血卟啉衍生物-癌胚抗原单抗偶联物抗肿瘤特性的研究

目的 研究血卟啉衍生物－癌胚抗原单抗偶联物对表达癌胚抗原（CEA）的肿瘤细胞的特异性杀伤作用。方法 将血卟啉衍生物（HPD）与一种癌胚抗原单克隆抗体－C50单抗，通过碳二亚胺（EDCI）偶联，制备HPD－C50单抗偶联物。以表达CEA的SW1116细胞株和不表达CEA的Hep-2 细胞株用MTT法进行体外肿瘤细胞的杀伤实验。结果 被鉴定偶联物的免疫活性与标准单抗差异无显著性（P＞0．01）。偶联物较游离HPD对表达CEA的肿瘤细胞杀伤效果明显增强（P＜0．05）；显微镜下可见CEA阳性细胞死亡，对非表达CEA细胞，二者的作用无明显差异。对各摩尔比的偶联物进行测定，发现摩尔比为66：1时，杀伤效果最好，其HPD的半数杀伤浓度＜2．2μg/ml。结论 HPD－C50单抗免疫偶联物可特异性地杀伤CEA阳性细胞。     

抗CEA单抗-天花粉蛋白偶联物的研制及活性鉴定

应用SPDP化学偶联法,将天花粉蛋白通过二硫键交联与抗CEA单抗制备成免疫毒素,经Sepbadex G-150凝胶过滤和Blue Sepharose-4B离子梯度交换层析纯化,电泳鉴定显示这一免疫毒素纯度高,偶联蛋白克分子比合理。应用间接免疫荧光染色技术和ELISA法测定结果证明,其与CEA人结肠癌细胞(LoVo)具有特异结合反应,仍保留大部份原抗体活性。具有较好的导向性。体外毒性试验结果表明,免疫毒素对靶细胞(LoVo)有选择性的杀伤作用,50％细胞毒剂量(I.C50)为10~(-9)范围,比单用天花粉蛋白和天花粉蛋白与正常小鼠IgG-偶联物对靶细胞杀伤能力分别增强约150倍和2000倍,而对实验对照细胞(Hela)杀伤无增强作用。     

NK细胞对不同人肝癌细胞株的杀伤作用

目的: 观察自然杀伤(NK)细胞对不同肝癌细胞株的体内外抑瘤作用,并检测肝癌细胞MHC-I类链相关蛋白(MIC蛋白)的表达。方法: 抽取志愿者外周血50 mL,分离单个核细胞,置入NK细胞试剂盒行孵化及逐级扩增。计算NK细胞对人白血病细胞株K562及人肝癌细胞株BEL7402、HepG2、SMMC7721的杀伤率。接种建立人肝癌细胞株裸鼠移植瘤,进行NK细胞瘤内及瘤周注射;计算各组裸鼠移植瘤的体积,绘制各组肿瘤生长曲线;处死裸鼠,称瘤重,计算NK细胞对各组肿瘤抑制率。检测人肝癌细胞表面 MIC蛋白表达。结果: NK细胞对K562细胞杀伤最强,BEL-7402次之,SMMC-7721细胞株杀伤敏感性最低。裸鼠抑瘤实验结果显示NK细胞对于BEL-7402细胞株的抑瘤效果最好,而对于SMMC-7721细胞株的抑瘤效果较差。BEL-7402及HepG2细胞株表面表达MIC,而SMMC-7721则很少表达。结论: NK细胞对于不同人肝癌细胞株体内外抑瘤作用不同,其差异可能和不同肝癌细胞株MIC的表达有关。     

肝癌单抗—蓖麻毒素A链结合物的制备及其细胞毒性质

本文应用异型双功能基化合物SPDP与单克隆抗体反应,产生单克隆抗体-PDP,然后再与暴露巯基的RTA结合,制备肝癌单抗-RTA结合物。ELISA及毒素重组试验鉴定表明:结合物在10~(-9)mol/L浓度时与靶细胞仍有较好的结合能力,结合物中RTA保持良好活力。体外细胞毒结果表明:结合物对靶细胞具有良好的导向杀伤作用,在10~(-9)mol/L浓度时对人肝癌细胞株BEL7404的杀伤率为41.2％,对正常细胞SL_7的杀伤力很弱。     

双功能单抗介导CD3AK细胞对人原发性肝癌的杀伤作用

目的了解CD3AK细胞在双功能单抗介导下对人原发性肝癌(PLC)的杀伤作用.方法用二次杂交瘤方法制备得双功能单抗(GP95×CD3),将该单抗激活人淋巴细胞,分别测定后者对PLC细胞的体内外杀伤效应.结果GP95×CD3能显著提高T细胞与癌细胞的结合率,对靶细胞的杀伤具有较强的特异性.体外试验明显增加细胞毒效应,裸鼠体内试验具有显著抑制肝癌生长的作用.结论GP95×CD3在体内外均可介导CD3AK细胞对PLC的杀伤作用.     

