自由基对红细胞膜分子流动性的影响

为探明自由基引起红细胞流变性改变的作用机理，我们对体外自由基作用三十分钟前后红细胞膜剪切弹性模量、细胞表面指数、膜脂质分子和蛋白分子流动性进行了比较分析。发现自由基作用后，红细胞膜剪切弹性模量、膜脂质分子和蛋白分子的相对旋转时间分别增加了４９．８％、４９．５％和１９１．４％，而红细胞表面指数无变化；此外，随着自由基浓度的降低以上变化也随之减轻；在自由基损伤后的第三小时，上述改变部分回复。本研究说明，自由基引起脂质和蛋白分子流动性降低共同导致红细胞膜剪切弹性模量的增加，并且一定浓度自由基对红细胞流变性的损伤是部分可逆的。     

c-erbB-2基因工程抗体的构建及在哺乳动物细胞中的表达

原癌基因ＨＥＲ－２／ｎｅｕ／ｅｒｂＢ－２编码的１８５－ｋＤａ跨膜磷酸糖蛋白为受体酪氨酸激酶家族中的成员。已报道ｃ－ｅｒｂＢ－２在多种腺癌中过表达，其中包括１５％～４０％的早期及转移性乳腺癌和卵巢癌［１］。亦有人报道，约７３％的转移性乳腺癌和卵巢癌过表达 ＨＥＲ－２／ｎｅｕ［２］，表明其为乳腺癌靶向性免疫治疗的理想靶分子。我们采用基因工程技术，构建了ｃ－ｅｒｂＢ－２ ＳｃＦｖ基因，并获得了其在ＣＯＳ７细胞中的表达。ｌ 材料和方法１．ｌ材料ＣＯＳ７细胞为本室保存。载体ｐｃＤＮＡ３．ｌ购自Ｉｎ－ｖｉｔｒ…     

急性代谢性酸中毒时CSFpCO2在CSF酸碱调节中的作用

本文旨在探讨急性代酸时ＣＳＦｐＣＯ＿２在ＣＳＦ酸碱调节中的作用及其机制。４组急性代酸犬模型均由静脉内输入０．２ＮＨＣｌ产生，血浆［ＨＣＯ＿３－］ｌｈ内下降到１２±２ｍｍｏｌ／Ｌ，实验持续６ｈ。Ⅰ组控制ＰａＣＯ＿２常，６ｈ时ＣＳＦ［ＨＣＯ＿３－］下降了１．１ｍｍｏｌ／Ｌ；Ⅱ组自然呼吸，ＣＳＦｐＣＯ＿２伴随ＰａＣＯ＿２下降，６ｈ时ＣＳＦ［ＨＣＯ＿３－］下降了６．５ｍｍｏｌ／Ｌ；Ⅲ组机械通气，ＰａＣＯ＿２和ＣＳＦｐＣＯ２均迅速下降，６ｈ时ＣＳＦ［ＨＣＯ＿３－］下降了８．２ｍｍｏｌ／Ｌ；Ⅳ组控制ＰａＣＯ＿２正常，脑室注入乙酰唑胺，６ｈ时ＣＳＦ［ＨＣＯ＿３－］下降了１１．４ｍｍｏｌ／Ｌ。结果说明急性代酸时．ＣＳＦ［ＨＣＯ＿３－］取决于ＣＳＦｐＣＯ＿２。ＣＳＦＨＣＯ＿３－主要来源于ＣＮＳＣＯ＿２的水化作用，与ＣＡ活性显著相关。     

自由基诱发剂对大肠癌细胞脂质过氧化、膜脂流动性及DNA含量的影响

本文以体外培养的大肠癌细胞为模型，观察了自由基诱发剂ｔｂｏｏＨ及抗癌药物对癌细胞脂质过氧化、膜脂流动性及ＤＮＡ含量的影响。结果表明，作用早期ＬＰＯ含量即有明显增加，且随温育时间的延长而增强，但早期ＤＮＡ含量则无明显变化，提示细胞ＬＰＯ含量的变化出现于细胞核酸ＤＮＡ改变之前。ｔｂｏｏＨ结合５－ＦＵ作用于癌细胞，发现在早期ＤＮＡ便可出现抑制作用，提示细胞膜的脂质过氧化损伤可增强抗癌药物的作用。采用ＤＰＨ荧光探针标记观察了细胞脂质过氧化与膜脂流动性的关系，结果表明ｔｂｏｏＨ和５－ＦＵ均能不同程度地引起大肠癌细胞膜脂流动性的减少。且这一效果可因抗癌药５－ＦＵ并用ｔｂｏｏＨ而明显增强，提示细胞膜膜脂流动性的改变是脂质过氧化介导癌细胞功能障碍的重要机制。     

