬时受体电位香草酸1（TRPV1）介导的减毒机制。方法：采用Discovery Studio 4.0软件构建基于TRPV1激动剂分子共同特征的TRPV1激活药效团,虚拟筛选出草乌中的潜在活性成分;对草乌成分及诃子制草乌中引入的诃子成分进行Autodock vina分子对接研究;根据结果选出代表性成分,采用实时反转录PCR验证是否可促进心肌细胞中TRPV1 mRNA表达。结果：药效团共筛选出草乌中包括毒性较大的双酯型生物碱乌头碱、新乌头碱及次乌头碱在内的13个成分,分子对接结果表明这13个成分及诃子制草乌引入的诃子成分均有潜力与TRPV1结合。RT-PCR实验中没食子酸和新乌头碱在浓度≥25 μmol/L时,均可明显促进大鼠H9c2心肌细胞中TRPV1 mRNA表达的增加,随着给药浓度的增大表达量增加,新乌头碱促进TRPV1 mRNA表达的作用更强。药效团、分子对接结果表明诃子和草乌中均含有多种具备TRPV1激活潜力的成分。结论：实验证明新乌头碱、没食子酸均可在一定程度上激活TRPV1通道,可作为TRPV1的激动剂。根据结果推测,诃子可能会通过拮抗草乌中的活性成分与TRPV1的结合,从而降低草乌通过TRPV1介导的毒性;也可能是诃子制草乌在引入没食子酸等诃子成分后,可在安全剂量范围内使TRPV1通道快速脱敏从而实现减毒。     

蛇床子有效组分皮肤毒理学研究

目的 考察蛇床子有效组分皮肤用药的安全性.方法 多次重复给药观察其对豚鼠完整及破损皮肤的皮肤刺激性;豚鼠多次接触受试药物观察其有无过敏反应.结果 蛇床子醇提物及挥发油对豚鼠完整皮肤未见明显红斑、水肿等刺激反应,对破损皮肤出现红肿等轻度刺激反应;豚鼠多次接触醇提物及挥发油均未见红斑、水肿等皮肤过敏反应.结论 蛇床子醇提物及挥发油外用无明显皮肤刺激性和致敏作用.     

维吾尔药罗勒对环氧化酶的影响

目的:探讨维吾尔药罗勒醇提物在体外对环氧化酶的影响,从而研究罗勒抗血栓的作用机制。方法:测定人脐静脉内皮细胞6-keto-PGF1α、小鼠腹腔巨噬细胞PGE2的含量。结果:罗勒对环氧化酶-1(COX-1)和环氧化酶-2(COX-2)都有不同程度的抑制作用。在剂量相同时,罗勒醇提物对COX-2的抑制率大于COX-1。结论:本实验从底物的角度证实了罗勒醇提物对COX-1和COX-2的作用,抗血栓部分机理可能是由于抑制环氧化酶而介导的。     

去头水蛭醇提物抗血栓作用的研究

目的 :研究去头水蛭醇提物的抗血栓作用及可能机理。方法 :采用胶原蛋白 肾上腺素诱导的小鼠体内血栓和大鼠动 静脉旁路血栓形成的方法 ,观察去头水蛭醇提物的抗血栓作用 ;采用荧光偏振技术观察去头水蛭醇提物对红细细胞膜脂和血小板膜脂流动性的影响。结果 :去头水蛭醇提物对胶原蛋白 肾上腺素诱导的小鼠体内血栓和大鼠动 静脉旁路血栓形成有显著抑制作用 ,并能提高红细胞膜和血小板膜流动性。结论 :去头水蛭醇提物有抗血栓作用 ,其机理可能与其提高红细胞膜脂和血小板膜脂流动性有关。去头水蛭体部存在抗血栓成分。     

淫羊藿醇提物对内皮细胞释放 NO 的影响

为了了解淫羊藿治疗阳瘘的作用机制,采用Geiess试剂检测淫羊藿醇提物及灌服淫羊藿醇提物小鼠清对内皮细胞释放NO的影响.结果显示:淫羊藿提取物直接加入内皮细胞培养液中不影响NO产生,120min,180min采集的含淫羊藿醇提物血清能促进NO的产生,效应高峰的120min.结果提示:促进内皮细胞释放NO可能是淫羊霍治疗阳瘘的作用机制之一.     

