结核分支杆菌ESAT6蛋白的表达、纯化及抗原性研究

目的：获得重组ESAT6蛋白,研究其免疫学特性,评价其在结核病血清学诊断中的价值。方法：分别用生理盐水和卡介苗免疫小鼠8周后,以结核分支杆菌接种小鼠。应用基因工程技术表达、纯化ESAT6蛋白,分别以结核分支杆菌PPD或纯化的rESAT6蛋白为抗原,通过ELISA方法及结核病一步法检测小鼠或人血清中抗结核抗体。结果：重组质粒pET24b-ESAT6在大肠杆菌BL2（DE3）细胞内以包涵体形式存在,分子量约6kDa,每100ml培养菌可获得约18mg纯化的重组蛋白。生理盐水和卡介苗免疫小鼠血后血清中抗ESAT6抗体无区别。结论分支杆菌攻击后,两组小鼠血清中抗ESAT6抗体均明显升高,但只有卡介苗组小鼠抗体水平超过平均值＋2标准误。以33例正常人血清的OD值＋2S为正常界限值,33例正常人和32例结核病人血清一步法和PDD、rESAT6 ELISA检测抗结核抗体的特异性和敏感性分别为：一步法87.9%(29/33),65.6%(21/32),PPD93.9%(31/33),62.5%(20/32);rESAT6 97%(32/33),18.2%(4/32)。结论：pET24b-ESAT6大肠杆菌工程菌能以包涵形式高效表达重组ESAT6蛋白,卡介苗免疫对血清中ESAT6抗体无影响,结核病人血清中抗ESAT6抗体阳性率低,rESAT6纯化蛋白可作为结核病血清学诊断的混合抗原之一。     

HIV感染者/艾滋病并发肺结核7例分析

目的：了解人类免疫缺陷病毒(HIV)并发结核分枝杆菌(MTB)双重感染发病情况、临床表现。方法：对2002年6月至2004年3月42例HIV感染者／艾滋病并发结核病的患者的临床资料进行分析。结果：42例HIV感染者／艾滋病并发肺结核7例，并发率16．67％。结论：对HIV感染者／艾滋病患者，应常规进行结核病相关检查，对HIV／MTB双重感染患者应积极抗结核治疗，抗结核治疗可取得较好近期疗效，但应注意药物副反应。     

不同浓度纯结素试验对HIV感染者结核病诊断价值

目的探讨不同浓度纯结素试验对H IV感染者结核病诊断的敏感性和特异性。方法采用5 IU(0.1m l)、1 IU、0.1 IU三个不同浓度结核菌素分别对H IV感染者合并涂阳肺结核病、涂阴肺结核病、单纯H IV感染者进行皮试。结果5 IU涂阳肺结核病人的灵敏度为37.8%、1 IU涂阳肺结核病人的灵敏度为17.8%、0.1 IU涂阳肺结核病人的灵敏度为2.2%;5 IU涂阴肺结核病人的灵敏度为36.7%、1 IU涂阴肺结核病人的灵敏度为21.5%、0.1 IU涂阴肺结核病人的灵敏度为2.6%;5 IU PPD试验的特异度为92.6%、1 IU PPD试验的特异度为96.7%、0.1 IU PPD试验的特异度为98.3%。结论5 IU对H IV感染者结核病的诊断具有较高的敏感性和特异性,对H IV感染者结核病的诊断具有较大的价值;1 IU和0.1 IU对感染者结核病的诊断具有较高的特异性,但敏感性太低,对H IV感染者结核病的诊断不具有应用价值。     

2097份HIV感染者痰标本直接涂片与培养法筛查肺结核结果分析

目的 评价痰萋-尼氏染色和结核培养检测方法在HIV感染者中筛查肺结核的临床诊断价值.方法 用直接涂片萋-尼氏染色和结核培养(培养同时做中性罗氏培养基分离培养和Bact/Alert 3D系统培养)检测方法对2097份HIV感染者痰标本抗酸杆菌检测,并将检测结果进行比较.结果 萋-尼氏染色和结核培养法检测痰标本阳性检出率分别为4.6%、15.2%;318份标本培养阳性,其中94份标本涂片阳性,224份标本涂片阴性.结论 结核培养能提高HIV感染者中筛查肺结核阳性检出率,有助于HIV感染者合并结核病的诊断和治疗;直接涂片法阳性检出率低,作为HIV感染者中筛查肺结核意义不大.     

