利用组织芯片探讨凋亡相关基因在乳腺癌发生中的意义

目的：检测凋亡相关基因BAG-1在乳腺癌、癌旁组织、正常组织中的表达及意义。方法：利用组织芯片采用免疫组化DAKO Envision法检测乳腺癌、癌旁组织、正常组织中BAG-1的表达。结果：组织芯片中BAG-1在乳腺癌组织中的表达比乳腺癌癌旁组织、正常乳腺组织中高，其阳性表达率分别为65．0％，7．1％和11.1％，差异有显著性意义(P=0．001)。结论：BAG-1在乳腺癌组织中表达较乳腺癌癌旁组织、正常乳腺组织高，乳腺癌的发生可能与凋亡相关基因BAG-1有关。     

利用组织芯片探讨凋亡相关基因在乳腺癌发生中的意义

目的:检测凋亡相关基因BAG-1在乳腺癌、癌旁组织、正常组织中的表达及意义。方法:利用组织芯片采用免疫组化DAKOEnvision法检测乳腺癌、癌旁组织、正常组织中BAG-1的表达。结果:组织芯片中BAG-1在乳腺癌组织中的表达比乳腺癌癌旁组织、正常乳腺组织中高,其阳性表达率分别为65.0%,7.1%和11.1%,差异有显著性意义(P=0.001)。结论:BAG-1在乳腺癌组织中表达较乳腺癌癌旁组织、正常乳腺组织高,乳腺癌的发生可能与凋亡相关基因BAG-1有关。     

STAT5诱骗寡核苷酸下调K562细胞周期相关基因的研究

目的采用基因芯片技术筛选信号转导和转录活化因子5（STAT5）诱骗寡核苷酸作用下K562细胞差异表达的周期相关分子，探讨其对K562细胞周期的影响。方法合成STAT5诱骗寡核苷酸，在脂质体介导下转染K562细胞，采用人14K基因表达谱cDNA芯片检测差异表达基因，逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）验证芯片筛选到的部分基因的表达情况。结果两张cDNA芯片检测重复性良好（r-0．9799）。在13824个标记的基因中检出多个下调基因，其中包括cyclin D1、cyc-linD2、S100钙结合蛋白P和E2F-5等在内的周期相关基因；RT-PCR实验证实STAT5诱骗寡核苷酸引起cyclinD2和E2F-5mRNA表达下调。进一步分析发现，这些基因的启动子区域均含有STAT5结合的一致性序列。结论STAT5诱骗寡核苷酸抑制K562细胞G-／s转换而影响细胞周期进程的作用机制，可能与cyclin D2和E2F-5等基因的表达下调相关。     

乳腺癌发生转移及预后与RAB5A基因表达的相关性

目的：研究RAB5A基因的高表达在乳腺癌发生发展及转移与预后中的作用。方法：对牡丹江市肿瘤医院2003-01／1246例乳腺癌术后标本，应用免疫组化技术检测RAIB5A基因的表达。结果：RAB5A的表达在正常组织中不表达，而在乳腺癌组织中有不同程度的表达(P&;lt;0．01)。结论：RA485A是一个可能与乳腺癌发生、转移相关的基因，并且还可能与它们的分化程度有关。     

组织芯片技术在癌症研究中的应用

组织芯片技术已广泛应用于病理学各研究领域，现总结组织芯片技术在癌症研究中的应用现状，包括不同发展阶段相关基因的表达，以及组织芯片技术和DNA芯片技术的联合应用等方面的研究。     