半乳糖受体介导的c-myc反义核酸对人肝癌细胞 增殖的抑制作用

目的：探讨半乳糖(Gal)-聚乙烯亚胺(PEI)-c—mye反义寡核苷酸(ASODN)交联复合物对人肝癌细胞增殖的影响。方法：Gal—PEI—ASODN复合物作用于人肝癌Bel-7402细胞，台盼蓝染色法检测不同时间、不同浓度作用下细胞增殖的变化，倒置显微镜观察细胞形态，流式细胞仪分析细胞亚二倍体的百分率，透射电镜观察细胞超微结构的改变。结果：在0-96h的不同时间点，与ASODN组(含ASODN 20μmol／L)相比，Gal—PEI—ASODN复合物(含ASODN O.75μmol／L)明显抑制Bel-7402细胞的增殖，Gal—PEI—ASODN复合物的起效浓度更低，起效时间更短；不同浓度的单纯ASODN与Bel-7402细胞作用72h，测得ASODN的IC50为20．9μmol／L，而在半乳糖受体的介导下，ASODN与Bel-7402细胞作用48h，测得ASODN的IC50为0．294μmol／L，ASODN的抑制效果提高70．9倍；Gal—PEI—ASODN复合物与Bel-7402细胞作用48h，与单纯ASODN组相比，细胞亚二倍体百分率更高，并且电镜下可见明显的细胞凋亡形态。结论：半乳糖受体介导的投递系统可明显提高ASODN对Bel-7402细胞的增殖抑制效应。     

细胞因子调节人肝癌细胞ICAM-1分子的表达及其对CD3AK杀伤功能的影响

应用基因重组人干扰素α（IFN-α）、干扰素γ（IFN-γ）和肿瘤坏死因子（TNF）体外处理人肝癌细胞系H-7402,ABC-CELISA法检测各处理组和对照组细胞表面细胞间粘附分子-1（ICAM-1）的表达水平,用 LDH释放法观察CD3单克隆抗体活化的杀伤细胞（CD3AK）对各处理条件下H-7402细胞的杀伤活性。结果表明:经TNF,IFN-α处理的肿瘤细胞ICAM-1表达水平较对照组显著增高,同时对CD3AK细胞的杀伤敏感性亦显著增强,IFN-γ虽能够提高靶细胞ICAM-1分子的表达,但CD3AK的杀伤活性并未因此增强。抗ICAM-1和抗白细胞功能相关抗原LFA-1单抗能够有效地降低CD3AK对靶细胞的杀伤作用,并且能够阻断IFN-α、TNF对CD3AK细胞杀伤效应的促进作用。提示ICAM-1/LFA-1参与了CD3AK粘附杀伤肿瘤细胞过程,TNF、IFN-α的促杀伤效应与肿瘤细胞表面ICAM-1分子的表达水平升高有关。     

肝癌单克隆抗体HAb18-氨甲喋呤结合物的制备及其细胞毒作用的研究

本文报道肝癌单抗HAb18与氨甲喋呤结合物的制备方法及其选择性细胞毒作用。结果表明,在交联过程中,抗体与药物活性均较好保存,交联物对人肝癌靶细胞显示较强的选择性杀伤作用。     

