N乙L-半胱氨酸对胎儿卵巢组织体外培养的影响

目的：探讨硫醇类抗氧化剂 N 乙酰 L 半胱氨酸(n acetyl l cysteine,NAC)对胎儿卵巢组织体外培养效果的影响。方法：取中期引产的20～28周死亡女胎的卵巢,分别在含NAC 25、50、100?mmol/L(实验组)和不含NAC(对照组)的培养液内培养0～9?d,采用液相平衡竞争放射免疫分析法检测各组卵巢组织在不同的培养时间雌二醇（estrogen,E2）分泌量;观察培养后各组卵巢卵泡的形态学变化。结果：培养后卵泡可进一步发育,各期卵泡构成比实验组与未培养组、对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05),而3个不同剂量实验组两两之间在卵泡构成比上差异无统计学意义（P>0.05）;胎儿卵巢组织经体外培养后能够分泌E2,E2分泌量实验组和对照组之间差异有统计学意义(P<0.05),随着培养时间的延长E2分泌量显著增加(P<0.05);而在添加不同剂量NAC的3个实验组,两两比较差异则无统计学意义(P>0.05)。结论：在培养液中添加NAC后,E2分泌量增加,各期卵泡的形态得以维持并能进一步发育,为人胎儿卵巢培养后移植提供了实验依据。     

蛇床子素对卵巢组织氧化应激损伤的作用

目的 探讨蛇床子素(OST)对卵巢氧化损伤的保护作用。方法 体外培养小鼠卵巢组织,用过氧化氢(H_2O_2)构建卵巢组织氧化损伤模型(模型组);药物组以20μg/mL、40μg/mL和80μg/mL 3种不同浓度OST预处理卵巢组织后再加入H_2O_2;同时设对照组。在显微镜下计数卵巢组织内卵泡总数和生长卵泡数,计算生长卵泡率;化学发光法检测培养液中雌二醇(E2)的水平,WST-1法检测卵巢组织中SOD活性,TBA法检测卵巢组织中MDA含量。结果 与对照组相比,H_2O_2损伤模型组卵巢生长卵泡数、卵泡总数和生长卵泡率均明显下降,培养第4天的培养液中E2浓度明显下降,组织内SOD活性显著下降(P0.01),MDA含量明显升高(P0.01)。40μg/mL和80μg/mL两个浓度的OST预处理后,卵巢组织中的生长卵泡数、卵泡总数和生长卵泡率、第4天培养液中的E2浓度、组织内SOD活性均较模型组有不同程度的上升,MDA含量下降(P0.01)。20μg/mL OST组仅在第4天培养液中的E2浓度上明显高于模型组,其他相关指标相对于模型组均无显著性差异。结论 一定浓度的蛇床子素预处理可减轻H_2O_2对卵巢组织的氧化应激损伤。     

抗生长分化因子-9抗体对化疗所致大鼠卵巢损伤的保护作用

目的 探讨抗生长分化因子-9抗体(Anti-GDF-9)对化疗所致体外培养大鼠卵巢损伤的保护作用.方法 实验分3组,每组32个卵巢:(1)正常对照组不加磷酰胺氮芥(PM);(2)PM组加入10 μg /mL 的PM;(3)抗体组在加入PM前24 h加入Anti-GDF-9(5 μg/mL).加入PM前,加入后2、4、6...     

β-巯基乙醇对胎儿卵巢组织体外培养的影响

目的探讨低分子量的硫醇类化合物-β-巯基乙醇(β-ME)对胎儿卵巢组织体外培养效果的影响。方法取中期引产的20～22周死亡女胎的卵巢,分别在含β-ME50μM、100μMβ-ME(实验组)和不含β-ME(对照组)的培养液内培养3～9d,观察培养后各组卵巢卵泡的形态学变化。结果胎儿卵巢组织经体外培养后可进一步发育,培养后各期卵泡构成比实验组与未培养组、对照组比较差异均有统计学意义(P<005),而在添加β-巯基乙醇的两个实验组(50μM和100μMβ-ME)之间在卵泡构成比上差异则无统计学意义(P>005)。结论在培养液中添加β-巯基乙醇后,可以更好地维持卵泡的形态,促进卵泡发育。     

