消岩汤对肺腺癌A549实体荷瘤小鼠肿瘤细胞凋亡干预机制的研究

目的分析消岩汤干预下Survivin siRNA对肺腺癌A549实体荷瘤小鼠肿瘤细胞凋亡的影响。方法以人肺腺癌A549实体移植瘤裸鼠模型为研究对象,将消岩汤含药血清及siRNA转染后的A549细胞分别进行瘤内注射,通过流式细胞术观察小鼠体内细胞凋亡情况;免疫细胞化学法检测Survivin蛋白表达。结果 siRNA转染组对Survivin蛋白表达的抑制率明显高于消岩汤组,但显著低于消岩汤+siRNA转染组。siRNA转染组和消岩汤组均可诱导细胞凋亡,且siRNA转染组的诱导作用强于消岩汤组,消岩汤+siRNA转染组可协同增强诱导细胞凋亡作用。结论消岩汤联合Survivin siRNA可协同增强诱导细胞凋亡作用。     

岩黄连总碱对人肺癌A549细胞增殖,凋亡及Caspase,Survivin表达的影响

目的:初步探讨岩黄连总碱对人肺腺癌A549细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用,及其可能的作用机制。方法:将肺癌A549细胞株在体外条件下加入不同质量浓度岩黄连总碱。用四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法检测不同浓度(0.1,0.05,0.01,0.005 g·L-1)岩黄连总碱分别作用24,48,72 h后,对人肺腺癌A549细胞的生长抑制情况。采用Hoechst染色法检测岩黄连总碱处理A549细胞48 h的生长情况。流式细胞术检测岩黄连总碱不同药物浓度诱导凋亡的情况。RT-PCR法检测岩黄连及顺铂对A549细胞中Caspase-3,Survivin mRNA的表达影响变化情况。结果:MTT结果提示岩黄连总碱对肺癌A549细胞增殖具有一定的抑制作用,且抑制作用呈现时间-剂量关系。MTT及Hoechst染色显示岩黄连总碱组较阴性组明显抑制A549细胞增殖(P0.05)。流式细胞仪检测结果显示岩黄连诱导A549细胞凋亡作用随着药物浓度的增加,凋亡率升高。RT-PCR结果提示岩黄连组较阴性组上调了Caspase-3 mRNA的表达,下调了Survivin mRNA的表达。结论:岩黄连总碱具有一定的抑制人肺腺癌A549细胞增殖和诱导凋亡作用,并呈时间-剂量关系。其机制可能与上调Caspase-3的表达和下调Survivin的表达有关。     

消岩汤药物血清对A549/DDP细胞凋亡的诱导作用

目的:探讨消岩汤在顺铂诱导A549细胞凋亡中的作用,从诱导细胞凋亡角度分析其可能的抗耐药作用机制。方法:采用Annexin V/PI双标记染色法,通过流式细胞术检测A549和A549/DDP细胞凋亡率。结果:在药物血清作用于A549/DDP 24 h后,消岩汤高剂量组细胞凋亡率为32.97%,消岩汤低剂量组为16.01%,3组细胞凋亡率对比,差别有统计学意义(P<0.05);消岩汤低剂量组与模型对照组对比,细胞凋亡率差别无统计学意义(P>0.05);而消岩汤高剂量组与模型对照组对比,凋亡率差别则有统计学意义(P<0.05)。结论:流式细胞仪分析结果显示,消岩汤对顺铂诱导的A549/DDP耐药细胞的凋亡具有显著的增强作用,细胞凋亡率呈现剂量依赖关系。     

消岩汤剂拆方配伍对肺腺癌A549细胞survivin和caspase-3表达的影响

目的 探讨消岩汤及其各拆方组分对人肺腺癌A549细胞株凋亡的影响及其机制.方法 将消岩汤按照功效进行拆方,分为清热解毒组、活血化瘀组、益气扶正组.以CCK-8法检测各拆方对A549细胞的最有效抑制浓度,采用Western blotting法测定Survivin、Caspase-3蛋白表达,RT-PCR法检测survivin与caspase-3基因表达.结果 消岩汤及其各拆方组分均有明显的抑制A549细胞生长作用,消岩汤及其各拆方组分具有诱导A549细胞凋亡的作用,其机制与下调survivin基因和蛋白表达有关,对caspase-3基因和蛋白表达影响不显著.结论 消岩汤及其各拆方组分体外均有明显的抑制A549细胞生长作用,消岩汤及其各拆方组分可通过下调survivin的表达诱导肿瘤细胞凋亡,清热解毒组方中药是其抗肿瘤作用主要组分.     