肝癌Bel7402细胞HLA-E基因上调对NK细胞体外杀伤作用的影响

目的: 探讨肝癌Bel7402细胞人类白细胞抗原-E(HLA-E)基因上调对NK细胞体外杀伤作用的影响。方法: 体外构建Lentivirus/CMV/GFP-HLA-E慢病毒表达载体并转导肝癌Bel7402细胞,采用RT-PCR和Western blotting方法检测肝癌Bel7402细胞HLA-E基因mRNA水平和蛋白水平的表达,分析肝癌Bel7402细胞HLA-E基因上调及HLA-ABC抗体封闭靶细胞相应位点对NK细胞体外杀伤作用的影响。结果: Lentivirus/CMV/GFP-HLA-E重组慢病毒载体感染Bel7402细胞后不同时段(24 h、48 h、72 h、96 h)的HLA-E mRNA的表达明显上调,除在感染后24 h(P＜0.05)外,慢病毒过表达组在感染后48 h、72 h、96 h与Bel7402组比较,显著差异 (P＜0.01)。蛋白水平的表达亦明显上调:24 h、48 h、72 h、96 h外源性/内源性HLA-E吸光度比值与12 h比较显著差异 (P＜0.01)。未封闭的Bel7402组和Bel7402 Lenti HLA-E组比较,NK细胞的杀瘤活性差异显著(P＜0.05或P<0.01);封闭组和未封闭组比较,NK细胞的杀瘤活性差异显著(P＜0.05);Bel7402(封闭组) 和Bel7402 Lenti HLA-E(封闭组)比较,NK细胞的杀瘤活性有显著差异(P＜0.01)。结论: Lentivirus/CMV/GFP-HLA-E慢病毒表达载体能有效增加HLA-E的表达。NK细胞对HLA-E基因表达上调的Bel7402细胞的靶杀伤作用降低;抗HLA-ABC单抗封闭靶细胞相应位点后,NK细胞对靶细胞的杀伤能力普遍有所提高。     

γδΤ细胞、NK细胞及LAK的生物特性比较

目的通过体外分离、增殖培养获取 γδΤ细胞、NK细胞和 L AK细胞 ,并比较 3种细胞的抗肿瘤的生物学特性。方法收集用不同单抗分别包被粘附的细胞 ,通过 MACS细胞分选仪的分选 ,获取的细胞进行细胞增殖动力学、细胞表型、细胞杀伤活性的测定以及单抗阻断效应的分析。结果经 MACS分离得到的 γδΤ细胞 ,培养 2周后细胞数扩增 6 0 0～ 80 0倍 ,CD3、CD8和 γδ细胞表达阳性率分别是 72 .2 9%、5 8.0 2 %和 6 5 .98%。γδΤ细胞对 NK敏感细胞 K5 6 2以及 NK不敏感细胞 Raji和 XG- 7这 3种不同靶细胞均有较高的杀伤率 ,分别为 35 .98%、5 2 .2 7%和 6 9.0 8;NK细胞对此 3种细胞的杀伤率分别是45 .2 1%、12 .34%和 2 9.2 7% ;L AK细胞的杀伤率分别为 44 .0 1%、2 9.2 7%和 2 5 .6 8%。γδΤ细胞对经 MHC- 类单抗阻断前后的 K5 6 2、Raji和 XG- 73种靶细胞的杀伤率无明显改变。结论γδΤ细胞、NK细胞和 L AK细胞都具有一定非特异性杀伤肿瘤细胞的作用 ;γδΤ细胞对 MHC- 类单抗阻断后的肿瘤细胞的杀伤无明显变化。提示 γδΤ细胞较 NK细胞和 L AK细胞有更广泛的抗瘤谱     

口腔颌面部静脉畸形治疗中运用平阳霉素联合激素的临床研究

目的研究平阳霉素联合激素治疗口腔颌面部静脉畸形的疗效。方法采用PYM和地塞米松联合病变内注射治疗口腔颌面部静脉畸形患者79例（98个瘤体），5～7d注射一次，3—5次为一个疗程。结果对本组病例分别进行了6个月～4年的随访。治愈和基本治愈92个部位（93．8％），好转4个部位（4．1％），总有效率（97．9％）。结论联合应用平阳霉素和激素治疗口腔颌面部静脉畸形疗效确切，疗程短，不良反应及危险性很小。     

肝癌Hep3B细胞HLA-G过表达对NK细胞体外杀伤作用的影响

目的: 探讨肝癌Hep3B细胞白细胞抗原-G(HLA-G)过表达对NK细胞体外杀伤作用的影响。方法: 实验分为正常对照组(无干预措施, Hep3B组)、空载体对照组(转染空质粒, Hep3B-GFP组)和实验组(转染pEGFP-C1-HLA-G质粒,Hep3B-HLA-G组)。构建HLA-G真核表达质粒,转染至Hep3B细胞,经G418筛选,建立稳定过表达HLA-G的肝癌Hep3B细胞。Real-time PCR及Western blotting检测肝癌Hep3B细胞HLA-G mRNA及蛋白质水平的表达。分析肝癌Hep3B细胞HLA-G过表达及HLA-ABC抗体封闭靶细胞相应位点对NK细胞体外杀伤作用的影响。结果: 经酶切及测序鉴定证实, 插入序列与设计的序列相符。Real-time PCR和Western blotting结果均表明,转染重组质粒的Hep3B细胞HLA-G过表达(P<0.01)。NK细胞对转染pEGFP-C1-HLA-G的Hep3B细胞杀伤作用明显降低(P<0.01),HLA-ABC单抗封闭靶细胞相应位点后,NK细胞对Hep3B、Hep3B-GFP和Hep3B HLA-G细胞的杀伤均增加(P<0.01)。结论: pEGFP-C1-HLA-G表达载体可有效增加HLA-G表达,HLA-G过表达可以削弱NK细胞对肝癌细胞的杀伤效应。HLA-ABC单抗封闭靶细胞相应位点后,NK细胞对靶细胞的杀伤能力普遍有所提高。     

