456例不育患者单纯疱疹病毒Ⅱ检测结果分析

目的：用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测我院不育门诊患者的单纯疱疹病毒Ⅱ（HSV-Ⅱ）感染情况.方法：用FQ-PCR对456例不育患者进行检测HSV-Ⅱ.结果：①256例不育患者单纯疱疹病毒Ⅱ阳性患者91例,阳性率19 91%,其中男性患者阳性率27.00%（64/237）,女性患者12.32%（27/219）,男性患者与女性患者的发病率比较,差异有统计学意义（P〈0.05）.②各个年龄段患者即〈25岁,25～40岁,＞40岁阳性率分别为12.50%（1/16）,22.02%（85/386）,9.26%（5/54）,三个年龄段患者发病率比较,差异具有统计学意义（P〈0.05）.结论：不育患者中HSV-Ⅱ感染率高,且男性检出率高于女性;FQ-PCR在检测单纯疱疹病毒中具有快速、准确、简便等优点,可以广泛应用于临床检测.     

夏枯草多糖及凝胶抗单纯疱疹病毒的药效学研究

目的：探究夏枯草多糖及凝胶在体外和体内条件下的抗单纯疱疹病毒作用,为抗疱疹病毒新药研究提供科学依据。方法：本研究采用空斑减数法检测夏枯草多糖的体外抗单纯疱疹病毒（Herpes Simplex Virus,HSV）活性;同时,建立HSV-1（皮肤）和HSV-2（外阴部）病毒感染豚鼠模型,以病灶病变情况、丘疱疹数、典型病变评分结果以及病灶组织中HSV-1和HSV-2病毒的DNA拷贝数等为指标,对夏枯草多糖凝胶的体内抗HSV活性进行评价。结果：夏枯草多糖在体外实验中能够抑制HSV-1和HSV-2的活性;夏枯草多糖凝胶能够削弱HSV-1和HSV-2病毒感染豚鼠的病灶病变,发挥抗单纯疱疹病毒活性。结论：夏枯草多糖及凝胶在体外和体内实验中均具有抗单纯疱疹病毒的活性,具有开发成为抗单纯疱疹病毒药物的潜在价值。     

马齿苋提取物体外抗Ⅱ型单纯疱疹病毒的活性评价

目的利用体外细胞培养技术初步筛选马齿苋抗Ⅱ型单纯疱疹病毒（HSV-2）的有效部位。方法以选择性指数（Selectivity-Index,SI）为活性评价指标,通过细胞毒实验及抗病毒活性评价实验,对马齿苋的不同提取部位进行了体外抗HSV-2病毒活性的筛选研究。结果马齿苋50%乙醇提取部位显示了潜在的抗HSV-2病毒活性,IC50值为120μg/mL,SI值为15;水提取物以醋酸纤维素膜分离后的粗多糖部位则显示了较强的抗HSV-2病毒活性,IC50值为55μg/mL,SI值为34。结论马齿苋抗HSV-2病毒活性成分为多糖类成分。     

456例不育患者单纯疱疹病毒Ⅱ检测结果分析

目的:用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测我院不育门诊患者的单纯疱疹病毒Ⅱ(HSV-Ⅱ)感染情况.方法:用FQ-PCR对456例不育患者进行检测HSV-Ⅱ.结果:①256例不育患者单纯疱疹病毒Ⅱ阳性患者91例,阳性率19 91%,其中男性患者阳性率27.00%(64/237),女性患者12.32%(27/219),男性患者与女性患者的发病率比较,差异有统计学意义(P<0.05).②各个年龄段患者即<25岁,25～40岁,＞40岁阳性率分别为12.50%(1/16),22.02%(85/386),9.26%(5/54),三个年龄段患者发病率比较,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:不育患者中HSV-Ⅱ感染率高,且男性检出率高于女性;FQ-PCR在检测单纯疱疹病毒中具有快速、准确、简便等优点,可以广泛应用于临床检测.     

