双膦酸盐对破骨细胞分化中组织蛋白酶K及骨吸收功能的影响

背景:有研究表明双膦酸盐可抑制破骨细胞的骨吸收功能,但对其骨吸收功能关键细胞因子组织蛋白酶K是否产生作用,至今少有报道。目的:观察双膦酸盐对破骨细胞分化中组织蛋白酶K及骨吸收功能影响。方法:用小鼠单核巨噬细胞RAW264.7诱导培养破骨细胞。实验分2组:对照组加入质量浓度100μg/L核因子κB受体活化因子配体进行诱导至收获细胞,双膦酸盐组在对照组的基础上加入10-7 mol/L阿仑膦酸盐处理至收获细胞。培养第7天检测各组破骨细胞生成和骨吸收功能,培养72 h免疫荧光检测两组组织蛋白酶K表达差异,Western blot检测组织蛋白酶K蛋白表达情况。结果与结论:两组均有抗酒石酸酸性磷酸酶阳性多核破骨细胞生成,并在牙本质磨片上形成吸收陷窝;但对照组抗酒石酸酸性磷酸酶阳性多核细胞数目、吸收陷窝数目及陷窝面积均大于双膦酸盐组(P0.01)。免疫荧光检测组织蛋白酶K表达对照组强于双膦酸盐组(P0.01);Western blot检测组织蛋白酶K表达双膦酸盐组低于对照组(P0.01)。结果证实,双膦酸盐通过抑制组织蛋白酶K因子的表达,阻碍破骨细胞的骨吸收功能。     

CaMKIIδ在破骨细胞分化不同阶段表达规律的研究

目的:研究钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶II(Ca MKII)δ在破骨细胞分化不同阶段的表达规律,以揭示其在破骨细胞分化中的作用。方法:应用50μg/L核因子κB受体激活因子配体(RANKL)诱导小鼠RAW264.7细胞向破骨细胞分化;通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色及骨磨片吸收陷窝检测评价破骨细胞生成情况;同时于诱导第0、1、3、5天末通过免疫荧光细胞化学、RT-q PCR和Western blot法检测Ca MKIIδ的mRNA及蛋白表达水平。结果:TRAP染色及骨吸收陷窝检测显示于诱导第5天有多核破骨细胞生成。第0、1、3、5天Ca MKIIδ的mRNA表达水平分别为1.028±0.041、2.478±0.087、10.524±1.284和42.914±2.667,蛋白相对水平分别为0.762、0.963、1.802和3.136,免疫荧光细胞化学检测显示Ca MKIIδ的荧光6强度呈时间依赖性递增。结论:Ca MKIIδ的表达随破骨细胞分化逐步增高,提示Ca MKIIδ在破骨细胞分化中可能起着关键调控作用。     

骨水泥中的硫酸钡对破骨细胞的作用

目的验证骨水泥中的硫酸钡对破骨细胞形成及其生物学活性的影响。方法体外培养外周血单核细胞并加入巨噬细胞克隆集落刺激因子及核因子B激活因子配体诱导破骨细胞分化,实验组中分别加入含有或不含有硫酸钡的骨水泥颗粒。以抗酒石酸酸性磷酸酶阳性多核细胞及象牙磨片上虫蚀样骨吸收陷窝的形成昨作为检测破骨细胞形成及其骨吸收活性的检测指标,检验骨水泥中的硫酸钡对破骨细胞的影响。结果含或不含硫酸钡的骨水泥颗粒组抗酒石酸酸性磷酸酶阳性多核细胞形成均早于无骨水泥颗粒的对照组（4天vs6天）,而骨水泥颗粒中是否含有硫酸钡的两组间抗酒石酸酸性磷酸酶阳性多核细胞形成的时间无明显差异。各组间抗酒石酸酸性磷酸酶阳性多核细胞的数量无显著差异;含硫酸钡的骨水泥颗粒组象牙磨片上骨吸收陷窝的面积较不含硫酸钡的骨水泥颗粒组及阴性对照组均增大（28.26±4.98vs22.28±3.49vs14.58±2.82,〈0.05）。结论骨水泥颗粒中的硫酸钡能够促进破骨细胞分化并促进成熟破骨细胞的骨吸收活性。     