顺铂所致体外培养大鼠窦前卵泡损伤模型的建立

目的　探索建立顺铂(cisplatin，CDDP)所致大鼠窦前卵泡损伤的模型。方法以SD大鼠窦前卵泡为研究对象，将5组不同剂量（0、0.25、0.5、1、2μg/mL）的CDDP加入到体外培养的大鼠窦前卵泡培养液中。作用24h后，用光镜和Hoechst33342/PI荧光双染观察窦前卵泡的形态学变化，用化学发光法检测窦前卵泡培养液中的雌二醇(E2)水平。结果　CDDP浓度≥1μg/mL时，窦前卵泡的形态发生明显改变，培养液中E2浓度降低，与空白对照组比较差异有统计学意义（P＜0.01)。结论　1μg/mL的CDDP作用24h后即可明显抑制大鼠窦前卵泡的生长，出现闭锁现象。该模型的窦前卵泡形态及E2水平出现明显变化，与人类CDDP导致的卵巢功能早衰的病变过程相似。     

非酶糖基化终末产物介导的ERK1/2信号转导通路在大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌中的作用

目的：探讨非酶糖基化终末产物(AGEs)对大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌的影响及其潜在机制。方法首先,原代培养大鼠睾丸间质细胞,采用3β-HSD免疫细胞化学方法对间质细胞进行鉴定;其次,MTT法测定不同浓度的AGEs (25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL)及200μg/mL BSA作用Leydig细胞后的细胞活力;最后,用不同浓度的AGEs及200μg/mL BSA预处理Leydig细胞12 h,之后更换含相应浓度AGEs或BSA的培养基并加入终浓度为4 U/mL的hCG,其中对照组不含AGEs和BSA,ELISA法和Western blot分别检测睾酮分泌量和p-ERK1/2的表达量。结果 MTT法表明AGEs (≤200μg/mL)对Leydig细胞的活力在本实验所研究的时间内没有影响;ELISA法和Western blot结果显示,不同浓度AGEs处理后,hCG诱导的Leydig细胞睾酮合成量和ERK1/2蛋白的磷酸化都呈现浓度依赖性下降,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 AGEs通过抑制ERK1/2的磷酸化降低大鼠Leydig cells睾酮的分泌。     

飞机辅助动力装置引气特性计算方法

目的 观察胎牛血清(FBS)对体外培养获取的脂肪组织分泌物(ATE)诱导大鼠脂肪干细胞(ADSCs)成脂能力有无影响,并探讨ATE中不同蛋白浓度对诱导大鼠ADSCs成脂、细胞增殖和迁移能力的影响.方法 培养大鼠ADSCs并传代,对ADSCs成骨和成神经诱导,采用茜素红染色和神经丝蛋白(NF)免疫荧光检测鉴定.含有FBS和无FBS的培养基对脂肪组织块进行培养并收集ATE,对第4代ADSCs进行诱导,第7d时油红染色鉴定并计算成脂率;收集无FBS培养基获取的ATE,分为不同蛋白质量浓度组(100 μg/mL、250 μg/mL、500μg/mL组),对第4代ADSCs进行成脂诱导,观察各组成脂率;并观察不同蛋白质量浓度组对ADSCs细胞增殖和迁移的影响.结果 培养的ADSCs成骨和成神经诱导后茜素红染色和NF免疫荧光染色阳性;获取ATE时添加或不添加FBS,在第3d时均能诱导ADSCs成脂,第7d时的成脂率差异无统计学意义;ATE 500 μg/mL组较100 μg/mL、250 μg/mL组成脂率高(P均＜0.05),细胞培养2d后,3个不同蛋白质量浓度组均抑制细胞增殖,不同蛋白质量浓度间细胞抑制率差异无统计学意义(P均＞0.05);ATE中不同蛋白质量浓度对细胞的迁移无影响.结论 无FBS的培养基获取的ATE,短期内对ADSCs成脂能力没有影响;ATE蛋白浓度与ADSCs成脂率有关.     