中药消岩汤剂与特罗凯联合抗肿瘤的体外实验研究

目的观察中药复方消岩汤剂和特罗凯（盐酸厄洛替尼）,两种药物单独使用以及联合应用后体外抗肿瘤作用,并观察这两种药物之间是否存在协同效应。方法通过MTT法检测消岩汤剂和特罗凯单独及联合应用对人肺腺癌A549细胞株细胞增殖的影响;通过流式细胞术检测细胞凋亡。结果单药高剂量消岩汤剂组对A549的抑制率较高;而单药特罗凯组及低剂量消岩汤剂特罗凯联合组未显示明显的抑瘤作用;高剂量消岩汤剂联合特罗凯组显示细胞坏死明显。经药物处理过血清作用于细胞结果显示：各剂量消岩汤剂与特罗凯联合组有一定的抑瘤作用,而各单药组均未显示出明显的抑制作用。结论中药消岩汤剂以及消岩汤剂联合特罗凯体外实验均具有一定的抗肿瘤作用;两药联合具有较好的协同抗肿瘤作用。     

Survivin靶向siRNA抑制结直肠癌细胞增殖作用的研究

目的分析Survivin靶向siRNA抑制结直肠癌细胞增殖的作用。方法将结直肠癌Lovo细胞株进行培养及转染,采用Western blot法、RT-PCR法对Survivin的表达进行检测,应用MTT法对siRNA抑制细胞增殖的作用进行检测。结果 Survivin靶向小干扰RNA抑制结直肠癌SW480细胞株mRNA的构成比为37.1%,抑制结直肠癌SW480细胞株蛋白表达的构成比为45.3%,12 h对结直肠癌SW480细胞的抑制率为23.8%,24 h对结直肠癌SW480细胞的抑制率为30.2%,36 h对结直肠癌SW480细胞的抑制率为35.2%,48 h对结直肠癌SW480细胞的抑制率为38.5%,72 h对结直肠癌SW480细胞的抑制率为39.6%,均显著高于阴性对照组(P均<0.05)。结论 Survivin靶向siRNA抑制结直肠癌细胞增殖的作用显著。     

消癥丸含药血清对胶质瘤C6细胞增殖与凋亡的影响

[目的]观察消癥丸含药血清对胶质瘤C6细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用及其对Bcl-2表达的影响。[方法]运用血清药理学方法,选择不同浓度的消癥丸含药血清与胶质瘤C6细胞共同孵育,用MTT法计算增殖抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡率;免疫组织化学法检测C6细胞中的Bcl-2的表达情况。[结果]MTT法结果显示大、中剂量组消癥丸含药血清可显著抑制胶质瘤C6细胞的增殖,且呈现含药血清浓度-时间依赖性的特点。流式细胞仪检测可见各组消癥丸含药血清作用下C6细胞凋亡率呈含药血清浓度依赖性特点,大、中剂量组凋亡率较高。免疫组化学检测Bcl-2表达显示消癥丸能显著降低其表达。[结论]消癥丸可通过抑制胶质瘤细胞的增殖,降低Bcl-2表达,从而诱导肿瘤细胞凋亡,发挥其临床抗肿瘤,抑制脑瘤的作用。     

枸杞多糖对人肺癌A549细胞凋亡及Survivin表达的影响

目的 探讨枸杞多糖(LBP)诱导人肺癌A549细胞的凋亡的作用及其作用机制.方法 在体外培养的肺癌A549细胞株中加入不同浓度的LBP,应用流式细胞仪FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,RT - PCR及Western blot法分析加药前后凋亡抑制基因Survivin mRNA和蛋白表达情况.结果 流式细胞仪FITC/PI双染法检测结果显示LBP可诱导人肺癌A549细胞凋亡,并且随着LBP浓度增加,凋亡率逐渐增加;LBP可使Survivin mRNA和蛋白的表达明显降低,并成一定的量效关系.结论 LBP可显著诱导人肺癌A549细胞凋亡,其作用机制可能与LBP抑制A549细胞凋亡抑制基因Survivin表达有关.     

