肺癌患者外周血中表面活性蛋白DmRNA的表达及临床意义

背景与目的 : 循环癌细胞的灵敏检测对于肺癌患者的预后及选择合适的治疗方法很 重要. 为此,我们建立了利用表面活性蛋白 D(surfactant protein D, SP-D)作为基因标志 的 RT-PCR方法,检测肺癌患者外周血中的癌细胞,并初步探讨其临床意义. 方法 : 采用优化 的套式 RT-PCR方法,对 26例伴肺外转移肺癌患者,37例无转移肺癌患者,15例良性肺疾病患 者及 15例健康志愿者外周血中 SP-D mRNA的表达进行分析. 结果 : 1)该方法灵敏度可达 1× 10- 6, 特异性强 ; 2)采用此方法,伴肺外转移和无转移肺癌患者外周血中 SP-D mRNA的检出 率分别为 92.3% (24/26)和 24.3% ( 9/ 37),所有良性肺疾病患者和健康对照外周血中均未 见 SP-D mRNA 的表达. 结论 : SP-D mRNA可能是检测肺癌患者外周血中是否存在癌细胞的一 个有价值的指标,对肺癌的转移倾向有一定的提示作用,并有可能为制定治疗方案和评估预 后提供重要的参考依据.     

肺癌患者血中癌细胞端粒酶活性的检测

目的　研究以端粒酶重复序列扩增法 (PCR TRAP)检测血中肺癌细胞端粒酶活性 ,以监测其血循环转移情况。方法　应用PCR TRAP法检测 2 5例肺癌手术患者和 3 5例肺癌化疗前患者血中端粒酶活性 ,并以 3 0例非肿瘤患者外周血为对照。结果　非肿瘤患者外周血中端粒酶阴性。肺癌患者手术时肺动脉血中端粒酶活性阳性率达 5 2 % ( 13 /2 5 ) ,明显高于术前外周血端粒酶活性 ( 2 4% ,P <0 .0 5 )。Ⅲ～Ⅳ期肺癌患者端粒酶活性表达阳性率为 64 % ( 16/2 5 ) ,Ⅰ～Ⅱ期为 3 0 % ( 3 /10 ) (P <0 .0 5 )。结论　端粒酶有可能作为肿瘤标志物用于检测外周血中肺癌细胞和预测肿瘤复发转移。     

大肠癌患者外周血癌细胞CK20检测及其意义

目的:探讨大肠癌患者外周血癌细胞角蛋白20(cytokeratin,CK20)检测与转移复发的关系。方法:以非同位 素RT-PCR方法,检测30例大肠癌患者术前和术后外周血中大肠癌细胞的标志物CK20,同时检测20例健康者外周血作对 照。结果:30例患者外周血中查出CK20阳性表达23例,阳性率76.67%,20例健康者外周血均无CK20表达。CK20阳性检 出与Dukes分期、淋巴结转移和肝转移存在显著性差异(P<0.05),术后3天内外周血CK20阳性检出较术前多出2例。随访 发现,外周血CK20扩增阳性者,术后发生肝转移的机会增加(33.3%)。结论:检测大肠癌患者外周血微转移癌细胞CK20可 提高大肠癌临床分期的准确性,帮助综合判断患者的预后,且可能有助于早期诊断大肠癌肝脏微小转移。     

