人巨细胞病毒单克隆抗体的研制检定和应用

采用人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＡＤ１６９株作为免疫原，制备出１３株鼠－鼠杂交瘤细胞系。对其中的６株进行了检定．免疫印迹试验结果表明：单克隆抗体（ＭｃＡｂ）７Ｂ４、７Ｄ７、７Ｅ１１、８Ｅ８和８Ｄ６相对应的ＨＣＭＶ多肽分子量分别为４６、１５０、３８、５１７２和６５ｋＤ．ＨＣＭＶ感染人胚肺二倍体细胞（２ＢＳ）后不同时间制成抗原片，与ＭｃＡｂ作间接免疫荧光试验。结果表明：ＭｃＡｂ８Ｂ８相应的病毒多肽为即刻早期抗原，其它５株ＭｃＡｂ相应的病毒多肽均为晚期抗原，６株ＭｃＡｂ等量混合后，标上辣根过氧化物酶，用于ＩｇＭ抗体捕获法ＥＬＩＳＡ（ＭａｃＥＬＩＳＡ）中，并与间接ＥＬＩＳＡ（ＩＥＬＩＳＡ）同时检测ＨＣＭＶ－ＩｇＭ．在未经选择的１００份脐带血中，两法均为阳性的３份，两法均为阴性的９４份；ＭａｃＥＬＩＳＡ阳性而ＩＥＬＩＳＡ阴性的２份血清的特异性试验证明，ＨＣＭＶ－ＩｇＭ确为阳性．ＩＥＬＩＳＡ阳性而ＭａｃＥＬＩＳＡ阴性的１份血清的特异性试验证明，它是由ＲＦ引起的假阳性。     

抗重组人肿瘤坏死因子－α单克隆抗体的研制及其初步应用

应用淋巴细胞杂交瘤技术获得１０株抗重组人肿瘤坏死因子－α（ｒＨｕＴＮＦ－α）ＭｃＡｂ。７株ＭｃＡｂ为ＩｇＧ１，２株为ＩｇＧ２ａ，１株为ＩｇＧ２ａ。１０株ＭｃＡｂ与淋巴毒素（ＬＴ或ｒＨｕＴＮＦ－β）、ｒＨｕＩＬ－６和载体菌菌体蛋白均无交叉反应。其中７株ＭｃＡｂ具有中和活性，７株ＭｃＡｂ能识到天然的ＴＮＦ－α。Ｇ１１和Ｅ６ＭｃＡｂ应用ＡＢＣ法免疫组化染色肝病患者组织细胞片得到明确的阳性结果。用２株识别不同表位的ＭｃＡｂ建立了一步夹心ＥＬＩＳＡ法，检测ＴＮＦ－α的敏感性可达到１００ｐｇ／ｍｌ左右。     

小鼠IgG类单克隆抗体三种纯化方法的比较

分别采用辛酸一硫酸铵（ＣＡ－ＡＳ）法、硫酸铵沉淀法（ＡＳ）和ＤＥＡＥ离子交换层析法３种方法，对抗鸡Ｉｇ轻链的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）３Ｇ６进行了纯化效果的比较。结果表明，ＣＡ－ＡＳ法纯度为８３．１％，ＭｃＡｂ回收率为４６．５％；对ＭｃＡｂ活性无影响，制备的酶结合物效价达１．２８×１０－４，是一种可用于一般实验室纯化小鼠ＩｇＧ类ＭｃＡｂ的简便而有效的方法。ＡＳ法纯度最低为６０％，回收率为６３．６％，活性降低５０％。ＤＥＡＥ法纯度最高为１００％，但回收率只有１０％，活性无丧失，可用作电泳纯级样品的制备。     

