结核分枝杆菌Rv1419蛋白抗原表位的预测

 目的 预测结核分枝杆菌Rv1419蛋白的抗原表位。方法 利用DNAStar软件包中Protean软件对Rv1419氨基酸序列进行分析,采用包括二级结构、亲水性、抗原性、可及性、柔韧性、电荷分布等多参数预测其二级结构及T细胞和B细胞抗原表位。结果 Rv1419蛋白具有丰富的二级结构和多处抗原指数较高的区段,含有少数潜在的B细胞抗原肽表位（可能在67～70、72～82、142～154、131～137位氨基酸残基或其附近）,这些表位抗原性较好,都含有β转角和无规则卷曲结构,呈现在表面的可能性和柔韧性都较大。该蛋白含有较多潜在的T细胞抗原肽表位（可能在5～15、18～22、29～32、43～55、58～62、64～68、86～97、99～109、110～114、117～123、126～128、136～140位氨基酸残基或其附近）。结论 结核分枝杆菌Rv1419蛋白是一个T细胞抗原表位占优势的蛋白抗原,也存在B细胞抗原表位,本研究结果为该蛋白抗原表位的进一步研究、应用奠定了基础。     

应用DNA微阵列技术快速鉴定分枝杆菌菌种

目的 利用DNA微阵列的高通量、高效性,建立一种快速、简便的分枝杆菌分子菌种鉴定方法,为临床医师正确诊断提供依据.方法 以DNA直接测序法为对照,通过PCR-SSCP和DNA微阵列技术分析28种分枝杆菌标准菌株、9种非分枝杆菌和465株分枝杆菌临床分离株的菌种.结果 应用DNA微阵列技术分析28种分枝杆菌标准菌株和9种非分枝杆菌菌株,特异性100%.465株分枝杆菌临床分离株中,经16S rRNA PCR-SSCP初步菌种鉴定,256株为结核分枝杆菌复合群,应用DNA微阵列分析,显示与分枝杆菌属探针M和结核分枝杆菌复合群探针a杂交阳性,两种鉴定方法结果一致;209株PCR-SSCP初步鉴定为非结核分枝杆菌的分离株,经芯片分析,68株为龟分枝杆菌龟亚种和脓肿亚种,46株为胞内分枝杆菌,34株为堪萨斯、瘰疬、胃和猿猴分枝杆菌复合群,31株为偶然分枝杆菌,16株为戈登分枝杆菌,3株为鸟分枝杆菌,2株为海和溃疡分枝杆菌复合群,1株为土分枝杆菌,1株为迪氏分枝杆菌,1株为草分枝杆菌;另6株只与探针M杂交,经测序显示5株为胞内分枝杆菌,但其基因序列与标准菌株不完全相同,1株为新金色分枝杆菌,芯片上无鉴定该菌种的探针.结论 用DNA微阵列可简便、快速、灵敏、特异地将大多数分枝杆菌鉴定到种,提高分枝杆菌病的正确诊断率,指导临床合理治疗.     

几种结核分支杆菌重组蛋白诱发豚鼠迟发型超敏反应的研究

目的　了解结核分支杆菌重组抗原ESAT6 (E)、MPT64 (M)、Ag85A(A)及两两混合物诱发豚鼠产生迟发型超敏 (DTH)反应的能力。方法 常规皮肤实验法 :灭活H₃₇R_v全菌体致敏豚鼠，皮肤试验以生理盐水为阴性对照，5UPPD标准品为阳性对照，0.8μgE、0.8μgM、0.8μgA、0.4μgA+0.4μgM、0.4μgA+0.4μgE、0.4μgE+0.4μgM分别于背部皮内注射，注射后24、48、72h分别测量硬结反应横、纵直径 (mm)，取二者的平均值。皮肤试验轮圈法 :生理盐水、5UPPD及0.8μgE、0.8μgM、0.8μgA、0.4μgA+0.4μgM、0.4μgA+0.4μgE、0.4μgE+0.4μgM，以轮圈法注射于同一只豚鼠背部两侧，每批6只，共3批。注射后24、48、72h分别测量硬结反应横、纵直径 (mm)，取二者的平均值。结果 常规皮肤试验0.8μgM、A、M+E及E+A诱发豚鼠DTH的平均直径与PPD相比无显著性差异 (P＞0.05)，而0.8μgE抗原及M+A诱发豚鼠DTH的平均直径与PPD相比有显著性差异(P＜0.05)。时间效应 :重组抗原及其混合物诱发豚鼠DTH的平均直径24h平均直径显著高于48h平均直径 (P＜0.05)，24h测量效果较好。轮圈法皮肤试验排除个体差异后，结果与常规皮肤试验结果一致。结论 从试验结果看，重组ESAT6抗原及MTP64与Ag85A混合物诱发豚鼠DTH反应强于PPD。     

