紫杉醇与顺铂联合化疗对宫颈鳞癌细胞株HCE1作用的实验研究

目的 观察紫杉醇加顺铂联合化疗在宫颈鳞癌细胞株HCE1中的协同效应,指导进一步临床应用.方法 (1)培养宫颈鳞癌细胞株HCE1,观察活细胞生长情况并摄片.(2)实验分组及检测:①终浓度为20 μmol/L、40 μmol/L、80 μmol/L的紫杉醇培养HCE1细胞;②终浓度为20 μg/ml、40 μg/ml、80 μg/ml顺铂培养HCE1细胞;③紫杉醇联合顺铂培养HCE1细胞,通过MTT比色法检测培养24 h、48 h、72 h后细胞增殖活力,并计算细胞生长抑制率;流式细胞仪分别检测24 h、48 h、72 h三个不同时间点的细胞凋亡发生率,并分析细胞周期改变.结果 (1)紫杉醇处理后凋亡细胞明显增多,细胞缩小变圆,细胞膜出泡等.(2)经终浓度分别为20 μmol/L、40 μmol/L、80 μmol/L紫杉醇处理HCE1细胞24 h时,细胞抑制率分别为(9.5±0.66)%、(17.1±1.51)%、(33.3±1.77)%,48 h时,细胞抑制率分别为(28.0±2.27)%、(45.2±3.15)%、(66.0±2.95)%,72 h时,细胞抑制率分别为(39.4±2.81)%、(66.2±7.02)%、(81.5±1.78)%;经终浓度分别为20 μg/ml、40 μg/ml、80 μg/ml顺铂处理HCE1细胞24 h时,细胞抑制率分别为(3.6±0.56)%、(6.5±0.98)%、(14.1±2.52)%,48 h时,细胞抑制率分别为(6.5±0.46)%、(9.9±1.35)%、(20.0±3.05)%,72 h时,细胞抑制率分别为(14.1±3.05)%、(42.1±3.90)%、(59.4±4.26)%;联合处理组以48 h 20 μmol/L紫杉醇联合20 μg/ml顺铂对HCE1细胞的增殖抑制作用为例,细胞增殖抑制率为(30.2±3.34)%,综上可见紫杉醇和顺铂以时间和剂量依赖性特点抑制宫颈癌细胞的增殖,紫杉醇联合顺铂对人宫颈癌HCE1细胞的增殖抑制具有协同作用.(3)流式细胞仪细胞周期分析表明,紫杉醇处理组G1期细胞比例有所增加,S期细胞比例明显降低,顺铂处理组G1期细胞比例明显降低,反之S期细胞比例明显升高,紫杉醇联合顺铂处理组G1期细胞比例和S期细胞比例介于紫杉醇处理组和顺铂处理组之间.以20 μmol/L紫杉醇作用HCE1细胞48 h为例,G1期细胞比例和S期细胞比例分别为(86.0±3.01)%、(9.1±0.66)%,40 μg/ml顺铂作用HCE1细胞48 h G1期细胞比例和S期细胞比例分别为(2.1±0.26)%、(92.2±6.24)%,20 μmol/L紫杉醇联合40 μg/ml顺铂作用HCE1细胞48 h G1期细胞比例和S期细胞比例分别为(13.2±0.78)%、(80.5±2.46)%.(4)细胞凋亡分析表明,紫杉醇处理组细胞凋亡率较对照组升高,呈时间和剂量依赖性特点;顺铂处理组细胞凋亡率较对照组也升高,呈时间和剂量依赖性特点;紫杉醇联合顺铂处理组细胞凋亡率较单药处理组高.结论 紫杉醇与顺铂联合对宫颈癌细胞的抑制作用明显增强,提示紫杉醇可与顺铂对宫颈癌细胞增殖的抑制产生协同作用.     

盐酸小檗碱对人乳腺癌MCF-7细胞增殖和迁移的影响

目的探讨盐酸小檗碱对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及迁移能力的影响。方法对数生长期人乳腺癌MCF-7细胞株分为对照组(普通培养液)、紫杉醇组(培养液+100mg/L紫杉醇)、观察组(培养液+盐酸小檗碱),采用MTT法检测盐酸小檗碱对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响,依据细胞生长抑制率计算盐酸小檗碱对人乳腺癌MCF-7细胞的半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC_(50))值,参照IC_(50)值进行后续实验;采用划痕实验检测3组人乳腺癌MCF-7细胞迁移率;采用实时荧光定量PCR法检测3组细胞色素P450(cytochrome P450,CYP)1A1和CYP1B1 mRNA表达水平。结果盐酸小檗碱对人乳腺癌MCF-7细胞具有明显的增殖抑制作用,其IC_(50)值为(106±17)μmol/L;人乳腺癌MCF-7细胞迁移率在紫杉醇组[(45.50±4.30)%]和观察组[(37.50±3.43)%]均低于对照组[(84.60±6.88)%],且观察组低于紫杉醇组(P0.05);CYP1A1 mRNA表达量在紫杉醇组(247.69±59.67)和观察组(253.70±60.03)均低于对照组(512.31±76.53),且紫杉醇组低于观察组(P0.05);CYP1B1 mRNA表达量在紫杉醇组(139.09±18.82)和观察组(141.53±19.25)均低于对照组(224.63±33.89)(P0.05),观察组与紫杉醇组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论盐酸小檗碱具有抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖和迁移的作用,其机制可能与抑制CYP1A1、CYP1B1基因表达有关。     