盐酸小檗碱体外抗单纯疱疹病毒1型的作用及机制研究

目的:探讨盐酸小檗碱体外抗单纯疱疹病毒1型(HSV-1)的作用及作用机制。方法:MTT法检测盐酸小檗碱对Vero细胞的毒性作用,观察HSV-1感染Vero细胞后所致的细胞病变效应(Cytopathologic effects,CPE),实时荧光定量PCR法检测盐酸小檗碱对病毒蛋白gD的mRNA表达水平,免疫印迹(Western blot)法检测盐酸小檗碱对病毒蛋白ICP27和ICP8表达的影响。结果:盐酸小檗碱半数中毒浓度(TC50)为392.5μmol/L,病毒半数抑制浓度(IC50)为66.49μmol/L,选择性指数(SI)为5.9。实时荧光定量PCR结果显示盐酸小檗碱可降低HSV-1 gD的mRNA表达水平。Western blot显示盐酸小檗碱可明显抑制病毒蛋白ICP27和ICP8的表达。结论:盐酸小檗碱具有抗HSV-1的作用,可能与抑制病毒蛋白ICP27的表达进而影响ICP8和gD的表达有关。     

细胞凋亡在小鼠单纯疱疹病毒I型心肌炎中的作用

目的：探讨小鼠单纯疱疹病毒I型心肌炎细胞凋亡与TGF—β1表达的关系。方法与结果：通过给BALB／C小鼠腹腔接种单纯疱疹病毒I型（HSV-1）诱发病毒性心肌炎（VMC），感染病毒3-35d，病毒性心肌炎（VMC）检出率为91．67％。应用原位末端标记法（TUNEL）及免疫组化技术检测发现：78．33％感染病毒鼠心肌中发现凋亡细胞，71．67％有TGF—B．的表达，二者之间分布区域一致。结论：细胞凋亡可能参与HSV-1诱导的VMC的发生、发展，而TGF—β1可能参与VMC细胞凋亡的调控。     

唇疱疹分离无环鸟苷耐受HSV1株的发生率和分子鉴定

目的：检测120名门诊口腔科唇疱疹患者分离的无环鸟苷（ACV）耐受HSV-1毒株的发生率和分子鉴定。方法：采用病毒培养,实时定量PCR和基因测序分析这些临床分离株。结果：分离到无环鸟苷耐受毒株为6株（6／120=5％）在6份ACV耐受毒株中,TK基因发生突变,这可能与ACV耐受相关。结论：本研究表明唇疱疹患者中存在ACV耐受毒株,对于难于治疗的患者有必要检测毒株对ACV的敏感性。     

朱砂七抗Ⅱ型单纯疱疹病毒的体外研究

目的:研究朱砂七粗提物和总蒽醌体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-Ⅱ)的作用。方法:运用单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-Ⅱ),以非洲绿猴肾细胞(Vero)作为宿主细胞,通过三种给药方式观察感染病毒后的细胞变性反应(CPE)和MTT比色法,检测不同浓度朱砂七粗提物和总蒽醌对Ⅱ型单纯疱疹病毒的直接杀灭、预防和阻止复制作用。结果:朱砂七粗提物和总蒽醌能抑制HSV-Ⅱ病毒的复制,但无预防和直接杀灭作用,朱砂七粗提物抑制HSV-Ⅱ病毒复制IC50为0.1008 mg/ml,治疗指数(TI)为6.2;总蒽醌抑制HSV-Ⅱ病毒复制IC50为0.0067mg/ml,治疗指数(TI)为11.66。结论 :朱砂七粗提物和总蒽醌在体外具有明显的保护宿主细胞抵抗HSV-Ⅱ病毒复制的作用。     

喜树碱通过抑制HSV-1复制相关基因的表达发挥抗HSV-1作用

目的探讨喜树碱体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)的作用及其机制。方法不同浓度的喜树碱作用于HSV-1感染的Vero细胞后,采用细胞病变(cytopathologic effects,CPE)法评价喜树碱体外抗HSV-1的作用,计算喜树碱半数毒性浓度(TC_(50))、病毒半数抑制浓度(IC50)及治疗指数(TI),并通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测喜树碱对HSV-1相关基因m RNA表达的影响。结果喜树碱的TC_(50)为2 153.44 nmol/L,IC_(50)为43.01 nmol/L,TI为50.07。RT-qPCR结果显示,喜树碱能明显抑制HSV-1 UL12、UL42、UL54、TK基因的表达,其抑制作用与喜树碱浓度呈剂量依赖关系。结论喜树碱具有明显抗HSV-1的作用,能抑制HSV-1 UL12、UL42、UL54、TK基因的转录。     