在结核病人中筛查HIV病毒感染者和艾滋病人情况分析

目的了解承德县辖区内免费治疗管理的肺结核病人中HIV病毒感染者和艾滋病人的发病情况,为结核病和艾滋病患者提供免费双向筛查和医疗救治,控制疾病流行。方法对2006年10月1日-2008年9月30日,在承德县结核病防治科免费治疗管理的694例肺结核病人进行HIV抗体筛查检测。结果694例肺结核病人共查出HIV病毒感染者2例,双重感染率为0.29%。2例感染者均为男性,年龄分别为36岁和40岁,均曾在外地打工。结论结核病是艾滋病感染者最常见的合并症,也是导致艾滋病患者死亡死亡的最常见的疾病,做好TB/HIV双向筛查,并开展结核病和艾滋病医疗救治工作非常必要。     

石家庄市TB/HIV双重感染疫情监测与防治的研究

目的掌握石家庄市TB/HIV双重感染疫情,探索防治措施。方法对2009年4月-2012年3月新登记的18333例肺结核病人中采取自愿的原则进行HIV抗体的检测,同时对已知的HIV抗体阳性者进行半年一次的免费结核病体检。结果 18 333例新登记肺结核病人中,13 430例进行了检测;279例HIV感染者191人进行了肺结核的筛查。共发现TB/HIV病人9例,其中已知HIV阳性者6例,新发现3例。以青壮年男性农民为主,平均年龄35岁,HIV感染方式呈多种形式。给与抗结核治疗,治愈完成疗程5人,治疗期间死亡2人,丢失1人,初治失败1人。结论肺结核病人进行HIV检测和HIV感染者筛查肺结核是早期发现TB/HIV双重感染者的重要途径,对提高TB/HIV双重感染者治愈率,延缓病人寿命均有现实意义。     

全血γ-干扰素诱导蛋白10释放试验辅助诊断活动性肺结核的意义

目的：研究全血γ‐干扰素诱导蛋白10（IP‐10）释放试验对活动性肺结核的辅助诊断价值。方法检测活动性结核病组患者66例、非结核呼吸疾病组患者40例及健康对照组40例,应用纯化的结核分枝杆菌特异性蛋白早期分泌性靶抗原6（ESAT‐6）和培养液蛋白10（CFP10）体外刺激全血后,检测3组人群IP‐10和γ‐干扰素（IFN‐γ）的释放水平,并应用受试者工作特征曲线（ROC曲线）比较二者对活动性肺结核的诊断效能。结果肺结核病组、非结核呼吸疾病组、健康对照组IP‐10释放水平分别为（146．0±167．1）pg／mL、（26．6±9．7）pg／mL、（24．2±9．7）pg／mL ,3组间比较差异有统计学意义（P＜0．01）;经过ROC分析,诊断活动性肺结核,IP‐10 ROC曲线下面积（AUC）为0．915,γ‐干扰素AUC为0．872,二者比较差异无统计学意义（P＞0．05）。结论外周血IP‐10释放试验可应用于活动性肺结核的诊断,与IFN‐γ释放试验诊断效率基本相同。     

512例血清抗结核抗体测定与肺结核的诊断分析

目的探讨血清抗结核抗体对肺结核诊断的作用。方法以结核杆菌特异性外膜为抗原，斑点免疫金渗滤试验（DIGFA）原理，随机检测本疾病控制中心2005年1～12月170例痰菌阳性和167例痰菌阴性肺结核病人的血清抗结核抗体，并以175例健康体检者为对照组。结果痰菌阳性肺结核病人血清抗结核抗体阳性率为80．6％，痰菌阴性肺结核病人血清抗结核抗体阳性率为66．5％，健康对照组血清抗结核抗体阳性率为5．1％，肺结核病人的血清抗结核抗体阳性率明显高于健康对照组。结论血清抗结核抗体测定对肺结核的诊断具有较高的临床参考价值。     

海口市实施现代结核病控制项目效果评价

目的 评价海口市实施世界银行贷款结核病控制项目的效果和取得成效的原因。方法对1992～2001年海口市结核病控制项目资料进行分析。结果10年间共检查可疑肺结核症状者20607例，发现活动性肺结核病人996例，其中涂阳病人503例，占活动性肺结核的50．50％，肺结核病人年均登记率为20／10万。初、复治涂阳病人治愈率分别从1992年的80．64％和64．71％提高至2001年的93．88％和85．71％初、复治涂阳病人治愈率分别为91．24％和80．90％，愈后5年细菌学复发率分别为1．69％和3．33％。结论10年来海口市结核病控制水平整体提高，显示实施现代结核病控制策略，对今后海口市结核病控制工作的发展具有积极的促进作用。     

