高产纳他霉素的褐黄孢链霉菌选育

目的　以褐黄孢链霉菌 (Streptomyces gilvosporeus) S- 71为出发菌株 ,筛选纳他霉素的高产菌株。方法　紫外线对孢子悬浮液照射 4 0 s后 ,分别用链霉素抗性和琼脂块法进行筛选纳他霉素高产菌株 ,之后对高产菌株进行生产稳定性实验。结果　通过链霉素抗性法筛选获得了约 10 %的正选率突变株 ,其中突变株SG- 5 6摇瓶效价单位为 2 4 10μg/ ml,为出发菌株的 14 6 % ;通过琼脂块筛选法获得了约 1%的正选率突变株 ,其中突变株 SG- 2 0 0 2摇瓶效价单位为 2 6 5 0μg/ ml,为出发菌株的 16 1% ,该菌株无链霉素抗性标记。结论　链霉素抗性筛选和琼脂块筛选均可以获得纳他霉素的高产菌株 ,其中链霉素抗性筛选法效率高 ,琼脂块法筛选全面。     

60Co诱变选育平阳霉素高产株的研究

目的 筛选平阳霉素高产菌株。方法 以平阳霉素产生菌-平阳链霉菌为出发菌株,采用60C0诱变处理并通过遥瓶试验。结果 获得一株高产突变株,其产素能力达到出发菌株效价的1.86倍。传代试验表明该突变株的高产遗传特性稳定。结论     

低能离子注入诱变达托霉素高产菌株及其发酵的研究(英文)

通过离子注入技术对达托霉素产生菌玫瑰孢链霉菌(Streptomyces roseosporus)Z0327进行诱变选育,使用N+作为离子源,注入能量为20keV,并研究了不同离子注入参数对菌株存活率的影响以及正负突变率的关系,初步探讨N+离子注入对达托霉素生产菌所产生的生物学效应。通过癸酸钠抗性筛选法获得多株遗传稳定性较好的高产突变株,其中突变株M1208发酵单位比出发菌株提高了206%,经发酵工艺研究,100L发酵终效价达到1720mg/L。     

乳链菌肽（nisin）生产菌选育工艺的研究

采用以种子培养基为选育培养基的单菌落抑菌圈法对乳链菌肽生产菌Lactococcus lactis subsp．1actis W28（2583 IU／ml）进行自然选育，做出了效价同抑菌圈直径与菌落直径之比的关系图（图略）。由图可知当直径比大于5．3时，该菌的效价大于2800 IU／ml。直接挑取直径比大于5．3的单菌落5株，得到4号菌（2903 IU／ml）。用传统的选育法与之对比：随机挑出20株菌只有两株效价在2600 IU／ml以上。可见单菌落抑菌圈法大大提高了筛选效率。然后用加有5％乳链菌肽（nisin）产品的梯度平板对4号菌进行抗性筛选，得到对乳链菌肽抗性更强、效价更高的4H1号菌（3016 IU／ml），最后对4H1进行紫外诱变，并利用单菌落抑菌圈法直接挑取3株菌，得到菌株4H1Y2（3499 IU／ml），经稳定性考察后其效价较为稳定（3482 IU／ml）。由此可见单菌落抑菌圈法及抗性筛选法是筛选乳链菌肽高产菌株的快速、有效方法。     