绿原酸体外抗单纯疱疹病毒作用

目的：研究绿原酸对单纯疱疹病毒Ⅰ型（HSV-1）的体外抑制作用。方法：采用细胞培养技术，通过绿原酸预处理对病毒的抑制作用、病毒感染细胞同时使用绿原酸和预先使用绿原酸再感染病毒3种给药方法，利用生物显微镜观察幼仓鼠肾细胞（BHK-21）发生病变的情况及观察实验组与病毒对照组病毒感染的滴度。结果：绿原酸在BHK-21细胞上具有明显的抗病毒作用，绿原酸对病毒的最小有效浓度（MIC）为1．0μg·mL^-1，而且毒性低，最大无毒浓度（TD0）为200μg·mL^-1，其治疗指数（TI）为200；绿原酸浓度1μg·mL^-1预处理细胞24h以上能有效抑制病毒感染；绿原酸对HSV-1病毒无直接杀伤作用。结论：绿原酸在体外实验中对HSV-1感染具有明显的抗病毒作用，且能有效预防病毒感染的作用，但对病毒无直接杀死作用。     

余甘子提取物体外抗单纯疱疹病毒1型和2型的初步研究

目的 从余甘子的醋酸乙酯提取物、甲醇提取物和水提物3种提取物体外筛选抗单纯疱疹病毒1型和2型的活性成分.方法 通过观察药物毒性、病毒引起的细胞病变效应、空斑减数法,判断药物的毒性及其抗病毒效应.结果 余甘子的醋酸乙酯提取物、甲醇提取物和水提物对于单纯疱疹病毒1型的半数抑制浓度分别为25.28,66.17,100.94 μg/ml;余甘子的3种提取物对于单纯疱疹病毒2型的半数抑制浓度分别为31.70,180.3,112.1 μg/ml.结论 余甘子3种提取物在体外对单纯疱疹病毒1型和2型均有一定的抑制作用.     

西藏紫金标抗HSV-1的作用及其分子机制的研究

 目的探讨紫金标抗单纯疱疹Ⅰ型病毒(HSV-1)的分子机制,为进一步开发该药提供理论依据。方法采用不同剂量的紫金标作用于适量HSV-1感染的Vero细胞,以50%组织细胞感染量(TCID₅₀),细胞病变效应(CPE),蚀斑形成单位(PFU)为评价指标,采用CsCl密度梯度离心,RT-PCR,Western Blot以及扫描电镜和透射电镜为研究手段。结果紫金标无直接灭活HSV-1的作用,也不能影响病毒的释放;但可干扰HSV-1对宿主细胞的吸附,选择性地抑制HSV-1DNA及蛋白质合成,不同浓度的紫金标能明显抑制HSV-lgD基因mRNA表达。结论紫金标能抑制HSV-1对宿主细胞的吸附选择性地抑制HSV-1DNA及蛋白质合成,抑制HSV-1gD基因转录。     

清咽滴丸抗常见呼吸道病毒的实验研究

 目的 研究清咽滴丸对呼吸道常见病毒的抑制作用。方法 应用MTT方法,检测清咽滴丸对单纯疱疹病毒（HSV-1）和腺病毒（ADV11）的直接抑制作用、侵入细胞的抑制作用。应用鸡胚培养法,检测清咽滴丸体外灭活流感病毒的作用。建立ICR小鼠感染流感病毒模型,观察并记录小鼠的死亡情况,检测肺指数、肺脏病理改变及T、B淋巴细胞增殖情况和脾指数。结果 ①清咽滴丸对HSV-1和ADV11有直接抑制作用并且可抑制其侵入细胞。②鸡胚实验结果显示,清咽滴丸具有明显体外灭活病毒的作用。③动物实验结果显示,清咽滴丸不能降低动物的死亡率,但却可明显延长其平均存活时间;对肺脏有较好的抗炎作用;有刺激免疫细胞增殖,调节机体免疫功能的作用。结论 清咽滴丸有明确的体外灭活病毒和一定的抗流感病毒鼠肺适应株（FM1）和调节机体免疫力的作用。在抗HSV-1和ADV11实验中,表现出确切的直接抑制作用和阻断病毒侵入细胞的作用。     