miR-203过表达对结肠癌HT-29细胞紫杉醇化疗敏感性的影响及可能机制

目的采用脂质体转染法制备miR-203过表达结肠癌HT-29细胞,探讨miR-203过表达对结肠癌HT-29细胞紫杉醇化疗敏感性的影响及可能机制。方法取对数生长期结肠成纤维细胞CCD-18Co和结肠癌HT-29细胞,采用实时荧光定量PCR法检测miR-203相对表达量。取对数生长期结肠癌HT-29细胞,分为过表达组(转染miR-203-pcDNA 3.1质粒)、空载组(转染NC-pcDNA3.1质粒)和对照组(不作任何干预),采用实时荧光定量PCR法检测3组转染48h时miR-203相对表达量。取转染48h时过表达组、空载组、对照组细胞,用1、5、10、50、100μmol/L紫杉醇处理细胞48h,采用MTT法测定细胞增殖抑制率,并计算3组紫杉醇对细胞的半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC₅₀)。转染48h,取对照组细胞分为对照1组和紫杉醇组,取过表达组细胞分为过表达1组和过表达+紫杉醇组,紫杉醇组和过表达+紫杉醇组应用对照组IC₅₀值(28.20μmol/L)浓度的紫杉醇处理,对照1组和过表达1组不进行处理,48h后采用流式细胞术检测4组细胞凋亡,采用Western blot法检测4组细胞磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol-3 kinase,PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、磷酸化Akt、caspase-3蛋白相对表达量。结果结肠癌HT-29细胞miR-203相对表达量(0.38±0.05)低于CCD-18Co细胞(1.01±0.09)(P<0.05)。转染48h,过表达组miR-203相对表达量(1.87±0.11)高于空载组(0.39±0.04)和对照组(0.40±0.05)(P<0.05),空载组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。1、5、10、50、100μmol/L紫杉醇处理48h,过表达组细胞增殖抑制率高于空载组和对照组(P<0.05),IC₅₀值低于空载组和对照组(P<0.05),空载组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。紫杉醇处理48h,过表达1组、紫杉醇组、过表达+紫杉醇组细胞凋亡率[(18.25±1.70)%、(19.11±1.83)%、(57.59±4.31)%]高于对照1组[(8.10±1.14)%](P<0.05),过表达+紫杉醇组高于过表达1组和紫杉醇组(P<0.05),过表达1组与紫杉醇组比较差异无统计学意义(P>0.05)。紫杉醇处理48h,过表达1组、紫杉醇组、过表达+紫杉醇组PI3K(0.81±0.05、0.83±0.05、0.32±0.04)、磷酸化Akt(0.57±0.04、0.55±0.04、0.18±0.03)、caspase-3(0.67±0.13、0.65±0.10、0.19±0.10)蛋白相对表达量低于对照1组(1.12±0.09、0.80±0.06、1.25±0.12)(P<0.05),过表达+紫杉醇组低于过表达1组和紫杉醇组(P<0.05),过表达1组与紫杉醇组比较差异均无统计学意义(P>0.05);4组Akt蛋白相对表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论结肠癌HT-29细胞miR-203呈低表达,过表达miR-203可提高结肠癌HT-29细胞对紫杉醇的敏感性,促进HT-29细胞凋亡,其机制可能与抑制PI3K、caspase-3激活及Akt磷酸化有关。     

血尿酸在不同类型冠心病发生中的作用机制

目的 探讨血尿酸在不同类型冠心病发生中的作用机制.方法 88例住院患者分为对照组、稳定型心绞痛(SA)组和急性冠状动脉综合征(ACS)组,分别测定其血尿酸、血小板α-颗粒膜蛋白(GMP-140)、血管性假性血友病因子(vWF)、纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)、血栓素B_2(TXB_2)、C-反应蛋白(CRP).结果 (1)①UA、CRP:ACS组[(392.10±68.57)μmol/L、(42.2±39.4)mg/L]和SA组[(370.50±58.80)μmoL/L、(18.9±17.1)mg/L]均高于对照组[(286.00±65.31)μmol/L、(2.5±0.7)mg/L,P均＜0.05];UA在ACS组、SA组差异无统计学意义(P＞0.05),ACS组CRP高于SA组(P＜0.05);②vWF、TXB_2:ACS组[(1.65±0.48)%、(19.73±18.66)ng/L]和SA组[(1.35±0.49)%、(11.18±10.71)ng/L]均高于对照组[(1.07±0.26)%、(6.46±5.41)ng/L,P均＜0.05],ACS组高于SA组(P均＜0.05);③GMP-140、PAI-1:ACS组[(13.04±0.99)μg/,L、(65.65±14.76)μg/L]和SA组[(12.55±0.74)μg/L、(62.69±12.24)μg/L]均高于对照组[(12.32±0.29)μg/L、(50.78±13.88)μg/L,P均＜0.05],ACS组与SA组间差异无统计学意义(P均＞0.05).④ACS组血尿酸升高者与血尿酸正常者CRP[(71.3±18.9)、(20.70±17.9)mg/L]、vWF[(1.08±0.52)%、(0.84±0.54)%]、GMP-140[(13.57±1.11)、(13.23±1.07)μg/L]、TXB_2[(57.26±47.84)、(26.70±23.83)ng/L]、PAI-1[(72.12±9.23)、(61.30±12.07)μg/L]差异均有统计学意义(t值分别为7.394、0.008、0.227、7.605、0.421,P均＜0.05),SA组血尿酸升高者与血尿酸正常者CRP[(31.1±18.9)、(10.9±10.1)mg/L]、TXB_2[(21.54±3.90)、(5.02±4.93)ng/L]差异均有统计学意义(t值分别为0.494、8.669,P均＜0.05).(2)Logistic逐步回归分析:与急性冠状动脉综合征相关的因素有UA、CRP、PAI-1、PT、TG(OR值分别为1.046、7.615、1.301、0.300和2.243,P均＜0.05).结论 血尿酸升高是影响冠心病发生、发展的重要危险因素.血尿酸升高可能通过损害血管内皮功能、激活血小板、影响凝血和纤溶功能、引发炎症反应参与不同类型冠心病的发生与发展.     

