抗人蛋白酶激活受体4单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备抗人蛋白酶激活受体4(PAR4)单克隆抗体(mAb).方法:以hPAR4为免疫原免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备抗PAR4 mAb.采用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定mAb的Ig类型,采用ELISA、点杂交、免疫组化染色法(人结肠、扁桃体及包皮组织)、流式细胞术、激光共聚焦显微镜(CLSM)技术鉴定mAb的特异性.结果:获得3株可稳定分泌抗PAR4 mAb的杂交瘤细胞,其分泌的mAb均为IgM.免疫组化染色表明,mAb将人结肠组织中的腺上皮细胞、疑似肥大细胞和淋巴细胞,扁桃体组织中的淋巴细胞和包皮组织中的肥大细胞染成褐色.流式细胞术分析显示,3株mAb与A549细胞的PAR4均呈阳性反应.CLSM观察发现,荧光标记的阳性反应物主要位于A549细胞的胞质和胞膜上.结论:成功制备了抗PAR4 mAb,为进一步的研究工作提供了有用的试剂.     

烯酰辅酶A水合酶单克隆抗体的制备与鉴定

目的 制备抗人烯酰辅酶A水合酶(ECH1)的单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定.方法 将正常成人肝组织匀浆离心并分离线粒体,用线粒体总蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备mAb.并通过问接ELISA法、Western blotting及免疫组化的方法对mAb进行特性鉴定,通过免疫沉淀联合质谱、Uni-ZAP XR表达文库筛选鉴定抗原.结果 获得1株可稳定分泌抗人ECH1 mAb的杂交瘤细胞系.mAb的Ig亚类(型)为IgG1(K),该mAb可用于EUSA检测、Western blotting、免疫组化和免疫沉淀实验.结论 成功制备了抗人ECHI的mAb,为ECH1的研究提供了有力的工具.     

抗人蛋白酶激活受体3单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备并鉴定抗人蛋白酶激活受体3(PAR3)单克隆抗体(mAb).方法:以人PAR3为免疫原免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备抗PAR3 mAb.采用捕获ELISA法鉴定mAb的Ig亚类;通过ELISA、流式细胞分析、激光共聚焦显微镜技术、免疫组织化学染色法、斑点杂交技术鉴定mAb的特异性.结果:获得2株可稳定分泌抗人PAR3 mAb的杂交瘤细胞,其分泌的mAb均为IgM.斑点杂交技术分析表明,其mAb能与PAR3抗原有效结合.免疫组织化学染色表明,mAb与肺组织中的巨噬细胞、结肠组织中的淋巴细胞及疑似肥大细胞、扁桃体和包皮组织中的淋巴细胞的反应呈阳性.流式细胞仪分析及激光共聚焦显微镜观察显示,2株mAb与人肺腺癌A549细胞胞内及膜上的PAR3均呈阳性反应.结论:成功地制备抗PAR3 mAb,为变态反应性和炎症性疾病的研究提供了有用的试剂.     

改良的免疫电镜胶体金技术

过碘酸结合乙二胺四乙酸(ＥＤＴＡ)代替双氧水(Ｈ2Ｏ2)和氚核(Ｔｒｉｔｏｎ)Ｘ-100应用于免疫电镜超薄切片的处理,改善了免疫胶体金标记的条件,提高了免疫胶体金标记技术的敏感性和特异性。利用改良的方法对人肺癌细胞内谷胱甘肽硫转移酶胎盘型(ＧＳＴｐｉ)和小鼠子宫内膜细胞内碱性成纤维细胞生长因子(ｂＦＧＦ)、层粘连蛋白(ＬＮ)和纤维粘连蛋白(ＦＮ)分别进行免疫金标记观察,结果良好。1　材料与方法11　材料　人肺癌组织由外科手术切除提供。小鼠阳性模型组织由本室提供。兔抗人ＧＳＴｐｉ抗体,兔抗小鼠ＬＮ抗体、兔抗小鼠ＦＮ抗体和羊…     

抗人白介素-28A单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备抗人白介素-28A（hIL-28A）单克隆抗体（mAb）。方法以hIL-28A融合蛋白为免疫原免疫BALB／c小鼠，运用杂交瘤技术制备抗hIL-28A mAb。采用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定mAb的Ig亚类，通过ELISA、Western blot、免疫组化染色法、流式细胞分析、激光共聚焦显微镜技术鉴定mAb的特异性。结果获得2株稳定分泌抗hIL-28A mAb的杂交瘤细胞，但2株mAb均与hIL-29有弱交叉反应。2株mAb的类别均为IgM。Western blot分析表明，此mAb所识别的靶分子的相对分子质量（Mr）约为19000。免疫组化染色表明，mAb与包皮和肺组织中的上皮细胞、结肠组织中的疑似巨噬细胞呈阳性反应。流式细胞仪分析显示，2株mAb与人脐静脉内皮细胞系HUVEC细胞的反应均呈阳性。激光共聚焦扫描显微镜观察到荧光标记的阳性反应物主要位于HUVEC细胞胞浆内。结论成功地制备抗hIL-28A mAb，为病毒感染性疾病、肿瘤和其他疾病的研究提供新的手段。     

