miR-218抑制卵巢癌细胞A2780对顺铂耐药性的实验研究

目的研究miR-218抑制卵巢癌细胞A2780对顺铂耐药性的影响及可能机制。方法实时定量PCR检测A2780及顺铂耐药细胞株A2780/DDP中miR-218的表达,转染miR-218 inhibitors和mimics改变A2780及A2780/DDP细胞中miR-218的表达,MTT法检测转染前后细胞对顺铂的敏感性,并分析Wnt2B蛋白表达的改变。结果与A2780细胞相比,miR-218在A2780/DDP中的表达明显降低。A2780细胞转染miR-218 inhibitors后,细胞对顺铂的敏感性降低,Wnt2B蛋白表达明显增强;而A2780/DDP细胞转染miR-218mimics后,细胞对顺铂的敏感性增强,Wnt2B蛋白表达明显减少。结论 miR-218可能通过靶向Wnt2B抑制卵巢癌细胞A2780对顺铂的耐药性。     

连接蛋白32及细胞缝隙连接对卵巢癌细胞顺铂耐药性的影响

目的研究连接蛋白32及细胞缝隙连接对卵巢癌细胞顺铂耐药性的影响。方法以A2780为亲代细胞,采用药物浓度递增法构建对顺铂耐药的卵巢癌细胞系(A2780-CDDP),CCK8法测定顺铂对肿瘤细胞的IC50,计算耐药指数(resistance index,RI)。"细胞接种荧光示踪法"检测卵巢癌细胞耐药行程过程中细胞的缝隙连接功能及Cx32的表达情况;调节A2780-CDDP细胞Cx32的表达,观察耐药性的变化;提细胞膜及胞浆蛋白,用Western印迹分别检测Cx32在A2780和A2780-CDDP的表达分布情况。结果本研究建立了顺铂耐药人卵巢癌细胞株A2780-CDDP,亲代细胞IC50为4.7 mg·L~(-1),A2780-CDDP的IC50为33.8 mg·L~(-1),耐药指数为7.2。同时,随着耐药性的增强,Cx32表达量逐渐增加,增强A2780-CDDP细胞中的GJ功能可提高顺铂的细胞毒性。此外,尽管Cx32在A2780-CDDP细胞中表达增加,但它更多地定位于细胞质而不是细胞膜,并且在A2780-CDDP细胞中下调Cx32的表达可以使其对顺铂治疗敏感。结论 Cx32参与顺铂耐药,Cx32在胞质中的定位对卵巢癌顺铂耐药有重要意义。     

卵巢癌对顺铂类药物耐药性的相关分析

摘要： 目的 筛选影响卵巢癌顺铂耐药性的靶点基因。方法 从 GEO 数据库中下载对顺铂敏感和产生抗药性 的人类卵巢癌细胞基因表达谱和甲基化谱数据（GSE15709）, 利用 R 的相关工具包筛选 A2780 和 A2780/DDP（顺铂 耐药卵巢癌细胞系）两类卵巢癌细胞之间的差异表达和差异甲基化的基因; 使用 DAVID 数据库对差异表达基因进 行功能富集分析; 对同时发生了差异甲基化、 差异表达且甲基化水平、 表达水平的变化趋势相反的基因, 进一步利用 qRT-PCR 技术检测这些基因在两种卵巢癌细胞中的表达值。结果 研究发现在两种卵巢癌细胞之间发生了 416 个 差异表达和 281 个差异甲基化的基因, 这些差异表达基因主要富集于细胞周期、 核分裂和蛋白修饰负调控等生物过 程。此外, 细胞周期、 DNA 复制和 p53 等通路在这些基因中同样富集。共发现 4 个发生了差异甲基化、 差异表达且 甲基化变化水平、 表达水平变化趋势相反的基因, qRT-PCR 实验验证了这些基因在两种卵巢癌细胞中的表达水平。 结论 利用生物信息学和分子生物学相结合的方法, 可以筛选出部分影响卵巢癌对顺铂抗药性的基因, 为进一步揭 示其中的分子机制提供实验参考。     