橄榄苦苷对HepG2细胞脂肪变性的作用

目的探讨橄榄苦苷对HepG2细胞脂肪变性的影响。方法人肝癌HepG2细胞株分别用浓度0、0.5、1、1.5、2mmol/L游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)培养24h,MTS法测定细胞生存率,尼罗红染色观察细胞内脂滴颗粒堆积情况,ELISA法检测细胞三酰甘油(triacylglycerol,TG)水平,选择1mmol/L FFA进行后续实验。取人肝癌HepG2细胞株随机分为空白组(培养液),FFA组(培养液+1 mmol/L FFA),1μmol/L橄榄苦苷组(培养液+1 mmol/L FFA+1μmol/L橄榄苦苷)、10μmol/L橄榄苦苷组(培养液+1mmol/L FFA+10μmol/L橄榄苦苷)、100μmol/L橄榄苦苷组(培养液+1mmol/L FFA+100μmol/L橄榄苦苷)、1 000μmol/L橄榄苦苷组(培养液+1mmol/L FFA+1 000μmol/L橄榄苦苷),培养24h采用MTS法测定细胞生存率,尼罗红染色观察细胞内脂滴颗粒堆积情况,ELISA法检测细胞TG水平。结果 MTS结果显示,FFA浓度为1.5、2mmol/L时细胞生存率[(66.50±5.83)%、(57.63±11.63)%]低于0mmol/L时(100%)(P0.05),0.5、1mmol/L时细胞生存率[(95.96±3.50)%、(95.49±7.75)%]与0mmol/L比较差异无统计学意义(P0.05);FFA浓度为0.5、1mmol/L时细胞中TG水平[(0.91±0.02)、(0.96±0.04)mmol/L]均高于0 mmol/L[(0.37±0.05)mmol/L](P0.05);1、10、100μmol/L橄榄苦苷组细胞生存率[(96.22±8.05)%、(94.94±4.51)%、(97.10±2.53)%]与空白组(100%)、FFA组[(95.42±9.42)%]比较差异无统计学意义(P0.05);1 000μmol/L橄榄苦苷组细胞生存率[(41.35±4.84)%]明显低于空白组、FFA组(P0.05);10、100μmol/L橄榄苦苷组细胞中TG水平[(0.64±0.07)、(0.57±0.02)mmol/L]低于FFA组[(0.96±0.02)mmol/L](P0.05),1μmol/L橄榄苦苷组细胞中TG水平[(0.92±0.05)mmol/L]与FFA组比较差异无统计学意义(P0.05);显微镜下10、100μmol/L橄榄苦苷组脂肪颗粒较FFA组明显减少。结论 10、100μmol/L橄榄苦苷可减少HepG2细胞内TG生成,防止肝细胞脂肪变性。     

肝细胞生长因子激活剂的抑制剂-1基因对宫颈癌细胞自噬及凋亡调控的影响

目的探讨肝细胞生长因子激活剂的抑制剂-1(hepatocyte growth factor activator inhibitor-1, HAI-1)基因对宫颈癌细胞自噬及凋亡调控的机制。方法对数生长期HeLa细胞分为转染组和对照组,转染组转染HAI-1质粒,对照组细胞正常培养。采用实时荧光定量PCR法检测2组细胞HAI-1 mRNA表达情况,采用AO染色和流式细胞术检测2组细胞自噬情况,采用ELISA检测2组细胞自噬相关因子LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ和Beclin-1蛋白水平,应用流式细胞仪检测2组细胞凋亡率,采用Western blot法检测细胞Bax和Bcl-2蛋白相对表达量。结果转染组细胞HAI-1 mRNA相对表达量(1.57±0.26)、AO细胞荧光强度(52.14±3.88)、LC3-Ⅱ蛋白[(3.42±0.85)μg/L]、Beclin-1蛋白[(14.69±1.96)μg/L]水平、细胞凋亡率[(86.75±6.42)%]、Bax蛋白相对表达量(1.24±0.13)和Bax/Bcl-2(7.75±0.83)高于对照组[0.48±0.09、5.47±0.32、(1.10±0.22)μg/L、(10.12±0.53)μg/L、(12.64±1.33)%、0.25±0.06、0.17±0.05)](P0.05),LC3-Ⅰ蛋白水平[(0.59±0.11)μg/L]、Bcl-2蛋白相对表达量(0.16±0.04)低于对照组[(3.26±0.82)μg/L、1.47±0.15](P0.05)。结论 HAI-1转染通过增加HeLa细胞中LC3-Ⅱ和Beclin-1蛋白表达,降低LC3-Ⅰ蛋白表达,提高Bax/Bcl-2来调节宫颈癌细胞的自噬和凋亡。     

骨髓增殖性肿瘤患者血清血管调控细胞因子水平变化及意义

目的探讨骨髓增殖性肿瘤(myeloproliferative neoplasms,MPN)患者血清血管调控相关细胞因子水平及其临床意义。方法 30例MPN患者为MPN组,20例体检健康者为对照组,2组采用双抗体夹心ELISA法检测血清血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、血小板衍生生长因子(platelet derived growth factor,PDGF)、内皮抑素(endostatin,ES)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)及基质金属蛋白酶抑制剂-1(tissue inhibitors of metalloproteinase-1,TIMP-1)水平,分析MPN组各血管调控细胞因子间的相关性,及临床因素与血管调控细胞因子间的关系。结果MPN组血清VEGF[(610.10±295.70)ng/L]、PDGF[(9.50±3.68)μg/L]、ES[(6.80±2.70)μg/L]、MMP-9[(856.32±544.28)μg/L]、TIMP-1[(464.45±216.71)μg/L]水平及MMP-9/TIMP-1比值(2.41±1.77)均高于对照组[(355.82±155.29)ng/L、(6.03±1.07)μg/L、(4.04±0.90)μg/L、(382.90±171.36)μg/L、(202.37±28.35)μg/L、1.88±0.71](P0.05);MPN组VEGF与PDGF呈正相关(r=0.429,P=0.018),PDGF与ES呈正相关(r=0.418,P=0.022);MPN组白细胞计数≥10×109/L者血清MMP-9水平[(1 059.95±625.22)μg/L]明显高于10×109/L者[(623.60±316.93)μg/L](P0.05),血红蛋白≥160g/L者血清TIMP-1水平[(385.66±178.38)μg/L]明显低于160g/L者[(554.49±227.31)μg/L](P0.05),≥60岁患者血清PDGF[(10.70±4.14)μg/L]、ES[(7.93±2.85)μg/L]、TIMP-1[(533.89±200.88)μg/L]水平高于60岁患者[(7.71±1.83)μg/L、(5.10±1.19)μg/L、(360.29±204.25)μg/L](P0.05),2项血管危险因素者血清PDGF水平[(14.01±4.99)μg/L]明显高于≤2项危险因素者[(8.38±2.45)μg/L](P0.05);多因素logistic回归分析结果显示,高龄和低血红蛋白是TIMP-1水平增高的独立危险因素(OR=1.005,95%CI:1.000~1.010,P=0.049;OR=0.996,95%CI:0.992~1.000,P=0.046);高龄和2项血管危险因素是PDGF水平增高的独立危险因素(OR=1.462,95%CI:1.008~2.119,P=0.045;OR=1.282,95%CI:0.988~1.663,P=0.041)。结论 MPN患者白细胞计数、血红蛋白增多与血管新生调控因子表达增加有关,通过炎症导致血管新生促进和抑制因子的表达失衡,进而参与MPN的发生、发展。     