MCAb、PcAb不同标记ELISA技术对HBeAg／抗－HBe检测的评估

用单克隆抗体（ＭｃＡｂ）和多克隆抗体（ＰｃＡｂ）进行辣根过氧化物酶标记或生物素标记作酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ），检测乙型肝炎病毒ＨＢｅＡｇ／抗－ＨＢｅ标志物。结果显示，ＭｃＡｂ的灵敏性高于ＰｃＡｂ，且标记用的抗体量较少，一孔一期法同时测ＨＢｅＡｇ／抗－ＨＢｅ只能使用ＭｃＡｂ。利用生物素与亲和素系统与ＭｃＡｂ建立的Ｍｃ－ＡＢＣ－ＥＬＩＳＡ技术，其灵敏性与放射免疫法（ＲＩＡ）相同，特异性好，稳定性优于ＲＩＡ。生物素标记抗体至少１年保持效价不变，是一种新的较理想的检测ｅ系统的方法之一。     

分泌抗金黄色葡萄球菌C1型肠毒素杂交瘤细胞系的建立及初步应用

应用常规方法建立了３株稳定分泌抗金黄色葡萄球菌Ｃ１型肠毒素（ＳＥＣ１）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的小鼠杂交瘤细胞系Ｂ３、Ｃ４和Ｇ８。其中Ｂ３和Ｃ４均为ＩｇＧ１（ｋ），Ｇ８为ＩｇＧ２ａ（ｋ）。Ｂ３和Ｇ８与ＳＥＡ，ＳＥＢ及ＳＥＤ均无交叉反应；Ｃ４虽与ＳＥＡ和ＳＥＤ无交叉反应，但与ＳＥＢ有交叉反应。间接ＥＬＩＳＡ测定小鼠腹水效价为１０＾－５～１０＾－８。应用识别不同表位的ＭｃＡｂ建立了双ＭｃＡｂ夹心ＥＬＩＳ     

阴离子交换FPLC制备级纯化单克隆抗体

作者采用ＤＥＡＥ－４０ＨＲ阴离子交换柱。在快速蛋白液相色谱系统（ＦＰＬＣ）建立了ＩｇＧ类单克隆抗体制备级纯化方法。该法是将ＭｃＡｂ腹水经５０％饱和硫酸铵盐析粗分离后，再用阴离子交换色谱纯化，一次上样量相当于８０～１００ｍｌ腹水。可得纯化ＭｃＡｂ５００～６００ｍｇ，得率为６～７ｍｇ／ｍｌ腹水，回收率为５７～６７％．一次纯化周期仅需４５ｍｉｎ。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测ＭｃＡｂ纯度为９５％，ＡＢＣ染色法测定ＭｃＡｂ活性为１：２００００（３．１３×１０－１０ｍｏｌ／Ｌ）．     

分泌抗金黄色葡萄球菌C1型肠毒素杂交瘤细胞系的建立及初步应用

应用常规方法建立了３株稳定分泌抗金黄色葡萄球菌Ｃ１型肠毒素（ＳＥＣ１）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的小鼠杂交瘤细胞系Ｂ３、Ｃ４和Ｇ８。其中Ｂ３和Ｃ４均为ＩｇＧ１（ｋ），Ｇ８为ＩｇＧ２ａ（ｋ）。Ｂ３和Ｇ８与ＳＥＡ、ＳＥＢ及ＳＥＤ均无交叉反应；Ｃ４虽与ＳＥＡ和ＳＥＤ无交叉反应，但与ＳＥＢ有交叉反应。间接ＥＬＩＳＡ测定小鼠腹水效价为１０－５～１０－８。应用识别不同表位的ＭｃＡｂ建立了双ＭｃＡｂ夹心ＥＬＩＳＡ法检测ＳＥＣ１，敏感性可达１ｎｇ／ｍｌ。     

抗重组人肿瘤坏死因子—α单克隆抗体的研制及其初步应用

应用淋巴细胞杂交瘤技术获得１０株抗重组人肿瘤坏死因子－α（ｒＨｕＴＮＦ－α）ＭｃＡｂ。７株ＭｃＡｂ为ＩｇＧ１，２株为ＩｇＧ２ａ，１株为ＩｇＧ２ａ。１株ＭｃＡｂ与淋巴毒素（ＬＴ或ｒＨｕＴＮＦ－β）、ｒＨｕＩＬ－６和载体菌菌体蛋白均无交叉反应。其中７株ＭｃＡｂ具有中和活性，７株ＭｃＡｂ能识别天然的ＴＮＦ－α。Ｇ１１和Ｅ６ＭｃＡｂ应用ＡＢＣ法免疫组化染色肝病患者组织细胞片得到明确的阳性结果。用２株识别不     