速尿在犬急性代谢性碱中毒脑脊液［HCO3］调节中的作用

本研究通过复制犬急性代谢性碱中毒动物模型，动态观察动脉血和脑脊液（ＣＳＦ）酸碱变量及主要离子变化。在ＰａＣＯ２正常和血浆［ＨＣＯ３－］升高为３５±２ｍｍｏｌ／Ｌ时，分为对照组和速尿组。两组在６ｈ时［ＨＣＯ３－］ｃｓＦ分别增加了４和８．８ｍｍｏｌ／Ｌ。两组［ＨＣＯ３－］ｃｓＦ的增加均伴有等量［Ｃｌ－］的下降。两组ＰｃｓＦＣＯ２变化相似，Ｎａ＋、Ｋ＋乳酸浓度无明显改变。结果表明速尿能抑制ＣＳＦＨＣＯ３－和血浆Ｃｌ－的等量交换，ＨＣＯ３－／Ｃｌ－交换在急性代谢性碱中毒ＣＳＦ酸碱调节中有重要作用。     

微量元素硒对人红细胞流变性的保护作用

本文对术前口服硒的患房、室缺病人组在行体外循环心内直视修补术中心肌缺血／再灌注期的冠状静脉窦血中维生素Ｃ自由基水平（Ａ）、脂质过氧化物（ＭＤＡ）、自由基清除酶活性（ＳＯＤ和ＧＳＨ－Ｐｘ），红细胞膜剪切弹性模量（μ）和细胞表面指数（Ｓｉ）、红细胞膜脂质分子及蛋白分子相对旋转时间等指标进行了动态观察，并与术前未服硒的对照组进行比较。发现再灌注后即刻，尽管服硒组Ａ的增加幅度与对照组基本相同（６６％比６８     

P物质对人多形核白细胞功能的影响

目的研究Ｐ物质（ＳＰ）对人多形核白细胞（ＰＭＮ）有关方面作用及可能的意义。方法应用硝基四氮唑蓝（ＮＢＴ）还原法，荧光法和Ｇｒｉｅｓｓ反应等测定不同浓度ＳＰ单独或在细菌衍生肽类似物ＦＭＬＰ甲酯存在下对ＰＭＮ产生超氧阴离子（Ｏ－２，）过氧化氢（Ｈ２Ｏ２），一氧化氮（ＮＯ）和ＰＭＮ膜上一功能酶中性内肽酶（ＮＥＰ）活性及膜流动性的影响。结果ＳＰ（≥１０－５ｍｏｌ／Ｌ）可剌激ＰＭＮ显著产生Ｏ－２，Ｈ２Ｏ２和ＮＯ，后者被Ｌ－单甲基精氨酸（ＮＭＭＡ）所抑制；ＳＰ（１０－８～１０－４ｍｏｌ／Ｌ）能显著增加ＦＭＬＰ甲酯剌激ＰＭＮ产生Ｈ２Ｏ２，并显浓度递增依赖性；ＳＰ与ＦＭＬＰ甲酯协同可下调ＮＥＰ活性；ＳＰ能提高ＰＭＮ膜流动性。结论ＳＰ可通过ＰＭＮ介导调节炎症反应，对ＰＭＮ的杀菌功能有增强作用，ＳＰ对ＰＭＮ的这些影响可能是神经系统参与炎症和免疫调节的途径之一。     

重细胞分泌可溶怀IL—2R的动态检测及放免分析

ＩＬＩＳＡ检测表明：重组ＣＨＯ细胞产生的ＩＬ－２Ｒａ分子主要分布在细胞膜上，少量分泌到膜外成为可溶性ＩＬ－２Ｒ（ ｓＩＬ－２Ｒ）。ｓＩＬ－２Ｒ产生的时相与膜ＩＬ－２Ｒａ相似，但后有一个较长的高浓度稳定期。此结果提示：膜ｓＩＬ－２Ｒａ代谢比培养液中ｓＩＬ－２Ｒ明显活跃，但ｓＩＬ－２Ｒ的水平并不随膜ＩＬ－２Ｒａ含量增加而改变，ｓＩＲ－２Ｒ这种恒定的代谢方式可能包含着独特的免疫生物学意义。放免受体分析     