血管内皮生长因子对非小细胞肺癌血道转移的影响

目的 探讨血管内皮生长因子（VEGF）含量对非小细胞肺癌（NSCLC）血道转移的影响。方法 外周血中细胞角蛋白（CK）阳性细胞经磁性细胞分选技术分离后,采用细胞学、免疫组化及免疫荧光染色对其中的肺癌细胞进行特性分析。外周血肺癌细胞含量按已建立的流式细胞仪检测方法作定量分析。VEGF含量采用ELISA测定。结果 外周血肺癌细胞具有明显的核异型,表达端粒酶逆转录酶（hTERT)及上皮细胞标志CK,可被抗人NSCLC特异性单抗S5A10－2染色,但不表达白细胞抗原CD34及CD45。154例NSCLC患者中,外周血肺癌细胞阳性44例,阳性率为28．6％。癌细胞阳性率与病期进展相关。NSCLC患者血浆VEGF含量显著高于健康人及肺部良性疾患者。VEGF含量与肺腺癌的病期进展密切相关。在血循环癌细胞阳性NSCLC患者中,VEGF含量增高者,癌细胞数量显著高于VEGF不增高者。结论 NSCLC患者血浆VEGF明显增高,在血循环癌细胞阳性的患者中,VEGF高表达可促使癌细胞血道转移,表现为血循环癌细胞数量明显增加。     

检测肺癌患者外周血和骨髓微转移的临床意义

目的探讨检测肺癌患者外周血和骨髓微转移的特异性、敏感性及临床意义。方法应用巢式RT-PCR技术,检测59例肺癌患者、11例肺部良性病变患者和20例健康人外周血、骨髓中CK19 mRNA表达。结果巢式RT-PCR检测技术的敏感性达到10-6。59例肺癌患者中,20例检测出外周血微转移,13例检测出骨髓微转移,其阳性检出率分别为33.9％(20/59)和22.0％(13/59),二者有显著正相关(P<0.05)。肺癌患者外周血和骨髓微转移与肺癌组织学类型、细胞分化程度及P-TNM分期均存在密切关系(P<0.05或P<0.01)。肺良性病变患者、健康人外周血和骨髓中均未检测出CK19 mRNA表达。结论肺癌患者外周血和骨髓中均存在用常规方法检测不出的微转移;应用巢式RT-PCR技术检测肺癌患者外周血和骨髓中CK19 mRNA表达,对肺癌微转移的分子诊断具有重要的理论意义和临床应用前景。     

肺癌患者外周血淋巴细胞与癌细胞体外化疗药敏实验研究

目的　研究肺癌患者外周血淋巴细胞和癌细胞体外化疗药敏的相关性。方法　采用MTT法测定了 74例肺癌患者外周血淋巴细胞及其癌细胞对 15种临床常用化疗药物的敏感性。结果　肺癌患者外周血淋巴细胞与癌细胞对其中 12种化疗药的敏感性有很好的相关性 ,差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　外周血淋巴细胞的体外化疗敏感性检测对肺癌的临床化疗药物的选择具有重要的参考价值。     

非小细胞肺癌患者淋巴结、外周血及骨髓微转移分子诊断在肺癌外科治疗中的作用

目的 探讨检测肺癌患者区域淋巴结、外周血和骨髓中微转移在肺癌外科治疗中的临床意义,以及区域淋巴结、外周血和骨髓肺癌微转移三者之间的相关性。方法 应用巢式RT－PCR技术,对29例肺癌患者和11例肺良性病变患者的淋巴结、外周血和骨髓中CK19基因mRNA表达进行联合检测。结果 本实验建立的巢式RT－PCR技术的敏感性可达到10^-6。术前10例患者检测到外周血微转移,6例患者检测到骨髓肺癌微转移,101枚纵隔淋巴结中55枚检测到肺癌微转移。肺癌患者淋巴结、外周血和骨髓中微转移阳性检出率分别为54．5％、34．5％和20．7％,三者之间存在显著正相关（P＜0．05）,外周血和骨髓微转移与肺癌组织学类型、细胞分化程度及P－TNM分期均存在密切关系（P＜0．05或P＜0．01）。结论 RT－PCR法是一种特异性,敏感性均较高的肿瘤微转移检测方法;检测CK19 mRNA表达应用于肺癌微转移的分子诊断有助于选择外科手术适应证,并具有广阔的临床应用前景。     