消瘕丸含药血清对胶质瘤C6细胞增殖与凋亡的影响

[目的]观察消瘕丸含药血清对胶质瘤C6细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用及其对Bcl-2表迭的影响。[方法]运用血清药理学方法，选择不同浓度的消癓丸含药血清与胶质瘤C6细胞共同孵育，用MTT法计算增殖抑制率；流式细胞仪检测细胞凋亡率；免疫组织化学法检测C6细胞中的Bcl-2的表达情况。[结果]MTT法结果显示大、中剂量组消癓丸含药血清可显著抑制胶质瘤C6细胞的增殖，且呈现含药血清浓度-时间依赖性的特点。流式细胞仪检测可见各组消癓丸含药血清作用下C6细胞凋亡率呈含药血清浓度依赖性特点，大、中剂量组凋亡率较高。免疫组化学检测Bcl-2表达显示消癓丸能显著降低其表达。[结论]消癓丸可通过抑制胶质瘤细胞的增殖，降低Bcl-2表达，从而诱导肿瘤细胞凋亡，发挥其临床抗肿瘤，抑制脑瘤的作用。     

消岩汤通过WNT通路抑制肺腺癌A549细胞增殖、促进细胞凋亡的机制研究

[目的] 探讨扶正祛瘀解毒法经典用药消岩汤抑制人肺腺癌A549细胞增殖、促进细胞凋亡的可能机制。[方法] 体外培养A549细胞,乳酸脱氢酶（LDH）、CCK8、流式细胞术检测对照组、消岩汤组、消岩汤加WNT通路激动剂组、WNT通路抑制剂XAV939组、单独WNT通路激动剂组细胞毒性、存活率和凋亡率。通过聚合酶链式反应（RT-PCR）测定对照组、消岩汤组和WNT通路抑制剂XAV939组中WNT通路相关基因β-catenin、c-myc,凋亡相关基因Bcl-2、Caspase-3表达情况;通过荧光素酶报告基因检测反应WNT通路活性。[结果] 消岩汤可以抑制A549细胞的增殖,促进细胞凋亡,而消岩汤加WNT通路激动剂组可以减弱以上作用;同时消岩汤可以显著降低A549细胞中β-catenin、c-myc的表达水平,抑制WNT通路活性,并通过降低Bcl-2表达、增强Caspase-3表达来促进了肿瘤细胞凋亡。[结论] 扶正祛瘀解毒法消岩汤可以抑制A549细胞的增殖、促进凋亡,其作用机制可能是抑制WNT通路活性。     

消岩汤对A549/DDP细胞自噬及耐药蛋白的影响研究

[目的]通过消岩汤对耐顺铂人肺腺癌细胞A549/DDP多药耐药及自噬蛋白的影响,探究消岩汤对耐顺铂人肺腺癌A549/DDP的耐药逆转作用及探讨相关分子通路。[方法]建立稳定细胞耐药模型,连续灌胃不同浓度消岩汤10 d后,通过血清药理学的实验方法,提取药物血清,用含药血清作用于肺腺癌细胞耐药细胞A549/DDP,通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(QPT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Werstern Blot)检测A549/DDP耐药、自噬相关基因的表达及相关通路蛋白的变化。[结果]高剂量消岩汤,低剂量消岩汤和生理盐水作用于肺腺癌耐药细胞A549/DDP,检测A549/DDP细胞中耐药相关蛋白P-糖蛋白(P-gp)、肺抗药性相关蛋白(LRP)及自噬相关蛋白Beclin1,HMGB1m RNA和蛋白表达变化,发现高剂量组消岩汤处理细胞株后P-gp、LRP及自噬相关蛋白Beclin1,HMGB1 m RNA和蛋白均发生降低(P0.05),进一步发现消岩汤可影响AKT1-m TOR相关基因,消岩汤明显降低AKT1,m TOR蛋白的表达。[结论]消岩汤通过影响AKT1-m TOR分子通路进而影响耐药相关蛋白P-gp、LRP及自噬相关蛋白Beclin1,HMGB1基因的变化。     

