白藜芦醇抑制U251人胶质瘤细胞增殖及其相关机制的探讨

目的 探讨白藜芦醇（Res）对U251胶质瘤细胞增殖和侵袭的抑制作用及其机制。方法 将不同浓度Res作用于U251胶质瘤细胞系，相差显微镜下观察其形态的变化，MTT法检测其对细胞生长增殖的抑制作用，流式细胞术（FCM）检测其对细胞周期的影响，用蛋白印迹（Western blot）检测Res处理前后U251细胞表皮生长因子受体（EGFR）、p53、p21、CDK4、CyclinD1、Bcl-2及caspase-3的表达，免疫组化分析MMP9、NFKB、P-AKT及AKT2的表达。结果 U251细胞经Res处理后，细胞形态发生一定变化，U251胶质瘤细胞的增殖被抑制，呈浓度和时间依赖性，细胞周期被阻滞在S期，Western blot检测显示EGFR、CyclinD1、CDK4、Bcl-2的表达降低，p21、p53、caspase-3蛋白表达升高，免疫组化检测显示MMP9，NFKB、P-AKT及AKT2的表达降低。结论 Res有可能通过调节EGFR及p53信号通路而抑制U251胶质瘤细胞的增殖和侵袭，诱导肿瘤细胞凋亡。     

EGFR反义RNA抑制人脑恶性胶质瘤细胞增殖并诱导凋亡的研究

目的:研究表皮生长因子受体(EGFR)反义RNA对抑制胶质瘤细胞增殖及诱导凋亡的作用。方法:将互补于EGFR 3′端部分序列的反义cDNA转染胶质瘤细胞,检测其生长率、增殖活性、EGFR mRNA及其蛋白表达和细胞凋亡。结果:胶质瘤细胞转染EGFR反义RNA后生长率及增殖活性下降,EGFRmRNA及蛋白表达减低,出现大量细胞凋亡。结论:EGFR有可能成为胶质瘤基因治疗的候选基因。     

NF-κB在胶质瘤细胞凋亡中的作用

NF-κB蛋白家族作为转录调控因子,参与细胞的增殖、抑制细胞的凋亡,并被证实和许多肿瘤的形成有关,在肿瘤发生发展过程中具有重要作用.近年来研究发现NF-κB与胶质瘤的恶性程度、侵袭性、血管生成密切相关,NF-κB通路介导了肿瘤相关基因的异常表达,从而抑制胶质瘤细胞凋亡,促进胶质瘤血管形成和转移等,直接影响胶质瘤的发生和发展,而降低胶质瘤中NF-κB的活性有可能成为治疗胶质瘤的新方向.     

白藜芦醇抑制SHG-44胶质瘤细胞生长实验研究

目的探讨白藜芦醇(Res)在体外诱导脑胶质瘤SHG-44细胞凋亡并抑制其生长的作用。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测量不同剂量的Res作用6h、24h和48h后对SHG-44胶质瘤细胞增殖的影响。HE染色、Hoechst33342荧光染色观察细胞形态改变,DNAladder检测细胞DNA裂解情况,流式细胞仪用异硫氰酸荧光素标记的膜联蛋白V(AnnexinV-FITC)和碘化丙啶(PI)双染检测凋亡率,并测定细胞周期的改变。结果Res明显抑制SHG-44细胞的生长和增殖(P<0.01),呈浓度及时间依赖性反应;Res所致的SHG-44胶质瘤细胞凋亡为浓度依赖关系,随着浓度的增高,凋亡更明显。此凋亡细胞周期主要发生G1期比例升高,S、G2期比例降低。结论Res明显抑制SHG-44细胞生长并诱导其发生凋亡和细胞周期改变,为Res用于治疗脑胶质细胞瘤提供了实验依据。     

