蝉花菌丝对单侧输尿管结扎大鼠肾间质TGF-β_1和CTGF蛋白及mRNA表达的影响

目的：探讨蝉花菌丝对肾间质纤维化大鼠肾间质TGF-β1、CTGF蛋白及mRNA表达的影响。方法：采用单侧输尿管结扎的方法制备单侧输尿管梗阻（UUO）肾间质纤维化大鼠模型。实验分组为正常组、模型组、假手术组、冬虫夏草组、蝉花高剂量组、蝉花中剂量组和蝉花低剂量组,实验周期为25d。采用免疫组织化学和原位杂交方法,分别检测肾组织TGF-β1、CTGF蛋白及其mRNA表达,使用图像分析系统对结果进行处理,采用SPSS11.5统计软件统计分析。结果：UUO模型组大鼠肾间质中TGF-β1、CTGF蛋白及mRNA的表达量均明显高于正常组和假手术组（P〈0.05～0.01）;不同剂量的蝉花菌丝组TGF-β1、CTGF蛋白及mRNA的表达量明显低于模型组（P〈0.05～0.01）,呈明显的量效依赖关系;蝉花菌丝大剂量组的TGF-β1、CTGF蛋白及mRNA的表达量较虫草组为低（P〈0.05～0.01）。结论：蝉花菌丝可以通过下调TGF-β1、CTGF蛋白及其mRNA的表达,对UUO肾间质纤维化大鼠肾脏起一定的保护作用。     

蝉花菌丝抗大鼠肾小管间质纤维化的实验研究

目的：探讨蝉花菌丝对肾小管间质纤维化大鼠的治疗作用。方法：采用单侧输尿管结扎的方法制备单侧输尿管梗阻（UUO）的肾小管间质纤维化大鼠模型。实验分组为正常组、模型组、假手术组,冬虫夏草组、蝉花高剂量组、蝉花中剂量组和蝉花低剂量组,实验周期为24d,观察指标有尿素氮、血肌酐、尿NAG酶、肾重/体重的比值、尿蛋白、肾组织病理学变化等。结果：蝉花大、中、小剂量组对UUO大鼠尿素氮、血肌酐、肾重/体重的比值、尿蛋白等均有显著改善作用,与模型组比较差异有统计学意义（P〈0.05～0.01）,并且蝉花大、中剂量组的尿NAG酶测值也与模型组差异有统计学意义（P〈0.05～0.01）,蝉花大剂量组对UUO大鼠尿素氮、血肌酐、尿蛋白等的改善作用优于虫草组（P〈0.01）。肾组织病理学研究发现,肾小管间质损害评分蝉花大、中、小剂量组均与模型组差异有统计学意义（P〈0.01）,蝉花大剂量组的肾小管间质损害评分又与蝉花中、小剂量组和虫草组差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：蝉花菌丝对UUO大鼠肾间质纤维化有较好的干预作用。     

脉血康对单侧输尿管梗阻大鼠肾保护作用及机制探讨

目的观察脉血康对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)大鼠肾脏保护作用并探讨其可能作用机制。方法建立UUO大鼠模型,大鼠随机分为假手术组、模型组及脉血康组3组,各组给予相应干预,各组大鼠于术后14 d处死,抽取血清并留取肾组织标本,检测各组大鼠血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、胆固醇(total cholesterol,TC)、三酰甘油(triglyceride,TG)情况,并观察各组肾脏病理改变情况,采用免疫组化方法观察肾组织中组织型纤溶酶原激活物(tissue type plasminogen activator,t-PA)、尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase type plasminogen activator,u-PA)、纤溶酶原激活物抑制剂1(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)在各组的表达情况。结果①3组肾脏形态学变化有差异,假手术组双肾大小及体积无改变,颜色红润,模型组及脉血康组术侧肾脏体积明显增大,术侧肾盂肾盏及输尿管结扎段以上全程扩张。模型组肾实质颜色变浅,剖面肾皮质变薄,皮髓质分界不清,脉血康组肾脏颜色稍红润,肾脏皮髓质分界较清。②假手术组肾脏病理未见明显改变,与假手术组比较,模型组及脉血康组肾小管损伤及肾间质纤维化程度显著(P0.01);与模型组比较,脉血康组肾小管损伤及肾间质纤维化程度明显减轻(P0.05)。③与假手术组相比,模型组SCr、BUN、TC、TG水平均升高(P0.05),与模型组相比,脉血康组SCr、BUN、TC、TG水平均下降(P0.05)。④假手术组PAI-1、t-PA、u-PA表达于肾小管上皮细胞及肾小球系膜细胞胞浆,肾间质表达极少;与假手术组比较,模型组及脉血康组PAI-1明显增多(P0.05),而t-PA、u-PA表达明显减少(P0.05),与模型组相比,脉血康组PAI--1表达明显减少,t-PA表达明显增多(P0.05),u-PA无明显差别(P0.05)。结论脉血康可能通过调节脂质代谢下调肾脏PAI-1的表达,上调t-PA的表达从而促进肾脏细胞外基质降解,对UUO大鼠肾间质纤维化及肾功能具有保护作用。     