赛特铂对人卵巢癌细胞A2780的凋亡诱导作用

目的：观察赛特铂对人卵巢癌细胞A2780的凋亡诱导作用及对细胞周期的影响。方法：MTT法观察药物对细胞增殖的抑制作用，碘化丙锭染色分析细胞周期变化，电镜和荧光显微镜观察细胞形态学变化，多参数流式细胞术及TUNEL法检测细胞凋亡率，并测定caspase-3的活性变化及caspase抑制剂对细胞存活率的影响。结果：赛特铂可抑制A2780细胞的增殖并诱导凋亡，具有明显的剂量依赖性，作用与顺铂相当。赛特铂主要导致A2780细胞S期细胞明显增加，G2／M期细胞少许增加。经赛特铂作用后漂浮细胞呈现典型凋亡细胞形态学改变。caspase-3活性随着细胞凋亡率增加而增加，caspase抑制剂不完全抑制细胞死亡。结论：赛特铂影响A2780细胞周期分布，可体外诱导A2780细胞凋亡。caspase依赖性和caspase非依赖性途径参与了其凋亡过程，其中caspase依赖性途径又包括caspase-3依赖性和非easpase-3依赖性途径。     

基于生物信息学分析高表达EFNA1对卵巢癌铂类耐药的影响

目的 研究肝配蛋白A1(ephrin-A1,EFNA1)与卵巢癌铂类耐药的关系。方法 运用Oncomine和基因表达谱交互分析在线工具分析EFNA1在全身肿瘤组织和卵巢癌组织中的表达;TISIDB结合TNMplot以及muTarget分析EFNA1与不同卵巢癌病理参数的相关性;Kaplan-Meier Plotter结合PrognoScan进行EFNA1表达量与卵巢癌患者生存率相关性分析;GEO数据库分析EFNA1在铂类敏感性与铂类耐药性的卵巢癌细胞株中的表达差异;采用反转录-聚合酶链反应及Western blot检测EFNA1在顺铂敏感或耐药性卵巢癌细胞系中的表达,CCK8检测顺铂耐药性卵巢癌细胞系A2780-DDP增殖,流式细胞术检测A2780-DDP细胞凋亡,Coremine文本挖掘分析EFNA1介导卵巢癌顺铂耐药的生物过程。结果 EFNA1在卵巢癌中高表达,而且与卵巢癌患者的病理参数、生存率显著相关;EFNA1在铂类耐药性卵巢癌组织或细胞中高表达,并且与卵巢癌铂类化疗患者的不良预后显著相关。EFNA1敲低后抑制了顺铂处理后的A2780-DDP细胞的增殖,促进了凋亡。细胞增殖、凋...     

顺铂增加人Hela细胞放疗敏感性涉及细胞周期的研究

目的 探讨小剂量顺铂增加人Hela细胞对电离辐射敏感性涉及细胞周期动力学的机理。方法 将Hela细胞分为空白对照组、单纯放疗组、单纯化疗组和放疗加化疗组，用流式细胞仪测定细胞凋亡率和细胞周期变化，采用SP免疫组化法检测Hela细胞受作用后p53基因蛋白表达情况。结果 单纯放疗、单纯化疗均可诱导Hela细胞凋亡，而放疗加化疗组细胞凋亡率明显增加，经顺铂作用后，Hela细胞周期发生明显变化，表现为G1期减少、S期和G2／M期增加，突变型p53表达减弱。结论 小剂量顺铂可通过改变培养的人Hela细胞周期，诱导细胞G2／M期延迟从而提高放疗敏感性，可能与其内在的p53基因表达改变有关。     

黄芩素增强细胞缝隙链接的功能进而增加卵巢癌耐药细胞对顺铂的敏感性

目的研究黄芩素对卵巢癌耐药细胞A2780/CDDP的细胞缝隙连接功能和A2780/CDDP对顺铂敏感性的影响。方法 CCK-8法检测黄芩素对A2780/CDDP细胞对顺铂的IC50的影响;"Parachute assay"检测黄芩素对A2780/CDDP细胞gap junction功能的影响以及改变A2780/CDDP细胞中Connexin43蛋白表达水平之后gap junction功能的变化;Western印迹检测黄芩素对A2780/CDDP细胞中Connexin43蛋白表达水平的影响。结果在黄芩素的作用下,A2780/CDDP细胞对顺铂的IC50由34.77μg·L~(-1)下降至19.52μg·L~(-1),A2780/CDDP细胞对顺铂的耐药指数由5.7下降至3.2;黄芩素时间依赖性地增强A2780/CDDP细胞的gap junction功能;A2780/CDDP细胞中过表达Connexin43蛋白可增强其gap junction功能,而下调Connexin43蛋白的表达量可减弱gap junction的功能;黄芩素可时间依赖性地上调A2780/CDDP细胞中Connexin43蛋白的表达水平。结论黄芩素可通过上调卵巢癌A2780/CDDP细胞中Connexin43蛋白的表达水平,增强gap junction功能,进而增强A2780/CDDP细胞对顺铂的敏感性。     