H2O2和NO对滑膜成纤维增殖反应的影响

采用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法和ＭＴＴ比色法研究过氧化氢（Ｈ２Ｏ２）和一氧化氮（ＮＯ）对兔滑膜成纤维细胞（ＳＦ）增殖反应的影响。结果表明，在使用亚适ＳＦ浓度（５×１０＾７细胞／Ｌ）时，＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法和ＭＴＴ比色法检测结果一致，Ｈ２Ｏ２和亚硝基铁氰化钠（ＮＯ供体）在低浓度时促进ＳＦ增殖反应，而在高浓度时抑制其增殖反应，提示Ｈ２Ｏ２和ＮＯ对ＳＦ增殖反应具有双向调节作用。     

二十二碳六烯酸和二十碳五烯酸对对模拟失重大鼠红细胞膜流动性的影响

目的:研究二十二碳六烯酸(DHA)、二十碳五烯酸(EPA)对模拟失重大鼠红细胞膜流动性的影响.方法:将30只健康SD大鼠随机分为地面对照组(Ⅰ)、悬吊对照组(Ⅱ)和悬吊实验组(Ⅲ).悬吊实验组鼠料中添加DHA、 EPA , 其他2组为普通鼠料.悬挂40 d后利用激光衍射法测定红细胞变形指数、取向指数, 荧光偏振法测定红细胞膜流动性, 硫代巴比妥酸荧光法测定红细胞膜脂质过氧化物(LP0), 激光共聚焦显微镜观测红细胞纤维型肌动蛋白的改变及含量.结果:失重下大鼠红细胞的变形指数、取向指数以及红细胞膜的流动性明显降低( P＜0.05), LPO增加, 红细胞形态和骨架发生改变, F-actin含量明显降低(P＜0.05).结论:在模拟失重条件下, 红细胞膜流动性降低, DHA、 EPA可拮抗损伤作用, 对红细胞膜具有较强的保护作用.     

新生儿脐血T细胞IL－2R表达和血清sIL－2R水平的研究

对新生儿脐血Ｔ细胞ＩＬ－２Ｒ表达率和血清ｓＩＬ－２Ｒ水平进行检测，结果显示：①早产儿脐血Ｔ细胞ＩＬ－２Ｒ自然表达率明显低于足月新生儿和正常儿童组，而后两者间无差异；②经ＰＨＡ活化后足月新生儿和早产儿Ｔ细胞ＩＬ－２Ｒ表达率皆显著低于正常儿童组，早产儿组也明显低于足月新生儿组；③足月新生儿和早产儿脐血血清ｓＩＬ－２Ｒ水平均明显高于正常儿童组，但前两者间无明显差异；④新生儿组（包括足月和早产儿）脐血Ｔ细胞ＩＬ－２Ｒ自然表达率与血清ｓＩＬ－２Ｒ水平呈直线负相关，而正常儿童组二者间呈直线正相关。     

白细胞介素—2放射免疫测定和质量控制

本文阐述了血清，尿液及激活淋巴细胞悬浮培养液中白细胞介素－２水平测定的放射免疫分析方法，该方法特异性强，与其它免疫因子和类似物的交叉反应率均〈０．０１％，测定的灵敏度达１ｎｇ／ｍｌ。关于ＲＩＡ的质量控制，保持标准品ＩＬ－２的免疫活性是关键，当然＾１２５Ｉ－ＩＬ－２的比活度和抗血清的质量也是很重要的。     

弓形虫SAG2和GRA2基因疫苗的免疫保护研究

DNA疫苗是将编码抗原的基因插入载体质粒中构成重组体,直接接种机体,在接种部位摄取表达并达到抗感染目的的一种疫苗。pCMV—Taq2B载体具有人巨细胞病毒（Humancytomcgalovirus,CMV）高效启动子／增强子序列,可使目的基因在真核细胞中高水平稳定表达成为DNA疫苗载体。构建pCMV-Taq2B—Surfaceantigen2（表面膜抗原2）（pSAG2）、pCMV—Taq2B—Densegranuleprotein2（致密颗粒蛋白2）（pGRA2）及pCMV．Taq2B—SAG2．GRA2（pSAG2-GRA2）DNA疫苗并研究其免疫保护效果。将pSAG2、pGRA2、pSAG2-GRA2DNA疫苗（实验组）、磷酸盐缓冲液（Phosphatebufferedsaline,PBS）、pCMV—Taq2B空质粒（对照组）分别肌肉注射BALB／c小鼠,ELISA法检测血清IgG抗体水平。末次免疫后第28d,各组每只小鼠经腹腔注射弓形虫速殖子1000个,观察小鼠的生存时间。结果显示单基因疫苗pSAG2、pGRA2和双基因疫苗pSAG2一GRA2免疫组均能诱导产生特异性IgG抗体,且于末次免疫后第28d达到最高值,此时单基因疫苗pGRA2（0．382±0．66）和双基因疫苗pSAG2-GRA2（0．548±0．137）免疫组吸光度值显著高于PBS（0．137±0．016）或pCMV—Taq2B（0．135±0．010）对照组吸光度值。免疫单基因疫苗pSAG2（14．3±1．8）、pGRA2组（13．5±2．1）小鼠存活时间（d）明显长于PBS（4．3±1．6）及pCMV—Taq2B组（4．1±1．3）,且双基因疫苗pSAG2．GRA2组（19．6±2．4）小鼠存活时间明显长于单基因疫苗pSAG2组及pGRA2组。弓形虫双基因疫苗pSAG2-GRA2能够诱导小鼠产生抗弓形虫感染保护性免疫,其免疫保护性优于pSAG2、pGRA2单基因疫苗。     