肾小管间质纤维化大鼠u-PA/PAI-1的表达及桂枝茯苓胶囊对其影响

目的：观察桂枝茯苓胶囊对肾小管间质纤维化（tubulointerstitial fibrosis,TIF）的肾组织中的尿激酶型纤溶酶原激活物（urokinase-type plasminogen activator,u-PA）及纤溶酶原激活物抑制剂-1（plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1）表达的影响。方法：雄性3月龄SD大鼠72只,随机分为：假手术组（24只）,模型组（24只）,预防组（24只）。行单侧输尿管结扎术单侧输尿管梗阻诱导TIF模型。预防组大鼠加以125 mg/kg桂枝茯苓胶囊,溶于生理盐水灌胃,日2次,模型组及假手术组每天以等体积生理盐水灌胃。各组分别于实验第7天、第14天、第21天时随机选取8只大鼠,处死后行光镜下观察梗阻侧肾脏组织病理学改变、免疫组织化学法（SP法）评价肾脏尿激酶型纤溶酶原激活物-PA、PAI-1表达变化。结果：（1）PAI-1表达量在假手术组各时间点差异无统计学意义（P〉0.05）。各时间点模型组、预防组均高于假手术组（P〈0.01,P〈0.05）,除PAI-1表达量在7 d时模型组与预防组无明显差异外,预防组均低于模型组（P〈0.01）。模型组、预防组表达量随梗阻时间延长而增加（P〈0.01,P〈0.05）。（2）各时间点预防组u-PA表达量均低于假手术组（P〈0.01）,高于模型组（P〈0.01,P〈0.05）。模型组、预防组14 d、21 d u-PA的表达量均较各自前一时间点减少（P〈0.01）,假手术组u-PA的表达量各时间点差异无统计学意义（P〉0.05）。（3）肾小管间质损害半定量评分与PAI-1（r=0.917,P〈0.01）表达量呈正相关,与u-PA表达量呈负相关（r=-933,P〈0.01）。结论：桂枝茯苓胶囊能减轻梗阻肾组织的病理损害,延缓TIF的进程。并参与纤维化形成的全过程。     

加味抵挡汤对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质PAI—1表达的影响

目的探讨加味抵挡汤延缓肾间质纤维化的机制。方法将60只大鼠随机分为模型组、加味抵挡汤组、贝那普利组、假手术组、空白组各12只,前3组行单侧输尿管梗阻（UUO）术,术后第14天处死大鼠,留取梗阻侧肾组织行HE染色,观察肾脏病理学变化,并用免疫组化方法测定肾组织纤溶酶原激活剂抑制物-1（PAI-1）的表达。结果加味抵挡汤能改善肾间质损伤和肾间质纤维化程度,降低肾脏组织致纤维化因子PAI-1表达。结论加味抵挡汤具有延缓肾纤维化的作用。     

尿激酶型纤溶酶原激活物在动物肾小管上皮细胞转分化中的表达及其意义

目的:探讨尿激酶型纤溶酶原激活物(u-PA)在动物肾小管上皮细胞转分化(EMT)中的表达及其意义。方法:将64只大鼠分为假手术组和单侧输尿管梗阻(UUO)组,术后3、7、14、28天取肾,观察肾小管间质损伤(TIS)、肾小管间质纤维化(RIF)程度及肾小管基底膜(TBM)破坏程度,免疫组织化学检测u-PA及上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)的变化,并进行统计学分析。结果:UUO组与假手术组相比,在同时间点各检测指标的差异均有统计学意义(P0.01),观察各指标在UUO组内各时间点的差异也均有统计学意义(P0.01)。UUO组u-PA与TBM断裂的肾小管百分比呈正相关(r=0.556,P0.01)。结论:u-PA的表达影响TBM的完整性,参与EMT进程。     