藏药甘青乌头抗单纯疱疹病毒Ⅱ型体内外作用研究

 目的探讨藏药甘青乌头抗单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)的作用和机制。方法MTT法测定甘青乌头对Vero细胞的毒性,采用细胞病变法和蚀斑法测定甘青乌头体外抗病毒活性,以半数抑制浓度和治疗指数为评价指标;定量荧光PCR法和蚀斑法考察甘青乌头体外抗病毒作用机制。用HSV-2建立小鼠脑炎模型,对甘青乌头体内抗单纯疱疹病毒的抗病毒活性进行评价。结果甘青乌头对Vero细胞的半数中毒浓度(CC₅₀)为5.57 g·L^-1。细胞病变法和蚀斑法测得甘青乌头的半数有效浓度(EC₅₀)分别为2.25,1.68 g·L^-1,治疗指数TI分别为2.47,3.32。LD₅₀值为0.85 g·kg^-1。甘青乌头延长了小鼠的平均存活时间,对小鼠的死亡显示出10%的保护率。甘青乌头能直接灭活HSV-2,能够显著抑制HSV-2的感染性;对病毒吸附到细胞没有抑制作用,能抑制HSV-2大分子的增值。抑制HSV-2 DNA合成的抑制倍数达102。结论甘青乌头体外具有较强的抗HSV-2的活性,抗病毒作用是通过抑制病毒复制循环的各个环节起作用的。     

三白草抗单纯疱疹病毒作用及机制

目的:病毒复制需要宿主细胞参与,包括信号通路的激活,本研究以病毒复制所需信号通路为靶点,寻找抑制单纯疱疹病毒(HSV-2)感染的有效药物。方法:观察HSV-2感染引起的Vero细胞病变效应(CPE),用MTT法检测细胞活性,评价三白草水提物冻干粉抗病毒能力;以免疫印迹法检查HeLa细胞中三白草水提物对HSV-2病毒诱导的信号通路的作用。结果:三白草水提物可以明显抑制HSV-2感染引起的CPE和病毒复制所需的NF-κB通路的活化。水提物(冻干粉)在0.10,0.03,0.01,0.003 g.L-1时对HSV-2平均抑制率分别为(70.68±3.39)%,(61.74±2.13)%,(39.31±1.10)%,(18.54±3.44)%;IC50为(0.023±0.004)g.L-1,而阳性对照阿昔洛韦100%抑制浓度为0.001 g.L-1(5.0×10-6mol.L-1);最佳药物添加时间为感染前2 h至感染后6 h之间。免疫印迹试验发现三白草水提物可以明显抑制HSV-2诱导的NF-κB核转移。结论:三白草水提物可以抑制HSV-2病毒复制,其机制与抑制病毒复制所需的NF-κB通路活化有关。     

Antiherpetic activities of acidic protein bound polysacchride isolated from Ganoderma lucidum alone and in combinations with interferons