氧化苦参碱对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响

目的探讨氧化苦参碱对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响。方法分别应用2.0、1.5、1.0、0.5mg/mL氧化苦参碱体外培养人胃癌细胞SGC-7901,分别于培养24、48、72h后以倒置显微镜观察细胞形态学改变,采用MTT法观察不同浓度和作用时间下氧化苦参碱对SGC-7901细胞的抑制情况,并与对照组(不进行氧化若参碱处理)进行比较。结果 2.0 mg/mL浓度组氧化苦参碱作用人胃癌细胞株SGC-7901后24h抑制率[(35.500±0.014)%]高于1.5mg/mL组[(23.000±0.004)%]、1.0mg/mL组[(20.300±0.013)%]、0.5mg/mL[(15.700±0.007)%]和对照组(0),48h抑制率[(64.100±0.004)%]高于1.5mg/mL组[(45.400±0.013)%]、1.0mg/mL组[(44.700±0.031)%]、0.5mg/mL[(23.000±0.033)%]和对照组(0)(P0.05),72h抑制率[(82.400±0.133)%]高于1.5 mg/mL组[(66.000±0.035)%]、1.0mg/mL组[(58.900±0.120)%]、0.5mg/mL[(34.900±0.024)%]和对照组(0)(P0.05)。结论氧化苦参碱可抑制人胃癌细胞株SGC7901细胞增殖,细胞抑制率与氧化苦参碱浓度呈时间-剂量依赖性。     

不同剂量丙种球蛋白对急性免疫性血小板减少症患儿血清白细胞介素-6和白细胞介素-10及自然杀伤细胞表达的影响

目的探讨急性免疫性血小板减少症(immune thrombocytopenia, ITP)患儿应用不同剂量丙种球蛋白(intravenous immunoglobulin, IVIG)治疗前、后血清白细胞介素(interleukin, IL)-6、IL-10水平及自然杀伤(natural killer, NK)细胞占外周血单个核细胞百分比(NK细胞比率)变化。方法新确诊急性ITP患儿50例,随机分为低剂量组和高剂量组各25例,同期健康儿童25例为对照组。低剂量组静脉滴注IVIG 0.4 g/(kg·d),高剂量组静脉滴注IVIG 1.0 g/(kg·d),均连续2 d;之后均口服泼尼松1.5～2.0 mg/(kg·d),血小板计数≥100×10~9/L后稳定1周,逐渐减量至停药。分别于IVIG治疗前、后测定血清IL-6、IL-10水平,NK细胞计数及NK细胞比率,并与对照组进行比较。结果急性ITP患儿治疗前血清IL-6[(7.72±6.37)ng/L]、IL-10[(6.01±3.67)ng/L]高于对照组[(3.63±2.55)、(4.28±1.97)ng/L](P0.05),NK细胞比率[(9.06±3.99)%]低于对照组[(11.61±5.23)%](P0.05),NK细胞计数[(571.31±394.35)个/μL]与对照组[(602.97±497.27)个/μL]比较差异无统计学意义(P0.05)。IVIG治疗前,低、高剂量组血清IL-6[(7.18±6.04)、(11.85±2.12)ng/L]、IL-10[(5.39±3.15)、(6.64±4.09)μg/L]、NK细胞计数[(544.20±340.42)、(598.59±447.29)个/μL]及NK细胞比率[(9.11±3.73)%、(9.01±4.30)%]比较差异无统计学意义(P0.05)。IVIG治疗后,低、高剂量组血清IL-6水平[(8.76±5.12)、(16.35±6.87)ng/L]均高于治疗前(P0.05),IL-10水平[(4.75±2.50)、(5.22±3.90)ng/L]、NK细胞比率[(6.90±4.13)%、(8.31±5.52)%]、NK细胞计数[(340.39±471.55)、(374.24±268.27)个/μL]较治疗前下降(P0.05),高剂量组治疗后IL-6水平高于低剂量组(P0.05),IL-10、NK细胞计数及NK细胞比率与低剂量组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论低、高剂量IVIG均可上调ITP患儿血清IL-6水平,降低IL-10、NK细胞计数、NK细胞比率。     