p15基因对人肝癌HepG2顺铂耐药细胞周期和耐药性的影响研究

目的:利用p15-shRNA表达载体干扰细胞周期相关基因p15,探讨p15基因对人肝癌HepG2顺铂耐药细胞周期和耐药性的影响。方法:用梯度浓度的顺铂诱导HepG2细胞耐药并建立动态耐药模型HepG2/顺铂/2.0,以不同浓度(30、60、90nmol·L-1)的干扰质粒p15-shRNAY2和阴性对照质粒(shRNA-F)转染HepG2/顺铂/2.0细胞后48h检测p15荧光阳性细胞,筛选最佳干扰浓度;以筛选结果转染HepG2/顺铂/2.0细胞,与未转染细胞和阴性对照转染细胞比较,检测细胞存活情况、周期分布和p15、Bcl-2、Bax的蛋白表达。结果:最佳干扰浓度为60nmol·L-1;与未转染细胞和阴性对照转染细胞比较,p15-shRNAY2转染细胞的存活率明显增加,G1期细胞明显减少,p15、Bax蛋白表达明显降低,Bcl-2蛋白表达明显增加(P均<0.01)。结论:p15-shRNA可抑制p15基因表达,干扰细胞周期使G1期的比例减少,增加HepG2/顺铂/2.0对顺铂的耐药性。     

灯盏乙素通过下调TRIM32的表达增强卡铂的抗卵巢癌活性研究

目的探讨灯盏乙素对卵巢癌卡铂化疗的辅助治疗作用并研究其机制。方法 CCK-8试验检测卵巢癌细胞系A2780在灯盏乙素和不同浓度卡铂处理下的细胞活力。Western blotting试验检测卡铂和灯盏乙素对A2780细胞TRIM32、Bcl-2及caspase-9、caspase-3活化水平的影响。流式细胞术检测A2780细胞活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)的水平、线粒体膜电位和细胞凋亡率。结果灯盏乙素联合处理能明显降低卡铂对A2780细胞的IC50。灯盏乙素处理能显著抑制A2780细胞TRIM32的表达。转染TRIM32真核表达质粒后,灯盏乙素对卡铂抗卵巢癌活性的增强作用受到明显抑制。灯盏乙素处理能明显降低A2780细胞Bcl-2的表达并且促进卡铂诱导ROS产生。灯盏乙素联合卡铂能引起显著的线粒体膜电位的降低,caspase-9、caspase-3的活化及凋亡的发生。转染TRIM32真核表达质粒后,灯盏乙素联合卡铂对A2780细胞线粒体途径的凋亡受到显著抑制。结论灯盏乙素通过下调TRIM32的表达增强卡铂对卵巢癌细胞线粒体途径凋亡的诱导作用。     

TIMP-1基因体外稳定转染对人卵巢癌A2780细胞周期与增殖的影响

目的:探讨正、反义基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)基因对人卵巢癌细胞周期及增殖的影响。方法:将重组质粒正、反义TIMP-1表达载体体外转染到卵巢癌A2780细胞中,用G418筛选稳定表达细胞株并扩增培养,采用MTT细胞计数法检测肿瘤细胞生长增殖率,流式细胞术检测肿瘤细胞周期的变化。结果:经15～20 dG418筛选得到稳定表达细胞株,重组质粒TIMP-1稳定转染正义(PTs)组A2780细胞的增殖可明显受到抑制,细胞周期明显改变,细胞从G1期到S期发生阻滞。而反义(PTas)组细胞与之相反。结论:提示体外转染TIMP-1基因可使A2780细胞周期阻滞于G1期,并可抑制肿瘤细胞增殖。可为临床基因治疗及相关基因药物研究提供实验依据。