FasL基因诱导胶质瘤细胞凋亡和抑制作用的研究

目的：探讨FasL基因诱导胶质瘤细胞凋亡和抑制增殖的作用。方法：脂质体介导FasL基因转染TJ905胶质瘤细胞系，原位杂交，FasL免疫组化鉴定转染成功,应用MTT法、Ki-67免疫组化检测TJ905细胞的增殖变化，TUNEL法检测细胞凋亡。结果：FasL基因转染成功后，肿瘤细胞内FasL表达增加，细胞增殖率降低，而凋亡细胞数增多。结论；FasL基因诱导的细胞凋亡可能成为胶质瘤治疗的新途径之一。     

白藜芦醇通过Fas-线粒体双途径诱导U-87脑胶质瘤细胞凋亡

目的研究白藜芦醇（Res）对人脑胶质瘤细胞系U-87细胞增殖抑制和诱导凋亡作用,并探讨其分子机制。方法以人脑胶质瘤细胞系U-87细胞为靶细胞,应用四氮唑蓝（MTT）比色法测定细胞增殖活性;AnnexinV/碘化丙啶（PI）双标记和细胞形态学法检测U-87细胞凋亡;流式细胞仪（FCM）检测细胞Fas蛋白表达水平、线粒体跨膜电位（Δψm）、细胞色素C（Cytc）释放和Caspase-3活性变化。结果Res明显抑制U-87细胞的增殖,呈浓度及时间依赖性（P〈0.01）;20μmol/L和40μmol/LRes处理U-87细胞,AnnexinV/PI染色显示凋亡细胞明显增多,细胞凋亡率分别为42.57%和62%,同时细胞出现典型的凋亡形态改变;FCM检测显示Fas蛋白表达增高1.6～2.2倍,线粒体Δψm降低15%～63%,胞浆Cytc含量增加2.5～7.3倍,Caspase-3被激活,活性增高25%～112%。结论Res体外明显抑制U-87细胞的增殖,通过Fas-线粒体双途径诱导U-87细胞凋亡。     

胶质瘤细胞c-fos基因表达水平对其增殖和凋亡的影响

目的原癌基因c-fos属快反应即刻早期应答基因，其编码蛋白是真核细胞内重要的转录因子．可诱导下游报道基因mRNA的转录和蛋白表达，参与细胞增殖和凋亡的调控，当其表达异常增加时可干扰细胞增殖和凋亡的动态平衡，诱导细胞转化和肿瘤形成。通过检测胶质瘤c-fos基因的表达水平观察c-fos基因与肿瘤恶性程度的关系以及对胶质瘤细胞增殖活性和凋亡程度的影响。方法用原位杂交、原位细胞凋亡检测和免疫组织化学染色方法观察73例不同级别人胶质瘤组织标本。结果73例胶质瘤均不同程度地表达c-fosmRNA和c-Fos蛋白（100％），这两种阳性肿瘤细胞密度均随肿瘤恶性程度的升高而相应增加，Ⅰ～Ⅱ级组、Ⅲ级组及Ⅳ级组间比较，差异均有统计学意义（均P〈0．01）。73例胶质瘤标本的增殖细胞核抗原阳性肿瘤细胞和凋亡肿瘤细胞的检出率均为100％．增殖细胞核抗原阳性肿瘤细胞密度随肿瘤恶性程度的升高而相应增加，Ⅰ～Ⅱ级组低于Ⅲ级组，Ⅲ级组低于Ⅳ级组，3组间比较差异均有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）；凋亡肿瘤细胞密度随肿瘤恶性程度的升高而相应减低，Ⅰ～Ⅱ级组高于Ⅲ级组，Ⅲ级组高于Ⅳ级组，3组间比较差异均有统计学意义（均P〈0．01）。直线相关分析证实，c-fos mRNA阳性肿瘤细胞密度、c-Fos蛋白阳性肿瘤细胞密度及增殖细胞核抗原阳性肿瘤细胞密度彼此间均呈显著性正相关（r=0．648～0．917，P〈0．001），这3种阳性肿瘤细胞的密度均与凋亡肿瘤细胞密度呈显著性负相关（r-=-0．727--0．775，P〈0．001）。结论c-fos基因表达水平对评价胶质瘤生物学行为有重要参考价值。胶质瘤细胞c-fos基因表达异常增加可能是促进肿瘤细胞增殖和抑制其凋亡的重要因素．并在胶质瘤发生及恶性进展过程中起重要作用。     