支气管哮喘患者血清肿瘤坏死因子-α和透明质酸及羟脯氨酸水平表达及意义

目的探讨支气管哮喘患者血清肿瘤坏死因子-α(tumour necrosis factor-a,TNF-α)、透明质酸(hyaluronic acid,HA)及羟脯氨酸(hydroxyproline,HP)水平变化,分析其与肺功能的相关性。方法支气管哮喘患者35例,处于发作期21例为发作期组,处于缓解期14例为缓解期组,同期11例体检健康者为对照组,测定3组血清TNF-α、HA、HP水平及用力肺活量(forced vital capacity,FVC)、第1秒钟用力呼气容积(forced expiratory volume in one second,FEV_1)、最大呼气峰值流速(peak expiratory flow,PEF)、最大呼气中期流速(maximal mid-expiratory flow,MMEF_(75/25))、FEV_1/FVC;分析TNF-α、HA及HP与肺功能指标的相关性。结果发作期组血清TNF-α[(1.49±0.40)μg/L]、HA[(92.69±7.04)μg/L]、HP[(1.90±0.21)mg/L]水平高于对照组[(0.99±0.08)μg/L、(34.84±9.61)μg/L、(1.41±0.78)mg/L](P<0.05);缓解期组血清TNF-α水平[(1.26±0.22)μg/L]高于对照组(P<0.05),HA[(38.99±9.56)μg/L]、HP[(1.96±0.61)mg/L]水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);发作期组血清TNF-α、HA水平高于缓解期组(P<0.05);发作期组FVC[(2.732±0.914)L]、FEV_1[(1.428±0.301)L]、FEV_1/FVC[(50.623±17.537)%]、PEF[(129.851±5.346)L/min]、MMEF_(75/25)[(0.359±0.090)L/s]均低于对照组[(3.216±0.869)L、(2.496±0.459)L、(59.796±16.438)%、(557.544±7.101)L/min、(2.355±0.353)L/s](P<0.05);缓解期组FVC[(3.314±0.589)L]高于对照组,FEV_1[(1.888±0.319)L]、PEF[(506.256±15.908)L/min]、MMEF_(75/25)[(0.603±0.095)L/s]低于对照组(P<0.05),FEV_1/FVC[(57.909±9.653)%]与对照组比较差异无统计学意义(P<0.05);发作期组FVC、FEV_1、PEF、MMEF_(75/25)低于缓解期组(P<0.05);Pearson相关分析结果显示,FVC、FEV_1、PEF、MMEF_(75/25)与TNF-α、HA、HP均呈负相关(P<0.01),FEV_1/FVC与HA、HP呈负相关(P<0.01),与TNF-α无相关性(P>0.05)。结论 TNF-α、HA、HP对评估哮喘气道炎症的发生及持续有重要价值。     

SCC-Ag、ProGRP、CYFRA21-1在肺癌患者血清中的表达及其意义

目的研究鳞状细胞癌抗原(SCC-Ag)、胃泌素释放肽前体(ProGRP)、细胞角蛋白19(CYFRA21-1)在肺癌患者血清中的表达意义。方法将郑州人民医院2017年1月至2019年2月诊治的96例肺癌患者作为研究组,另选同期来本院诊治的肺良性疾病患者(90例)作为疾病组以及进行体检的正常人(90例)作为对照组。检测三组研究对象的血清SCC-Ag、ProGRP以及CYFRA21-1水平,并进行比较和分析。结果研究组血清SCC-Ag[(1.41±0.80)μg/L]、ProGRP[(43.41±15.89)μg/L]以及CYFRA21-1[(8.98±1.39)μg/L]水平明显高于疾病组[SCC-Ag(1.02±0.74)μg/L、ProGRP(34.91±9.03)μg/L、CYFRA21-1(2.75±1.12)μg/L]和对照组[SCC-Ag(0.69±0.12)μg/L、ProGRP(26.71±10.59)μg/L、CYFRA21-1(1.69±0.98)μg/L](P0.05);鳞状细胞癌、腺癌、小细胞癌三组血清SCC-Ag、ProGRP以及CYFRA21-1水平比较,差异均有统计学意义(P0.05);三组血清SCC-Ag、ProGRP以及CYFRA21-1检测阳性率比较,差异均有统计学意义(P0.05),其中研究组血清ProGRP以及CYFRA21-1阳性率均明显高于疾病组和对照组(P0.05)。结论血清SCC-Ag、ProGRP以及CYFRA21-1水平检测有助于早期肺癌以及病理类型的诊断。     

肝细胞癌患者血浆Ⅰ型丝氨酸蛋白酶抑制剂kazal表达及意义

目的探讨肝细胞癌患者血浆Ⅰ型丝氨酸蛋白酶抑制剂kazal(serine peptidase inhibitor kazal 3type 1,SPINK1)的表达及意义。方法肝细胞癌患者70例,肝硬化患者30例,体检健康者30例(对照组),抽取空腹静脉血后应用ELISA法检测血浆SPINK1、甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)水平;分析SPINK1与肝细胞癌患者临床病理特征的关系;绘制ROC曲线分析血浆SPINK1、AFP诊断肝细胞癌的效能。结果肝细胞癌组、肝硬化组血浆SPINK1水平[(2.45±0.83)、(2.07±0.81)μg/L]高于对照组[(1.32±0.47)μg/L],且肝细胞癌组高于肝硬化组,差异均有统计学意义(P0.001);肝细胞癌组血浆AFP水平[(128.72±111.49)μg/L]高于肝硬化组[(47.38±46.16)μg/L]和对照组[(33.36±28.69)μg/L](P0.01),肝硬化组与对照组比较差异无统计学意义(P0.05);肝细胞癌患者血浆SPINK1水平在年龄≥50岁与50岁[(2.52±0.90)、(2.27±0.56)μg/L]、不同性别[(2.33±0.73)、(2.66±0.94)μg/L]上差异无统计学意义(P0.05),肿瘤分期Ⅰ期者[(2.28±0.78)μg/L]低于Ⅱ+Ⅲ期者[(2.72±0.85)μg/L](P0.05);ROC曲线分析结果显示,血浆SPINK1诊断肝细胞癌的AUC为0.835,最佳截断值为1.695μg/L,灵敏度为85.71%,特异度为54.90%;血浆AFP诊断肝细胞癌的AUC为0.735,最佳截断值为94.927μg/L,灵敏度为63.41%,特异度为62.50%;血浆SPINK1诊断肝细胞癌的灵敏度高于血浆AFP,特异度低于血浆AFP(P0.01)。结论血浆SPINK1可用于肝细胞癌患者的诊断,其诊断肝细胞癌的灵敏度高于血浆AFP。     