组织芯片技术在研究肿瘤组织中抗原表达的应用

目的：研究多种肿瘤组织芯片、肿瘤进展组织芯片以及肿瘤预后相关组织芯片中多种抗原的表达,明确组织芯片技术在肿瘤研究中的应用。方法：运用组织芯片技术和免疫组织化学法检测多种肿瘤组织中雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）的表达、肺癌进展组织中P53的表达及肺鳞癌组织中P16的表达。结果：手工制作的组织芯片阵列排列整齐,仅有1个组织缺失（1／625—0．16％）,3个组织有折叠（3／625=0．48％）,其余组织形态均好;ER、PR在乳腺癌、宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢癌、肺癌、食管癌、胃癌等多种肿瘤中均有强弱不等的表达;P53在肺癌及不典型增生组织中阳性表达率（70％,40％）明显高于在正常支气管黏膜中的表达（0％）（P〈0．05）;P16蛋白在肺鳞癌中失表达率为57．9％,其中有转移组（8／13—61．5％）高于无转移组（7／17—41．2％）（P〈0．05）。结论：组织芯片技术能快速、高效地对大量肿瘤组织样本进行各种检测分析,低消耗、可比性强,手工制作简单又经济,可以广泛地应用于肿瘤病理研究的各个方面;应用组织芯片技术,检测到ER,PR在多种肿瘤中均有表达,提示两者与多种肿瘤的发生有关;证明了P53基因的突变是肺癌发生的早期事件,参与了肺癌的发生与发展;P16基因在肺鳞癌中有一定的失表达率,而且与肿瘤预后相关因素中是否转移有一定相关性。     

乳腺癌发生转移及预后与RAB5A基因表达的相关性

目的:研究RAB5A基因的高表达在乳腺癌发生发展及转移与预后中的作用。方法:对牡丹江市肿瘤医院2003-01/1246例乳腺癌术后标本,应用免疫组化技术检测RAB5A基因的表达。结果:RAB5A的表达在正常组织中不表达,而在乳腺癌组织中有不同程度的表达(P<0.01)。结论:RAB5A是一个可能与乳腺癌发生、转移相关的基因,并且还可能与它们的分化程度有关。     

寡核苷酸芯片用于HLA-A基因分型的研究

目的 应用寡核苷酸芯片分型方法，对HLA-A基因进行分型研究。方法 采用不对称PCR方法，扩增HLA-A基因的第2，3外显子，荧光标记扩增产物，作为杂交模板。设计分型检测寡核苷酸探针，制备HLA-A基因分型检测芯片。采取差异选择法，筛选强杂交信号和高特异性的分型探针。探索了探针长度、探针位置等对杂交信号的影响。杂交结果经荧光扫描，并用分型软件分析判断阳性探针和HLA-A基因型。结果 30例临床样本芯片分型结果与PCR-SSP及DNA测序分型结果相符。结论 采用寡核苷酸芯片技术对HL-A基因分型是种好的方法，具有测速快、成本低、高通量的优点。     

Cpb1基因在乳腺癌中差异表达的初步研究

目的本研究利用生物信息学,从GenBank的乳腺癌表达文库中筛选了未见于国内外报道的高表达基因进行初步研究,以发现与乳腺癌相关的新基因。方法利用RT-PCR法对福州市第一医院和福建省人民医院乳腺外科2006～2007年切除手术中收集到的25例乳腺癌组织、11例癌旁正常组织和6例良性肿物组织进行了测定。重点研究Cpb1基因在乳腺癌组织、癌旁正常组织、良性肿物组织的表达差异。结果通过Fisher’s精确检验,Cpb1在小部分乳腺癌组织中具有特异性表达。结论研究表明Cpb1基因在部分乳腺癌患者中其表达差异显著,提示有望成为新的乳腺癌分子标志物。     

用寡核苷酸芯片研究淋巴瘤细胞系细胞与正常淋巴细胞间差异表达的基因

我们应用寡核苷酸芯片技术,分别筛选Burkitt’s淋巴瘤(BL)和皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)细胞系细胞与正常淋巴细胞间差异表达的基因,并对其功能进行初步的分析。材料和方法1　寡核苷酸探针的设计　芯片所包括的基因来源主要有:①Alizadeh等[1 ] 从1785 6条基因中筛选出的与恶性淋巴瘤特别是与弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)发病、分型密切相关的基因4 3条;②近年文献报道的和肿瘤发生发展相关的癌基因、抑癌基因或涉及细胞周期调控、分化凋亡诱导、信号转导等有关的基因5 6条;③部分基因库所登录的功能未确定、我们正在研究的淋巴瘤/肿瘤相关新…     