脂肪组织分泌物中蛋白浓度对诱导脂肪干细胞成脂的影响

目的 观察胎牛血清(FBS)对体外培养获取的脂肪组织分泌物(ATE)诱导大鼠脂肪干细胞(ADSCs)成脂能力有无影响,并探讨ATE中不同蛋白浓度对诱导大鼠ADSCs成脂、细胞增殖和迁移能力的影响。 方法 培养大鼠ADSCs并传代,对ADSCs成骨和成神经诱导,采用茜素红染色和神经丝蛋白(NF)免疫荧光检测鉴定。含有FBS和无FBS的培养基对脂肪组织块进行培养并收集ATE,对第4代ADSCs进行诱导,第7 d时油红染色鉴定并计算成脂率;收集无FBS培养基获取的ATE,分为不同蛋白质量浓度组(100 μg/mL、250 μg/mL、500 μg/mL组),对第4代ADSCs进行成脂诱导,观察各组成脂率;并观察不同蛋白质量浓度组对ADSCs细胞增殖和迁移的影响。 结果 培养的ADSCs成骨和成神经诱导后茜素红染色和NF免疫荧光染色阳性;获取ATE时添加或不添加FBS,在第3 d时均能诱导ADSCs成脂,第7 d时的成脂率差异无统计学意义;ATE 500 μg/mL组较100 μg/mL、250 μg/mL组成脂率高(P均<0.05),细胞培养2 d后,3个不同蛋白质量浓度组均抑制细胞增殖,不同蛋白质量浓度间细胞抑制率差异无统计学意义(P均>0.05);ATE中不同蛋白质量浓度对细胞的迁移无影响。 结论 无FBS的培养基获取的ATE,短期内对ADSCs成脂能力没有影响;ATE蛋白浓度与ADSCs成脂率有关。     

抗氧化剂联合应用优化人卵巢组织冻融效果的研究

目的 以首都医科大学附属北京妇产医院生育力保护中心现有人卵巢组织冻存复苏方案为基础,研究抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)和T(taurine,T)对卵巢组织的保护效果,以最大限度保护卵泡和基质细胞活性,提高复苏后卵泡发育潜能。方法 以本中心现有冻存复苏方案为对照组(C组),在此基础上加入5 mmol/L NAC(N组)或0.5 mmol/L牛磺酸(T组),或同时加入上述浓度的NAC和T(N+T组)。将16名患者的卵巢组织采用随机数字表法分配入以上4组,按照本中心标准化程序完成卵巢组织的处理和冻存。复苏后进行HE染色、钙黄绿素染色,进行形态学观察和卵泡活性检测,卵巢组织培养4 d后测定培养液中17β-雌二醇(17β-estradiol,E2)、抗苗勒管激素(anti-mullerian hormone,AMH),取培养后的卵巢组织测定细胞内活性氧类物质浓度(reactive oxygen species,ROS)。结果 各组卵泡结构和活性均良好,组间比较差异无统计学意义(P>0.05);各组卵巢组织经培养4 d后分泌E2浓度差异无统计学意义(P>0.05);N+T组卵巢组织中卵泡分泌AMH浓度高于C组,差异有统计学意义(P<0.05);N组和N+T组细胞内ROS浓度低于C组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 本中心现有冻存方案和在此基础上单独加入NAC或T的改良方案均可有效保护卵泡结构和卵泡活性,同时加入NAC和T可产生协同作用,在保存卵泡结构和活性的同时,提高复苏后卵泡分泌E2和AMH浓度,提高卵巢组织活性,减少细胞内ROS产生,降低氧化应激水平,提高复苏后的卵泡发育潜能。     

r-hFSH制备卵巢过度刺激综合征动物模型

目的 探讨用重组人促卵泡刺激素构建卵巢过度刺激综合征的大鼠模型.方法 20只未发育的雌性Wistar大鼠,随机分成重组人促卵泡刺激素组(实验组)和对照组.实验组从22 ～ 25日龄连续4d腹腔注射重组人促卵泡刺激素10IU,在第26日龄皮下注射绒毛膜促性腺激素30IU;对照组从第22～ 26日龄连续5d注射生理盐水0.1 ml,比较两组腹腔毛细血管通透性、腹水评分及卵巢重量.结果 实验组腹水EB含量(4.324±0.372μg/ml)、双侧卵巢重量(389±23.30 g)、腹水评分(2.43±0.34)与对照组腹水EB含量(0.312 ±0.032μg/ml)、双侧卵巢重量(29.37±4.26g)、腹水评分(1.00±0.00)比较,实验组均显著高于对照组(均P＜0.001).结论 重组人促卵泡刺激素可以用于适当日龄Wister大鼠构建OHSS动物模型.     