消岩汤剂拆方配伍对A549肺腺癌细胞体外生长抑制作用研究

[目的]探讨消岩汤及各拆方组对人肺腺癌A549细胞的体外生长的作用机制,探究消岩汤剂中最有效的作用成分和浓度。[方法]消岩汤全方和根据功效拆分的清热解毒组、活血化瘀组、益气扶正组,以CCK-8检测A549肺腺癌细胞的细胞增殖活性。[结果]各组均有明显的抑制细胞活性作用,抑制强度依次为:全方组、清热解毒组、活血化瘀组、益气扶正组。[结论]消岩汤及其拆方组在体外实验中均能抑制A549肺腺癌细胞细胞生长,消岩汤全方组当浓度达到50 g/L时达到最大抑制率为85.60%。清热解毒组药物在抗肿瘤作用方面,与全方接近,提示清热解毒组中药为体外实验中全方抗肿瘤作用最有效组分。     

消岩汤逆转肺癌顺铂耐药的机制研究

目的探讨消岩汤逆转肺癌顺铂(DDP)耐药的可能机制。方法 MTT检测细胞增殖情况,划痕实验检测细胞侵袭能力;si RNA转染细胞获取稳定低表达基因的细胞株;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Werstern blotting检测m RNA和蛋白表达水平的变化。结果 MTT检测A549/DDP,在72、96 h,消岩汤能够明显抑制细胞增殖,而在48、72、96 h,DDP联合消岩汤能够明显抑制细胞增殖。划痕实验显示与A549/DDP/si RNA-NC比较,A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞株迁移距离明显缩短。MTT显示与A549/DDP/si RNA-NC比较,A549/DDP/si RNA-Beclin1细胞株增殖能力减低,Westernblotting显示与A549/DDP/siRNA-NC比较,A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞P-糖蛋白(P-gp)和肺耐药相关蛋白(LRP)蛋白表达降低,MTT检测A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞,在72、96 h,DDP和消岩汤能明显抑制细胞增殖;而在24、48、72、96 h,DDP联合消岩汤明显抑制细胞增殖。结果显示DDP联合消岩汤使A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞株中YES关联蛋白1(YAP1)、P-gp和LRP蛋白表达明显降低。结论消岩汤可能通过影响Beclin 1-YAP1分子通路进而改变肺癌细胞对DDP的敏感性。     

消岩汤药物血清对A549/DDP多药耐药逆转作用的研究

[目的]探讨消岩汤药物血清对接种S180昆明小鼠肿瘤的抑制作用,及对耐顺铂人肺腺癌细胞系A549/耐顺铂(DDP)的耐药逆转作用。[方法]通过建立小鼠肿瘤模型,观察消岩汤对小鼠S180移植肿瘤生长的影响;以人肺腺癌敏感细胞A549和耐药细胞A549/DDP为研究对象,采用细胞毒实验(MTT)方法,探讨消岩汤对肺癌耐药细胞的多药耐药逆转作用。[结果]消岩汤高、低剂量组的抑瘤率分别是48.36%和27.87%;消岩汤荷瘤动物含药血清高、低剂量组分别与DDP合用时,对耐药细胞A549/DDP的杀伤作用分别是DDP组的1.78倍和1.57倍。[结论]消岩汤可改善小鼠生活质量,拮抗恶病质,并能够抑制肿瘤生长;消岩汤含药血清对A549及A549/DDP均有生长抑制作用,且能增强DDP对肺癌敏感细胞和耐药细胞的杀伤作用,具有耐药逆转作用。     