3种不同矫治器正畸作用下牙周骨组织重塑:压力侧破骨细胞分化因子的表达

背景:国内外研究表明破骨细胞分化因子在正畸牙移动骨改建骨重塑过程中与破骨细胞的分化和功能密切相关。目的:分析3种不同矫治器正畸治疗对大鼠牙周组织重塑过程中压力侧破骨细胞分化因子表达的影响,显示矫治器正畸过程与宿主组织重建的生物相容性。方法:选取80只健康Wistar大鼠,建立正畸牙移位的大鼠模型,随机数字表法分为4组。对照组、DamonⅢ矫治器组、Begg矫治器组、MBT矫治器组。于各组矫治器正畸后3,7,14,21 d各处死4只动物。通过破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶染色法检测大鼠压力侧牙槽骨组织的破骨细胞数;通过RT-PCR法检测大鼠压力侧的牙周骨组织中破骨细胞分化因子基因的表达变化及时间分布特点。结果与结论:与对照组相比,不同矫治器组压力侧的牙槽骨组织中的抗酒石酸酸性磷酸酶染色阳性破骨细胞计数和破骨细胞分化因子基因的表达水平随正畸时间的增加而升高,第7天时最高,而后逐渐降低。第7天时DamonⅢ矫治器组抗酒石酸酸性磷酸酶染色阳性破骨细胞计数和破骨细胞分化因子基因表达水平高于MBT矫治器组、Begg矫治器组及对照组(P0.05)。结果表明在大鼠骨改建过程中破骨细胞分化因子基因表达的变化与破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶染色阳性破骨细胞数的变化规律一致,第7天时,DamonⅢ矫治器组破骨细胞分化因子mR NA表达及破骨细胞数高于其他组。     

人破骨细胞分化中重组结核杆菌热休克蛋白10的影响

背景:体外小鼠颅盖骨实验已证实了其结核杆菌热休克蛋白10的破骨效应。目的:在诱导破骨细胞分化的体外细胞培养系统中,研究重组结核杆菌热休克蛋白10对破骨细胞分化的影响及相关机制。方法:选用人巨噬细胞集落刺激因子依赖性附着性血液单个核细胞,实验分为:核因子κB受体活化因子配体+重组结核杆菌热休克蛋白10组、核因子κB受体活化因子配体组、重组结核杆菌热休克蛋白10组(1 mg/L)、阴性对照组(完全培养基),核因子κB受体活化因子配体+重组结核杆菌热休克蛋白10组、重组结核杆菌热休克蛋白10组中重组结核杆菌热休克蛋白10质量浓度为1 mg/L,在含有巨噬细胞集落刺激因子的a-MEM培养液重悬单核细胞,各组培养7,14,21 d后,观察所形成的抗酒石酸酸性磷酸酶阳性染色多核细胞的形态、数目、骨吸收面积;各组NFATc1、c-Fos基因及蛋白表达情况。结果与结论:阴性对照组无抗酒石酸酸性磷酸酶阳性多核破骨细胞分化生成,其余各组均有抗酒石酸酸性磷酸酶阳性多核破骨细胞分化生成,并在小牛骨磨片上形成吸收陷窝;重组结核杆菌热休克蛋白10组形成的破骨细胞分化细胞数目、吸收陷窝数目及陷窝面积显著低于核因子κB受体活化因子配体+重组结核杆菌热休克蛋白10组;阴性对照组NFATc1、c-Fos基因表达水平显著低于核因子κB受体活化因子配体+重组结核杆菌热休克蛋白10组和重组结核杆菌热休克蛋白10组,而重组结核杆菌热休克蛋白10组表达NFATc1、c-Fos蛋白,显著低于核因子κB受体活化因子配体+重组结核杆菌热休克蛋白10组。提示结核杆菌热休克蛋白10参与破骨细胞分化的形成,可能与诱导相关基因NFATc1、c-Fos表达上调有关。     

