慢性阻塞性肺疾病患者外周血单个核细胞中TLR3、TLR7、TLR8及TLR9 mRNA的表达

目的观察慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者外周血单个核细胞中TLR3、TLR7、TLR8及TLR9mRNA的表达。方法用密度梯度离心法分离COPD患者和健康人外周血单个核细胞后,提取总RNA并逆转录为cDNA,用实时定量PCR检测TLR3、TLR7、TLR8及TLR9mRNA的拷贝数。结果COPD患者外周血单个核细胞的TLR3和TLR9mRNA表达较正常健康人明显增高(P<0.05),而TLR7和TLR8mRNA的表达在COPD患者和正常健康人之间却无显著差异(P>0.05)。在COPD患者中,急性期和稳定期患者的TLR3、TLR7、TLR8和TLR9无显著差异(P>0.05)。结论TLR3和TLR9的升高可能是COPD患者对病毒敏感性增高的一个重要机制。     

人CD7 cDNA在HEK293细胞中的表达

目的 建立表达人白细胞分化抗原CD7蛋白的哺乳动物细胞模型,为深入研究CD7的功能奠定基础。方法 采用PCR方法扩增CD7 cDNA,将目的片段定向克隆于真核表达载体pcDNA3,限制性内切酶酶切分析重组质粒并进行序列测定;通过电穿孔法将重组真核表达载体pcDNA3/CD7转染于人胚肾293细胞（HEK293）,经G418筛选得到抗性克隆;利用FCM检测CD7分子在HEK293细胞的表达。结果 得到了含CD7全长cDNA的重组真核表达载体pcDNA3/CD7。FCM分析表明：转染了pcDNA3/CD7的HEK293细胞表达人CD7蛋白。结论 为深入研究CD7的作用机制提供了条件。     

门诊治疗焦虑性心理障碍3例报道

焦虑性障碍是指以病理焦虑情绪为主要临床相的神经症,临床常见的包括:广泛性焦虑症、惊恐障碍、恐怖症、强迫症,以及以慢性焦虑状态为主的创伤后应激障碍,在DSM-IV中统称为焦虑性障碍.一般认为,对于焦虑性障碍,认知行为治疗和药物治疗是两种主要的、经研究证实有效的治疗方法.不过这两种方法都存在不足.大量的随机对照随访研究证实了认知行为治疗的近期和远期疗效,但是认知行为治疗需要大量经严格培训过的心理治疗师,对心理治疗师个人的要求也高,并且需要较长的心理治疗时间.药物治疗的近期疗效尚令人满意,但停药后复发率非常高.临床治疗的策略通常是延长治疗时间,逐渐停药.也就是说,心理治疗和药物治疗都具有治疗焦虑性障碍的有效性和局限性.因此,现在的趋势是联合认知行为治疗和药物治疗,以期达到最佳的临床疗效.本文提供笔者在心理门诊治疗过的三个个案,就焦虑性障碍在门诊治疗中的疗效进行探讨.     

甲氨喋呤在非肿瘤疾病中的新用途

甲氨喋呤(MTX)为叶酸对抗剂,临床上多用于治疗急性白血病、绒癌、恶性葡萄胎、头颈部肿瘤、原发性肝癌等。20世纪60年代MTX开始较广泛地应用于非肿瘤疾病,70年代已证实MTX是治疗牛皮癣和牛皮癣关节炎的有效药物。近年来,国外已有应用MTX治疗类风湿性关节炎(RA)的报道,国内报道很少,现将其新用途综述如下: 1 治疗类风湿性关节炎从20世纪50年代起,甲氨喋呤首先在治疗银屑病关节炎方面获得了较好的效果。     

加强实验室管理避免微生物实验教学中病原微生物的感染与扩散

医学微生物学实验是一门重要的临床基础实验课。通过实验来验证理论，加深对理论知识的理解，在巩固理论知识的同时，掌握医学微生物学实验的基本技能，培养严格的科学态度及分析问题和解决问题的能力，为临床诊断与科学研究打下良好的基础。     