硼替佐米与阿糖胞苷联用对K562细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米(Bor)单独或联合阿糖胞苷(Ara-C)对髓系白血病细胞系K562细胞增殖、凋亡的影响,并分析可能的作用机制.方法以20 nmoL/L的Bor、0.2μg/ml的Ara-C分别单独处理以及小同序贯方式联合处理K562细胞48 h后,MTT法检测细胞生长抑制率;流式细胞术榆测细胞凋亡率.并在两药分别单独处理6 h后用SP免疫组化法分析细胞NF-κB活性及流式细胞术检测细胞周期的变化.结果不同方式联合用药组细胞生长抑制率与细胞凋亡率均高于 两药分别单独处理组(P<0.01),而且在各联合用药组中,先加入Ara-C预处理6 h后冉序贯加入Bor组的细胞生长抑制率和细胞凋亡率分别为(81.5±4.0)%和(29.2±3.1)%,均高于先加入Bor预处理6 h后序贯Ara-c组[(54.1±4.2)%、(18.7±3.5)%]和同时加入组[(66.2±2.8)%、(21.1±2.2)%](P<0.01).Bor单独处理细胞6 h,细胞NF-κB活性减低,细胞阻滞于G_2/M期;Ara-C单独处理细胞6 h,NF-κB活性增高,G_1期细胞明显增多.结论 Bor可有效抑制K562细胞增殖,并诱导其凋亡,与Ara-C联合,这种效应显著增强,尤以Ara-C预处理后序贯Bor组影响最大.Ara-C预处理后,对NF-κB及细胞剧期的影响可能足发挥更大协同效应的原因.     

右美托咪定预处理对肝癌切除手术患者的肝缺血再灌注损伤的价值

目的探讨右美托咪定(Dex)预处理对于肝癌切除手术患者的肝缺血再灌注损伤的影响。方法前瞻性选取辽宁省朝阳市第二医院拟实施半肝切除手术治疗的95例原发性肝细胞癌患者作为研究对象,采用随机数字表法分为预处理组48例和常规组47例,预处理组手术前给予Dex 0.7μg/kg,10 min内输注完毕,后以0.4μg/(kg·h)维持至手术结束,常规组给予等量的0.9%氯化钠溶液。比较2组患者的手术时间、术中出血量、输血率、肝血流阻断时间及手术并发症。比较2组患者手术前、手术后24 h的血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、谷氨酰转肽酶(GGT)、总胆红素(STB)、结合胆红素(CB)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、白细胞介素-6(IL-6)水平。结果 2组患者的手术时间、术中出血量、输血率、肝血流阻断时间比较,差异均无统计学意义(P> 0.05)。术前,预处理组和常规组患者的血清ALT、AST、GGT、STB、CB检测值比较,差异均无统计学意义(P> 0.05);术后24 h,预处理组患者的ALT、AST、GGT、STB、CB分别为(330.2±104.0) U/L、(367.1±110.8) U/L、(31.75±7.25) U/L、(65.20±11.35)μmol/L、(37.67±6.29)μmol/L,均低于常规组[(418.6±120.7) U/L、(440.8±127.6) U/L、(38.00±9.52) U/L、(74.18±13.37)μmol/L、(42.52±8.06)μmol/L],差异均有统计学意义(P <0.05)。术前,预处理组和常规组患者的血清MDA、SOD、TNF-α、CRP、HMGB1、IL-6检测值比较,差异均无统计学意义(P> 0.05);术后24 h,预处理组患者的血清MDA、TNF-α、CRP、HMGB1、IL-6分别为(4.36±1.33)μmol/L、(5.20±1.64)μg/L、(34.75±6.83) mg/L、(258.4±41.7)μg/L、(31.28±9.50)μg/L,均低于常规组[(5.11±1.57)μmol/L、(7.00±2.17)μg/L、(43.80±8.53) mg/L、(295.0±46.4)μg/L、(48.64±11.57)μg/L],预处理组的血清SOD[(126.9±25.0) U/L]高于常规组[(113.1±19.6) U/L],差异均有统计学意义(P <0.05)。预处理组患者的手术并发症发生率(12.50%)与常规组(21.28%)比较,差异无统计学意义(P> 0.05)。结论原发性肝细胞癌患者实施半肝切除手术时,术前Dex预处理能显著减轻肝缺血再灌注损伤,保护肝脏功能。     

脓毒症患者高迁移率族蛋白-1的变化及应用卡巴胆碱进行体外干预的研究

目的 观察烧伤后脓毒症患者高迁移率族蛋白-1(HMGB-1)的变化,探讨卡巴胆碱对脂多糖刺激后单核细胞释放HMGB-1的影响及其作用机制.方法 取烧伤后脓毒症患者及正常献血员外周血,ELISA法检测HMGB-1含量.观察烧伤后脓毒症对HMGB-1的影响.取正常献血员外周血,分离获得单核细胞.实验分为6组:空白对照组的单核细胞仅加1640培养液;脂多糖组单核细胞仅加脂多糖刺激;烟碱预处理组和卡巴胆碱预处理组先用卡巴胆碱或烟碱预处理单核细胞5 min,再加入脂多糖刺激;阿托品+卡巴胆碱预处理组和α-银环蛇毒素+卡巴胆碱预处理组先在单核细胞悬液中加入阿托品或α-银环蛇毒素,5 min后给予卡巴胆碱.再5 min后给予脂多糖刺激.孵育48 h后取细胞培养上清液,ELISA法检测HMGB-1浓度.结果 烧伤后脓毒症患者HMGB-1的含量[(12.94±6.54)μg/L]明显增加,与正常献血员[(2.01±0.03)μg/L]比较差异有统计学意义(P<0.01).脂多糖单独刺激单核细胞时,HMGB-1含量[(9.39±1.37)μg/L]较对照组[(1.48±0.69)μg/L]明显升高(P<0.01).用卡巴胆碱或烟碱预处理细胞后,HMGB-l含量明显下降[(3.52±1.64)μg/L与(4.01±1.56)μg/L],与脂多糖单独刺激组比较差异有统计学意义(P<0.01).阿托品预处理细胞后,卡巴胆碱对脂多糖刺激下单核细胞释放HMGB-1的抑制作用无明显变化[(3.87±2.01)μg/L],而α-银环蛇毒素预处理细胞后,卡巴胆碱对HMGB-1的抑制作用明显减弱[(8.97±1.97)μg/L].结论 烧伤后脓毒症患者HMGB-1释放明显增加,卡巴胆碱能够减少单核细胞释放HMGB-1,其作用机制可能是通过N样胆碱能受体α-7亚基实现的.     