人肝癌细胞GHC－3表面抗原性质的研究

以人肝庙细胞株ＧＨＣ－３细胞为抗原，免疫制备获得抗人肝癌细胞膜单克隆抗体ＨＬＭ＿３（ＨＬＭ＿３－ＭｃＡｂ）．应用ＨＬＭ＿３－ＭｃＡｂ研究分析肝瘤细胞表面抗原性质及其对ＧＨＣ－３细胞的生物效应，结果表明：ＨＬＭ＿３－ＭｃＡｂ可抑制已铺展的ＧＨＣ－３细胞生长；辣根过氧化物酶结合法探测受ＭｃＡｂ作用的细胞ＣｏｎＡ受体和ｒａｓ瘤基因产物ｐ２１．反应均明显减弱；交叉－阻断测试抗原及ＣｏｎＡ受体发现，无论是细胞先与ＭｃＡｂ结合后再与ＣｏｎＡ反应，抑或先与ＣｏｎＡ反应后再与ＭｃＡｂ结合，都显示ＧＨＣ－３细胞的膜抗原与腹表面的ＣｏｎＡ受体有密切关系。进一步作糖化学分析，从高效薄层色谱（ＨＰＴＬＣ）区带和扫描初步显示为不完全分化的中性糖脂。     

凝胶色谱法半制备级纯化单克隆抗体

作者采用ＳｅＰｌｌａｃｙｌＳ－２００凝胶色谱柱，在快速蛋白液相色谱系统（ＦＰＬＣ）建立了肝癌相关抗原单克隆抗体半制各级纯化方法。该法是将ＭｃＡｂ腹水经４０％饱和硫酸铵盐析粗分离后，再用凝胶色谱纯化，一次上样量相当于５～１０ｍｌ腹水，可得纯化ＭｃＡｂ３０～６０ｍｇ，得率为６～６．５ｍｇ／ｍｌ腹水，回收率为６３％，一次色谱纯化周期２ｈ，整个分离纬化可在３ｈ内完成。经ＳＤＳ—ＰＡＧＥ和ＤＥＡＥ离子交换色谱法检测ＭｃＡｂ纯度大于８０％，ＡＢＣ染色法测定ＭｃＡｂ活性为，１：４００００（１．５６×１０－１０ｍｏｌ／Ｌ），是一般实验室纯化ＩｇＧ类ＭｃＡｂ的实用方法。     

大鼠抗—HBs的单克隆抗独特型抗体杂交瘤细胞系的建立

用纯化的小鼠单克隆抗—HBs和纯化的大鼠多克隆抗—HBs免疫LOU/C大鼠,取免疫大鼠脾细胞与IR983F骨髓瘤细胞融合,获得两株(TD_1、TD_2)持续分泌抗—HBs的单克隆抗独特型抗体(抗—Id,Ab_2)杂交瘤细胞系。对TD_2进行了较全面的鉴定,TD_2的Ig类型为IgG,亚类为IgG_(2?),核型分析结果染色体数为65条。通过ELISA竞争抑制和中和抑制试验表明,TD_2所分泌的Ab_2既能被不同来源的抗—HBs所中和。又能被HBsAg.所竞争,且都呈现剂量依赖关系。将纯化的TD_2IgG免疫同系大鼠,诱导出了具有抗—HBs活性的抗—抗—独特型抗体(Ab_3)。上述结果证实,TD_2所分泌的单克隆抗体(McAb)是带有HBsAg表位内影像,具有HBsAg免疫源性的抗—HBs的单克隆抗—Id。     

Protective anti-tumour immune responses by murine dendritic cells pulsed with recombinant Tat-carcinoembryonic antigen derived from Escherichia coli