新型常压室温等离子体-紫外复合诱变选育埃莎霉素I高产菌株#br#

目的 通过对埃莎霉素Ⅰ产生菌WSJ-IA进行诱变选育研究,以期获得埃莎霉素Ⅰ高产菌株。方法 使用多功能等离子体诱变系统(multifunctional plasma mutagenesis system, MPMS)对出发菌株的孢子进行等离子体和紫外复合诱变,设定不同的诱变时间处理孢子悬液,通过致死率确定合适的诱变条件,利用突变株摇瓶发酵效价筛选出正突变菌株。结果 在MPMS射频功率为100W,处理距离5mm,气体流量12.5SLM,等离子体-紫外辐射时间为50s时,菌株致死率为96.08%。在此诱变条件下,以突变株的初筛效价为指标的突变率、正突变率分别达到63.96%和22.52%,复筛效价是出发菌株1.5倍以上的有5株,占复筛菌株的9%。最终筛选出一株发酵单位比出发菌株提高221%、埃莎霉素Ⅰ组分含量提高192%的正突变株IA-425。42L自动发酵罐发酵结果表明,该菌株埃莎霉素Ⅰ产量达到(2000±200)μg/mL左右。结论 新型等离子体复合紫外诱变方式,可有效提高菌株的埃莎霉素Ⅰ发酵产量和组分含量。这为埃莎霉素Ⅰ的大规模发酵和临床前研究奠定了良好基础。     

核糖体工程技术选育米尔贝霉素高产菌株

本实验室中保存的一株从土壤中分离得到的米尔贝链霉菌(Streptomyces milbemycinicus)27号菌株所产米尔贝霉素A3和A4的初始产量分别为61.0和23.8μg/mL。以该菌株为出发菌株，采用核糖体工程技术，结合紫外诱变技术，对米尔贝霉素产生菌米尔贝链霉菌进行诱变，并以链霉素耐受为筛选压力进行筛选。经过诱变后对单菌落进行摇瓶复筛，其中正突变株中米尔贝霉素产量最高的菌株编号是R2-6-5，其米尔贝霉素A3和A4的产量分别是105.2和38.8μg/mL，较原始菌株分别提高了72.5%和63.3%，且遗传稳定。最后，对产量变化较大的11株突变株基因组中rsmG基因和rspL基因进行突变位点分析，发现在rspL基因内均未发生突变，rsmG基因均发生突变。本研究表明，链霉素抗性降低的突变菌株确实都在相关基因内发生突变，且核糖体工程结合紫外诱变的诱变方式效果良好，能够快速有效的提高米尔贝链霉菌生物合成米尔贝霉素的能力。     

雷帕霉素产生菌突变株的遗传稳定性研究

本文研究了雷帕霉素产生菌－吸水链霉菌ＦＣ９０４的高产突变株Ｃ１４的性状，稳定性。Ｃ１４菌株冷藏稳定性较好，存放４℃冰箱３个月，效价基本不变。Ｃ１４变株经传代后Ｉ型菌落减少，生产能力下降，其高产性状不稳定，需不断自然分离，进一步提高效价。     

埃博霉素高产菌株的诱变筛选

目的:探讨埃博霉素高产菌株的诱变筛选方法与效果.方法:选择原始菌株DES35 进行原始培养,在培养中进行硫酸二乙酯化学诱变筛选.结果:筛选到了6 株产量有所提高的突变株.高产菌株的埃博霉素A 与B 的平均产量与诱变前都有明显提高(P＜0.05).结论:埃博霉素高产菌株的硫酸二乙酯诱变筛选能使埃博霉素产量稳定提高,为埃博霉素生产提高了良好的菌株资源.     

达托霉素产生菌前体物耐受选育及其流加补料发酵

目的 通过对达托霉素产生菌进行诱变选育,以及前体物补料发酵方式提高达托霉素的产量。方法 采用常压室温等离子体(atmospheric and room temperature plasma, ARTP)技术对玫瑰孢链霉菌进行诱变,以癸酸铵和甘氨酸耐受作为选择压力进行菌株筛选,在摇瓶和100L发酵罐上进行癸酸铵流加补料试验确定最佳的发酵工艺。结果 经诱变选育获得1株突变株FIM-D1568摇瓶效价达到380mg/L,发酵单位较出发菌株提高了35.7%;通过优化100L发酵罐流加补料癸酸铵溶液工艺,使达托霉素发酵效价达到2276mg/L。结论 以ARTP为诱变源,甘氨酸及癸酸铵耐受性为选择性压力,可以快速筛选获得达托霉素高产菌;高产突变菌株在流加补料发酵工艺上优良性状得以发挥,发酵效价大幅提高。     

复合诱变法选育普那霉素高产菌株

以始旋链霉菌(Streptomyces pristinaespiralis)ZP2为出发菌株,经紫外线(UV)、亚硝基胍(NTG)复合诱变,并结合普那霉素抗性突变株的理化筛选,选育到一株高产突变菌株UN2056,其普那霉素产量达到1490 mg/L,比出发菌株提高了45.7%.传代试验表明该高产突变菌株的高产性能遗传特性稳定.高产突变株UN2056在5 L发酵罐中进行发酵试验,其平均发酵产量达到1645 mg/L,比出发菌株提高了60.8%.     