肾疏宁对肾小管间质损害大鼠FN、ColⅢ、PAI-1 mRNA的作用

目的:观察肾疏宁对肾小管间质损害大鼠FN、ColⅢ、PAI-1mRNA表达的影响。方法:在系膜增生性肾炎(MsPGN)模型基础上,延长造模时间至12~16周,使其自然发展成肾小管间质损害模型,观察肾疏宁对肾小管间质FN、ColⅢ、PAI-1mRNA表达的影响,并设苯那普利为阳性对照组。结果:第12~16周末,造模各组肾小管间质FN、ColⅢ、PAI-1mRNA表达量均明显升高(P<0.05或P<0.01),肾疏宁组、苯那普利组均显著低于模型组(P<0.05或P<0.01),第12周末,肾疏宁组与苯那普利组比较无统计学差异(P>0.05),而第16周末,肾疏宁组明显低于苯那普利组(P<0.01)。结论:肾疏宁能抑制细胞外基质的合成,促进其降解,从而保护肾小管间质损害。     

转化生长因子β1诱导的系膜细胞纤维蛋白溶酶系统变化及其机制

目的研究转化生长因子(TGF)-β1对大鼠系膜细胞纤维蛋白溶酶(纤溶酶)系统的影响,并探讨反应性氧基(ROS)的作用。方法以体外培养的大鼠系膜细胞为对象,采用TGF-β1刺激12h,部分实验中培养的细胞在刺激前应用DL-buthionine-(S,R)-sulfoximine(BSO)预处理24h,或应用抗氧化剂N-acetylcysteine(NAC)预处理1h。应用荧光素法测定细胞ROS含量。系膜细胞tPA、uPA和PAI-1mRNA的表达采用RT-PCR测定。PAI-1蛋白表达应用ELISA检测。应用合成的荧光素酶底物及荧光扫描法分别测定纤溶酶、uPA、tPA活性。结果TGF-β1可显著增加细胞ROS含量。2ng/mlTGF-β1可显著上调PAI-1mRNA和蛋白的表达,分别为1.9倍(P<0.01)和1.5倍(P<0.05)。tPAmRNA的表达不受影响但uPAmRNA的表达较对照组下调52%(P<0.01)。TGF-β1可抑制纤溶酶和uPA活性,分别为30%(P<0.01)和23%(P<0.05),但对tPA的活性无显著影响。在BSO预处理组,TGF-β1对uPA、PAI-1mRNA表达和蛋白释放的影响得到显著增强;而NAC预处理可明显逆转由TGF-β1诱导的uPA、PAI-1mRNA表达的上调和蛋白表达增加以及活性的改变。结论TGF-β1可促使细胞ROS产生增加。ROS介导了由TGF-β1诱导的系膜细胞PAI-1mRNA和蛋白表达的上调以及uPAmRNA表达的下调和uPA、纤溶酶活性的下降。TGF-β1对系膜细     

维甲酸抑制大鼠单侧输尿管梗阻模型肾间质纤维化

目的探讨维甲酸对大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)模型肾间质纤维化的影响。方法建立大鼠UUO模型前2d治疗组和对照组分别每天给予10mg/kg全反式维甲酸或溶媒皮下注射。观察模型第3、7和12天肾小管损害百分比、肾间质纤维化程度、肾间质巨噬细胞数、肾间质α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原Ⅲ和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA的表达。结果维甲酸显著减轻肾小管损害和肾间质纤维化(P<0.01)。治疗组肾间质巨噬细胞数和肾间质α-SMA表达显著低于对照组(P<0.01)。维甲酸显著抑制胶原Ⅲ和MCP-1mRNA表达(P<0.01)。结论维甲酸减少大鼠UUO模型肾间质巨噬细胞浸润、降低胶原Ⅲ和MCP-1mRNA表达、抑制α-SMA蛋白的表达,从而减轻肾间质纤维化。     