我国恶性疟原虫裂殖子表面蛋白MSP-2的抗原表位分析

根据我国恶性疟原虫株MSP-2基因序列,检索我国虫株MSP-2是否具有国外已鉴定的MSP-2抗原表位。结果显示,我国虫株MSP-2具有已鉴定的FC-27等位基因型可变区抗原表位STNS和DTPTATE。同时应用计算机辅助抗原表位分析技术对MSP-2进行抗原表位分析预测,并以合成肽技术鉴定了预测表位的免疫原性。抗原指数分析表明,MSP-2分子亲水性指数和侧链易曲性指数最高的区域分别位于aa153～166和aa65～72,而aa53～60可能是我国虫株特异的抗原表位。用4个合成肽进行免疫学鉴定,证实预测的表位可以诱导抗肽抗体反应,免疫血清可识别重组MSP-2和恶性疟原虫全抗原中MSP-2抗原区带,且合成肽可与我国流行区高度免疫人群免疫血清反应。由于这些表位存在于我国海南、云南、安徽株MSP-2序列中,可以作为研制我国恶性疟重组多价表位疫苗的候选抗原表位。     

P2X_2和P2X_3受体在小鼠咽粘膜味蕾内的分布

应用免疫组织化学双标记技术研究ATP受体的P2X2和P2X3受体亚型在小鼠咽部粘膜味蕾和邻近组织内的分布,探究ATP在咽部味觉及一般感觉信号传导中的作用。在咽部各水平粘膜味蕾内均可观察到许多P2X2受体阳性味细胞和基细胞,未见P2X2受体阳性的神经纤维。许多降钙素基因相关肽(CGRP)阳性神经纤维围绕在味蕾周围,并发出分支与P2X2受体阳性味细胞和基细胞形成密切接触。P2X3受体多在咽部粘膜上皮味蕾内的神经终末表达,P2X3受体阳性纤维在粘膜基底部形成纤维束并与粘膜下P2X3受体阳性纤维相连,其分支在味蕾基底部形成神经丛,由神经丛发出神经终末到达顶部的味孔和味蕾各部,未见味蕾细胞表达P2X3受体。在无味蕾的粘膜上皮内,也观察到少量P2X3受体阳性神经终末。CGRP阳性纤维缠绕在味蕾周围,并发出分支与味蕾内的P2X3受体阳性纤维形成密切接触。上述结果表明ATP可能是咽粘膜内味觉信号感受与传导的神经递质。     

大鼠气管损伤修复过程中ABCG2转运蛋白的表达

目的观察离体大鼠气管上皮损伤修复过程中气管干细胞的动态变化.方法用氟脲嘧啶（5-FU）造成离体大鼠气管上皮损伤,应用间接免疫荧光法和Western blotting动态观测了修复过程中各时间点气管上皮ABCG2的表达.结果 1.5-FU作用12 h后大部分气管上皮脱落,残留的G0期细胞中部分可见ABCG2表达阳性.去除5-FU后3 h细胞数目增多,为扁平状,ABCG2阳性细胞数也随之增多;6～9 h上皮细胞由扁平变为立方,ABCG2阳性细胞数继续增多;24 h上皮细胞呈立方状,并连接成片,ABCG2阳性细胞较前明显减少;48 h气管上皮接近恢复假复层结构,此时仅见极少量ABCG2阳性细胞.正常气管上皮未检测到ABCG2表达.2.Western blotting分析表明,ABCG2表达量的变化趋势与免疫荧光结果一致.结论 ABCG2的表达与干细胞的数量呈正相关,可作为气管干细胞的标志物.     