结核分枝杆菌三种特异性抗体ELISA检测方法的建立

目的 建立以结核分枝杆菌特异性蛋白ESAT6、CFP10-ESAT6、ESAT6-PPE68为包被抗原检测结核病人血清中特异性抗体的间接ELISA检测方法。方法 利用本室构建并纯化的结核分枝杆菌特异性抗原蛋白ESAT6、CFP10-ESAT6、ESAT6-PPE68,建立结核分枝杆菌特异性抗体检测的间接ELISA检测方法:ESAT6-ELISA、CFP10-ESAT6-ELISA、ESAT6-PPE68-ELISA。并与PPD-ELISA同时检测220例结核病人血清、30例非结核呼吸疾病病人血清和50例健康人群血清,分别对三种方法的敏感性与特异性进行统计学分析。结果 ESAT6-ELISA的敏感性为25%,特异性为95%;CFP10-ESAT6-ELISA的敏感性为45%,特异性为93%;ESAT6-PPE68-ELISA的敏感性为48%,特异性为85%。结论 三种结核分枝杆菌特异性抗体检测方法的敏感性均低于PPD-ELISA,但三种结核分枝杆菌特异性抗体检测方法的特异性均高于PPD-ELISA,其中CFP10-ESAT6-ELISA检测的效果最佳,PPE68可作为结核特异性诊断的候选抗原。     

结核杆菌特异性抗原对结核病诊断价值研究

目的从人血清提取结核杆菌早期分泌性抗原靶6、培养滤液蛋白、结核杆菌分泌蛋白38KD进行标测,探讨结核病诊断新方法。方法选择我院2007年1月～2008年1月间住院肺结核病人和健康查体者,应用结核分枝杆菌相关性抗原ESAT-6、CFP10、38KD检测试剂盒测定血清结核菌抗原水平,同时对所有入选者均行结核菌培养。结果活动性肺结核患者血清中检测到结核分枝杆菌特异性抗原ESAT-6、CFP10、38KD的阳性率高,与健康对照组有统计学差异（P〈0．005）;结核分枝杆菌抗原可区分结核感染和非感染,与结核菌素试验比较有显著的统计学差异（P〈0．001）。结论血清结核杆菌特异性抗原能够作为诊断结核病的依据,对鉴别活动性肺结核、非活动性肺结核、非结核病具有重要的价值。     

基于牛分枝杆菌PPD的猕猴全血IFN-γ释放试验观察

目的分析全血IFN-γ释放试验在猕猴分枝杆菌检测中的应用价值。方法首先测定结核菌素试验(TST)阳性、阴性猕猴血清样本的基础IFN-γ含量。然后以PBS为对照,200 IU bovine-PPD为刺激抗原,分别与TST阴性和阳性猕猴肝素抗凝血共培养约24 h,收集血浆,测定IFN-γ含量。通过分析抗原刺激前后血浆IFN-γ含量变化和刺激指数探讨全血IFN-γ释放试验的诊断效能。结果 TST阳性猕猴血清基础IFN-γ含量明显高于TST阴性猕猴,但离散度都较大。PPD刺激前后,TST阴性猕猴血浆IFN-γ含量无明显变化,而TST阳性猕猴血浆IFN-γ含量明显升高(P0.01)。刺激指数结果显示,TST阳性猕猴明显高于TST阴性猴(P0.01)。ROC曲线分析表明,血浆IFN-γ含量和刺激指数均可作为全血IFN-γ释放试验的评价指标。结论本研究基于小样本量的实验结果证实,全血IFN-γ释放试验是猕猴分枝杆菌快速诊断的有益补充方法。     

酶联免疫吸附试验法测定抗结核菌抗原的IgG抗体在诊断肺结核中的意义

本以酶联免疫吸附试验法对痰菌阳性肺结核、痰阴性肺结核、矽肺合并活动性肺结核患和正常健康组血中抗结核菌抗原的IgG抗体进行测定。阳性率分别为94．4％、90．8％、89．5％和6％。结果表明，该抗体的测定对肺结核的诊断具有一定的临床意义。对矽肺和合并结核具有鉴别和诊断性的意义。     

HIV感染者肝功能检查结果分析

目的 了解HIV感染者中肝功能情况，以指导临床抗结核或抗病毒治疗。方法 对HIV感染者同时作肝功能（ALT、AST、TBiL）检查、CD4细胞计数、肺结核病筛查。结果 ALT≥40U／L者占29．4％，AST≥50U／L者占20．3％，TBiL≥17μmol／L者12．8％；涂阳肺结核、活动肺结核、非结核病人间肝功能各指标异常无明显差异；CD4细胞不同水平间肝功能各指标异常无明显差异；ALT为肝功能改变较敏感的指标，其ALT≥120U／L者占5％。结论 HIV感染者肝功能异常率较高，进行抗病毒和抗结核之前和之中应进行肝功能检查，以保证抗结核和抗病毒治疗的安全性。     