抗骨松丹杞颗粒含药血清对成骨-破骨细胞共培养体系中破骨细胞功能的影响

目的:观察补肾方抗骨松丹杞颗粒含药血清在成骨-破骨细胞共同培养体系中对大鼠破骨细胞(OC)骨吸收功能的影响。方法:取1 d龄SD大鼠的胎鼠颅骨与四肢骨分别分离、培养成骨细胞和破骨细胞,建立细胞上清相通但细胞间不相互混杂的平面式成骨-破骨细胞共育体系,实验分为不同浓度(低、中、高)的补肾方含药血清组和对照组进行比较,用重氮盐法检测抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)和光镜观察骨陷窝数。结果:25%的补肾方含药血清组在48 h、72 h、96 h成骨-破骨细胞共育体系中OC分泌TRAP的活性明显降低于对照组;25%的补肾方含药血清组在48 h、72 h、120 h所形成骨吸收陷窝的数目明显低于对照组(P0.01)。结论:补肾方抗骨松丹杞颗粒含药血清在共育体系中能够抑制OC活性。     

骨碎补影响破骨细胞分化的程度与含药血清浓度有关

文题释义：活化T细胞核因子1：属于NFAT家族重要成员之一,是破骨细胞分化形成中的重要转录因子,活化T细胞核因子1激活后可由细胞质转位至细胞核,在此过程中c-Fos/AP1信号通路起关键作用。CTSK、抗酒石酸酸性磷酸酶是破骨细胞特异性蛋白,活化T细胞核因子1活化的同时,可将CTSK、抗酒石酸酸性磷酸酶转录出细胞核,促进破骨细胞分化。中药含药血清：是指动物灌胃给予中药或单体制剂,经吸收进入血液循环,在一定时间内采取血液,分离所得血清,必定还有一定量的该药物成分,可反映机体真实血药浓度;将此血清进行体外细胞培养体系,可观察体外药理作用。 背景：已有报道骨碎补总黄酮有防治骨质疏松症的效果,但其作用机制多集中于对成骨细胞的作用,而对破骨细胞分化的影响研究较少。 目的：探讨骨碎补通过活化T细胞核因子1信号通路对破骨细胞分化的影响。方法：40只SD大鼠随机分为4组,分别以0,11.6,34.8,104.4 g/kg的骨碎补总黄酮灌胃,获得阴性对照血清及低、中、高浓度含药血清。另取5周龄大鼠分离获取骨髓巨噬细胞,采用CCK-8法检测不同含药血清对巨噬细胞活性的影响;取巨噬细胞分为低、中、高浓度组、阴性对照组、空白组,每孔5个复孔,分别加入低、中、高浓度含药血清、阴性对照血清培养液、正常培养液;所有培养液均用20 μg/L巨噬细胞集落刺激因子、100 μg/L核因子κB受体活化因子配体进行破骨细胞诱导分化。诱导分化7 d,抗酒石酸酸性磷酸酶染色检测破骨细胞数、融合指数,实时荧光定量PCR、Western blot检测各组细胞c-Fos、Fra-1、Fra-2、活化T细胞核因子1、组织蛋白酶KmRNA和蛋白表达;诱导分化14 d,骨片吸收陷窝试验检测破骨细胞骨吸收陷窝数、陷窝面积占比。实验方案经濮阳市安阳地区医院动物实验伦理委员会批准,批准号为PYSAYDQ-2019096。结果与结论：①不同浓度骨碎补含药血清对巨噬细胞活性影响无明显变化;②诱导分化前巨噬细胞形态规则,诱导分化后行抗酒石酸酸性磷酸酶染色证实为破骨细胞;③与空白组、阴性对照组比较,低、中、高浓度组破骨细胞数、融合指数、骨吸收陷窝数、陷窝面积占比、c-Fos、Fra-1、Fra-2、活化T细胞核因子1、组织蛋白酶K mRNA和蛋白相对表达量均明显降低(P < 0.05),且上述指标均随骨碎补含药血清浓度升高呈降低趋势：低浓度组>中浓度组>高浓度组,各浓度组间比较差异均有显著性意义(P < 0.05);④结果说明,骨碎补可能通过活化T细胞核因子1信号通路抑制大鼠巨噬细胞向破骨细胞的分化,且分化抑制程度与骨碎补含药血清浓度有关。ORCID: 0000-0003-3948-4631(许金松) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

