EPS8在卵巢浆液性腺癌中的表达分析

目的检测表皮生长因子受体通路底物8（epidermal growth factor receptor pathway substrate 8, Eps8）在卵巢浆液性腺癌组织、上皮性卵巢良性肿瘤及正常卵巢组织的表达,探讨Eps8在不同卵巢组织中的表达情况及在卵巢癌化疗耐药中的作用。方法采用免疫组织化学法检测76例卵巢浆液性腺癌（其中化疗敏感型40例,化疗耐药型36例）组织、15例上皮性卵巢良性肿瘤及15例正常卵巢组织中Eps8的表达情况,并分析其与卵巢癌化疗耐药间的关系。结果Eps8在卵巢浆液性腺癌组织中高表达,在上皮性卵巢良性肿瘤及正常卵巢组织中低表达,差异有统计学意义（P〈0．05）,但在化疗耐药型及化疗敏感型中的表达差异无统计学意义（P〉0．05）。结论Eps8在卵巢浆液性腺癌中高表达,其定位主要在细胞浆中,在化疗耐药型及化疗敏感型中的表达差异无统计学意义。     

p-Akt-mTOR-p70S6K信号通路蛋白与卵巢癌临床病理特征及化疗耐药的相关性

目的：研究磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)-雷帕霉素靶蛋白(mTOR)-p70核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)信号通路中 的p-Akt,mTOR和p70S6K 3种蛋白与卵巢癌临床病理特征及化学药物治疗(简称化疗)耐药的关系。方法：采用免疫组 织化学方法检测18例卵巢癌化疗耐药和25例化疗敏感组织中p-Akt,mTOR和p70S6K蛋白的表达,分析这些蛋白与卵 巢癌临床病理特征及化疗耐药的相关性。结果：p-Akt蛋白在卵巢浆液性癌、黏液性癌和子宫内膜样癌中的表达分别 为77.14%,50.00%和66.67%,三者比较差异无统计学意义(P>0.05);在高、中分化和低分化癌中的表达分别为73.33% 和75.00%,两者比较差异无统计学意义(P>0.05);在I~II期和III~IV期中的表达分别为18.18%和93.75%,差异有统计学 意义(P<0.05)。mTOR蛋白在卵巢浆液性癌、黏液性癌和子宫内膜样癌中的表达分别为77.14%,100.00%和83.33%,三 者比较差异无统计学意义(P>0.05);在高、中分化和低分化癌中的表达分别为80.00%和78.57%,两者比较差异无统 计学意义(P>0.05);在I~II期和III~IV期中的表达分别为27.27%和96.88%,差异有统计学意义(P<0.05)。p70S6K蛋白在 卵巢浆液性癌、黏液性癌和子宫内膜样癌中的表达分别为80.00%,100.00%和100.00%,三者比较差异无统计学意义 (P>0.05);在高、中分化和低分化癌中的表达分别为93.33%和78.57%,两者比较差异无统计学意义(P>0.05);在I~II期 和III~IV期中的表达分别为45.45%和96.88%,差异有统计学意义(P<0.05)。p-Akt蛋白在卵巢癌化疗耐药和敏感组织中 的表达率分别为88.89%及64.00%;mTOR蛋白在耐药和敏感组织中的表达率分别为94.44%及68.00%;p70S6K蛋白在耐 药和敏感组织中的表达率分别为100.00%及72.00%,3种蛋白在耐药组中的表达均高于敏感组(P<0.05)。结论：p-Akt- mTOR-p70S6K信号通路中的3种蛋白可能参与卵巢癌的侵袭和转移,这3种蛋白的表达上调可能与卵巢癌化疗耐药有 关,在临床上可作为预测卵巢癌化疗耐药的标志。     

脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶与卵巢上皮性癌耐药相关性研究

目的 探讨脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶(APE1)与卵巢上皮性癌耐药性的相关性以及其在卵巢癌化疗耐药中的作用机制.方法 应用免疫组织化学法对78例原发性卵巢上皮性癌组织和卵巢癌顺铂敏感株A2780、顺铂耐药株CP70中APE1的表达进行测定.结果 APE1在卵巢上皮性癌组织中呈胞核表达、胞浆表达或核浆共同表达.化疗敏感组和耐药组的APE1表达强度间差异有统计学意义(P=0.045),核表达者化疗敏感率与浆表达、核浆表达者比较差异有统计学意义(P=0.037).在卵巢癌顺铂耐药株CP70中APE1表达水平较顺铂敏感株A2780明显增高.结论 APE1表达强度和定位与以铂类为基础化疗药物的敏感性相关,时卵巢癌的化疗疗效有提示作用,检测APE1对前瞻性预测化疗药物敏感性和判断化疗疗效具有一定的临床指导价值.     

人激肽释放酶10在卵巢癌组织中的表达及其意义

目的：研究人激肽释放酶10（hK10）在卵巢癌组织中的表达,探讨hK10基因在卵巢癌早期诊断研究中的意义。方法：①应用4 097靶基因点基因芯片对5例卵巢浆液性囊腺癌及5例正常卵巢组织进行基因表达谱分析,筛查差异表达基因。②应用RT-PCR检测32例卵巢浆液性囊腺癌组织、20例卵巢浆液性囊腺瘤组织及16例正常卵巢组织中hK10表达并对比分析。结果：①基因芯片筛查出差异表达基因58个,其中表达增高（上调趋势）基因30个,表达降低（下调趋势）基因28个,hK10基因为表达上调基因（Cy5/Cy3＝3.031）。②hK10基因在正常卵巢及卵巢瘤组织中有弱表达(0.023±0015和0.023±0.045),在卵巢癌组织中表达明显增强(0.106±0.045),hK10基因在卵巢癌组的表达明显高于正常卵巢组及卵巢瘤组（P<0.01）。结论：基因芯片能够用于筛查卵巢癌差异表达基因;hK10基因在卵巢癌组织表达明显增强,有望成为卵巢癌的肿瘤标志物。      

miR-17~92基因簇在宫颈癌、子宫内膜癌与卵巢癌多种细胞系中的表达及意义

 目的检测宫颈癌、子宫内膜癌与卵巢癌多种细胞系中miR-17~92基因簇的表达,初步探讨miR-17~92基因簇与妇科肿瘤发生的关系。方法利用实时定量PCR方法配对检测Hela/Siha、Ishikawa/HEC-1A、HO-8910/HO-8910PM、SKOV3/SKOV3-TR30/SKOV3-DDP、COC1/COC1-DDP和CAOV3、OVCAR3中miR-17~92基因簇的表达水平;应用miRWalk数据库、miR2Subpath数据库和KEGGpathway功能聚类分析miR-17~92基因簇调控的靶基因及参与的与肿瘤相关的信号通路。结果与人脐静脉血管内皮细胞系ECV-304相比,miR-17~92基因簇在宫颈癌细胞系Hela与Siha中均呈下调表达（F=9.86,P<0.001）;在子宫内膜癌细胞系Ishikawa与HEC-1A中均呈上调表达（F=10.35,P<0.005）;与人正常卵巢细胞系IOSE386相比,miR-17~92基因簇在卵巢癌细胞系HO-8910、HO-8910PM、COC1、COC1/DDP、CAOV3、OVCAR3、SKOV3、SKOV3-TR30、SKOV3/DDP均呈上调表达（F=12.64,P<0.001）。预测得出miR-17~92基因簇的靶基因为ABCA1、ARHGAP21、BAP1、C10orf46、CCND1、CD4等共30个;通过miR2Subpath数据库富集分析得出miR-17~92基因簇参与的生物学过程共8个,KEGGpathway分析得出miR-17~92基因簇参与的信号通路共11条。结论miR-17~92基因簇在宫颈癌、子宫内膜癌与卵巢癌多种细胞系中表达,且在生物学行为不同的同一肿瘤细胞系中存在差异表达。miR-17~92基因簇可能通过相关的靶基因和信号通路参与宫颈癌、子宫内膜癌与卵巢癌的发生、发展并影响其生物学行为。     