卵巢过度刺激综合征大鼠模型建立

为建立卵巢过度刺激综合征大鼠模型 ,将 2 2日龄大鼠 1 8只随机分成卵巢过度刺激组、超排卵组和生理盐水对照组 ,每组 6只。按照改良的 Ujioka方法 ,卵巢过度刺激组从第2 2日龄起皮下注射 PMSG1 0 IU连续 4d,第 2 6日龄注射 HCG1 0 0 IU;超排卵组从第 2 4日龄皮下注射 PMSG 1 0 IU,第 2 6日龄注射 HCG 1 0 IU,其余时间同上注射生理盐水 ;生理盐水对照组经皮下注射生理盐水 0 .1 ml连续 5d即从第 2 2～ 2 6日龄。在 HCG注射 72h后 ,尾静脉注射 1 % Evans blue( EB) 0 .1 ml以评价腹腔毛细血管通透性。EB注射 3 0 min后 ,观察卵巢重量、腹腔 EB含量及有无腹水出现。结果表明 :卵巢过度刺激组卵巢重量 ( 0 .3 53± 0 .0 2 2 8g)显著高于超排卵组和对照组卵巢重量 ( 0 .1 3 5± 0 .0 2 8g,0 .0 57± 0 .0 1 0 ;分别 P<0 .0 0 1 ) ;卵巢过度刺激组腹腔 EB含量 ( 2 .3 3± 1 .0 6μg)显著高于超排卵组和对照组卵巢重量 ( 0 .79± 0 .1 8μg,0 .68± 0 .1 9μg;分别 P<0 .0 0 1 )。卵巢过度刺激组出现腹水 ,而超排卵组和生理盐水对照组无腹水出现。这提示 :卵巢过度刺激综合征大鼠模型建立是成功的 ,该模型为系统性探讨卵巢过度刺激综合征的确切发病机理奠定了一定的基础。     

P-糖蛋白在吗啡耐受大鼠不同脑区表达差异的研究

目的 研究P-糖蛋白（P-glycoprotein, P-gp）在吗啡耐受大鼠脑内额叶皮层、海马及下丘脑表达差异。 方法 雄性SD大鼠12只随机分为吗啡耐受组和生理盐水对照组：吗啡耐受组连续皮下注射吗啡10 mg∕kg,2次∕d,连续7 d,建立吗啡耐受模型;生理盐水对照组同时注射生理盐水。模型建立并确认成功后处死大鼠,取出大鼠海马、下丘脑和额叶皮层组织,以逆转录聚合酶链反应分析比较两组不同脑区P-gp基因表达。 结果 吗啡耐受组大鼠海马和下丘脑P-gp的表达显著高于同组的额叶皮层（P<0.05）,并显著高于生理盐水对照组相同脑区P-gp的表达（P<0.05）;而在生理盐水对照组各脑区间P-gp的表达无显著差异（P>0.05）。 结论 海马和下丘脑P-gp表达增加明显高于额叶皮层,P-gp表达在吗啡耐受大鼠各脑区之间存在显著差异。     

自拟化瘀胶囊对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的:观察化瘀胶囊对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用.方法:Wistar 大鼠雄性60只,随机分为6组,每组10只.即化瘀胶囊高、中、低剂量组、尼莫地平组、模型对照组和假手术组分别给等体积生理盐水,各组均连续灌胃给药7天,末次给药30min 后.参照文献法制备大鼠脑缺血再灌注模型,通过观察模型大鼠脑含水量、脑组织 SOD 活性、MDA含量及NO含量的变化,探讨中药化瘀胶囊对局部永久性脑缺血的预防和治疗作用.结果:化瘀胶囊各组能降低脑组织含水量,可抑制脑水肿的发生,对缺血脑组织具有一定保护作用;化瘀胶囊高剂量组能明显提高脑组织 SOD 活性,减少脑组织 MDA 生成,中剂量组虽能明显增强SOD活性.但减少MDA生成作用不及低剂量组,提示化瘀胶囊对脑缺血的保护作用与抗自由基生成有关;再灌注2h后,脑组织 NO 明显升高,而化瘀胶囊高剂量组却可减少其生成,说明化瘀胶囊有抑制再灌注脑损伤引起的 NO 升高作用.结论:化瘀胶囊对大鼠脑缺血再灌注损伤具有明显的保护作用.     