基于网络药理学与实验验证的甘薯保肝作用机制研究

目的：运用网络药理学和分子对接的方法预测甘薯保肝的潜在作用靶点,结合体外细胞实验进行验证,初步揭示甘薯保肝作用分子机制。方法：制备脂多糖（LPS）诱导的肝细胞LO2炎性损伤体外模型,考察甘薯醇提物对肝损伤细胞的保护作用。通过查阅文献资料,并利用中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）、SwissTargetPrediction、GeneCards、DisGeNET、OMIM等数据库,查找甘薯的活性成分、作用靶点及疾病靶点。基于STRING数据库,采用Cytoscape软件构建成分-靶点网络和蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络,筛选核心靶点。借助DAVID数据库进行基因本体（GO）生物学过程和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析,并用AutoDock软件对关键成分与核心靶点进行分子对接验证。进一步采用肝细胞炎性损伤模型,运用蛋白质免疫印迹法（Western blot）对相关调控靶点蛋白的表达进行检测和验证。结果：体外评价结果显示,甘薯醇提物能促进正常LO2细胞增殖,改善LO2肝损伤细胞存活率。筛选出甘薯潜在作用靶点154个,通过网络拓扑筛选获得10个核心靶点,分别是酪氨...     

生三七及其不同炮制品对血瘀模型大鼠的影响

目的:评价生三七及其不同炮制品对急性血瘀模型大鼠药效作用,比较三七炮制前后在破瘀功效上的差异。方法:给大鼠皮下注射大剂量的肾上腺素,再以冰水浸泡制备急性血瘀模型,灌胃给予生三七水提物、生三七醇提物、蒸三七水提物、蒸三七醇提物、油炸三七水提物、油炸三七醇提物。测定给药后血液流变学指标(全血黏度、血浆黏度)、凝血时间、出血时间及尾部微循环血流量等指标。结果:生三七水提和醇提物都能降低大鼠低切变率下全血黏度和血浆黏度、延长大鼠凝血时间;生三七水提和醇提物、蒸三七醇提物、油炸水提物能增加大鼠微循环血流量。结论:生三七在改善血黏度、抗凝具有较好作用,炮制后作用减弱。生三七可能具有较优的破瘀效果。     

金钮扣提取物的抗炎作用及有效部位探讨

目的:研究金钮扣水、醇提物的抗炎作用。根据试验结果进一步分离,寻找其中的有效部位。方法:提取金钮扣水、醇提物,将醇提物按极性大小依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取。用足趾肿胀法观察抗急性炎症作用,用棉球肉芽法观察抗慢性炎症作用。结果:金钮扣醇提物抗急性炎症和慢性炎症效果较好,优于金钮扣水提物;金钮扣醇提物的萃取物对急性炎症均有显著抑制作用,氯仿组和水层组能较好的抑制慢性炎症组织细胞增生和组织液渗出。     

牛膝醇提物对肾脏转移生长因子蛋白表达的影响

目的:探讨牛膝醇提物对自发性高血压大鼠(SHR)肾脏转移生长因子(TGF-β1)的影响.方法:将40只SHR随机分为5组:空白组、牛膝醇提物高、中、低剂量组、依那普力组,每组8只.8周后,摘取肾脏,检测大鼠肾脏转移生长因子的蛋白表达.结果:川牛膝醇提物随着剂量的升高,可明显降低肾组织细胞中TGF-β1蛋白的表达,并且川牛膝醇提物高剂量组的作用与依那普利组比较无显著差异.结论:川牛膝醇提物具有抑制转化生长因子生成的作用,通过减少肾组织的纤维化,可能降低TGF-β1对肾小球细胞的刺激,减少肾素的释放,减少血管紧张素Ⅱ的生成,从而使血管舒张,血压下降.