应用比较基因组杂交技术对卵巢癌耐药机制的研究

目的探讨卵巢癌化疗耐药患者组织中染色体的变化特征,寻找或定位与卵巢癌化疗耐药密切相关的基因,以便对其耐药机制进一步研究。方法采用比较基因组杂交技术分析卵巢癌化疗耐药组（浆液性卵巢癌6例、黏液性卵巢癌3例、子宫内膜样卵巢癌2例、透明细胞癌1例,共12例）和化疗敏感组（浆液性卵巢癌5例、黏液性卵巢癌3例、子宫内膜样卵巢癌2例、透明细胞癌2例,共12例）两组癌细胞基因组的不平衡,即DNA丢失或扩增。结果化疗耐药患者组织中最常见的染色体DNA拷贝数增加的部位是3q,8q,20q,11q,17q,2p,1q;常见的染色体DNA拷贝数缺失的部位是9p,5q,10q,3p。其中17q的增加,耐药组为66．7％,敏感组为16．7％;1q的增加,耐药组为66、7％,敏感组为16．7％;3p的丢失,耐药组为50．0％,敏感组为8．3％,在化疗耐药患者组织中表现更加明显。结论卵巢癌耐药患者组织中细胞染色体基因组最明显的改变为17q,1q的增加以及3p的丢失,这些部位可能存在与卵巢癌化疗耐药密切相关的癌基因及抑癌基因。     

卵巢癌基因表达谱的cDNA微矩阵研究

目的： 探讨cDNA微矩阵（基因芯片）研究卵巢癌基因表达谱及分析部分差异表达基因功能的可行性。方法：采用4 097个靶基因点BiostarH-40s表达谱基因芯片, 检测5例卵巢浆液性腺癌及5例正常卵巢组织（cy3-dUTP标记正常卵巢组织的RNA,用cy5-dUTP标记卵巢癌组织的RNA）的基因表达谱。结果：两组病例卵巢癌基因表达谱中,4例以上差异表达基因163个,其中基因表达增高（上调趋势）66个,基因表达降低（下调趋势）97个。明确基因功能分类的差异表达基因37个,其中原癌基因和抑癌基因类基因3个,细胞周期蛋白类基因1个,细胞骨架及运动蛋白类基因6个,DNA结合、转录和转录因子类基因1个,细胞受体类基因2个,免疫相关蛋白类基因5个,代谢类基因7个,蛋白翻译合成类基因2个,发育相关基因3个,其他类基因7个。 结论： 应用cDNA微矩阵研究卵巢癌基因表达谱, 发现差异表达基因及其基因功能分类。     

Gab2在卵巢癌中的表达及其与铂类药物化疗耐药的相关性研究

目的 通过检测Gab2在卵巢癌中的表达,探讨其与卵巢癌铂类化疗耐药的相关性.方法 利用免疫组织化学及蛋白质印迹法(Western blotting)对该院妇产科2011年1月至2015年6月手术切除的107例患者浆液性卵巢癌组织、12例膀胱癌根治术中切除正常卵巢组织中Gab2的表达进行检测,分析Gab2表达与临床分期,以及与以铂类药物为基础的联合化疗疗效的相关性.结果 卵巢癌组织中Gab2表达水平明显高于正常卵巢组织,且与肿瘤的国际妇产科联盟(FIGO)临床分期有关,分期越晚表达越高,差异均有统计学意义(P<0.05);61例卵巢癌患者化疗敏感,46例发生耐药,化疗耐药患者Gab2表达水平明显高于化疗敏感者,差异有统计学意义(P<0.05).结论 Gab2可能成为预测铂类药物化疗敏感性的有效指标之一.     