小陷胸汤对鼠镇静安神作用的实验研究

目的观察小陷胸汤对小鼠及大鼠血液中、脑组织中5-HT(5-羟色胺)、GABA(r-氨基丁酸)镇静安神作用的影响。方法将50只KM种小鼠随机分为空白组、地西泮组、小陷胸汤高、中、低剂量组,灌胃7 d,观察各组小鼠的睡眠时间;将32只大鼠随机分为空白组、地西泮组、小陷胸汤组、小陷胸汤加地西泮组,于造模第8天开始,各组分别以不同药物连续灌胃8 d后,测定血液和脑组织中5-HT和GABA浓度。结果对小陷胸汤小鼠中剂量组与空白组平均睡眠持续时间比较差异有统计学意义(P<0.05)。小陷胸汤组大鼠与空白组血液和脑组织中GABA及5-HT浓度比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论小陷胸汤能够对小鼠和大鼠产生镇静安神作用,其作用机制可能与提高5-HT、GABA的浓度有关。     

缺氧条件下15-脂氧化酶在体内肺组织的表达

目的探讨缺氧过程中,在大鼠体内肺组织15-LO（15-脂氧化酶）在不同时间的表达程度和分布。方法通过制作缺氧模型,正常Wistar雌性大鼠随机分为对照组,缺氧1d、3d、5d和7d组,大鼠每天缺氧2h,其他时间置于空气中,原位杂交方法检测15-LO在体内的表达程度。结果在缺氧1d、3d、5d、7d时,通过原位杂交方法,可见在肺动脉内皮细胞和平滑肌细胞15-LO的表达逐渐增强,而且在各级肺动脉均有表达,正常对照组和缺氧7d组比较,P〈0.05有显著统计学意义。结论提示在体内15-LO随缺氧时间的增加,表达逐渐加强。     

不同剂量的盐酸戊乙奎醚对大鼠认知功能的影响

目的观察腹腔注射不同剂量的盐酸戊乙奎醚对大鼠认知功能及大鼠海马胆碱乙酰转移酶(ChAT)阳性细胞数量的影响。方法 12月龄Wistar大鼠32只,随机分为4组(n=8)。对照组:腹腔注射生理盐水2 mL;PL组:注射盐酸戊乙奎醚0.64 mg/kg;PM组盐酸戊乙奎醚1.28 mg/kg组(PH)组盐酸戊乙奎醚2.56 mg/kg。连续3 d腹腔给药,停药1d后进行Morris水迷宫行为测试。测试结束后立即处死大鼠,取海马组织,进行免疫组织化学染色,测定海马胆碱乙酰转移酶(ChAT)的表达。结果水迷宫测试结果:PM组和PH组大鼠的潜伏期(2～3 d)和游泳距离均明显长于PL组和NS组(P<0.05)。ChAT在PL组和NS组海马内表达均显著高于PM组和PH组(P<0.05)。结论腹腔重复注射较大剂量盐酸戊乙奎醚对大鼠的认知功能有明显损害作用,而注射小剂量的盐酸戊乙奎醚对大鼠的认知功能无明显损害作用。     