核因子κB受体活化因子配体诱导形成的成熟破骨细胞

背景：破骨细胞作为一种终末细胞,获取困难,而且没有成熟破骨细胞株等因素限制了其应用。先前国内外对破骨细胞的获取一般采用基质细胞诱导培养或共培养,或运用核因子κB受体活化因子配体和巨噬细胞集落刺激因子共同作用诱导形成成熟的破骨细胞。 目的：观察小鼠单核巨噬细胞RAW264.7的一般生物学特征,分析其在核因子κB受体活化因子配体诱导下形成成熟破骨细胞的可行性。 方法：培养RAW264.7后,用核因子κB受体活化因子配体诱导RAW264.7细胞7 d后观察抗酒石酸酸性磷酸酶染色结果,以抗酒石酸酸性磷酸酶染色阳性,细胞核≥3个为破骨细胞。以鬼笔环肽荧光染色观察纤维性肌动蛋白环,甲苯胺蓝染色观察牛骨片表面的吸收陷窝情况。 结果与结论：核因子κB受体活化因子配体可诱导RAW264.7细胞形成抗酒石酸酸性磷酸酶染色阳性的多核细胞,形成纤维性肌动蛋白环,电镜下可见骨片上圆形或椭圆形的吸收陷窝。提示RAW264.7是一种较好的破骨前体细胞模型,可用于破骨细胞分化研究。单用核因子κB受体活化因子配体诱导RAW264.7细胞分化成熟,减少了巨噬细胞集落刺激因子的应用,使培养体系更加简单,易于操作,诱导出的细胞纯度高,适合于破骨细胞的生物学和生化研究。     

不同剂量骨保护素对破骨细胞内一氧化氮生成及内皮型一氧化氮合酶的影响CSCD

背景:骨保护素和一氧化氮在防治骨质疏松方面有重要作用,但目前关于两者在抑制破骨细胞增殖分化方面的关系研究较少。目的:验证不同剂量的骨保护素对破骨细胞内生成一氧化氮量及内皮型一氧化氮合酶活性的影响。方法:用抗酒石酸酸性磷酸酶染色验证诱导生成的破骨细胞;将诱导生成的破骨细胞分成6个组,空白对照组不加任何试剂;阴性对照组培养液中加入培养液;骨保护素组分为4组分别加入10,25,50,75μg/L不同剂量的骨保护素试剂。采用Annexinv-FITC细胞凋亡检测试剂盒,利用流式细胞仪测定破骨细胞凋亡率;荧光定量PCR检测破骨细胞标志基因抗酒石酸酸性磷酸酶mRNA及蛋白激酶K mRNA的表达量变化;一氧化氮检测试剂盒检测破骨细胞中内一氧化氮浓度;内皮型一氧化氮合成酶活力试剂盒检测破骨细胞内一氧化氮合酶的活力;骨保护素各组加入内皮细胞型一氧化氮合酶抑制剂;荧光定量PCR检测破骨细胞特异性酶抗酒石酸酸性磷酸酶mRNA及蛋白激酶K mRNA表达量的变化。结果与结论:1骨保护素可以抑制破骨细胞的分化生成并诱导其凋亡。2骨保护素的质量浓度与诱导生成的破骨细胞数量及其标志酶mRNA的表达量呈负相关,与破骨细胞凋亡率呈正相关。3骨保护素可以增加破骨细胞内一氧化氮的生成以及内皮型一氧化氮合酶活性的升高;骨保护素的质量浓度与破骨细胞生成的一氧化氮浓度及内皮型一氧化氮合酶活性呈正相关。4Raw264.7细胞在体外培养条件下,骨保护素与一氧化氮在抑制破骨细胞生成及促进其凋亡方面有协同作用,推测两者之间可能存在骨保护素/内皮型一氧化氮合酶/一氧化氮信号通路。     