蝉花菌丝延缓肾小球硬化的作用机制研究

目的:探讨蝉花菌丝延缓实验大鼠肾小球硬化作用的可能机制,观察和评价蝉花菌丝对实验大鼠慢性肾衰竭的治疗效果.方法:对大鼠行5/6肾切除,建立肾小球硬化模型,并用蝉花菌丝对其治疗42 d,其间观察大鼠的尾动脉血压和测定24 h尿蛋白定量,并在实验结束时检测各种生化指标(Scr、BUN、Alb、TG、TC、Hb、HCT、RBC)和取材作病理分析,行HE染色,采用病理图像分析系统计算肾小球平均损伤面积的百分率;采用免疫组化和原位杂交技术进行Col-Ⅳ、PAI-1、u-PA、u-PA mRNA和PAI-1 mRNA免疫染色,应用计算机图像分析系统对其阳性表达结果进行分析,并对模型对照组中Col-Ⅳ、PAI-1、u-PA蛋白表达作相关分析.结果:蝉花菌丝与模型组比较能明显降低大鼠肾重/体重比值,24 h尿蛋白量,降低大鼠BUN和Scr(P<0.01);模型组大鼠尾动脉血压在42 d里均明显高于蝉花菌丝组(P<0.05);蝉花菌丝组大鼠红细胞计数、血红蛋白、红细胞压积和血浆白蛋白均高于模型组大鼠(P<0.05);免疫组化显示蝉花菌丝能减少大鼠肾小球中PAI-1蛋白的表达,提高u-PA的表达,与模型组比较有统计学差异(P<0.01),而模型组大鼠肾小球内Col-Ⅳ的表达明显强于蝉花菌丝组(P<0.01);原位杂交技术显示u-PA mRNA和PAI-1 mRNA主要表达定位在肾小球系膜区、毛细血管襻和部分肾小球脏层上皮细胞.蝉花菌丝组大鼠的u-PA mRNA的表达明显高于模型组(P<0.01),而PAI-1 mRNA的表达弱于模型组大鼠(P<0.05);经等级相关分析,模型组大鼠肾小球中PAI-1蛋白的表达和肾小球内Col-Ⅳ的表达呈明显正相关(r=0.932;P<0.01).结论:蝉花菌丝减轻了肾小球的损害,改善了动物的肾功能和肾衰竭并发症(贫血、营养不良),延缓了肾小球硬化的进程,其机制可能具有下调PAI-1的表达,使肾小球毛细血管襻上u-PA的表达相应增高,使肾小球内Col-Ⅳ的表达量减少.     

冬虫夏草通过诱导血色素加氧酶-1表达抑制肾小管间质纤维化

目的：观察冬虫夏草对单侧输尿管梗阻（unilateral ureteral obstruction,UUO）模型大鼠肾小管间质纤维化进展的保护作用。方法：72只雄性清洁级SD大鼠随机分为4组：假手术组,UUO模型组,UUO加冬虫夏草治疗组,UUO加冬虫夏草和血色素加氧酶抑制剂卟啉锌[（zinc（a）protoporphyrinη,znpp）]治疗组。各组大鼠分别于术后（建模后）第3、7、14天分批处死,留取手术侧（模型组梗阻侧）肾脏组织。采用HE、Masson染色、荧光定量PCR、免疫组织化学染色评价肾小管间质纤维化损伤程度并检测肾脏组织血色素加氧酶-1（hemoglobin oxygenase-1,HO-1）,α平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle ac-tin,α-SMA）mRNA及蛋白表达变化情况。结果：冬虫夏草治疗组相对于UUO模型组,肾脏病理损伤及进展程度明显减轻且HO-1的表达上调,α-SMA的表达下调（P〈0.05）,而冬虫夏草加HO-1抑制剂znpp后,以上作用明显减弱。结论：冬虫夏草可以通过诱导血色素加氧酶的表达减轻肾小管间质纤维化程度。     