卵巢癌基因表达的cDNA微阵列研究

目的应用基因表达谱芯片研究人卵巢癌组织和正常卵巢组织中差异表达的基因,筛选出与卵巢癌发生发展相关的基因,并对这些基因的功能进行初步分析.方法采用cDNA芯片技术从有关癌基因和抑癌基因、细胞周期和细胞凋亡相关、DNA合成、转录和修复以及细胞信号传递等肿瘤相关的2304个基因中,分析研究卵巢癌基因表达谱,即寻找出不同于正常卵巢组织而只在卵巢癌实体瘤中上调或下调的特殊基因.结果与正常卵巢组织比较,卵巢浆液性囊腺癌组织表达有明显差异的基因92个,卵巢粘液性囊腺癌差异表达基因110个,卵巢浆液性囊腺癌和粘液性囊腺癌均呈差异表达的基因65个,卵巢浆液性囊腺癌和粘液性囊腺癌中不同的差异表达基因共有173个.结论与卵巢癌有关的基因涉及多种细胞生物学过程,说明卵巢癌的发生是一个多步骤、多基因调控的过程.基因芯片技术实现了基因分析的快速、高通量、微型化和自动化,它为同时分析几百个基因状况提供了一个有效的方法,所获得的差异基因表达谱为深入研究特异相关基因提供了参考.     

寡核苷酸DNA芯片用于ABO血型基因分型的研究

目的 对寡核苷酸芯片用于ABO血型基因分型的技术进行研究。方法 常规的酚／氯仿法提取标准血样基因组DNA，在ABO座位的外显子6和7区域各设计一对引物，经PCR扩增基因组相应区段并用Cy5-dCTP进行标记。设计寡核苷酸分型探针，将探针固定在APS－PDC法制作的DNA芯片上，用标记的PCR产物与之杂交，扫描仪对杂交结果进行扫描，Imagene软件对杂交图象进行分析。结果 本实验共检测了100份已知血型血样的ABO基因型，结果证明本实验研制的ABO基因分型芯片快速、准确、灵敏。结论 寡核苷酸DNA芯片用于ABO的基因分型与其他方法相比更具有灵敏、直观、高通量和集成化的优势。     

寡核苷酸芯片用于HLA-B分型的初步研究

HLA基因具有复杂的多态性。本研究根据HLA-B基因序列的多态性，设计了一套寡核苷酸探针，井用基因芯片点样仪点样到醛基修饰的载玻片上，制成寡核苷酸芯片用于HLA-B基因的分型。本研究以克隆井已测序的HLA—B基因序列作为标准样品，经PCR分别扩增其具有多态性的第二和第三外显子，PCR扩增产物与芯片进行杂交，利用分析软件将杂交模式转变成为HLA—B基因型。结果表明，利用芯片进行分型的结果与标准样品序列结果完全符合。结论：寡核苷酸芯片用于HLA—B基因分型是一种简便、快捷和有前景的方法。     

组织芯片原位杂交技术的应用体会

组织芯片技术将数十个甚至上千个不同个体的组织标本按预先设计的顺序排列在一张玻片上，与组织化学、免疫组化和原位杂交等技术相结合，可以在基因、基因转录和相关表达产物生物学功能三个水平上进行相关研究，是一种高通量、多样本，并具有平行分析功能的工具，成为近年来发展迅速的一种崭新的病理学技术。我们将组织芯片与原位杂交技术相结合，用于检测小鼠哮喘模型肺组织中的肾上腺＆受体的变化，取得了较理想的效果，现介绍如下。     

肝细胞癌组织中差异表达基因的初步筛选

目的探讨基因表达谱芯片技术在筛查肝细胞癌相关基因群表达中的作用。方法采用美国Affymetrix公司的U133A2.0基因表达谱芯片,按一步法抽提肝细胞癌及正常肝脏组织总RNA,分离纯化两种组织的mRNA;经逆转录合成掺入生物素标记的cDNA合成探针,与芯片杂交和严格洗片后,用荧光扫描仪扫描芯片荧光信号图像,分析肝细胞癌及正常肝组织中差异表达的基因。结果在14500条基因中,肝细胞癌组织与正常肝脏组织间有2756条(19.01%)存在差异表达的基因,其中上调表达基因1772条和下调表达基因984条,对2756条差异表达基因作了初步功能分类,这些基因与肝细胞癌的发病机制存在相关性。结论基因表达谱芯片技术可以筛选出肝细胞癌表达异常的相关基因群,对其进一步研究有助于认识肝细胞癌的发病机制。     