Biosynthesis of indocarbazostatin B, incorporation of D-[U-13C] glucose and L-[2-13C] tryptophan

High incorporation of D-[U-13C] glucose and L-[indole-2-13C] tryptophan into indocarbazostatin B (2) was observed in a biosynthetic study using a mutant strain, Streptomyces sp. MUV-7-8. The original strain, Streptomyces sp. TA-0403 produced a small amount of indocarbazostatin (1) and indocarbazostatin B (2), which displayed potent biological activities. To facilitate biosynthetic studies, we selected high indocarbazostatin producing mutant strains. The first mutants, Streptomyces sp. MUV-6-83 and MUV-6-17, produced indocarbazostatins C (3) and D (4) as well as 1 and 2. When the production medium was supplemented with D-tryptophan, the MUV-6-17 mutant produced K252c (5), whereas when L-tryptophan was added, it produced K252d (6). On further UV treatment of the mutant strain MUV-6-83, we finally obtained a new mutant producer, Streptomyces sp. MUV-7-8, that produced 2 as a major metabolite with higher productivity. This mutant producer enabled us to do a feeding experiment of the envisioned precursors, glucose and tryptophan.     

LC determination of salinomycin in fermentation broths and premixes

A simple and rapid high performance liquid chromatography method for the determination of salinomycin in fermentation media of Streptomyces albus strains and in premixes has been developed. This method involves reverse-phase separation of the component analysed with UV detection at 210 nm using methanol and 0.2 M acetate buffer pH 5.8 (100:10, v/v) as the mobile phase. The reliability of the method was confirmed by validation. A linear relationship was obtained within range 0.2-2.0 mg ml(-1) (r=0.9999). The relative standard deviation of methods within-laboratory reproducibility was 1.6%. The estimated quantitation limit of assay was about 32.5 microg ml(-1). The method has been successfully used in the determination of salinomycin content in testing production processes and premixes of different commercial brands.     

螺旋霉素产生菌螺旋霉素链霉菌遗传育种

本文是利用抗生素抗性与产量之间的相关性来进行螺旋霉素产生菌螺旋霉素链霉菌的遗传育种,旨在获得高效价菌株,从而提高螺旋霉素的生产水平。首先用正交试验法确定出发菌株最佳发酵培养基,并在此基础上通过紫外线诱变,和在螺旋霉素浓度梯度平板上筛选螺旋霉素抗性菌株。按上述方法理性化筛选得到的菌株多为正突变株。从本实验得到一株螺旋霉素抗性菌株SPM~r-248,其抗性较出发菌株提高300％,生产能力较出发菌株提高81.3％。菌株SPM~r-248的高效价生产性能遗传特性稳定。在7m~3罐做发酵放大,与出发菌株相比,发酵效价提高31.4％,发酵指数提高18.8％,具有一定的学术意义和经济价值。     

盐霉素和盐霉素钠对人乳腺癌干细胞和乳腺癌细胞体外细胞毒作用的比较(英文)