脊髓灰质炎疫苗相关病例发生率及其影响因素研究进展

脊髓灰质炎减毒活疫苗(OPV)的研制成功,为控制全球脊髓灰质炎爆发流行发挥了不可估量的作用,并在当前全球消灭脊髓灰质炎中作为首选疫苗加以应用.尽管如此,随着全球消灭脊髓灰质炎的进展,由脊髓灰质炎野病毒引起的脊髓灰质炎麻痹病例越来越少,而减毒活疫苗致命的缺陷,及其引起的脊髓灰质炎疫苗相关病例(VAPP),越来越受到社会的关注,可以肯定的是在全球停止使用减毒活疫苗前,疫苗相关病例将持续存在.……     

LBP对LPS激活巨噬细胞内p38信号通路的影响 

目的:探讨脂多糖结合蛋白(LBP)对脂多糖(LPS)激活肺泡巨噬细胞内p38信号通路的调节作用。方法:经硫酸铵盐析、Bio-Rex70阳离子交换层析和MonoQ阴离子交换层析, 从大鼠急性期血清中分离纯化LBP。分别用0.01mg/L和1mg/L的LPS刺激肺泡巨噬细胞, 并加入不同浓度LBP(0mg/L、0.01mg/L、0.1mg/L、1mg/L和10mg/L), 观察肺泡巨噬细胞中p38蛋白激酶的磷酸化程度。结果:纯化的大鼠LBP在SDS-PAGE的60kD处呈现单一条带, 并可增强LPS与单核细胞的结合。当LPS浓度为0.01mg/L时, 1mg/L以下的LBP可明显增敏LPS对肺泡巨噬细胞内p38信号通路的激活, 并且这种增敏作用随LBP浓度的增加而增强。但LBP为10mg/L时, LBP对LPS的增敏作用反而有所减弱;当LPS为1mg/L时, LBP对LPS激活肺泡巨噬细胞内p38信号通路无调节作用。结论:LBP对低浓度LPS(0.01mg/L)激活肺泡巨噬细胞内p38信号通路有明显的调节作用;而高浓度LPS(1mg/L)不需LBP的增敏作用, 可能通过LBP非依赖途径直接激活p38信号通路。     

组胺对肺上皮细胞Toll样受体表达的上调作用

目的: 观察组胺对肺上皮细胞中Toll样受体(TLR)表达的影响. 方法: 体外培养人肺上皮细胞株A549,用RT-PCR和实时定量PCR检测静息状态或组胺作用下的A549细胞中TLR1～TLR10 mRNA的变化,并用流式细胞术进一步确定组胺对TLR3表达的调节作用. 结果: A549细胞有TLR1～TLR10 mRNA的组成型表达,组胺对TLR3 mRNA和蛋白的上调作用具有时间和剂量依赖性,并且H1受体阻断剂可抑制组胺对TLR3的上调作用. 结论: 组胺可上调肺上皮细胞中TLR3的表达,提示当呼吸道存在变态反应性病变时,增多的组胺可能会增加肺上皮细胞对病毒感染的敏感性.     

抗人白介素-28A单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备抗人白介素-28A（hIL-28A）单克隆抗体（mAb）。方法以hIL-28A融合蛋白为免疫原免疫BALB／c小鼠，运用杂交瘤技术制备抗hIL-28A mAb。采用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定mAb的Ig亚类，通过ELISA、Western blot、免疫组化染色法、流式细胞分析、激光共聚焦显微镜技术鉴定mAb的特异性。结果获得2株稳定分泌抗hIL-28A mAb的杂交瘤细胞，但2株mAb均与hIL-29有弱交叉反应。2株mAb的类别均为IgM。Western blot分析表明，此mAb所识别的靶分子的相对分子质量（Mr）约为19000。免疫组化染色表明，mAb与包皮和肺组织中的上皮细胞、结肠组织中的疑似巨噬细胞呈阳性反应。流式细胞仪分析显示，2株mAb与人脐静脉内皮细胞系HUVEC细胞的反应均呈阳性。激光共聚焦扫描显微镜观察到荧光标记的阳性反应物主要位于HUVEC细胞胞浆内。结论成功地制备抗hIL-28A mAb，为病毒感染性疾病、肿瘤和其他疾病的研究提供新的手段。