LncRNA CASC2、miR-155-5p与上皮性卵巢癌病人化疗敏感性及预后的相关性研究

目的：分析长链非编码RNA(LncRNA)癌易感性候选基因2(CASC2)、miR-155-5p与上皮性卵巢癌病人化疗敏感性及预后的相关性关系。方法：采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测87例上皮性卵巢癌病人(上皮性卵巢癌组)及72例卵巢良性肿瘤病人(对照组)LncRNA CASC2、miR-155-5p表达水平,比较2组LncRNA CASC2、miR-155-5p表达水平,分析上皮性卵巢癌组LncRNA CASC2、miR-155-5p表达水平与临床病理特征的相关性关系。根据上皮性卵巢癌组病人术后化疗是否出现继发耐药分为化疗耐药组(n=32例)和化疗敏感组(n=55例),分析LncRNA CASC2、miR-155-5p表达水平与化疗敏感性的关系。同时采用Pearson法分析上皮性卵巢癌组织中LncRNA CASC2与miR-155-5p的相关性关系,采用Kaplan-Meier法分析两者与上皮性卵巢癌病人5年生存情况的关系。结果：上皮性卵巢癌组LncRNA CASC2表达水平低于对照组,而miR-155-5p表达水平高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01);...     

miR-181a在卵巢癌组织中的表达及临床意义

目的:分析miR-181a在卵巢癌组织中的表达并探究其与临床特征之间的关系。方法:选取我院妇科2011-2013年治疗的30例卵巢癌恶性肿瘤患者的卵巢组织为卵巢癌组,选取同期术中诊断卵囊巢浆液性或黏液性囊腺瘤行卵巢切除的卵巢组织为对照组。提取两组患者卵巢组织中的总RNA后通过microRNA茎环引物进行逆转录,实时荧光定量PCR(q-PCR)技术检测正常组织与卵巢癌组织中miR-181a的表达,并分析不同临床特征中miR-181a的表达差异。结果:miR-181a在卵巢癌中表达显著升高,相对正常组表达量(2-ΔΔCt值)为20.620±1.242。上皮性卵巢癌组织中,高分化卵巢癌miR-181a的表达明显低于中、低分化组织;病理分期Ⅰ、Ⅱ期的卵巢癌患者miR-181a表达明显低于Ⅲ、Ⅳ;存在淋巴转移的患者miR-181a表达明显高于无淋巴转移的患者;术前CA-125<1 000μmol/L的患者miR-181a表达明显低于CA-125>1 000μmol/L的患者;腹水量<1 000ml的患者miR-181a的表达明显低于腹水量>1 000ml的患者,以上差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-181a在卵巢癌组织中表达差异明显,并与患者FIGO分期、组织分级、淋巴转移、术前CA-125等临床特征相关,提示它可能参与调节卵巢癌的发生、发展并可能成为卵巢癌治疗的一个潜在靶点。     

基于活体成像技术的裸鼠卵巢癌休眠模型的建立

目的 建立基于活体成像的裸鼠卵巢癌休眠模型并利用小动物活体成像技术验证休眠细胞的存在.方法 采用慢病毒载体对人卵巢癌skov-3细胞稳定转染萤火虫荧光素酶基因(firefly luciferase gene),经筛选获得稳定表达荧光素酶基因的人卵巢癌细胞株(skov-3/luc).将skov-3/luc细胞接种至裸小鼠右侧腋部皮下,成瘤后观测荧光并做肿瘤切除手术,术后的裸鼠再常规喂养8周后选取接种肿瘤处肉眼未见肿瘤组织生长的裸鼠进行活体成像观察,显示接种处肿瘤细胞荧光阳性者,即认为卵巢癌裸鼠休眠模型建立成功.结果 筛选到了稳定表达Luc的skov-3/luc细胞株;成功构建了基于活体成像的裸鼠卵巢癌休眠模型,并利用小动物活体成像技术验证了裸鼠体内卵巢癌休眠细胞的存在.结论 利用活体成像技术构建的裸鼠卵巢癌休眠模型为研究肿瘤休眠的机制及诱导和维持肿瘤细胞休眠的方法提供了理想的实验动物模型.     

Identification of Differentially Expressed MicroRNAs in the Ovary of Polycystic Ovary Syndrome with Hyperandrogenism and Insulin Resistance

Background:Polycystic ovary syndrome (PCOS) is the commonest endocrinopathy in women of reproductive age.The patients often develop insulin resistance (IR) or hyperinsulinemia despite manifesting anovu...     