异丙酚对血管紧张素Ⅱ诱导大鼠心肌成纤维细胞增殖的抑制作用及机制

目的探讨不同剂量异丙酚对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ, AngⅡ)诱导大鼠心肌成纤维细胞增殖的抑制作用和机制。方法 100只出生1~3 d的Wistar大鼠进行心肌成纤维细胞的分离与培养后,将细胞分为对照组(细胞培养基中加入1 mL含体积分数1%小牛血清的DMEM培养基)、AngⅡ组(细胞培养基中加入1 mL 1.0×10-7 mol/L AngⅡ),AngⅡ+异丙酚0.5 mmol/L组(细胞培养基中加入1 mL 1.0×10-7 mol/L AngⅡ+0.5 mmol/L异丙酚)、AngⅡ+异丙酚1.0 mmol/L组(细胞培养基中加入1 mL 1.0×10-7 mol/L AngⅡ+1.0 mmol/L异丙酚)、AngⅡ+异丙酚1.5 mmol/L组(细胞培养基中加入1 mL 1.0×10-7 mol/L AngⅡ+1.5 mmol/L异丙酚)。采用MTT法检测各组细胞生长抑制率,采用PCR法检测各组细胞α-SMA mRNA相对表达量,采用Western blot法检测各组细胞总蛋白含量。结果培养48 h,AngⅡ组细胞生长抑制率[(14.23±1.17)%]低于对照组[(23.32±2.15)%]、AngⅡ+异丙酚0.5 mmol/L组[(24.19±1.36)%]、AngⅡ+异丙酚1.0 mmol/L组[(29.25±2.30)%]及AngⅡ+异丙酚1.5 mmol/L组[(31.37±2.19)%](P<0.05),AngⅡ+异丙酚1.5 mmol/L组、AngⅡ+异丙酚1.0 mmol/L组、AngⅡ+异丙酚0.5 mmol/L组细胞生长抑制率依次降低(P<0.05);AngⅡ组心肌成纤维细胞α-SMA mRNA相对表达量(2.05±0.23)、总蛋白含量(225.06±18.66)均高于对照组(0.98±0.12、150.65±11.23)、AngⅡ+异丙酚0.5 mmol/L组(1.78±0.25、197.54±11.56)、AngⅡ+异丙酚1.0 mmol/L组(1.50±0.11、182.51±10.14)和AngⅡ+异丙酚1.5 mmol/L组(1.12±0.05、168.26±11.05)(P<0.05),AngⅡ+异丙酚0.5 mmol/L组、AngⅡ+异丙酚1.0 mmol/L组、AngⅡ+异丙酚1.5 mmol/L组及对照组心肌成纤维细胞α-SMA mRNA相对表达量及总蛋白含量依次降低(P<0.05)。结论异丙酚具有抑制AngⅡ诱导的大鼠心肌成纤维细胞增殖的作用,且随剂量增加,抗心肌成纤维的作用逐渐增强。     

血清基质金属蛋白酶-9水平在非小细胞肺癌侵袭和转移中意义

目的探讨基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)在非小细胞肺癌患者侵袭和转移中的意义。方法非小细胞肺癌患者70例为肺癌组,体检健康者50例为对照组,采用ELISA法检测2组血清MMP-9水平并进行比较,比较肺癌组鳞癌与腺癌患者,有、无淋巴结转移者及对照组不同年龄间血清MMP-9水平。结果肺癌组血清MMP-9水平[(981.23±326.54)μg/L]明显高于对照组[(201.32±7.23)μg/L](P<0.05);肺癌组有淋巴结转移者血清MMP-9水平[(1 251.23±243.34)μg/L]明显高于无淋巴结转移者[(723.54±315.32)μg/L](P<0.05),鳞癌患者血清MMP-9水平[(898.97±249.67)μg/L]与腺癌患者[(1 024.25±214.22)μg/L]比较差异无统计学意义(P>0.05);对照组不同年龄间血清MMP-9水平比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 MMP-9可作为临床判断肺癌侵袭和转移的生物学指标。     