RT-PCR法检测外周血LUNX-mRNA诊断非小细胞肺癌微转移的研究

 目的　探索检测中早期非小细胞肺癌外周血微转移的理想途径以及手术对促进微转移的影响。方法　对 2 0例可手术的中早期非小细胞肺癌分别于术前、手术刚结束、术后一周取外周血 ,用RT PCR法检测肺癌特异性基因LUNX的表达情况 ,并与肺部良性疾病患者外周血LUNX基因的表达进行对比。结果　在被检测的 2 0例患者中 ,有 9例在不同时期被检测到有LUNX基因表达 ,而肺部良性疾病患者外周血均未发现LUNX基因表达。结论　RT PCR法检测外周血LUNX mRNA是理想的诊断非小细胞肺癌微转移的方法 ;手术治疗可以减少肺癌患者术后远处转移的发生 ;手术操作可能促进肿瘤细胞向外周血的脱落     

肺癌患者血中循环癌细胞端粒酶活性的表达及意义

目的：检测肺癌患者外周血循环癌细胞端粒酶活性变化与临床资料的关系。方法：外周血经Ficoll梯度离心分离单个核细胞组份，再应用PCR－TRAP法检测49例肺癌化疗前患者外周血中端粒酶活性。结果：49例肺癌患者中32例端粒酶活性明显升高。阳性率达65.3%，其中小细胞肺癌端粒酶活性表达阳性率最高而腺癌、鳞腺癌较低，同时晚期初治患者端粒酶活性明显高于复治患者。结论：端粒酶活性变化与病理类型，晚期复治病人有关，值得进一步探索。     

肺癌患者三种微转移标志物临床意义的比较研究

目的评价肺癌患者外周血LUNX mRNA 、CK19 mRNA、CEA mRNA诊断微转移的特异性、敏感性,探索肺癌患者微转移的早期诊断.方法以肺部良性疾病30例、健康人10例的外周血为对照,以LUNX mRNA 、CK19 mRNA、CEA mRNA的表达为指标,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测48例肺癌患者外周血、手术切除区域44个淋巴结的微转移,并根据淋巴结病理切片、临床分期、随访过程中复发转移率评价微转移的临床意义.结果①LUNX mRNA、CK19 mRNA、CEA mRNA在肺癌组织的表达率均为100%(35/35).②48例肺癌患者外周血中LUNX mRNA阳性30例(62.5%),CK19 mRNA阳性24例(50.0%),CEA mRNA阳性32例(66.7%);44枚肺癌患者手术切除的区域淋巴结,LUNX mRNA阳性16枚(36.4%),CK19 mRNA阳性12枚(27.3%),CEA mRNA阳性18枚(40.9%).③30例肺部良性疾病患者外周血中,CK19 mRNA表达阳性2例(6.7%),LUNX mRNA或CEA mRNA表达均阴性;10例健康人外周血和11枚取自肺良性疾病患者的淋巴结,3个指标检测结果均为阴性.④44枚肺癌区域淋巴结中,普通病理组织学检出6枚(13.6%)有癌转移,阳性率明显低于RT-PCR检测结果(P<0.05).⑤3种微转移指标的阳性率均随TNM分期的增加而升高(P=0.01).⑥随访发现外周血微转移阳性患者的复发率高于阴性患者.结论 LUNX mRNA、CK19 mRNA 、CEA mRNA有可能成为监测肺癌微转移的分子标志.     

检测CK19 mRNA、CEA mRNA诊断非小细胞肺癌外周血微转移

目的 探讨检测细胞角蛋白(cytokeratin 19，CK19)mRNA、癌胚抗原(cancer embryonic antigen，CEA)mRNA诊断非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)患者外周血微转移的临床意义。方法 应用RT-PCR法检测35例NSCLC患者外周血中的CK19mRNA、CEAmRNA，并以20例良性病变、20例健康人作对照。结果 35例NSCLC患者外周血CK19mRNA、CEAmRNA阳性表达率分别为40％和57％，两者均阳性者40％，两者均阴性者43％；肺良性疾病患者20例，CK19mRNA阳性2例(10％)，无CEAmRNA阳性者；20例健康对照2个指标检测结果均为阴性。随访发现CK-19mRNA阳性、CEAmRNA阳性和二者均阴性患者的远处转移率分别为50％、56％和27％。结论CEAmRNA和CK19mRNA是检测肺癌患者外周血微转移的良好标志物，检测外周血微转移有助于预测肺癌患者预后。     