反向斑点杂交技术检测耐链霉素结核分枝杆菌基因型

耐药结核病已成为治愈及控制结核病流行的严重障碍。而抗结核药物敏感试验则是制定化疗方案、监测化疗效果和评估预后的关键指标。近年来结核分枝杆菌分子药敏试验新技术层出不穷,但大都通过凝胶,一次只能分析一个基因型,不能一次性检测多个耐药基因而限制其推广应用。本研究旨在应用膜反向斑点杂交技术快速检测结核分枝杆菌对链霉素(SM )的耐药性。材料与方法　从5 3株结核分枝杆菌临床分离株中提取DNA ,分别扩增rpsL和rrs基因,产生2 15bp和2 0 0bp目的片段。设计用于检测结核分枝杆菌耐SM基因rpsL和rrs的寡核苷酸探针,探针S1和S1b用…     

基因芯片技术及其在结核分枝杆菌菌种鉴定及耐药性检测方面的研究进展

我国是全球22个结核病高负担国家之一,目前结核病患者数量居世界第2位,仅次于印度.3月24日是"世界肺结核日",2004年根据世界卫牛组织的最新研究报告指出,结核病已跃升为人类头号杀手.我国目前现有肺结核患者约451万,其中传染性肺结核患者约200万.每年约有145万新发病例,每年因结核病死亡人数达13万,大大超过其他传染病死亡人数的总和.     

抗结核药物所致肝损伤的分子机制

直接面视下督导化疗（DOTS）是目前结核病控制的有效策略,它主要应用4个一线抗结核药物异烟肼（INH）、利福平（RFP）、乙胺丁醇（EMB）和吡嗪酰胺（PZA）联合治疗6个月或更长时间。然而,抗结核药物不良反应尤其是INH、RFP和PZA引发的肝损伤是化疗中最常见的,联合用药时肝毒性的发生率和严重程度明显增加,给结核病的化疗带来了难题。     

应用基因芯片方法检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼的耐药性

目的 应用基因芯片方法检测结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)对利福平和异烟肼的耐受性,评价其临床应用价值。方法 应用聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）扩增-基因芯片杂交的方法检测经常规药敏实验证实的30株Mtb利福平和异烟肼敏感株和50株耐利福平和异烟肼分离株的rpoB基因及katG和inhA基因突变,同时以PCR-直接测序法为对照。结果 应用PCR-基因芯片与基因测序方法检测30株Mtb利福平敏感株rpoB基因和异烟肼敏感株katG基因和inhA基因均为野生型。50株Mtb利福平耐药株中,PCR-基因芯片与基因测序分析3株rpoB基因均为野生型,41株均为突变型;6株PCR-基因芯片与基因测序结果不一致。50株Mtb异烟肼耐药株中,PCR-基因芯片与基因测序分析16株katG基因和30株inhA基因均为野生型,31株katG基因均为315位密码子突变,7株inhA基因均为15位突变型,其中2株为katG和inhA双重突变;3株katG和13株inhA PCR-基因芯片与基因测序结果不一致。结论 应用PCR-基因芯片方法可快速、有效地检出大多数Mtb耐多药分离株,指导临床用药。     

结核分枝杆菌重组Ag85A蛋白的血清学诊断

目的 评价结核分枝杆菌重组Ag85A蛋白为抗原进行结核病血清学诊断的价值.方法 以重组Ag85A蛋白为抗原,通过酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测健康体检者147例和结核患者143例血清中的抗结核抗体;同时以结核杆菌特异性抗体快速检测试剂盒为对照.结果...     

结核病临床分离株及痰标本中embB基因型的快速测定

目的建立快速测定结核病耐乙胺丁醇(EMB)分离株和痰标本中结核分枝杆菌EMB耐药基因型的方法，以期为患者提供及时、有效地化验结果。方法应用16S rDNA聚合酶链反应(PCR)-单链构象多态性(SSCP)和PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)对11株耐EMB分离株和46例结核病痰标本进行分子菌种鉴定和embB基因突变的部位与性质分析。结果以结核分枝杆菌H37Rv标准株为对照，11株耐EMB分离株和46例临床痰标本经16S rDNA PCR-SSCP分析电泳图谱均与结核分枝杆菌标准株相同；限制性内切酶NlaⅢ消化embB基因扩增产物显示，11株耐EMB分离株中4株(36．4％)不被NlaⅡ消化；46例结核病痰标本中10例(21．7％)不被NlaⅡ消化。结论部分结核分枝杆菌耐EMB是由于embB基因突变所致。采用PCR-SSCP和PCR-RFLP方法可直接快速测定结核病耐EMB分离株和痰标本中结核分枝杆菌耐EMB基因型。