蝉花菌丝对TGF—β1作用下的肾小管上皮细胞α—SMA等蛋白及mRNA表达的影响

目的：探讨蝉花茵丝对TGF—βl作用下肾小管上皮细胞d—SMA、FN、LN、ColⅢ蛋白及mRNA表达的影响。方法：以TGF—β1,刺激下的肾小管上皮细胞为研究对象,采用血清药理学研究方法和免疫组化、RT—PCR检测技术,观察空白对照组、TGF－β1,对照组、冬虫夏草组、蝉花高剂量组、蝉花中剂量组和蝉花低荆量组的a—SMA、FiN、LN、ColⅢ蛋白及mR－NA表达,采用SPSS11．5统计软件统计分析。结果：TGF-β1,刺激下的肾小管上皮细胞a—SMA、FN、LN、colⅢ蛋白及mRNA的表达与正常组比较明显增加（P〈0．01）;蝉花大、中、小剂量组均能下调肾小管上皮细胞对α－SMA、LN、FN、ColⅢ蛋白及mRNA的表达,与TGF—β1,对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05—0．01）,并且大剂量的蝉花茵丝组优于虫草菌丝组（P〈0．05）;不同剂量的蝉花茵丝组存在量效依赖关系。结论：本研究表明蝉花茵丝通过下调TGF－β1,刺激下的肾小管上皮细胞对仪一SMA、LN、FN、ColIⅢ蛋白及mRNA的异常表达而发挥抗肾间质纤维化的药理作用。     

人基质金属蛋白酶1组织抑制剂转基因小鼠肾小管间质炎症的改变

目的观察基质金属蛋白酶1组织抑制剂(TIMP-1)过表达对肾小管间质炎症反应的影响。方法采用人TIMP-1转基因小鼠和野生型小鼠(n=8)构建单侧输尿管梗阻(UUO)模型。以3 d和14 d为时间点,Masson染色观察肾组织形态学变化,间接免疫荧光法观察肾组织内F4／80阳性细胞的表达;Western印迹检测TIMP-1、TIMP-2、MMP-2、MMP-9和ICAM-1的蛋白表达,明胶酶谱法检测MMP-2和MMP-9的活性,反向酶谱法检测TIMP-1的活性。结果UUO术后肾小管间质病理损伤加重[肾间质纤维化面积(46．24±6．58)％比野生型(36．33±5．12)％．P< 0．05],F4／80阳性细胞数目增加[(68．9±15．6)个／视野比野生型(52．4±13．3)个／视野,P< 0．05],ICAM-1蛋白表达显著上调,术后14 d上述改变在转基因组中更为显著(P<0．05)。UUO术后TIMP-1蛋白表达及活性上调,在术后14 d达高峰,在转基因组中增加更为显著(P< 0．05)。MMP-2和MMP-9的蛋白表达及活性在术后逐渐下降,UUO术后14 d转基因组降低更为显著(P<0．05)。结论TIMP-1过表达可通过增强炎症加重肾小管间质损伤。     

7/8肾切除大鼠凝血纤溶系统的变化及干预治疗的影响

目的：探讨肾小球硬化及小管间质纤维化过程中肾组织纤溶酶原激活物（PA）和PA抑制物（PAI）－1蛋白表达及干预治疗的影响。方法：7／8肾切除肾功能衰竭大鼠为实验动物模型,随机分为未治疗组和治疗组,观察12周后各组大鼠血尿各项生化指标、尿PA活性及残肾组织常规病理和用免疫组织化学染色定性定量评价残肾组织型PA（tPA)、尿激酶型（uPA)、PAI－1蛋白表达。结果：未治疗组大鼠肾功能进行性丧失,尿PA活性下降,肾组织PAI－1表达增高,而tPA、uPA表达下降,残肾组织出现肾小球硬化和间质纤维化。治疗组大鼠残肾组织tPA、uPA蛋白表达增加,PAI－1表达下降。尿PA活性增加,肾功能改善。结论：水蛭治疗组、苯那普利治疗组及联合治疗组都可以通过改善7／8肾切除大鼠PA／PAI－1系统的紊乱而延缓肾小球硬化和间质纤维化病变的进展。     