高迁移率蛋白A2在浆液性卵巢癌中高表达及其与let-7家族microRNA的关系

目的：检测高迁移率蛋白A2（high mobility group A2, HMGA2）、let-7家族microRNA和P53在浆液性卵巢癌中的表达,分析HMGA2和let-7家族microRNA的关系,比较HMGA2与P53在浆液性卵巢癌中的表达情况。方法：用免疫组织化学方法检测50例卵巢癌和4例正常输卵管石蜡包埋标本中HMGA2和P53蛋白的表达,采用实时荧光定量逆转录-PCR方法检测对应标本以及卵巢癌细胞系中HMGA2 mRNA和let-7家族microRNA的表达。结果：HMGA2 和P53在浆液性卵巢癌中免疫组织化学染色阳性率分别为70%（35/50）和78%(39/50)。HMGA2在输卵管纤毛上皮中有微弱表达,在分泌型上皮细胞中不表达;HMGA2的表达存在随着肿瘤病理分级的增高而增高的趋势,但与肿瘤临床分期没有关系。HMGA2 mRNA在所有卵巢癌标本中均能检测到,但在72%（36/50）的标本中表达量高于正常输卵管组;恶性程度高的细胞系（SKOV3.ipl）比恶性程度低(SKOV3)的细胞系HMGA2 mRNA表达更高。let-7家族各成员在所有浆液性卵巢癌标本中均表达,其表达量与HMGA2 mRNA呈低度负相关(r=-0.305,P＜0.05)。结论：HMGA2可能与P53一样,可以作为浆液性卵巢癌的生物标志物,其表达与浆液性卵巢癌恶性程度有关。let-7表达降低是HMGA2在浆液性卵巢癌中高表达的一种、但非唯一机制。     

miR-655在上皮性卵巢癌中的表达研究

目的探讨微小RNA（microRNA,miR）-655在上皮性卵巢癌中的表达、作用及其可能的分子机制。方法采用实时定量-PCR检测miR-655在40对上皮性卵巢癌组织和正常组织中的表达,分析miR-655表达水平与临床病理之间的关系。Cell Counting Kit-8（CCK-8）和流式细胞术检测miR-655对卵巢癌细胞增殖及凋亡的影响。Western blotting检测PI3K、AKT和mTOR蛋白的表达。结果miR-655在上皮性卵巢癌组织中的表达量明显低于正常组织（P < 0.01）。miR-655表达水平在不同肿瘤直径、病理分化程度和是否淋巴结转移病人间差异均有统计学意义（P < 0.05~P < 0.01）,而不同年龄、CA-125病人间miR-655 mimics表达差异均无统计学意义（P>0.05）。转染miR-655 mimics可明显抑制卵巢癌细胞的增殖并促进细胞的凋亡（P < 0.01）;miR-655 mimics转染明显抑制卵巢癌细胞中PI3K、AKT和mTOR活性（P < 0.01）。结论miR-655在卵巢癌组织中明显低表达,miR-655低表达可能与卵巢癌的肿瘤生长和分化程度相关,miR-655可明显抑制卵巢癌细胞的增殖,并促进其凋亡,其在卵巢癌病人中具有一定的靶向治疗价值。     

NSCLC患者血清miR系列基因表达水平与化疗疗效的相关性研究

目的 探讨非小细胞肺癌(non-small lung cancer, NSCLC）患者血清miR (microRNA)系列基因表达水平及与化疗疗效的相关性。方法 2011 年3 月~2016 年9 月选择200 例未经任何抗癌治疗的NSCLC 患者作为NSCLC组,100 例健康志愿者作为健康组,分别收集血清样本;25 例晚期NSCLC 患者化疗前和化疗后的血清样本。采用qRT-PCR 方法检测NSCLC 组和健康组中血清miR 系列基因表达水平,判断血清miR 系列基因表达水平与预后的关系。结果 NSCLC 组的血清miR-19a、miR-19b-1、miR-20a、miR-17-3p、miR-18a 和miR-92-1 基因表达与健康组存在差异(P<0.01）。NSCLC 患者的血清上述基因表达化疗前与化疗后存在明显差异（P<0.05）;健康组的血清miR-19a、miR-19b-1、miR-20a、miR-17-3p、miR-18a 和miR-92-1 基因表达与化疗前患者存在明显差异（P<0.05）,与化疗后的患者比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论 NSCLC 患者血清存在高水平miR 系列基因表达,化疗可降低miR 系列基因表达水平,上述6 种miR 基因血清表达有助于NSCLC 的诊断、预测和预后的判断,联合检测有助于敏感性的提高。     