盐霉素是一种从白色链丝菌培养物中分离提取的聚醚类离子载体型抗生素,它广泛应用于畜禽类动物鸡球虫病的防治,并且还能作为饲料添加剂以促进畜禽的生长。最近新发现盐霉素具有特异性抑制肿瘤干细胞的作用。目前盐霉素钠的价格只是盐霉素的十分之一,但两者在抑制肿瘤细胞和肿瘤干细胞方面的异同却未见文献报导。本研究以人乳腺癌细胞MCF-7及其干细胞为模型,通过SRB实验对盐霉素及其钠盐的细胞毒性进行了评价和比较。首先,通过流式细胞仪从MCF-7细胞中分选得到了SP细胞;然后用乳腺癌干细胞表面特异性标志物CD44~+/CD24~-对SP细胞进行了鉴定;最后,分别测定了盐霉素和盐霉素钠对分选得到的肿瘤干细胞和肿瘤细胞的体外生长抑制率。结果表明,与乳腺癌细胞相比较,盐霉素和盐霉素钠对肿瘤干细胞均表现出了更强的抑制作用,在同样的给药浓度下,盐霉素和盐霉素钠对肿瘤细胞和肿瘤干细胞的抑制作用未表现出明显的差异。本研究结果提示,在抑制肿瘤干细胞的相关研究中,可以用盐霉素钠替代盐霉素而不会影响抑制效果。     

一株新的星孢菌素产生菌的鉴定及其诱变选育

摘要：目的 对自主分离得到的星孢菌素产生菌HY1进行分类鉴定和诱变选育。方法 通过16S rDNA基因序列同源性 比对分析，结合其形态特征、培养特征、生理生化特性对菌株HY1进行分类研究；以HY1为出发菌株，通过紫外-氯化锂(UVLiCl) 、常压室温等离子体(ARTP)及亚硝基胍(NTG)诱变，结合含色氨酸、甲硫氨酸的抗性平板进行筛选。结果 菌株HY1为链 霉菌属的菌株，通过多次诱变得到突变高产菌株HY6-S36，且遗传性能稳定，发酵效价达360mg/L，比原始菌株提高了80%。结 论 获得一株高产稳定的星孢菌素生产菌株，为星孢菌素产业化提供优良的菌种。     

提高白色链霉菌盐霉素产量的工艺研究

以白色链霉菌SL—F2—110为产生菌，着重从菌种选育和补料工艺两方面研究提高白色链霉菌的盐霉素产量。结果表明，①氯化锂前处理与紫外线复合处理后筛选出的突变株盐霉索发酵产量有很大提高；②在基础培养基中减少豆油加量，采用中间补豆油控制，发酵水平与没有补料的相比有较大提高。     

沙利霉素抗肿瘤机制的研究进展

沙利霉素是从白色链霉菌发酵液中分离出的一种羧基聚醚类钾离子载体抗生素,广泛应用于家禽球虫病的防治。2009年首次发现沙利霉素对乳腺癌干细胞具有特异性抑制作用,此后的研究表明,沙利霉素能够有效抑制口腔鳞状细胞癌、卵巢癌、鼻咽癌、乳腺癌和肺癌等多种肿瘤细胞的增殖、转移和侵袭。沙利霉素通过靶向肿瘤干细胞、逆转肿瘤细胞耐药性、抑制肿瘤血管生成和上皮间充质转化、调节肿瘤细胞自噬发挥抗肿瘤作用。本文旨在对沙利霉素的具体抗肿瘤机制作一综述,为其在临床上进一步应用提供理论基础。     

氮离子注入柔红霉素产生菌诱变高产菌株的研究

抗肿瘤抗生素柔红霉素产生菌 HB1482 - 170株经 1.5× 10 1 1 ions/ cm2 氮离子束诱变处理后 ,获得1株高产柔红霉素诱变株 137,菌落形态与出发株相近 ,用于生产罐 ,柔红霉素产率较出发菌株提高 2 5 .8%。     

红霉素链霉菌遗传控制的研究 一 红霉素链霉菌无活性突变株回复突变株的筛选

利用亚硝基胍(NTG)对红霉素链霉菌(S.erythreus UV 80)活性菌株进行回复突变,获得了红霉素高产量变株。先以NTG(100μg/ml,1小时)处理母株,得无活性变株,再经诱变,得到回复突变株,其活性提高8％。进一步用NTG(1000μg/ml,1小时)诱变处理,得到了比原菌株红霉素产量高25％的变株。诱变剂的最适剂量为产生90～94％死亡率的剂量。同时还观察到红霉素链霉菌变株的培养特征和生产能力之间有相关性。