Carcinoembryonic antigen (CEA) is over-expressed on various human cancer cells and has been the target of immunotherapies using dendritic cells (DCs) pulsed with CEA-specific RNA or peptides, or transduced by CEA-expressing adenovirus or vaccinia virus. Because activated DCs do not phagocytose soluble protein antigens efficiently and pure immature DCs are not obtained easily ex vivo, an efficacious whole CEA protein-loaded DC vaccine has not been reported. To improve the antigen delivery into DCs, we utilized CEA conjugated to a protein-transduction domain, human immunodeficiency virus transactivating Tat. Furthermore, we purified the truncated non-glycosylated CEA from Escherichia coli to overcome the safety concerns and immunosuppressive functions associated with the native CEA protein. Using confocal microscopy and fluorescence activating cell sorter analysis, we demonstrated that the Tat-CEA protein entered the cytoplasm of DCs efficiently within 10 min of co-culture, compared with the negligible amount of CEA into DCs 30 min later. CEA-specific T cell proliferation and cytotoxic T cell responses were enhanced significantly in mice immunized with Tat-CEA-pulsed DCs [DC (Tat-CEA)] compared with those immunized with CEA-pulsed DCs [DC (CEA)]. T helper type 1 responses were more prominent in the DC (Tat-CEA) immunized mice whose splenocytes secreted more interferon-γ and less interleukin-4 than those from DC (CEA) immunized mice. In vivo, the DC (Tat-CEA) vaccine delayed tumour growth significantly and prolonged survival of tumour-bearing mice. These results suggest that protective epitopes are well preserved on bacteria-derived recombinant Tat-CEA. This strategy may provide a basic platform for DC-based anti-CEA vaccines that could be utilized in combination with advanced immune-enhancing therapeutics.     

用人抗HBs在体内诱导的远期免疫应答

作者对三年前曾经过高价人抗ＨＢｓ的１１名健康志愿者复查血清内的ＨＢｓＡｇ，抗独特型抗体和抗－抗－独特型抗体水平，发现ＨＢｓＡｇ皆为阴性，Ａｂ３水平高于Ａｂ２，说明在这三年期间，无人感染乙肝病毒。     

Production of specific antibody and T helper 1-dominant cytokine elicited by dendritic cells genetically modified with an adenovirus vector

In this study we examined how dendritic cells (DCs) transduced with an adenovirus vector encoding a model tumor antigen (beta-galactosidase; beta-gal) would influence the humoral immune response to this antigen. Mice immunized with LacZ transduced DCs by an adenovirus vector could produce more anti-beta-gal antibody, especially of IgG2a subclass, than mice immunized with DCs alone, although the amount of serum IgG antibody did not increase. Compared with mice immunized with DCs alone, splenocytes of mice immunized with LacZ transduced DCs could produce more interferon-gamma (IFN-gamma) against the beta-gal derived, H-2Ld-restricted nonapeptide (TPHPARIGL) in a dose-dependent manner. These data suggest that DCs transduced with an adenovirus vector encoding the model tumor antigen could induce the T helper 1 (Th1) dominant response against the model tumor antigen.     

抗人肺癌单克隆抗体(3D3)的研制及其特性鉴定

本文用人肺腺癌组织免疫的BALB/c小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤Sp2/0细胞融合,获得1株单克隆抗体(McAb 3D3)。Ig类测定为IgG_1型。杂交瘤培养上清液和腹水的效价分别为1∶10~3～10~4和1∶10~6。采用间接免疫荧光法(IFA)观察到McAb3D3主要与肺腺癌细胞株A549和L342反应,与其它组织肿瘤细胞株没有反应。ABC免疫酶染色试验显示McAb3D3主要与肺腺癌组织反应,与正常肺组织没有反应。     

选择性环氧合酶-2抑制剂对结肠癌细胞的生长抑制作用及机制探讨

目的：研究NS-398（一种选择性环氧合酶-2抑制剂）对结肠癌HT-29细胞的生长抑制作用并探讨其机制。 方法： 通过MTT法检测细胞的增殖情况，通过流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期，通过RT-PCR检测bcl-2 mRNA和bax mRNA表达，通过共聚焦激光扫描显微镜观察细胞骨架成分F-actin的变化。 结果： NS-398对结肠癌HT-29细胞生长的抑制具有时间和剂量依赖性。流式细胞术结果显示NS-398可剂量依赖地诱导HT-29细胞凋亡，使其停滞于G0/G1期。经不同浓度的NS-398处理72 h后，bcl-2 mRNA 在HT-29细胞的表达降低，bcl-2／bax比值降低。细胞骨架成分F-actin主要分布在HT-29细胞核周围，呈环状结构，NS-398作用后细胞核周围的环状结构消失。 结论： NS-398可显著抑制结肠癌细胞的体外生长并诱导其凋亡，这与下调bcl-2／bax比值以及细胞骨架的破坏有关。     