白藜芦醇通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制体外胃癌细胞生长的研究

目的探讨白藜芦醇(Res)对胃腺癌细胞(AGS)生长的影响及其与Wnt/β-catenin信号通路的关系。方法体外培养胃癌细胞株AGS,并以不同浓度Res(25、50、100μmol/L)干预24、48、72 h后,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞抑制率;不同浓度Res干预24 h流式细胞仪检测细胞周期,细胞免疫组化检测Wnt1、β-catenin、Lgr5的表达情况。实验数据以x±s表示,采用SPSS13.0软件进行统计分析,多组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用t检验。P<0.05表示差异有统计学意义。结果不同浓度Res(25、50、100μmol/L)干预24、48、72 h后,AGS细胞的状态变差,细胞形态变圆密度及数量减少,贴壁较差,细胞增殖抑制率分别为:25μmol/L Res作用24 h组(0.2033±0.0207)、48 h组(0.3949±0.0199)、72 h组(0.5102±0.0155);50μmol/L Res作用24 h组(0.3554±0.0207)、48 h组(0.5157±0.0321)、72 h组(0.6167±0.0248);100μmol/L Res作用24 h组(0.5005±0.0199)、48 h组(0.6251±0.0299)、72 h组(0.7271±0.0147),细胞增殖抑制率呈时间依赖性与剂量依赖性(P<0.05);不同浓度Res作用24 h后,检测G1期细胞所占比分别为空白组(48.33±0.21)%、25μmol/L Res作用组(52.61±0.41)%、50μmol/L Res作用组(58.53±0.48)%、100μmol/L Res作用组(71.16±0.20)%,细胞周期阻滞在G0/G1期(P<0.05);不同浓度Res干预24 h后100μmol/L组(207.36±0.52)、50μmol/L组(202.65±0.53)、25μmol/L组(197.13±1.07)Wnt1灰度值均高于对照组(191.40±0.28)(P<0.05);100μmol/L组(206.51±0.68)、50μmol/L组(200.49±0.30)、25μmol/L组(196.53±0.59)β-catenin灰度值均高于对照组(191.98±0.30)(P<0.05),100μmol/L组(209.22±0.51)、50μmol/L组(204.53±0.92)、25μmol/L组(195.7±60.90)Lgr5灰度值均高于对照组(188.16±0.86)(P<0.05)。结论 Res可抑制胃癌细胞AGS的生长作用,其机制可能通过减少Wnt/β-catenin信号通路的活化而产生的。     

瘦素预处理和缺血预处理在小鼠心肌缺血/再灌注损伤中的心肌保护机制

目的 观察瘦素预处理和缺血预处理(IPC)对心肌缺血/再灌注损伤(MIRI)模型小鼠的心肌保护作用,探讨瘦素参与的机制.方法 将36只C57BL/6小鼠按随机数字表法分为5组:①假手术组(12只);②短暂缺血/再灌注(I/R)组(6只):缺血3 min后再灌注5 min,进行3个短暂的循环;⑨标准I/R组(6只):缺血30 min后再灌注120 min,④IPC组(6只):行3个短暂I/R循环后再进行标准I/R操作;⑤瘦素预处理组(6只):缺血前30min腹腔注射50μg/kg小鼠重组瘦素.假手术组和短暂I/R组分别于再灌注后0(RP刻)、5、30、120 min取血,动态监测血清瘦素水平;其余各组于再灌注后120 min处死小鼠,观察心肌梗死面积、心肌瘦素水平、髓过氧化物酶(MPO)活性,以及血清瘦素、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平.结果 短暂I/R处理后5 min血清瘦素水平即较假手术组同期显著升高[(6.24±2.34)μg/L比(1.35±0.45)μg/L],30 min达峰值[(12.36±1.33)μg/L],之后逐渐下降,与假手术组水平同期比较差异无统计学意义[(1.96±1.33)μg/L比(1.16±0.25)μg/L,P＞0.05].与标准I/R组比较,瘦素预处理组与IPC组均可显著缩小梗死面积[(11.50±2.86)%、(9.00±1.90)%比(37.00±2.53)%],降低心肌瘦素[(8.36±3.42)μg/g、(6.71±2.03)μg/g比(15.51±3.92)μg/g]、MPO((17.10±3.95)μg/g、(13.33±2.88)μg/g比(30.83±4.06)μg/g]以及血清瘦素[(15.03±1.87)μ/L、(11.85±0.72)μg/L比(29.55±2.31)μg/L]、TNF-α[(35.10±10.12)ng/L、(27.04±5.18)ng/L比(81.34±14.20)ng/L]、IL-6[(167.39±72.83)ng/L、(149.13±37.69)ng/L比(477.30±29.09)ng/L]水平(均P＜0.01).结论 低剂量瘦素预处理可模仿经典的IPC以减轻MIRI,瘦素参与IPC的心肌保护机制可能与减轻炎症反应有关.     

神经突触核蛋白-γ质粒转染胶质瘤细胞及其过表达对紫杉醇耐药性的影响

目的探讨胶质瘤细胞U87中神经突触核蛋白-γ(synuclein-γ,SNGG)过度表达对紫杉醇耐药的影响。方法 U87/SNCG组采用pIRES2-EGFP-SNCG真核表达载体转染U87胶质瘤细胞,构建稳定转染SNCG的U87/SNCG细胞系,U87/neo对照组采用pIRES2-EGFP空载质粒转染U87胶质瘤细胞,构建U87/neo细胞系。采用G418选择培养稳定转染的U87/neo和U87/SNCG细胞系,采用反转录实时定量聚合酶链反应和免疫荧光染色技术鉴定成功后,2组分别于紫杉醇作用6、12、18、24h时检测细胞增殖抑制率,采用流式细胞术检测细胞周期分布和凋亡细胞比例,采用免疫荧光染色法观察细胞形态学变化。结果成功构建U87/SNCG细胞系;U87/SNCG组SNCG mRNA表达较U87/neo对照组上调9.06倍;紫杉醇作用24h时,U87U/SNCG组细胞增殖抑制率[(25.49±2.44)%]和凋亡细胞比例[(7.02±0.26)%]明显低于U87/neo对照组[(34.36±2.95)%、(14.93±1.53)%](P<0.05);紫杉醇作用6h时,U87/SNCG组细胞G2/M期比例[(22.87±0.60)%]低于U87/neo对照组[(26.75±2.70)%](P<0.01);随着紫杉醇作用时间延长,与U87/SNCG组比较,U87/neo对照组细胞总数减少,细胞散落浮于培养液中,出现透明空泡、崩解细胞,并可见大量核固缩、核碎裂之凋亡现象。结论 SNCG过表达可降低抗微管药物诱导的U87细胞有丝分裂期阻滞,增强胶质瘤细胞的增殖能力和抗凋亡能力。