免疫调节肽对卵巢癌skov3细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的研究免疫调节肽(PGPIPN)对人卵巢癌细胞株skov3凋亡及相关基因表达的影响。方法体外培养卵巢癌skov3细胞,分别使用10-6、10-5、10-4、10-3、10-2g/L的PGPIPN孵育skov3细胞48 h,观察量效关系;通过cDNA芯片技术筛选凋亡相关基因;实时荧光定量PCR法检测Bax、Bcl-xl、Caspase-3 mRNA水平的表达量;Western blot法检测Bax、Bcl-xl、Caspase-3蛋白表达量。结果与对照组相比,Bax和Caspase-3的表达随着PGPIPN浓度升高而升高(P<0.05);Bcl-xl的表达随着PGPIPN浓度升高而降低(P<0.05)。结论 PGPIPN通过促进细胞中Bax及抑制Bcl-xl的表达来调控skov3细胞的凋亡,该过程可能和Caspase的活化相关。     

miR-125b confers resistance of ovarian cancer cells to cisplatin by targeting pro-apoptotic Bcl-2 antagonist killer 1

Chemotherapy is the preferred therapeutic approach for advanced ovarian cancer,but a successful long-term treatment is prevented by the development of drug resistance.Recent works have underlined the involvement of non-coding RNAs,microRNAs(miRNAs) in cancer development,with several conjectures regarding their possible involvement in the evolution of drug resistance.This study is to investigate the promoting effects and mechanism of miR-125b involved in the development of chemoresistance in ovarian cancer.The different expression of miR-125b in cisplatin-sensitive ovarian cancer cell line(OV2008) and its resistant variant(C13*) was identified by real-time PCR.An in vitro cytotoxicity assay and apoptosis assay using CCK-8 assay and flow cytometry,were carried out to detect the effect of miR-125b and Bak1 on cisplatin resistance of cells.Real-time PCR,Western blotting and luciferase reporter assay were used to detect whether Bak1 is a target of miR-125b.As compared with OV2008 cells,the expression levels of miR-125b in C13* cells were increased.It was found that the up-regulation of microRNA-125b caused a marked inhibition of cisplatin-induced cytotoxicity and apoptosis and a subsequent increase in the resistance to cisplatin in OV2008 and C13* cells.Moreover,Bak1 was a direct target of miR-125b,and down-regulation of Bak1 suppressed cisplatin-induced apoptosis and led to an increased resistance to cisplatin.Our study indicates that miR-125b has a significantly promoting effect on chemoresistance of C13* cells and up-regulation of miR-125b expression contributes to cisplatin resistance through suppression of Bak1 expression.This finding has important implications in the development of targeted therapeutics for overcoming cisplatin resistance in ovarian cancer.     

驱动蛋白家族成员2C与卵巢癌化学药物治疗耐药的相关性

目的 探讨驱动蛋白家族成员2C(kinesin family proteins 2C,KIF2C)与卵巢癌化学药物治疗(以下简称化疗)耐药的相关性。方法 选取2010年1月至2020年12月于首都医科大学附属北京同仁医院接受手术治疗的上皮性卵巢癌患者151例。其中铂类化疗敏感患者98例，铂类化疗耐药患者53例。利用免疫组化染色法检测KIF2C在化疗敏感及化疗耐药卵巢癌组织中的表达情况。结果 卵巢癌化疗耐药组织中KIF2C明显低表达。KIF2C及病理分期ⅢC期是影响卵巢癌化疗耐药的危险因素。结论 KIF2C有可能成为预测卵巢癌患者化疗敏感性的指标，并可能成为治疗化疗耐药卵巢癌患者的新型治疗靶点。