FasL基因诱导胶质瘤细胞凋亡和抑制增殖作用的研究

目的 :探讨FasL基因诱导胶质瘤细胞凋亡和抑制增殖的作用。方法 :脂质体介导FasL基因转染TJ90 5胶质瘤细胞系 ,原位杂交 ,FasL免疫组化鉴定转染成功 ,应用MTT法、Ki 67免疫组化检测TJ90 5细胞的增殖变化 ,TUNEL法检测细胞凋亡。结果 :FasL基因转染成功后 ,肿瘤细胞内FasL表达增加 ,细胞增殖率降低 ,而凋亡细胞数增多。结论 :FasL基因诱导的细胞凋亡可能成为胶质瘤治疗的新途径之一     

白藜芦醇对脑胶质瘤U87细胞及干细胞凋亡诱导作用

目的比较研究白黎芦醇(Res)对人脑胶质瘤U87细胞及其胶质瘤干细胞(GSC)的作用。方法膜联蛋白Ⅴ(AnnexinⅤ)和碘化丙啶(PI)染色法测定细胞凋亡;CD133标记、CD133与AnnexinⅤ/PI共标记检测GSC相对含量及GSC的凋亡;实时荧光定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测mdr1基因mRNA表达,流式细胞术(FCM)测定P-糖蛋白(P-gp)的表达;集落形成法(CFU)检测细胞的自我更新和增殖能力。结果不同浓度的Res显著诱导U87细胞凋亡,抑制U87细胞集落的形成。40～160μmol/L Res作用后U87细胞群体中CD133+GSC相对含量显著增高、GSC凋亡细胞数量增加,但GSC对Res的敏感性低于U87群体细胞。Res诱导后U87细胞群体中高表达mdr1/P-gp的细胞显著增高,并与GSC含量的增高基本相一致。结论白黎芦醇可诱导脑恶性胶质瘤U87群体细胞及其干细胞凋亡。     

ATRA诱导胶质瘤C6细胞凋亡过程中Bcl-2和Caspase-3表达的研究

目的研究全反式维甲酸（ATRA）诱导胶质瘤C6细胞凋亡过程中Caspase-3和Bcl-2表达情况,探讨ATRA诱导胶质瘤C6细胞凋亡的机制。方法用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法绘制ATRA不同浓度不同时间（6、12、24、48、72h）对胶质瘤C6细胞作用后细胞生长曲线,逆转录酶-多聚酶链反应（RT—PCR）检测凋亡相关基因Bcl-2和Caspase-3 mRNA水平的表达变化影响,Western blot分析Caspased和Bcl-2在胶质瘤C6细胞中的表达情况。结果胶质瘤C6细胞经ATRA诱导后,细胞的增殖明显受到抑制,通过RT-PCR结果证实Bcl-2 mRNA在ATRA作用下明显呈低表达而Caspase-3 mRNA的表达随时间延长逐渐增高,Western blot检测结果显示ATRA作用后,下调凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达并激活了凋亡蛋白Caspase-3的表达。结论ATRA对胶质瘤C6细胞的增殖具有抑制作用。     

Notch信号通路在脑胶质瘤中的研究进展

Notch信号通路通过细胞间受体及配体作用介导信号转导,在系统发育及肿瘤发生、发展等生理病理过程中发挥重要作用。Notch信号通路在脑胶质瘤方面也被广泛研究,Notch配体、受体及其下游基因在脑胶质瘤中都有不同程度的增高,且与胶质瘤级别呈一定的相关性。选择性抑制Notch信号通路,胶质瘤细胞生长受抑、凋亡增加,肿瘤动物模型存活时间延长。最近研究还发现Notch的配体之一DLL4(Deltalike-4)可以抑制肿瘤血管内皮细胞增殖,调控肿瘤血管形成,成为潜在的胶质瘤治疗靶点。     