癌胚抗原单克隆抗体放射免疫分析和临床初步应用

应用杂交瘤技术,获得了8种CEA单克隆抗体(McAb),这8中McAb经~(125)I标记NCA,NFA,NCA(J)抑制试验,证明是针对CEA抗原决定簇的,取其中的三种 McAb混合后,其亲和常数为2×10~(-8)M,应用此混合McAb检测239例人次血清标本,85例正常人的CEA 平均值为3.6±9.1ng/ml,其中96％少于30mg/ml,而 5％位于30～50ng/ml。在 128 例肿瘤患者中,81例结直肠癌,阳性检出率为44％;22 例胃癌为55％;21例肺癌为57％;4例肝癌为25％。在91 例消化道肿瘤病理检测中阳性率达79％,正常胃对照18例皆为阴性。     

鼠抗丙型肝炎病毒ns－5区单克隆抗体的研究

用ＨＣＶ非结构区ｎｓ－５合成多肽抗原交联后免疫小鼠，成功地建立了３株抗ｎｓ－５单克隆抗体（ＭｃＡｂ），经检测这３株ＭｃＡｂ属于同一位点，与其它区域无明显交叉反应，具有高度特异性。ＭｃＡｂ的研制为检测ｎｓ－５抗原奠定了一定基础。     

人CD137单抗诱导不同状态T细胞增殖和凋亡的研究

为了研究一种新的T细胞共刺激分子—CD137对不同状态T细胞增殖和凋亡的双重调节作用。采用3 H TdR掺入法测定T细胞增殖 ,用流式细胞仪测定细胞凋亡。结果显示 :(1)CD137单抗可与T细胞表面的CD137抗原结合 ,明显增强PHA刺激T细胞增殖 ,使T细胞增殖指数较PHA单独作用高 2～ 3倍 ,但CD137单抗单独不能刺激T细胞增殖 ;(2 )对于慢性活化的T细胞 ,CD137单抗可协同PHA诱导T细胞凋亡 ,使T细胞凋亡率从PHA单独作用的 19 2 0 %增加到 36 31% ,CD137单抗单独并不能诱导慢性活化T细胞凋亡。CD137单抗一方面可协同PHA刺激静止状态T细胞的增殖 ,另一方面可协同PHA诱导慢性活化T细胞凋亡 ,对T细胞起双重调节作用。     

卡洛芬单克隆抗体的制备

目的:制备卡洛芬单克隆抗体,为研制卡洛芬的免疫学快速检测奠定基础。方法:通过活性酯法制备了以牛血清白蛋白(BSA)为载体的免疫抗原卡洛芬-BSA(Carprofen-BSA)和以卵清白蛋白(OVA)为载体的检测抗原卡洛芬-OVA(Carprofen-OVA)。通过免疫BALB/ c 小鼠、杂交瘤技术获得稳定分泌卡洛芬单抗的细胞株51C3,并通过变异系数及添加回收率的测定初步建立了卡洛芬的ELISA 检测方法。结果:将该细胞株注射BALB/ c 小鼠制备腹水单抗。腹水纯化后效价为1 .3.2*105 ,属于IgG1 型。卡洛芬单抗的灵敏度为0.32 ng/ ml,IC50 为0.882 ng/ ml。单抗与布洛芬、酮洛芬、萘普生、非诺洛芬、吲哚洛芬、芬布芬的交叉反应率均小于0.04%。且猪肉样品中卡洛芬的添加回收率在81.4% ~ 104.4% 之间,变异系数在16.3% ~25.8%之间。结论:本研究成功制备了卡洛芬单克隆抗体,该单抗可以成功应用于卡洛芬的ELISA 快速检测,为研制卡洛芬的胶体金快速检测奠定基础。