大鼠卵巢组织体积对其动情周期及体质量的影响

目的 观察切除大鼠不同卵巢体积对其动情周期及体质量的影响。方法 67只10周龄SD大鼠适应1周后,按照切除不同的卵巢体积共分为6组：A组,假手术组（n=12）;B组,切除单侧1/2（n=12）;C组,切除单侧全部（n=12）;D组,切除单侧全部+对侧1/2（n=12）;E组,切除单侧全部+对侧3/4（n=12）;F组,切除双侧全部（n=7）。卵巢部分切除术后4、8、12周连续9 d监测大鼠阴道细胞涂片,并于手术当天、术后4、6、8、10、12周监测大鼠体质量。分析切除大鼠不同卵巢体积对其动情周期及体质量的影响。结果 E组以及F组大鼠的动情周期与其余4组间差异有统计学意义（P<0.05）,动情周期天数高于其余4组。F组大鼠体质量明显高于其余5组（P<0.05）。结论 大鼠卵巢切除超过单侧全部+对侧3/4组时对动情周期有影响,双侧全切对体质量有影响。     

高脂饮食诱导青春期前雌性大鼠 多囊卵巢综合征的实验研究

目的 复制高脂饮食诱导青春期前雌性大鼠的多囊卵巢综合征（PCOS）动物模型,探讨其生殖 和代谢特征。方法 将青春期前雌性大鼠随机分成C 组和D 组,C 组接受正常饮食,D 组接受高脂饮食,连 续喂养105 d。另将成年雌性大鼠随机分成A 组和B 组,A 组接受1% 羧甲基纤维素,B 组接受1 mg/kg 灌服 来曲唑,连续喂养21 d。观察各组体重、动情周期和卵巢组织学变化,检测各组空腹血糖、胰岛素、糖耐量、 计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）、定量胰岛素敏感性检测指数、血脂水平、性激素水平、促黄体激素受 体（LHR）及促卵泡激素受体（FSHR）mRNA 的表达。结果 B 组0、7、14 及21 d 体重低于A 组（P <0.05）; B 组观察结束后卵巢重量高于A 组（P <0.05）;B 组喂养21 d 后糖耐量曲线下面积（AUC）高于A 组（P <0.05）; D 组49、77 及105 d 的糖耐量AUC、空腹胰岛素、HOMA-IR、血清总胆固醇、雌二醇及孕酮高于C 组 （P <0.05）,C 组定量胰岛素敏感性检测指数、睾酮高于D 组（P <0.05）。结论 高脂饮食可诱导青春期前雌 性大鼠PCOS,并产生代谢紊乱和卵巢改变,与PCOS 患者临床观察相似。     

炎性因子IL-1?IL-6?IL-10与卵巢过度刺激综合征大鼠的关系

目的:检测卵巢过度刺激综合征(0HSS)大鼠体内IL-1、IL-6、IL-10的变化,探讨OHSS的发病机制.方法:将Wistar雌性清洁大鼠随机分成生理盐水组和OHSS组.卵巢过度刺激组皮下注射孕马血清促性腺激素(PMSG)10 IU,每日1次,连续4天,第5天皮下注射100 IU人绒毛膜促性腺激素(HCG)一次建立OHSS模型;对照组皮下注射生理盐水每天1次,连续5天.HCG注射后48 h,取大鼠血、卵巢测IL-1、IL-6、IL-10(酶联免疫法).结果:OHSS组血和卵巢IL-1均高于对照组,有显著差异(P＜0.05);两组血IL-6、IL-10含量极低,无法测出.OHSS组卵巢IL-10含量显著降低,有统计学意义(P＜0.05).结论:大鼠OHSS全身症状可能与主要由IL-1介导的炎症相关,而IL-6和IL-10参与卵巢局部炎症.     

TUNEL法探讨以“肝脾”为核心对高催乳激素血症模型大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响

目的:运用TUNEL法探讨以"肝脾"为核心对高催乳激素血症(Hyperprolactinemia,HPRL)模型大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响。方法:将SD成熟雌性大鼠,随机分为空白对照组、模型组、溴隐亭组、中药高、中、低剂量组。除空白对照组外,其余组用甲氧氯普胺腹腔注射制作HPRL大鼠模型,各组完成相应30天灌胃治疗后,处死开腹取卵巢,运用TUNEL法检测凋亡阳性细胞数。结果:中药高剂量组能显著降低凋亡小体(P0.01),各剂量组呈量效关系;颗粒细胞生长量多、排列整齐、形态规则;中剂量组次之;低剂量组较差;结论:逍遥散加减方可降低凋亡小体的表达,改善卵巢颗粒细胞的形态,减少颗粒细胞凋亡。