EGFR过表达和基因扩增状态差异与胶质瘤临床病理和细胞凋亡关系研究

目的探讨人类表皮生长因子受体（EGFR）在胶质瘤中的表达和基因扩增状态,并分析其与肿瘤细胞凋亡的关系。方法采用Envision免疫组化二步法、westernblot和荧光原位杂交法（FISH）检测10例正常脑组织、60例不同级别原发性胶质瘤和25例继发性胶质母细胞瘤组织中EGFR蛋白水平和基因扩增状态,并分析其与肿瘤凋亡蛋白P53的相关性。结果在不同级别的原发性胶质瘤组织中,EGFR的阳性表达与扩增程度不同,I～Ⅱ级组与Ⅲ～Ⅳ级组间比较具有统计学差异（P〈0．05）;原发性胶质瘤中EGFR免疫组化阳性率和基因扩增率分别为85％和40％,显著高于继发性胶质母细胞瘤（28％和28％）,差异均具有统计学意义（P均〈0．05）;EGFR过表达与基因扩增状态并不一致,在有EGFR扩增的原发性胶质母细胞瘤中均有EGFR过表达,在EGFR过表达的肿瘤中仅有31．03％EGFR扩增;在胶质瘤中EGFR阳性表达与P53呈正相关（r=14．22,P：0．001）。结论EGFR在不同级别胶质瘤中差异性过表达和扩增,且与肿瘤细胞凋亡相关,其基因扩增状态在原发性和继发性胶质母细胞瘤中存在差异,EGFR可作为胶质母细胞瘤治疗的一个重要靶点。     

白藜芦醇抑制胶质瘤细胞生长与诱导细胞凋亡实验研究

目的探讨白藜芦醇(Res)对脑胶质瘤细胞(C6细胞株)和正常成纤维细胞(3T3细胞株)体外增殖的影响,进而观察Res诱导C6和3T3细胞系的凋亡作用.方法用不同浓度的Res处理C6和3T3细胞,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测Res对C6和3T3细胞的增殖作用,通过HE染色、扫描电子显微镜(SEM)、原位末端标记法(TUNEL)和流式细胞仪Annexin Ⅴ荧光染色,观察细胞的形态学结构改变,并定量检测细胞凋亡.结果 Res抑制了C6细胞的生长与增殖( P < 0.01 ),呈浓度依赖性反应;Res能明显诱导C6细胞凋亡,经210 μmol/L、120 μmol/L Res处理24 h后及对照组的C6细胞,其凋亡率分别为29.7%、14.6%及2.1%;相应的3T3细胞凋亡率分别为4.3%、3.5%、2.6%. 结论 Res能通过诱导C6细胞凋亡而抑制其生长与增殖,但对3T3细胞无此作用.本研究为临床应用Res治疗脑胶质细胞瘤提供了实验依据.     

苯乙酸对胶质瘤C6细胞增殖和凋亡的影响

目的观察诱导分化剂苯乙酸（PA）对胶质瘤C6细胞增殖和凋亡的影响。方法体外培养胶质瘤C6细胞，用0、2．5、5．0和7．5mmol／L不同浓度的PA，分别在PA诱导24、48、72、96h后。甲基噻唑基四唑（MTT）比色法检测细胞增殖抑制率，进一步用免疫细胞化学检测胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达变化，末端脱氧核糖核酸转移酶介导的脱氧尿嘧啶核苷酸缺口末端标记（TUNEL）检测细胞凋亡。结果PA显著抑制c6细胞增殖，随药物浓度的增加和作用时间的延长，细胞增殖抑制率增加。PA作用后GFAP表达增强。随PA浓度和作用时间的增加，细胞凋亡率增加。结论PA对胶质瘤C6细胞有显著的增殖抑制和诱导凋亡作用，呈时间剂量依赖性。     