抗CD28单抗对T细胞体外抗瘤作用的影响

采用健康人外周血T淋巴细胞分别与BEL 740 2人肝癌细胞和抗CD2 8混合培养 ,检测淋巴细胞活化增殖能力、CTL细胞的杀伤活性、培养上清IFN γ和TNF α的水平。结果发现 ,在BEL 740 2刺激细胞存在时 ,抗CD2 8促进增殖的最佳浓度为 6 μg/ml,而单一抗CD2 8不能刺激T细胞增殖。BEL 740 2细胞和抗CD2 8共刺激后IFN γ和TNF α分泌均比单纯BEL 740 2高 ,同时其诱生的CTL细胞杀伤BEL 740 2的能力也强于对照组 ,其差异均具有显著性 (P <0 0 1)。上述结果提示 ,抗CD2 8单抗共刺激诱导CD4+ 和CD8+ T细胞参与抗肿瘤免疫 ,使IFN γ、TNF α的分泌增多 ,增强了体外T细胞抗瘤作用。     

苯丁酸氮芥-抗人直肠癌单抗免疫偶联物对人直肠癌细胞的特异杀伤作用

苯丁酸氮芥(CBL)的活性酯通过共价联接的方式与抗人直肠癌单克隆抗体5OH.19偶联,形成的免疫偶联物CBL一5OH.19具有较高的药物/抗体比率(25～30∶1)以及很好的导向活性。在体外30分钟试验和24小时试验中,CBL—50H.19对人直肠癌LoVo细胞均具有很强的体外杀伤活性.其效果比游离的CBL强。CBL—50H.19对人膀胱癌E—J细胞无杀伤活性;CBL与正常小鼠IgG偶联组成的免疫偶联物对LoVo细胞和E—J细胞均无杀伤作用。这表明CBL—50H.19对人直肠癌细胞不但具有较强的杀伤能力.而且具有好的杀伤特异性.     

天花粉蛋白与抗CEA单抗偶联物实验性抗肿瘤研究

本文报道天花粉蛋白(TCS)为弹头药物经 SPDP 法与抗 CEA 单抗连接制备成免疫偶联物即免疫毒素,通过凝胶过滤和离子梯度层析纯化后,仍保留特并识别靶细胞抗原的免疫活性。体外毒性试验证实免疫毒素具有杀伤肿瘤细胞作用,它比 TCS 和正常小鼠 Ig 与 TCS 偶联物对 IOVO 细胞的毒性作用(I.C.50)分别增强150和2000倍左右。对不同肿瘤细胞 CEA 含量分析,发现这一作用与肿瘤细胞表面 CEA 含量成正比.体内实验结果同样表明,免疫毒素对潜伏期和生长期的人结肠癌裸鼠移植瘤有明显的抑瘤作用,其抑瘤率分别为76—80%和68—72%,并能延长荷瘤裸鼠生存时间,而对于宿生来出现明显的毒付作用.     

雷帕霉素介导丝裂原活化蛋白激酶信号通路对肝癌细胞的影响

目的： 探讨雷帕霉素介导丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路对肝癌细胞Bcl-2、Bcl-xl 及Bax 蛋白表 达的影响。方法：将人肝癌细胞BEL-7402 细胞分为对照组和雷帕霉素处理组（20、50、100 ng/mL）,观察各组 BEL-7402 细胞的形态变化、细胞增殖抑制率、凋亡及蛋白（MAPK、Bcl-2、Bcl-xl 及Bax）表达。结果：随着 雷帕霉素浓度的升高,BEL-7402 细胞呈现崩解和坏死;对照组BEL-7402 细胞增殖抑制率最低,雷帕霉素干预组 BEL-7402 细胞增殖抑制率高于对照组,随着时间及雷帕霉素浓度的升高,细胞生长抑制率逐渐升高;雷帕霉素 处理组与对照组相比差异有统计学意义;随着浓度的升高,BEL-7402 细胞凋亡率升高;对照组BEL-7402 细胞中 MAPK阳性表达率高于雷帕霉素处理组,雷帕霉素处理组随着浓度升高,MAPK阳性表达率不断降低;对照组 BEL-7402 细胞中Bcl-2、Bcl-xl 蛋白升高,与雷帕霉素处理组比较存在显著差异,雷帕霉素处理组Bcl-2、Bcl-xl 蛋白水平随着雷帕霉素的浓度升高而降低,Bax 表达水平随着雷帕霉素的浓度升高而增加。结论：雷帕霉素能 够抑制肝癌细胞增殖,加快坏死及破裂,随着雷帕霉素的浓度升高,凋亡程度增大,其作用机制可能与抑制 MAPK、Bcl-2、Bcl-xl 表达,促进Bax 水平升高有关。     