2005-2012年凭祥市结核病和艾滋病（TB／HIV）双重感染人群资料分析

目的了解凭祥市结核病和艾滋病（TB／HIV）双重感染情况,为制定结核病和艾滋病的防治措施提供科学依据。方法通过结核病与艾滋病双向筛查,对凭祥市2005-2012年发现的69例TB／HIV双重感染者资料进行分析。结果2005-2012年新登记的1364例结核病人全部进行HIV筛查,检测率100．00％,检出HIV抗体阳性53例,阳性率为3．89％;对新发和可随访到的725例艾滋病患者和HIV感染者进行结核病筛查,查出活动性结核病患者16例,检出率为2．21％。69例双重感染者中,男性60例、女性9例;其中活动性肺结核患者68例,肺外结核患者l例;痰涂片阳性11例,阴性58例;HIV传播途径,血液传播24例、性传播45例;69例双重感染者全部进行了抗结核药物治疗,11例涂阳结核病患者中治愈7例、非结核死亡2例、迁出2例;34例涂阴结核病患者完成疗程;35例接受抗病毒治疗。结论TB／HIV双向筛查策略是有效发现传染源、预防和控制结核病及艾滋病流行的有效途径。     

结核快速诊断免疫色谱卡对活动性肺结核病情评价作用

目的 评价从结核分支杆菌中提取38kDa抗原制备结核快速诊断免疫色谱卡系统（ICT卡）对活动性肺结核血清学评判意义。方法 采用ICT卡检测261例结核病患血清中38kDa相应4种不同抗体。结果 肺结核阳性率69．79％，明显高于肺外结核56．25％，P＜0．05。肺结核进展、吸收好转、稳定期阳性率分别为79．76％、50．79％、16．67％，P＜0．05。肺结核病灶＞1／2肺野伴有空洞和＜1／2不伴有空洞阳性率为84．48％、63．20％，P＜0．05；痰结核分支杆菌、DNA、血清PPD－IgG阳性ICT卡阳性率明显高于三项阴性，P＜0．05。结论 本方法不仅对结核病具有较高诊断价值，对评判活动性肺结核病情、考核疗效、估计预后也有较好意义，且方法安全、简便、快速，不需昂贵仪器，值得推广应用。     

胸腹水、脑脊液中结核分枝杆菌RD1基因编码抗原刺激后释放γ干扰素的特异性T细胞检测

目的 初步探讨胸腹水、脑脊液中结核分枝杆菌RDI基因编码抗原刺激后释放γ干扰素的特异性T细胞检测在诊断结核感染中的应用.方法 应用酶联免疫斑点技术检测6kD早期分泌靶向抗原和10kD培养滤过蛋白肽段库刺激后外周血、胸腹水、脑脊液单个核细胞中释放γ干扰素的特异性T细胞.结果 静脉血和胸腹水、脑脊液中单个核细胞γ干扰素释放反应有助于诊断结核感染,结果阳性的患者最终均诊断为活动性结核病.结果 阳性的胸、腹水斑点形成细胞数分别是静脉血的6.4和31.9倍.结论 在胸腹水、脑脊液中检测结核分枝杆菌RDI基因编码抗原刺激后释放γ干扰素的特异性T细胞,可能为诊断结核感染提供新的途径.     