肺癌患者外周血血小板活化标志物水平及其临床意义

背景与目的 中、晚期肿瘤患者的血小板往往处于活化状态,其血小板黏附分子的表达和释放增加.本研究的目的是探讨肺癌患者手术前、后外周血血小板活化标志物的动态变化规律及其与肺癌的关系.方法 采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测120例肺癌患者手术前、后外周血血小板活化标志物(CD62P和CD63)水平,以60例健康体检者作为对照.结果 肺癌患者手术前外周血CD62P、CD63水平均显著高于正常对照组(P＜0.01).肺癌患者术后第7天外周血CD62P、CD63水平显著低于术前和术后第1天(P＜0.01).肺癌患者术前外周血CD62P、CD63水平与肺癌原发肿瘤大小、有无淋巴结转移和分期有密切关系(P＜0.01),与肺癌细胞分化程度、组织学类型、患者性别和年龄无明显关系(P＞0.05).结论 肺癌患者外周血血小板活化标志物水平升高,且与肺癌的发生、发展和淋巴结转移有一定关系,因而有可能作为动态监测肺癌患者病情进展、判断预后的参考指标.     

肺癌患者外周血CK19-mRNA的测定及其临床意义

目的：建立一种敏感的方法来检测肺癌患者外周血循环癌细胞,并探讨其临床应用的意义。方法：采用反转录聚合酶链反应（RT－PCR）技术检测肺癌患者患者外周血CK19－mRNA的表达情况。结果：40例肺癌外周血标本中16例（40％）CK19－mRNA阳性,15例肺良性病变中1例＊（6．6％）阳性,5例正常人为阴性,10例有转移的肺癌患者,其外周血CK19－mRNA均为阳性（100％）,30例检测时尚我转移证据者,有6例阳性（20％）,经过半定量分析,两组CK19－mRNA在量上判别有显著性,结论：CK19－mRNA可作为一个标志物来检测肺癌患者外周血微转移,定量检测外周血CK19－mRNA有助于诊断肺癌的血行转移,定期检测外周血CK19－mRNA,尚可作为疗效的观察指标。     

肺癌循环肿瘤细胞的研究进展

转移和复发是肺癌患者死亡的主要原因。研究发现循环肿瘤细胞(circula tingtumo rcells,CTCs)在肺癌转移和复发中起着重要作用。而且随着靶向治疗的不断进步,对于晚期无法取得肺癌实体组织的患者,CTCs作为一种肺癌组织替代物可以决定治疗方案。所以CTCs在早期发现肺癌患者的微转移、检测肿瘤复发、评估预后和选择个体化治疗方案方面有着重要作用。本文针对CTCs的研究进展及肺癌领域的应用进行综述。     

逆转录聚合酶链反应检测肺癌外周血微转移基因研究进展

肺癌患者外周血中有微转移（隐匿肿瘤细胞）是预后不良的重要因素之一，早期患者已有发生。通过逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）扩增外周血中组织特异性或肿瘤特异性靶基因，可以确定是否存在血液微转移。该技术无论在敏感性还是特异性均有临床应用价值，但靶基因的选择是其关键，近年来有关肺癌外周血微转移的靶基因研究成为热点。     