Rapamycin attenuates unilateral ureteral obstruction-induced renal fibrosis

Unilateral ureteral obstruction (UUO) is a well-characterized hydronephrosis model exhibiting interstitial inflammatory-cell infiltration and tubular dilatation followed by tubulointerstitial fibrosis of the obstructed kidney. Our recent report indicates that rapamycin is effective for 50% of transplant recipients with chronic allograft nephropathy. In this study, we investigate the effect of rapamycin on UUO-induced renal fibrosis. UUO or sham-operated rats were randomly assigned to rapamycin or vehicle and were killed on days 7 and 14 after UUO or sham operation. Rapamycin decreased cross-sectional and gross-morphology changes in the obstructed kidney significantly. Rapamycin markedly blunted the increase in weight of the obstructed kidney, obstructed kidney length, and the obstructed/non-obstructed kidney weight ratio (by 74.6, 42.8, and 61.6% on day 14, respectively, all P<0.01). The scores for tubular dilatation, interstitial volume, interstitial collagen deposition, and alpha-smooth muscle actin (alpha-SMA) after UUO were significantly reduced by rapamycin. Rapamycin also decreased the number of infiltrative anti-ED1-positive cells and the gene expression of transforming growth factor (TGF)-beta1 (84.8 and 80.2% on day 7) after UUO (both P<0.01). By double immunostaining and Western analysis, rapamycin blocked the TGF-beta1-induced loss of E-cadherin expression and de novo increase of the expression of alpha-SMA in a dose-dependent manner. In conclusion, rapamycin significantly attenuated tubulointerstitial damage in a UUO-induced rat model of renal fibrosis, suggesting that rapamycin may have the potential to delay the progression of tubulointerstitial renal fibrosis.     

替普瑞酮对大鼠梗阻性肾病间质纤维化的影响

目的探讨替普瑞酮（GGA）对大鼠梗阻性肾病模型（UUO）肾间质纤维化的影响和可能机制。方法15只SD大鼠随机分成3组：假手术组、UUO模型组和GGA治疗组，每组5只。从建立UUO模型前1d开始，GGA治疗组和模型组分别给予400mg／kgGGA和溶媒（0．05％阿拉伯树胶＋0．008％维生素E）灌胃，每天1次，术后第7天处死大鼠。常规染色观察肾脏组织病理改变。间接免疫荧光和Western印迹检测肾脏E-钙黏蛋白（E—cadherin）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的水平。TUNEL染色和PCNA免疫组织化学染色分别观察肾小管上皮细胞的凋亡和增生情况。结果GGA能诱导肾脏特异性高表达热休克蛋白72（HSP72）。与UUO模型组相比，GGA治疗组肾小管损伤和肾问质纤维化的程度明显减轻『肾小管损害百分比（48．7％±1．3％比65．8％±7．3％）；肾间质损害分值（0．40±0．08比1．36±0．50），P均〈0．05】；E—cadherin蛋白水平增加，α-SMA蛋白水平降低（P均〈0．05）；每高倍视野中TUNEL阳性和PCNA染色阳性的细胞数显著减少（分别为6．78±1．25比2．81±0．63，57．61±5．42比17．66±1．38，P均〈0．05）。结论GGA可能通过抑制肾小管上皮细胞的凋亡，延缓大鼠梗阻性肾病肾间质纤维化的进程。     

Urokinase receptor modulates cellular and angiogenic responses in obstructive nephropathy

Interstitial cells have been implicated in the pathogenesis of renal fibrosis. Given that the urokinase receptor (uPAR) is known to play a role in cell adhesion, migration, and angiogenesis, the present study was designed to evaluate the role of uPAR in the regulation of the phenotypic composition of interstitial cells (macrophages, myofibroblasts, capillaries) in response to chronic renal injury. Groups of uPAR wild-type (+/+) and knockout (-/-) mice were investigated between 3 and 14 d after unilateral ureteral obstruction (UUO) or sham surgery (n = 8 mice per group). The density of F4/80+ interstitial macrophages (Mphi) was significantly lower in the -/- mice (3.3 +/- 0.4 versus 6.9 +/- 1.7% area at day 3 UUO; 10.8 +/- 1.6 versus 15.7 +/- 1.0% at day 14 UUO; -/- versus +/+). In contrast, in the -/- mice there were significantly more alpha smooth muscle actin (alphaSMA)-positive cells (12.9 +/- 3.2 versus 7.8 +/- 1.5% area at day 3 UUO; 21.0 +/- 4.7 versus 9.7 +/- 1.9% at day 14 UUO) and CD34-positive endothelial cells (8.4 +/- 1.9 versus 4.0 +/- 1.1% area at day 14 UUO). These differences were associated with significantly more interstitial fibrosis in the -/- mice based on Sirius red staining (4.6 +/- 0.9 versus 2.3 +/- 0.9% area at 14 d UUO). Absence of the uPAR scavenger receptor was associated with significantly greater accumulation of plasminogen activator inhibitor-1 protein (PAI-1) (20.5 +/- 3.5 versus 9.1 +/- 2.9% area, day 14 UUO) and vitronectin protein (2.4 +/- 1.1 versus 0.9 +/- 0.4% area, day 14 UUO). By immunostaining alphaSMA+ cells, CD34+ cells, vitronectin and PAI-1 co-localized to the same tubulointerstitial area. The number of apoptotic cells increased in response to UUO but was significantly higher in the -/- mice (2.0 +/- 0.2 versus 1.2 +/- 0.2 per 100 tubulointerstitial cells, day 14 UUO) while the number of proliferating cells was significantly lower in the uPAR-/- mice. These data suggest that uPAR deficiency suppresses renal Mphi recruitment, but the absence of this scavenger receptor actually accentuates the fibrogenic response, likely due in part to the delayed clearance of angiogenic/profibrotic molecules such as PAI-1 and decreased receptor-associated uPA activity.     