1, 25二羟基胆钙化醇诱导大鼠骨髓单核细胞向破骨细胞转化的机制

目的:探讨1,25二羟基胆钙化醇(1,25(OH)2D3)诱导大鼠骨髓单核细胞向破骨细胞转化时明胶酶表达及其参与骨陷窝形成机制。方法:分离乳鼠骨髓内细胞,诱导生成破骨样细胞。姬姆莎、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色鉴定。扫描电镜观察诱导出的细胞贴附于骨片上形成的骨陷窝,明胶酶谱检测细胞培养液中明胶酶表达水平。结果:单核细胞经1,25(OH)2D3诱导,第9日生成大量的破骨样细胞。姬姆莎染色显示出多核(≥3个),TRAP染色阳性,扫描电镜观察破骨细胞在骨片上培养时产生骨陷窝。1,25(OH)2D3组基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达水平增加显著。结论:1,25(OH)2D3诱导单核细胞产生大量破骨细胞。参与骨陷窝形成的明胶酶是MMP-2。这可能是破骨细胞通过某些机制,促进其他非破骨细胞分泌有活性的MMP-2参与噬骨。     

破骨细胞骨吸收上清液对骨髓间充质干细胞增殖分化的影响

目的研究破骨细胞骨吸收活动中的分泌产物对骨髓间充质干细胞增殖、分化的影响。方法诱导小鼠脾脏细胞为破骨细胞,用抗酒石酸盐酸性磷酸酶(TRAP)染色。破骨细胞与牛骨磨片共培养,扫描电镜观察骨吸收陷窝。收集骨吸收实验破骨细胞培养上清液作用于小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC),MTT法检测BMSC生长曲线;成骨诱导后钙化结节茜素红染色法检测BMSC成骨能力;成脂诱导后油红O染色检测BMSC成脂能力;Western blot法检测小鼠BMSC成骨相关蛋白RUNX2、碱性磷酸酶(ALP)及成脂相关蛋白过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)的表达。结果 TRAP染色、扫描电镜显示脾脏细胞可诱导分化为具有骨吸收能力的破骨细胞;与对照组相比,加入破骨细胞培养上清液,BMSC的增殖受到抑制,成骨分化增强,成脂分化减弱(P0.05)。结论破骨细胞骨吸收上清液具有使BMSC增殖能力降低,成骨分化增强,成脂分化减弱的作用。     

不同剂量骨保护素对破骨细胞内一氧化氮生成及内皮型一氧化氮合酶的影响

背景:骨保护素和一氧化氮在防治骨质疏松方面有重要作用,但目前关于两者在抑制破骨细胞增殖分化方面的关系研究较少。目的:验证不同剂量的骨保护素对破骨细胞内生成一氧化氮量及内皮型一氧化氮合酶活性的影响。方法:用抗酒石酸酸性磷酸酶染色验证诱导生成的破骨细胞;将诱导生成的破骨细胞分成6个组,空白对照组不加任何试剂;阴性对照组培养液中加入培养液;骨保护素组分为4组分别加入10,25,50,75μg/L不同剂量的骨保护素试剂。采用Annexinv-FITC细胞凋亡检测试剂盒,利用流式细胞仪测定破骨细胞凋亡率;荧光定量PCR检测破骨细胞标志基因抗酒石酸酸性磷酸酶mRNA及蛋白激酶K mRNA的表达量变化;一氧化氮检测试剂盒检测破骨细胞中内一氧化氮浓度;内皮型一氧化氮合成酶活力试剂盒检测破骨细胞内一氧化氮合酶的活力;骨保护素各组加入内皮细胞型一氧化氮合酶抑制剂;荧光定量PCR检测破骨细胞特异性酶抗酒石酸酸性磷酸酶mRNA及蛋白激酶K mRNA表达量的变化。结果与结论:1骨保护素可以抑制破骨细胞的分化生成并诱导其凋亡。2骨保护素的质量浓度与诱导生成的破骨细胞数量及其标志酶mRNA的表达量呈负相关,与破骨细胞凋亡率呈正相关。3骨保护素可以增加破骨细胞内一氧化氮的生成以及内皮型一氧化氮合酶活性的升高;骨保护素的质量浓度与破骨细胞生成的一氧化氮浓度及内皮型一氧化氮合酶活性呈正相关。4Raw264.7细胞在体外培养条件下,骨保护素与一氧化氮在抑制破骨细胞生成及促进其凋亡方面有协同作用,推测两者之间可能存在骨保护素/内皮型一氧化氮合酶/一氧化氮信号通路。     