To investigate antiherpetic activity, an acidic protein bound polysaccharide (APBP) was isolated from carpophores of Ganoderma lucidum. This brownish APBP was isolated from water soluble substances of the carpophores by activity-guided isolation method. APBP was tested for its antiviral activity against herpes simplex virus type 1 (HSV-1) and type 2 (HSV-2) by plaque reduction assay in tissue culture. APBP showed potent antiviral activity against HSV-1 and HSV-2 in Vero cells at its 50% effective concentration (EC(50)) of 300 and 440 microg/ml, respectively. APBP had no cytotoxicity on Vero cells at a concentration of 1x10(4) microg/ml. APBP exhibited a potent antiviral activity with selectivity index (SI) of more than 22.73. The combined antiherpetic effects of APBP with protein antiviral agents, interferon alpha (IFN alpha) and interferon gamma (IFN gamma), were examined on the multiplication of these two strains of herpesviruses in Vero cells by the combination assay. The results of combination assay were evaluated by the combination index (CI) that was calculated by the multiple drug effect analysis. The combinations of APBP with IFN alpha on HSV-1 and HSV-2 showed more potent synergistic effects with CI values of 0.30-0.62 for 50-90% effective levels than those of APBP with IFN gamma with CI values of 0.65-1.10. These results suggest the possibility of developing APBP as a new antiherpetic agent.     

Antiherpetic activities of acidic protein bound polysacchride isolated from Ganoderma lucidum alone and in combinations with acyclovir and vidarabine

To investigate antiherpetic activity, an acidic protein bound polysaccharide (APBP) was isolated from carpophores of Ganoderma lucidum. This brownish APBP was isolated from water soluble substances of the carpophores by activity-guided isolation method. APBP was tested for its antiviral activity against herpes simplex virus type 1 (HSV-1) and type 2 (HSV-2) by plaque reduction assay in tissue culture. APBP showed potent antiviral activity against HSV-1 and HSV-2 in Vero cells at its 50% effective concentration (EC(50)) of 300 and 440 microg/ml, respectively. APBP had no cytotoxicity on Vero cells at a concentration of 1 x 10(4) microg/ml. APBP exhibited a potent antiviral activity with selectivity index (SI) of more than 22.73. The combined antiherpetic effects of APBP with nucleoside antiherpetic agents, acyclovir (ACV) and vidarabine (ara-A), were examined on the multiplication of these two strains of herpesviruses in Vero cells by the combination assay. The results of combination assay were evaluated by the combination index (CI) that was calculated by the multiple drug effect analysis. CI values were in the range 0.47-0.51 for a combination of APBP with ACV, and in the range of 1.02-1.18 for a combination of APBP with ara-A. The combinations of APBP with ACV on HSV-1 and HSV-2 showed potent synergistic effects, and these results suggest that the possibility of developing APBP as a new antiherpetic agent.     

藏药紫金标抗HSV-1的作用机理研究

目的 :探讨紫金标抗单纯疱疹Ⅰ型病毒 (HSV-1)的作用及机理 ,为进一步开发该药提供理论依据。方法 :采用不同剂量的紫金标作用于适量HSV-1感染的Vero细胞 ,以 50%组织细胞感染量 (TCID₅₀ ) ,细胞病变效应(CPE) ,MTT法和核酸分子杂交作为评价指标。结果 :MTT法测得紫金标的 50 %抑制浓度 (IC₅₀ )为 29.46mg·L^-1,50%中毒浓度 (TC₅₀ )为 1 077mg·L^-1,治疗指数 (TI)为 36.56 ,结果表明紫金标有明显抑制HSV-1的作用 ,其作用强度和有效时间与药物浓度成正比。紫金标无直接灭活HSV-1的作用 ,也不能影响病毒的释放 ;但可干扰HSV -1对宿主细胞的吸附。不同浓度的紫金标能明显抑制HSV-1gD基因复制和mRNA表达。结论 :紫金标具有显著的抗HSV-1的作用 ,能抑制HSV-1对宿主细胞的吸附以及抑制HSV-1gD基因复制与转录。     

千金藤素抗单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)初探

目的:体外测定千金藤素抗单纯疱疹病毒Ⅰ型的作用,为筛选新型抗病毒药物提供参考依据.方法:用不同稀释度的千金藤素抑制单纯疱疹病毒Ⅰ型对Vero细胞的感染作用,48 h后观察细胞病变(CPE)效应.结果:千金藤素能明显抑制HSV-1对Vero细胞的致病变作用,使细胞存活率升高.结论:千金藤素有较显著的抗HSV-1的作用,且抗病毒作用是多方面的,是一种具有潜在开发前景的药物.