综合性医院肺结核诊断和治疗问题

目的 通过回顾性的分析1980～2004年因诊断肺结核住院或出院诊断肺结核病人，总结和分析历年来肺结核的流行病学、诊断与鉴别诊断及治疗的成功与失败；以了解综合性医院存在的肺结核诊断和治疗问题。方法 回顾分析和比较住院肺结核患者在80年代前、后期及90年代前、后期和20世纪的发病率、发病年龄、发现方式、临床表现、出入院诊断的符合率、合并症、实验室检查及X线特点和治疗方案等。结果 1980～2034年共收住因诊断肺结核住院或出院诊断肺结核病人共1636例。最终确诊肺结核有1577例患者，其中男性1144例，女性433例，男女之比约为2．9：1。80年代病人总数为717例，90年代病人共有538例，20世纪的发病人数为322例；两时代相比有明显减少（P〈0．01）；但在年龄分层上，老年病人发病率逐年上升，结核病的发病年龄明显后移；因症就诊发现1529例（96．96％）；其中咯血474例（30．93％），高热咳嗽443例（28．96％），低热盗汗566例（37．05％）。841例病人分别送晨痰作结核菌涂片检查3～9次，阳性181例（21．52％）：563例送验痰结核菌培养，阳性118例（20．96％）；1577例病人中有698例（44．26％）病人同时合并其他疾病如细菌感染、糖尿病、肺癌、肾病、高血压、SEE、COPD、IPF、贫血等。其中主要合并细菌感染有235例（33．67％），合并糖尿病208例（29．78％）；在确诊的肺结核1577患者中，主要类型以Ⅲ型继发性肺结核为主，共850例（53．90％），其次为Ⅳ型结核性胸膜炎492例（31．20％），Ⅱ型血源播散型有110例（6．98％），Ⅰ型为8例（0．51％），Ⅲ＋Ⅳ型有57例（3．61％）。Ⅱ＋Ⅲ有43例（2．73％）；Ⅰ＋Ⅱ有17例（1．08％）；1577例肺结核患者中，出入院诊断符合率仅71．46％（1123例），因肺炎入院有235例（14．90％），而诊断肺部肿块或肺癌的有92例（5．83％）；因两肺弥漫性疾病入院后确诊为肺结核有67例（4．25％）；有71例（4．50％）入院诊断为肺结核后经检查为非结核病。所有肺结核患者中，初治病人为大多数，有1120例（71．02％），复治病人有457例（28.98％），在复治病人中绝大多数为〉60岁，约占病人的92．56％（423／457）。在80和90年代及20世纪相比，初治病人越来越多。结论 初诊于综合性医院的肺结核病人愈来愈多，而综合性医院的痰检率很低，阳性率更低，病人来源复杂，诊断率低，合并症多，综合性医院存在的肺结核诊断和治疗问题需要引起重视，并逐步规范。以减少复治病例，提高治愈率。     

ELISA检测p24抗原用于诊断HIV感染的研究现状

1HIV感染实验诊断的研究概况 HIV主要通过性接触、血液和母婴传播。近年来，欠发达国家的感染人数超过发达国家。预计到2010年我国感染HIV的人数将超过1000万。目前测定血清HIV抗体是诊断HIV感染的常规实验方法，但是测定HIV抗体有局限性：有超过70％的HIV感染者在感染6个月后才能检测出抗体，在同性恋群体，这个数字超过80％，检测技术增加了HIV“窗口期”传播的危险；新生儿产生抗体需要出生1年后，来自母亲的HIV抗体会致使假阳性产生；HIV抗体持续存在，艾滋病晚期时消失，无法作为治疗监测的稳定指标。     

南京市艾滋病监测与控制现状

目的 作者分析了南京地区HIV／AIDS感染现状，为制定控制HIV／AIDS增长的合理性对策提供依据。方法 HIV／AIDS疫情来自我市20余所医院HIV初筛实验室、市艾滋病检测初筛中心实验室、省、市血液中心、血站及国际卫生检疫局等HIV检测网络的报告，艾滋病检测初筛中心实验室设在南京市疾控中心，对全市发现报告的HIV抗体初筛阳性标本进行复检，若是复检HIV—抗体阳性，即送往江苏省疾病预防控制中心艾滋病确认实验室，确认后由市疾控中心性病艾滋病防制科对感染者进行流行病学个案调查、分析。结果 从1991—200l年发现HIV感染者54例，含10例AIDS现症病人。其中6例为本市户口。男性47例，女性7例；男：女之比为6．71：1。年龄分布在10—67岁之间；高峰年龄段是20—34岁之间，共40例占74．07％。54例HIV感染者中，经静脉吸毒、共用注射器途径感染28例占51．85％；检测献血员途径发现5例占9．26％；同性或异性接触途径感染9例占16．67％；不详12例占22.22％。南京市自1991年检出首例HIV感染者，以后年发现HIV感染者人数呈现快速增长趋势，人群分布由涉外劳务，新疆籍的外地流动人口，向本地人口转移；由静脉吸毒人群向输、受血、性乱转移，由发现HIV感染者向AIDS病人转移。仅200l年1月至12月底市艾滋病检测初筛中心及23家初筛实验室上报检测各类高危人群149689人份，发现HIV—抗体阳性27人，与去年同期(7例)相比增长286％。结论 南京市的HIV／AIDS感染现状为广大卫生工作者提出了严峻挑战，迫切需要加强对各类高危人群HIV—抗体的主动检测，同时加强人群HIV／AIDS防治知识的健康教育，以预防HIV／AIDS通过无保护性性接触途径扩散。