重组核因子κB活化因子受体蛋白对破骨细胞活性的抑制作用

背景:核因子κB活化因子受体直接参与破骨细胞的活性及功能调节,在骨吸收类疾病发病中具有重要意义。通过基因工程得到的可溶性核因子κB活化因子受体蛋白可能为防治骨质疏松等骨吸收类疾病提供了新的有效手段。目的:观察重组重组核因子κB活化因子受体蛋白对体外培养破骨细胞活化、吸收活性的影响。方法:取新生24h内SD大鼠胎鼠的四肢长骨,机械分离获得破骨细胞,采用不同浓度重组重组核因子κB活化因子受体蛋白干预后,行抗酒石酸酸性磷酸酶染色及骨吸收陷窝甲苯胺蓝染色,观察其对破骨细胞的生长情况。结果与结论:重组核因子κB活化因子受体蛋白对破骨细胞作用3d后,破骨细胞数量明显减少,以10-4mol/L重组核因子κB活化因子受体蛋白最为显著。核因子κB活化因子受体蛋白作用9d时,骨片吸收陷窝数明显减少。由此认为,在体外重组核因子κB活化因子受体蛋白可以有效抑制破骨细胞活化及骨吸收活性。     

罗格列酮通过抑制RANKL及p-ERK活化抑制类风湿关节炎破骨细胞的分化及功能

目的:探讨罗格列酮(RSG)对类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)介导的破骨细胞(Oc)分化及功能的影响及其可能机制。方法:活动期RA患者滑膜体外分离培养FLS,与健康人外周血单核细胞(MNC)共培养,不同浓度RSG(0、5、10和15μmol/L)干预,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色鉴定Oc并计数;甲苯胺蓝染色和图像分析系统计算骨吸收陷窝面积;Real-time PCR检测共培养体系RANKL和OPG的mRNA表达,Western blot检测RANKL、OPG、p-ERK、p-p38和p-JNK的蛋白含量。结果:与不加RSG组比较,15μmol/L RSG干预后Oc的数量明显减少(P0.01),骨吸收陷窝面积也减少(P0.05);共培养体系RANKL的mRNA及蛋白表达明显降低,OPG的mRNA及蛋白表达明显升高(P0.01);p-ERK的蛋白含量明显降低(P0.05),p-p38及p-JNK的蛋白含量则不受影响。结论:RSG通过抑制RANKL及p-ERK活化影响RA关节微环境中组织细胞与免疫细胞的相互作用,从而抑制Oc分化及骨吸收功能。     