基于VEGF/PI3K/AKT通路探讨消岩汤联合阿帕替尼抑制胃癌MGC-803细胞增殖的作用机制研究

[目的] 明确消岩汤通过血管内皮生长因子（VEGF）/磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/丝苏氨酸蛋白激酶（AKT）通路治疗胃癌的作用机制。[方法] 通过CCK-8检测消岩汤对MGC-803细胞增殖的影响;通过流式细胞术检测消岩汤对MGC-803细胞凋亡和周期的影响;通过蛋白免疫印迹（Westernblot）检测消岩汤、阿帕替尼及其联合用药作用于MGC-803细胞后VEGF/PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达。[结果] 消岩汤呈剂量依赖性抑制MGC-803细胞的增殖（P<0.05）,其半抑制浓度（IC₅₀）为63.56mg/mL;随着消岩汤浓度的增加,MGC-803细胞的总凋亡率逐渐升高（P<0.05）;随着消岩汤浓度的增加,MGC-803细胞的G0/G1期细胞所占百分比逐渐降低（P<0.05）,S期细胞所占百分比逐渐升高（P<0.05）,G2/M期细胞所占百分比变化不大（P>0.05）;与空白对照组比较,消岩汤组、阿帕替尼组及其联合用药组的p-PI3K、p-AKT、Bcl-2、血管内皮生长因子A（VEGFA）和血管内皮细胞生长因子受体2（VEGFR-2）蛋白的表达量显著下调（P<0.05）,Cleaved Caspase-9和Bax蛋白的表达量显著上调（P<0.05）,相较于单药组,联合用药组对相关蛋白的调控作用更强。[结论] 消岩汤能有效抑制人胃癌MGC-803细胞增殖,诱导凋亡以及S期阻滞,抗胃癌作用机制与其对VEGF/PI3K/AKT信号通路的调控相关。     

体外高频热疗联合中医辨证治疗气虚毒瘀型晚期非小细胞肺癌的临床研究

[目的]观察体外高频热疗联合消岩汤对气虚毒瘀型晚期非小细胞肺癌(ⅢB期、Ⅳ期)患者生活质量的影响。[方法]将40例气虚毒瘀型晚期非小细胞肺癌患者,随机分为联合治疗组(接受体外高频热疗联合口服消岩汤治疗)、中药治疗组(单纯接受口服消岩汤治疗),两组均连续治疗60 d。治疗前后评定中医证候、美国东部肿瘤协作组(ECOG)评分、癌症患者生存质量测定量表(EORTCQLQ-LC43)及癌症治疗功能性量表(FACT-L)评分。[结果]两组间治疗后比较,联合治疗组的中医症候评分提高水平较中药治疗组明显(P<0.05),联合治疗组在EORTCQLQ-LC43量表中的躯体领域、情感领域的改善程度上较中药治疗组改善明显(P<0.01),在疼痛改善情况上较中药治疗组明显(P<0.01)。而联合治疗组在FACT-L量表中的躯体状况、社会/家庭情况、功能情况、量表总分均较中药治疗组明显提高(P<0.01)。[结论]体外高频热疗联合中医药治疗能提高气虚毒瘀型晚期非小细胞肺癌患者中医症状及生存质量,在躯体、情感、疼痛症状的改善程度方面有明显优势。     

消岩汤对肺癌A549细胞及肺癌干细胞迁移及侵袭的影响

目的探讨消岩汤对非小细胞肺癌转移的作用机制。方法通过划痕实验,观察消岩汤对肺腺癌A549细胞的迁移能力的影响;通过侵袭实验,观察消岩汤对肺癌干细胞(SP细胞)侵袭能力的影响。结果划痕实验中消岩汤组肺腺癌A549细胞在24、48、72 h的迁移距离明显短于各时刻对照组细胞(P0.05);侵袭实验中消岩汤干预下的SP细胞穿出Transwell小室的细胞数明显少于对照组(P0.05)。结论消岩汤可有效抑制肺腺癌A549细胞的迁移及SP细胞的侵袭。     

消岩汤联合大株红景天注射液改善恶性肿瘤患者血液高凝状态的临床研究

[目的]观察消岩汤联合大株红景天注射液改善恶性肿瘤患者血液高凝状态的临床疗效。[方法]将80例合并存在血液高凝状态的恶性肿瘤患者,按照随机数字表法随机分为对照组(大株红景天注射液)40例,观察组(消岩汤联合大株红景天注射液)40例。两组均予大株红景天注射液治疗,观察组在此基础上加用消岩汤口服治疗。21 d为1个疗程,共观察2个疗程。分别观察各组治疗前后血浆中凝血酶原时间(PT)、D-二聚体(D-D2)、血小板计数(PLT)水平及中医症状积分、卡氏评分(KPS)变化。[结果]消岩汤联合大株红景天注射液可以降低患者血液中D-D2水平,降低血小板,有效改善患者血液高凝状态。观察组较对照组可以改善恶性肿瘤患者一般症状,提高患者生活质量。[结论]消岩汤联合大株红景天注射液可以显著改善恶性肿瘤患者血液高凝状态,并提高患者生活质量。