用基因芯片表达谱筛选恶性黑色素瘤差异基因的研究

目的 用基因芯片表达谱筛选出恶性黑色素瘤的差异基因。方法 用Agilent Human 1A OligoDNA芯片对恶性黑色素瘤和色素痣组织中基因表达情况进行检测，提取总RNA，进行荧光标记探针、杂交、洗涤后分析。结果 恶性黑色素瘤和正常色素痣组织共有1596个差异表达基因，其中上调基因733个，下调基因863个。结论 基因芯片技术可筛选出恶性黑色素瘤相关基因。     

失血性休克大鼠肝脏基因表达谱的变化

目的 应用基因芯片技术分析失血性休克组(hemorrhage shock,HS)及对照组(sham hemorrhage shock,SHAM)大鼠肝脏差异基因表达谱,从分子水平探讨HS可能的病理生理机制.方法 20只雄性Wistar大鼠随机分成SHAM组和HS模型组,每组10只.采用5705点的大鼠寡核苷酸芯片分别检测HS大鼠及SHAM大鼠肝脏基因表达谱,重复三次并计算Ratio(R)均数,R≥2时表示基因上调;R≤0.5时表示基因下调.对差异表达基因的功能进行分析并用RT-PCR对其中9条基因的表达水平进行验证.结果 在大鼠5705条靶基因中,初步筛选出86条差异表达基因,其中上调基因72条,下调基因14条.根据基因的生物学功能,差异表达基因主要为:物质转运相关基因、转录调节相关基因、信号转导相关基因、应激反应相关基因、代谢相关基因、发育相关基因、细胞黏附相关基因等.结论 HS的发生是由多基因参与的复杂调控过程;芯片试验结果对进一步探讨HS可能的病理生理机制以及为探求HS治疗的新靶点提供了依据.     

PTEN蛋白在乳腺癌中表达的研究

目的:探讨PTEN蛋白在乳腺癌组织中的表达及其临床意义。方法:应用免疫组织化学技术检测1998年1月—1999年12月间收治的120例乳腺癌组织标本中PTEN蛋白的表达。结果:在120例乳腺癌组织标本中有36例为阴性表达,正常乳腺组织、乳腺腺瘤组织均为阳性表达(P<0.01)。无论阳性面积抑或是强阳性面积,PTEN蛋白表达与乳腺癌患者年龄、肿瘤组织学分级和肿瘤大小之间无显著相关(P>0.05);而与乳腺癌腋窝淋巴结转移和远处转移间存在显著相关(P<0.01)。结论:PTEN抑癌基因的蛋白表达低下或丢失与乳腺癌变有关,可能是乳腺癌变过程中一种较晚发生的事件,是进展期乳腺癌的一种信号。     

组织芯片与普通切片免疫组化表达平行性的研究

目的 探讨应用组织芯片进行免疫组化研究的可靠性.方法 收集90例乳腺癌病例,制成直径2mm的组织芯片.行cyclin E和nm23免疫组织化学染色,与普通切片的免疫组化染色结果进行统计学处理比较.结果 组织芯片与普通切片cyclin E和nm23的表达显著相关,其一致性(阳性/阴性)分别是96.67%和97.77%.两者之间的差异没有统计学意义(P>0.05).通过组织芯片得到的cyclin E和nm23与乳腺癌淋巴结转移的关系也与已报道的普通切片之结果一致.结论 组织芯片免疫组化技术可以作为一种可靠、有效的高通量分析工具.     

ATM基因rs4585位点多态性及免疫组化表达与乳腺癌相关性研究

目的 探讨共济失调毛细血管扩张突变(ATM)基因单核苷酸多态性(SNP)rs4585位点及免疫组化表达在乳腺癌发生、发展过程中的相关性。方法 应用多重SNaPshot法研究ATM基因rs4585位点的多态性,其中乳腺癌56例,乳腺良性肿瘤72例,并对乳腺癌组织进行雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、人表皮生长因子受体2(HER2)和Ki-67蛋白进行检测,分析基因型与乳腺癌的关系。结果 ATM基因rs4585基因型分布与乳腺癌患病风险无相关性(P>0.05),与乳腺癌的发生部位、病理类型、肿瘤大小、有无淋巴结转移,以及ER、PR、HER2、Ki-67的表达均无明显相关(P>0.05)。结论 ATM基因rs4585位点多态性可能与乳腺癌患病风险、临床病理特征及免疫组化指标无明显相关。