低氧环境中PADI4促进破骨细胞分化和骨吸收功能的研究

为探讨低氧环境中肽酰基精氨酸脱亚胺酶4(peptidyl arginine deiminase 4,PADI4)对破骨细胞分化和功能的影响,采用巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stimulating factor, M-CSF)和核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand, RANKL)诱导单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7向破骨细胞分化,采用PADI4抑制剂Cl-amidine和PADI4-siRNA-MSN抑制PADI4表达,采用抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase, TRAP)染色试验、TRAP活性试验和骨吸收试验鉴定破骨细胞的分化和功能,用qRT-PCR和Western blotting分别检测PADI4、TRAP基因及其蛋白的表达水平。结果显示,低氧-M-CSF+RANKL组TRAP和PADI4 mRNA相对表达水平较常氧-M-CSF+RANKL组显著升高(P0.05)。低氧-M-CSF+RANKL组的TRAP阳性细胞数[(7.33±1.37)个/HP]显著高于常氧-M-CSF+RANKL组[(3.33±1.63)个/HP,P0.01],低氧-M-CSF+RANKL组较常氧-M-CSF+RANKL组TRAP活性显著增加(P0.001)。低氧-M-CSF+RANKL组骨吸收陷窝数[(107.00±12.42)个/片]较常氧-M-CSF+RANKL组[(77.40±8.79)个/片]显著增加(P0.05)。在低氧环境下,与对照组比较,M-CSF+RANKL+Cl-amidine组和M-CSF+RANKL+siRNA组TRAP mRNA表达水平、TRAP蛋白表达水平、TRAP阳性细胞数、TRAP活性、骨吸收陷窝数均显著降低(P0.05)。该研究提示,在低氧环境中PADI4可能是促进巨噬细胞向破骨细胞分化以及骨吸收的关键分子。     

瘦素通过抑制PPARγ的表达抑制RAW264.7巨噬细胞向破骨细胞分化

目的探讨瘦素对可溶性核因子κB配体的受体活化因子(sRANKL)诱导RAW264.7巨噬细胞向破骨细胞分化的影响及其机制。方法抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色检测瘦素对sRANKL诱导RAW264.7向破骨细胞分化的形态学影响;实时荧光定量PCR检测TRAP及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的mRNA表达;Western blot法检测TRAP及PPARγ的蛋白表达。结果瘦素和sRANKL联合处理组与单独sRANKL组相比,TRAP染色破骨细胞数目明显减少;TRAP的mRNA和蛋白表达量明显降低;PPARγ的mRNA和蛋白表达量明显降低,且与瘦素浓度呈梯度相关。结论瘦素可能通过抑制PPARγ的表达来抑制RAW264.7细胞向破骨细胞分化。     

破骨细胞释放凋亡小体微小RNA-30a对成骨活性的影响

目的 探讨破骨细胞凋亡释放凋亡小体介导成骨活性的作用。 方法 通过小鼠（n=10）骨髓单核细胞体外诱导破骨细胞,用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色和细胞骨架F-actin与DAPI双标免疫荧光鉴定破骨细胞,破骨细胞与小鼠成骨细胞MC-3T3E1共培养体系,DNA片段化ELISA分析破骨细胞凋亡,凋亡小体标志物检测,骨形成标志物Real-time PCR分析,凋亡小体微小RNA (miRNA)表达谱芯片筛查。 结果 100 μmol/L 阿伦膦酸钠(ALN) 诱导成熟破骨细胞凋亡,并释放凋亡小体;Western blotting检测表明,ALN诱导凋亡小体特异性表面标志物蛋白表达增强;破骨细胞凋亡小体蛋白C3b表达增高与成骨细胞活性负相关;凋亡小体表达谱芯片筛查提示,miR-30a与骨形成标志物血清碱性磷酸酶(ALP)相关。 结论 破骨细胞凋亡释放的凋亡小体携带miR-30a抑制成骨细胞活性,凋亡小体可能参与破骨细胞与成骨细胞的对话。     