Effect of renal fibrosis after macrophage depletion in C3-deficient unilateral ureteral obstruction mice

Objective To investigate the effect and mechanism of renal fibrosis after macrophage depletion in C3-deficient unilateral ureteral obstruction mice. Methods Renal interstitial fibrosis model was established by unilateral ureteral obstruction (UUO) in male C3-deficient mice and age-matched C57BL/6 WT mice (8-12 weeks of age). Mice were randomly divided into 4 groups, including sham operation in wild type group（WT/sham）(n=18), UUO operation in wild type group（WT/UUO）(n=18), sham operation in C3-deficient group（C3KO/sham）(n=18), and UUO operation in C3-deficient group（C3KO/UUO）(n=18). The expression of complement C3 was detected by immunohistochemical staining and renal interstitial macrophages were assessed by immunofluorescence staining. Tubulointerstitial fibrosis was observed by both HE staining and Masson staining after 14 days of UUO. Collagen accumulation and score of tubulointerstitial injury were obtained. Wild type and C3-deficient UUO mice were treated by liposome clodronate in early or late stage respectively and then interstitially infiltrated macrophages and renal fibrosis were analysed. Mice were sacrificed randomly at 3,7,14 days after UUO and obstructed kidneys were collected. Macrophage phenotype was detected by double-labeling immunofluorescence with F4/80 and iNOS for the M1, F4/80 and CD206 for the M2 macrophage subpopulation. iNOS, Arg-1 and CD206 were also detected by western blot. Results C3 deficient mice exhibited attenuated renal fibrosis, reduced collagen accumulation and tubulointerstitial injury score compared with WT mice (P＜0.01). Meanwhile, macrophage depletion in early or late stage of UUO reduced renal fibrosis in WT mice, but had no effect on C3-deficient UUO mice. Decreased accumulation of M1 macrophages and expression of iNOS, increased accumulation of M2 macrophages and expression of Arg-1, CD206 were found in C3 deficient mice compared with WT mice in early stage of UUO (P＜0.01). Conclusion Renal fibrosis is not reduced after depletion of macrophages in C3 deficient UUO mice due to the altered macrophage polarization.     

六味地黄丸对5/6肾切除大鼠肾组织中HIF-1α、PAI-1和TIMP-1表达的影响

目的：探讨缺氧诱导因子1α（HIF-1α）在肾间质纤维化中的表达及作用,观察六味地黄丸对其表达的影响.方法：用5/6肾切除大鼠制作肾间质纤维化模型,分假手术组,模型组和六味地黄丸组.术后8周,常规HE染色观察肾脏组织病理变化,用Masson染色法检测胶原在肾脏的沉积;免疫组化法检测HIF-1α、PAI-1和TIMP-1在肾组织中的表达;Western blot法检测HIF-1α蛋白的表达.结果：与假手术组比较,模型组肾组织中HIF-1α、PAI-1和TIMP-1蛋白水平均明显升高（P＜0.01）.与模型组比较,六味地黄丸组肾组织中HIF-1α、PAI-1和TIMP-1蛋白水平均明显降低（P＜0.05或P＜0.01）.结论：HIF-1α通过调节PAI-1和TIMP-1的表达,抑制细胞外基质降解而导致肾间质纤维化,六味地黄丸可通过减少HIF-1α蛋白水平来减轻肾间质纤维化.