白介素2和血小板活化因子对嗜酸性粒细胞的趋化作用比较

用改良Ｂｏｙｄｅｎ法，测定重组人白介素２（ｒｈＩＬ－２）和血小板活化因子（ＰＡＦ）对豚鼠嗜酸性粒细胞（Ｅｏｓ）和中性粒细胞（Ｎｅｕ）的趋化和化学激动作用，ｒｈＩＬ－２对Ｅｏｓ的最大趋化作用浓度为１０￣（－１２）ｍｏｌ／Ｌ，较ＰＡＦ的作用强约１００００倍，１０￣（－５）～１０￣（－９）ｍｏｌ／Ｌ范围内，ＰＡＦ对Ｅｏｓ和Ｎｅｕ有相似的趋化作用．但在对Ｅｏｓ呈趋化作用的１０￣－９～１０￣－１３ｍｏ１／Ｌ范围内。ｒｈＩＬ－２对Ｎｅｕ无明显作用．另外，１０￣（－１２）ｍｏｌ／Ｌ的ｒｈＩＬ－２对Ｅｏｓ的趋化和化学激动作用无显著差异（Ｐ＞０．０５），而１０￣（－８）ｍｏｌ／Ｌ的ＰＡＦ对Ｅｏｓ的趋化作用则显著大于化学激动作用（Ｐ＜０．０５）。以上结果表明，ＩＬ－２是一种极强的选择性Ｅｏｓ趋化介质．     

甲状腺疾病患者血清可溶性白细胞介素2受体测定的临床意义

某些甲状腺疾病时血清可溶性白细胞介素２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）水平及其与游离甲状腺素（ＦＴ＿４）、游离三碘甲腺原氨酸（ＦＴ＿３）和促甲状腺素（ＴＳＨ）水平的相关性比较。结果发现甲状腺机能亢进症（甲亢）未治疗组（Ａ）及甲亢未治疗伴突眼组（Ｄ）血清ｓＩＬ－２Ｒ明显升高；甲状腺机能减退症（甲减）经治疗甲状腺功能灭常组（Ｇ）ｓＩＬ－２Ｒ明显高于甲减未治疗组（Ｆ）；１０例毒性弥漫性甲状腺肿（Ｇｒａｖｅｓ病）患者经抗甲状腺药物治疗后ｓＩＬ－２Ｒ明显降低；Ｇｒａｖｅｓ病及甲减患者血清ｓＩＬ－２Ｒ均与ＦＴ＿３呈正相关。提示除自身免疫外，甲状腺素水平也是甲状腺疾病患者血清ｓＩＬ－２Ｒ水平的重要调节因素。     

癫痫发作敏感大鼠T区Bcl-2蛋白表达变化

为探讨前深梨状皮层T区中Bcl- 2蛋白的表达变化在红藻氨酸诱导的癫痫发作敏感性长期增强中的作用,本研究以免疫组化方法检测癫痫发作敏感大鼠前深梨状皮层T区Bcl- 2蛋白表达变化,以硫堇染色观察神经元脱失情况,并与经蝎毒处理后癫痫发作敏感性明显降低的大鼠进行比较。结果显示:与对照组比较,癫痫发作敏感大鼠前深梨状皮层T区Bcl 2蛋白免疫反应阳性细胞数目明显减少,染色强度明显降低(P<0. 05),神经元数量明显减少;以剂量为100mg/ (kg·d)的蝎毒给予动物连续灌胃4周,可明显降低其癫痫发作敏感性(P<0. 05),脑内前深梨状皮层神经元脱失程度减轻,Bcl- 2蛋白免疫反应产物与对照组相比无明显变化。以上结果提示,前深梨状皮层T区Bcl- 2蛋白表达减少可能是癫痫发作敏感性长期增强的重要原因之一。     

149例晚期肿瘤患者血清IL—2 RIA及其临床意义

采用一步法竞争原理,用放射免疫分析法对149例各种晚期恶性肿瘤病人的血清白细胞介素2(Interleukin,IL-2)水平进行检测。结果显示,各晚期恶性肿瘤组血清IL-2水平均显著低于正常对照组(p<0.001),且这种低水平血清IL-2浓度的患者愈后极差,平均生存期为24.5±18d,有16例血清IL-2水平<1.5ng/ml者,在3.8±1.8d内死亡。提示,血清IL-2水平测定适用于各种晚期恶性肿瘤病人病情监测及对预后的判断。