华蟾素对人脑胶质瘤细胞SHG44增殖及凋亡的影响

目的初步探讨华蟾素对人脑胶质瘤细胞SHG44增殖、细胞周期分布及凋亡的影响机制。方法利用MTT法、流式细胞仪检测华蟾素对人脑胶质瘤细胞SHG44增殖及细胞周期变化的影响。AO／EB染色、透射电镜观察人脑胶质瘤细胞SHG44凋亡细胞形态学的变化。Westernblot检测Bcl-2与Caspase8蛋白的表达。结果华蟾素（1μg／ml、10μg／ml）对细胞株增殖具有显著抑制作用（P〈0．05）,并呈时间和浓度依赖性。沆式细胞仪检测可见凋亡峰,Go／G。期细胞明显增多（P〈0．05）;华蟾素作用后可使Bcl-2蛋白表达降低．Caspase8蛋白表达升高。结论华蟾素可调控人脑胶质瘤细胞SHG44的周期进程,诱导Bcl-2及Caspase8差异性表达,且具有抑制肿瘤细胞增殖及促凋亡的作用。     

胶质瘤中EGFR扩增、过表达及其与肿瘤增殖关系的研究

目的探讨表皮生长因子受体（EGFR）在胶质瘤中扩增、过表达及其在肿瘤增殖中的作用机制。方法应用SP免疫组化法、RT—PCR、Southern印迹法检测6例正常脑组织、50例不同级别胶质瘤及2个体外胶质瘤细胞系中在EGFR蛋白水平、mRNA水平、DNA水平的表达及扩增情况，以及与肿瘤增殖活性的相关性。结果不同级别的胶质瘤中，表达与扩增程度不同，Ⅱ级与Ⅲ、Ⅳ级肿瘤之间比较具有显著性差异：EGFR过表达与Ki-67在胶质瘤中的表达呈正相关．而EGFR过表达与扩增并不一致。结论EGFR过表达与胶质瘤的增殖活性增高有密切相关性，推测EGFR过表达是肿瘤进展中的早期事件而非进展期事件。     

环氧合酶-2及其抑制剂在胶质瘤中的研究进展

环氧合酶(cyclooxygenase,COX)又名前列腺素内过氧化物合成酶,COX-2是其诱导型酶。胶质瘤中COX-2的高表达和病理分级、预后相关。COX-2具有促进肿瘤细胞增殖、抑制细胞凋亡、诱导胶质瘤血管生成及通过前列腺素抑制肿瘤免疫等作用。目前的研究也发现COX-2抑制剂特别是选择性抑制剂联合化疗药物抑制肿瘤的增殖以及联合放疗可以增强肿瘤的放射敏感性,临床试验未发现明显的毒副作用。COX-2抑制剂的应用可能是未来胶质瘤治疗的新途径。     

FRK通过调节EGFR-Y1173磷酸化促进脑胶质瘤细胞凋亡作用的研究

目的研究FRK是否通过调节表皮生长因子受体(EGFR)-Y1173磷酸化促进胶质瘤细胞的凋亡。方法应用PolyJet~(TM)将FRK质粒转染入脑胶质瘤U251细胞中,western blot(WB)检测质粒转染效果及EGFR蛋白水平和EGFR-Y1173磷酸化水平的变化,流式细胞术检测脑胶质瘤细胞凋亡的变化;转染EGFR(WT)、EGFR(Y1173F)质粒,或共转FRK和EGFR(WT)、EGFR(Y1173F)质粒,流式细胞术检测脑胶质瘤U251细胞凋亡的变化。结果成功将FRK质粒转染入脑胶质瘤U251细胞,过表达FRK促进脑胶质瘤U251细胞的凋亡。过表达FRK增加EGFR-Y1173磷酸化水平,而对EGFR蛋白水平无影响。过表达EGFR(WT)、EGFR(Y1173F)质粒,细胞凋亡均减少,分别减少了25%和75%。WB结果显示,共转FRK和EGFR(WT)、EGFR(Y1173F)质粒成功;流式细胞术结果显示,与对照组相比,过表达FRK促进了细胞凋亡,EGFR抑制了细胞凋亡,且转染EGFR(Y1173F)质粒组的作用比转染EGFR(WT)的效果更明显。此外,转染EGFR(Y1173F)质粒可逆转过表达FRK对胶质瘤细胞的促凋亡作用。结论 FRK可以通过促进EGFR-Y1173磷酸化从而调节胶质瘤细胞的凋亡。