血液中微转移癌细胞对非小细胞肺癌预后的影响

目的 分析非小细胞肺癌(NSCLC)患者血液中微转移癌细胞对预后的影响。方法 手术过程中采集肺静脉血,术前或术后采集外周血,应用流式细胞仪进行癌细胞检测。于手术后定期随访患者,并与检测结果做统计学分析。结果 对58例NSCLC患者血样进行了检测,共发现20例存在癌细胞,阳性率为34．5％,其中57岁以下年龄组及Ⅲ／Ⅳ期患者的癌细胞阳性率显著高于57岁以上年龄组及Ⅰ／Ⅱ期患者(P值分别为0．000和0．006)。随访结果显示,血液中癌细胞检测阳性组的2年及3年生存率分别为30．0％和20．0％,癌细胞检测阴性组分别为52．6％和50．0％,二组间差异有显著性(P值分别为0．0291和0．0092)。结论肺癌患者在手术前后可从血液中检测到癌细胞,此类患者的预后差,生存期短。     

流式细胞术检测肺癌患者外周血微转移的探讨

目的:应用流式细胞术检测肺癌患者外周血中的微转移。方法:外周血经F icoll梯度离心分离单核细胞后,用粘蛋白1(Muc in1,MUC1)单克隆抗体染色,应用流式细胞仪检测。结果:检测了96例肺癌患者外周血,发现29例患者外周血中有微转移。32例肺良性病变患者有1例患者外周血中有微转移。肺癌患者阳性率与患者病理分期、分化程度和细胞组织学类型密切相关(P<0.05)。结论:应用流式细胞术检测非小细胞肺癌患者外周血中的微转移,有助于判断肺癌转移倾向和预后。     

肺癌脑转移患者Th17细胞和IL-17水平变化的研究

背景与目的 Th17细胞是一种重要的辅助性T细胞,其主要分泌IL-17等细胞因子,在感染免疫、自身免疫性疾病和肿瘤免疫中均有重要意义。本研究旨在探讨Th17细胞和IL-17在肺癌脑转移患者外周血中的表达及IL-17在肺癌脑转移患者脑脊液中的表达和意义。方法流式细胞术检测22例肺癌脑转移患者和20名正常对照外周血Th17(CD3+CD4+IL-23R+)细胞的百分率,ELISA方法检测22例肺癌脑转移患者和20名正常对照血浆IL-17水平,ELISA方法检测19例肺癌脑转移患者和16例无脑转移肺癌患者脑脊液IL-17水平。结果肺癌脑转移患者外周血Th17细胞百分率(4.65%±0.72%)明显高于正常对照(2.71%±0.54%,P=0.04);其中非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者和小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)患者没有差异。肺癌脑转移患者血浆IL-17水平明显高于正常对照(117.4±16.43 pg/mL和72.55±8.19 pg/mL,P=0.02);其中NSCLC患者和SCLC患者没有差异。肺癌脑转移患者脑脊液IL-17水平明显高于无脑转移的肺癌患者(73.21±7.52 pg/mL和50.25±8.04 pg/mL,P=0.04)。结论肺癌脑转移患者外周血Th17细胞数量增多,血浆IL-17和脑脊液IL-17水平升高,Th17细胞和IL-17可能参与了肺癌脑转移的发生和发展。     

手术对肺癌患者外周血中癌细胞端粒酶活性的影响

目的:检测肺癌患者手术前后外周血中癌细胞端粒酶活性,了解手术对其影响及意义。方法:应用端粒酶重复序列扩增法(PCR-TRAP)检测30例肺癌患者手术前及术后第5天外周血中癌细胞端粒酶活性,随访其预后。本院同期30例非肿瘤患者为对照组。结果:非肿瘤患者外周血端粒酶活性均为阴性,肺癌患者手术前后阳性率分别为60%(18/30)及50%(15/30),手术前后阳性率无显著差异(P>0.05),手术后有6例端粒酶活性上升,其中4例存活不足1年;15例端粒酶活性明显下降(P<0.01),其中6例转阴性,15例存活均超过1年。结论:肺癌患者外周血端粒酶活性可能对诊断、指导治疗、判断预后有参考价值,手术治疗能减少外周血中癌细胞。