密骨打老儿丸含药血清对共育体系中成骨细胞和破骨细胞功能的影响

 目的： 观察密骨打老儿丸（Migu-Dalaoer pill,MDP）含药血清在成骨-破骨细胞共同培养体系中对成骨细胞（osteoblasts,OB）增殖和破骨细胞（osteoclasts,OC）骨吸收功能的影响。方法： 利用分段酶消化法从胎鼠颅骨中分离出OB,取1日龄SD大鼠四肢股骨和胫骨分离培养OC,建立培养上清相通但2种细胞间互不接触的成骨-破骨细胞共育模型。实验分为不同浓度（低、中、高）的MDP含药血清组和对照组进行比较,以细胞增殖（MTT 法）和碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性代表OB的成骨活性,以抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP）活性和骨吸收陷窝数目代表OC的破骨能力进行测定。结果： 与对照组相比,中、高浓度MDP含药血清在成骨-破骨细胞共同培养体系中6和7 d 能显著提高OB数目和 ALP 活性（P<0.01）。与对照组相比,中、高浓度MDP含药血清在成骨-破骨细胞共同培养体系中6和7 d 能显著降低OC骨吸收陷窝的数目和分泌 TRAP 的活性（P<0.01）。结论： 密骨打老儿丸含药血清在共育体系中能够促进OB增殖和骨形成,同时抑制OC骨吸收功能。     

葛根素通过Notch1信号通路抑制Raw264.7细胞向破骨细胞的分化

背景：前期研究表明葛根素干预后破骨细胞的分化被抑制,Notch1、HES1、Jagged1等Notch信号通路相关蛋白表达量下降,但Notch1信号通路对于葛根素抑制破骨细胞分化的作用机制尚不明确。目的：探究Notch信号通路对葛根素抑制小鼠巨噬细胞Raw264.7分化为破骨细胞的影响。方法：将Raw264.7细胞分为7组干预培养,空白对照组采用DMEM高糖完全培养基培养,破骨细胞诱导组采用破骨诱导培养基培养,葛根素干预组在破骨诱导的同时加入50μmol/L葛根素培养,葛根素+Notch1 si RNA对照组、葛根素+Notch1 si RNA组、葛根素+Notch1过表达对照组、葛根素+Notch1过表达组分别采用Notch1 si RNA对照序列、Notch1 si RNA序列、Notch1过表达对照质粒、Notch1过表达质粒转染Raw264.7细胞后,加入破骨诱导培养基和葛根素进行培养。培养7 d后,采用抗酒石酸酸性磷酸酶染色观察破骨细胞的数量和大小,F-actin染色观察破骨细胞骨架形成情况,RT-PCR检测破骨细胞形成标志物的基因表达水平。结果与结论：(1)抗酒石酸酸性磷酸...     

淫羊藿苷调节酸性微环境减轻绝经后老年骨质疏松性疼痛

背景：前期研究已证明，淫羊藿苷在促进骨形成和抑制骨吸收方面具有重要作用，但其对骨质疏松介导的骨痛产生的影响尚未见报道。目的：探讨淫羊藿苷减轻绝经后老年性骨质疏松性骨痛的可能机制。方法：(1)动物实验：将200只C57BL/6小鼠随机分为4组：假手术组、模型组、模型+淫羊藿苷组，模型+碳酸酐酶Ⅱ抑制剂组。除假手术组外，其余各组摘除小鼠卵巢建立绝经后骨质疏松模型。模型+淫羊藿苷组在造模后第2天灌胃淫羊藿苷，每2周进行1次疼痛行为学实验并取材，持续20周。microCT检测股骨骨量、苏木精-伊红染色及TRAP染色检测破骨细胞活性、免疫荧光染色检测神经元形态及相关离子通道表达。(2)细胞实验：提取小鼠骨髓来源的破骨细胞前体细胞，在体外使用RANKL/M-CSF体系诱导分化为破骨细胞并添加不同浓度淫羊藿苷(1,10μmol/L)干预。采用抗酒石酸酸性磷酸酶染色检测破骨细胞分化，采用鬼笔环肽染色检测破骨细胞肌动蛋白环，采用骨板吸收实验检测破骨细胞噬骨功能，采用pH计检测体系pH值，采用Western Blot检测破骨细胞分化相关蛋白表达。此外，提取小鼠背根神经节来源神经细胞并用淫羊藿苷处理，采用C...