抗人转铁蛋白受体单克隆抗体增强姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌的抑制效应

目的检测抗人转铁蛋白受体单克隆抗体(TfR mAb)对雄激素非依赖性前列腺癌细胞生物学行为的影响,了解抗人TfR mAb对姜黄素抗瘤作用的协同效应。方法利用杂交瘤细胞株制备抗人TfR mAb,分别采用CFSE染色、AnnexinⅤ-PI染色和PI染色法流式细胞仪检测抗人TfR mAb对PC-3细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。采用FITC标记的鼠抗人TfR mAb检测姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞表面TfR表达的影响。采用流式细胞仪进一步检测抗人TfR mAb联合姜黄素对PC-3细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。结果抗人TfR mAb对PC-3细胞增殖、凋亡和细胞周期无明显影响(均P>0.05)。姜黄素能够显著上调雄激素非依赖性前列腺癌细胞表面TfR表达(P<0.05)。抗人TfR mAb可显著增强姜黄素对PC-3细胞凋亡的诱导作用(P<0.05),而不影响姜黄素对PC-3细胞增殖和细胞周期的影响(均P>0.05)。结论姜黄素可导致雄激素非依赖性前列腺癌细胞表面TfR表达增高。抗人TfR mAb单独作用对雄激素非依赖性前列腺癌细胞的生物学行为无显著影响,但抗人TfR mAb可以增强姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞的凋亡效应。     

夹心ELISA法快速检测肝病患者血清中金属蛋白酶组织抑制剂-1

目的：建立一种快速检测肝病患者血清基质金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）的双抗体夹心ELISA，了解血清TIMP-1的水平与肝纤维化病程进展程度的关系．方法：以不同浓度的抗人TIMP-1单克隆抗体（mAb）为包被抗体，加入待测抗原以及辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗TIMP-1mAb作为标记抗体进行方阵滴定，建立双抗体夹心ELISA，并用于临床检测408例肝病患者血清TIMP-1的水平．结果：方阵滴定的结果表明包被抗体浓度为1mg／L，血清稀释倍数1：100，HRP标记mAb的最佳工作浓度为1：400．     

血管内皮生长因子在人食管癌中的表达和临床意义

目的 :研究血管内皮生长因子 (VEGF)在人食管癌中的表达及其临床意义。方法 :对 72例食管鳞癌患者手术切除标本 ,10例正常食管组织 ,应用免疫组织化学技术 ,抗VEGF单克隆抗体检测VEGF的表达 ,抗CD34单克隆抗体测定组织微血管密度 (MVD)。结果 :VEGF在 4 0例 (5 5 .6 % )食管鳞癌中阳性表达 ,而正常食管组织不表达 ;食管鳞癌组织MVD为 6 7.5± 2 7.6 ,正常食管组织MVD为 2 9.9± 9.4 ,两者之间有显著性差异 (P <0 .0 1) ;VEGF评分为高级的食管鳞癌组织MVD高于VEGF评分为阴性和低级的食管鳞癌组织(P <0 .0 1) ,MVD与VEGF的表达呈正相关 (P <0 .0 1) ;VEGF的表达和MVD值在淋巴结转移组显著高于无淋巴结转移组 (P <0 .0 1)。结论 :VEGF在食管鳞癌组织表达且与肿瘤血管形成有关 ;VEGF的表达和MVD与食管鳞癌的淋巴结转移密切相关 ,可作为术前治疗方案的选择和确定手术范围的重要指导因子     

肝切除治疗肝胆管结石的临床体会

目的 评价肝切除术在肝胆管结石治疗中的作用。方法 报告1989年3月-2003年9月采用肝切除术治疗179例肝胆管结石患者的手术方式、术后并发症和随访情况。结果 肝切除以左肝叶(段)切除为主148例(82．7％)，右肝叶(段)切除18例(10．1％)，多段切除4例(2．2％)，肝方叶切除作为附加术式9例(5．0％)；手术并发症35例(19．6％)，包括暂时性胆瘘、肝断面及膈下感染、胆道出血等；死亡3例(1．7％)。156例(87．2％)获3月-17年的随访，优良率91．7％。结论 肝叶段切除手术是治疗肝胆管结石的有效方法。     

人冠状病毒SARS-CoV、229E和OC43核衣壳(N)蛋白单克隆抗体的制备及3株人冠状病毒N蛋白的抗原相关性观察

目的 通过制备和鉴定人冠状病毒SARS．CoV、229E和OC43核衣壳（N）蛋白单克隆抗体〈mAb），观察3株人冠状病毒的N蛋白抗原相关性。方法 分别用基因重组SARS．CoV、229E和OC43N蛋白免疫BALB／c小鼠，制备mAb，并采用ELISA间接法、免疫印迹和免疫荧光进行筛选和鉴定．同时用mAb分析3株人冠状病毒N蛋白之间的免疫交叉反应。结果 获得多株抗SARS．CoV、229E和OC43N蛋白mAb杂交瘤细胞株。ELISA间接法、免疫印迹和免疫荧光结果均显示，所有的mAb仅与各自病毒的N蛋白特异性反应。而在3株人冠状病毒N蛋白抗原之间不产生免疫交叉反应。结论 获得的特异性抗人冠状病毒N蛋白mAb为进一步研究3株人冠状病毒的抗原决定簇相关性奠定了基础。