联合疗法与单纯微波治疗肛周多发性尖锐湿疣的临床对比研究

目的评价平阳霉素局部封闭、微波去除残留疣体、全身应用重组人干扰素仪2b联合治疗肛周多发性尖锐湿疣的疗效及安全性。方法160例肛周多发性尖锐湿疣患者，其中男性85例。女性75例，年龄18～66岁，平均年龄（33．5±8.5）岁，病程20天～1年，平均病程2．6个月。根据随机化原则将患者分为治疗组和对照组，各80例。治疗组，其中男性46例，女性34例，病程（1．21±0．65）年。对照组，其中男性39例，女性41例，病程（1．09±0．82）年。治疗组采用平阳霉素、重组人干扰素仪2b和微波联合治疗．对照组单纯微波治疗．进行疗效比较及12个月复发率观察。结果治疗组总有效率为87．5％，复发率为12.5％。对照组总有效率为47．5％，复发率为38．75％。经χ^2检验，两组差异有显著统计学意义（P〈0．01）。观察期间未见严重的不良反应。结论联合疗法治疗肛周多发性尖锐湿疣安全、可靠，疗效显著，复发率低、副作用小。     

大肠癌免疫脂质体导向紫杉醇的实验研究

采用新型偶联剂ＳＡＴＡ，将抗人体大肠癌的单克隆抗本与载有紫杉醇的脂质体偶联制成免疫脂质体。检测结果显示，脂质体稳定性良好，４℃存放１０ｄ，内含物无明显渗漏。制成免疫脂质体后，单抗免疫活性不丧失。体外细胞实验结果显示，紫杉醇免疫脂质体对细胞生长的抑制作用有明显的靶向专一性，对人大肠癌细胞的体外细胞毒作用优于普通脂质体和游离药物，ＩＣ５０分别为两者的６．７０和８８．７倍，对非靶细胞的作用与普通脂质体相     

平阳霉素和普鲁卡因治疗鼻咽癌时细胞膜电位的变化

本文用玻璃微电极细胞内记录方法观察了Ｃｏ照射、平阳霉素和普鲁卡因对人低分化鼻咽癌细胞系单克隆株（Ｂ７）细胞膜电位的影响ｑ结果显示：Ｃｏ照射后４ｈ膜电位负值减少，８～２４ｈ膜电位回升，４８ｈ时膜电位负值再次显著减少。不同剂量组４８ｈ膜电位差异非常显著（Ｐ＜０．０１），膜电位变化与照射剂量成正变关系；膜电位负值随平阳霉素作用时间延长而逐渐减小；平阳霉素合并Ｃｏ照射使膜电位负值下降率大于二者分别作用之和（Ｐ＜０．０１）；普鲁卡因作用后膜电位较早出现明显、不可逆转的下降。结果提示，细胞膜离子转运蛋白质可能参与平阳霉素、普鲁卡因抗肿瘤及Ｃｏ照射杀伤肿瘤细胞的作用。     

丝裂霉素C-CEA单抗偶联物对人结肠癌导向治疗的实验研究

丝裂霉素C-癌胚抗原单抗偶联物对人结肠癌有选择性杀伤作用。体外细胞毒试验证实,丝裂霉素C-癌胚抗原单抗偶联物比丝裂霉素C-正常γ球蛋白偶联物,癌胚抗原单抗,丝裂霉素C(游离)的细胞毒性都高。对植入性裸鼠人结肠癌模型疗效较好,潜伏期开始治疗的结肠癌抑瘤率为76.9％(P<0.01),生长期开始治疗的结肠癌抑瘤率为52.6％(p<0.05);治疗后瘤细胞密度明显减小(P<0.01),核分裂指数有非常显著差异(P<0.01),瘤细胞坏死程度明显增高。