淋巴细胞恶性疾病HTLV—I抗原及抗体的测定分析

本以间接免疫萤光法测定96例淋巴细胞恶性患血清中抗人T细胞白血病病毒Ⅰ型（HTLV-1）抗体，其中，80例急性淋巴细胞白血病；12例非何杰金氏淋巴瘤；4例慢性淋巴细胞白血病。发现一例成人抗HTLV-1抗体阳性，抗体滴度1：80，阳性率1.04%。并在培养细胞中检出HTLV-1抗原阳性细胞，前后两次阳性率分别为1.7-1.5%(P>0.05)。确诊病人已感染本病毒，提示HTLV-1已传入江西，认为测定HTLV-1抗原比抗体更重要，可用于早期确诊及流行病学调查。     

多聚酶链反应检测淋巴细胞白血病免疫球蛋白重链基因重排及其临床意义

用多聚酶链反应技术扩增42例急、慢性白血病患骨髓白血病球蛋白重链（IgH)基因重排产生的第三互补决定区（CDR-Ⅲ）DNA序列。结果显示：35例淋巴细胞白血病中25例出现IgH基因单克隆性重排（71.4%)，其中急、慢性B淋巴细胞白血病各为80%（16/20）和87.5%(7/8)及2例T、B淋巴细胞双表型白血病，另外有1例急性未分化白敌国病也出现这种重排，而5例，急性T淋巴细胞白血病和6例急性髓细胞白血病均无重排，对3例CDR-Ⅲ阳性克隆的B-ALL病例在完全缓解期进行微小残留病变检测，其中2例PCR阳性病人先后复发，1例PCR阴性病人缓解持续时间明显长于阳性病人。     

各类病毒的PCR检测

1 检测人类T-细胞淋巴瘤/白血病病毒 应用体外基因扩增技术棗PCR大大地增进了人类癌基因逆转录病毒的检测,因此PCR技术作为人类T-淋巴瘤/白血病病毒(HTLV-1.II)的临床诊断和流行病学研究的手段,广泛地应用于淋巴细胞增生性疾病和神经系统疾病的病人和携带者的检测.由于该技术具有相当高的敏感性,可以准确地鉴别出已发生感染的无症状携带者,因此还可能促进分子流行病学的建立.引物的探针系统包括普遍性和特异性两种.普遍性引物和探针系统用于扩增和检测HTLV-1和HTLN-II,而特异性引物和探针系统用于区别这两种病毒.对于流行病学筛选,常规应用普遍性引物探针系统进行初筛,对于阳性的DNA再进一步进行特异性分析.     

降落式PCR和SSCP检测淋巴细胞白血病单克隆T细胞受体γ基因重排

目的 以降落式PCR和单链构型多态性(SSCP)方法检测淋巴细胞白血病单克隆T细胞受体(TCR)γ基因重排，探讨其在淋巴细胞白血病诊断中的价值。方法 盐析法提取淋巴细胞白血病患者外周血白细胞DNA，TCR-γ基因重排通用引物和降落式PCR扩增基因重排。分别采用琼脂糖凝胶电泳、SSCP和DNA直接测序方法检测PCR扩增产物。阳性细胞系DNA模板与反应增生性淋巴组织DNA按不同比例混合后扩增，检测降落式PCR的灵敏度。结果 琼脂糖电泳中，18例T淋巴细胞白血病中有15例、4例B淋巴细胞白血病中有2例为阳性。阳性标本经SSCP进一步分析，呈不连续条带。DNA直接测序证实扩增产物为TCR-γ基因重排。阳性对照模板占1％以上时可得到阳性扩增结果。结论 TCR-γ基因重排通用引物结合降落式PCR可有效扩增T淋巴细胞白血病基因重排，可用于T淋巴细胞白血病的辅助诊断。     

血浆／血清EB病毒DNA检测在鼻咽癌血清学诊断中的价值

目的：比较健康成人和鼻咽癌患外周血EB病毒DNA检出率，评价外周血EB病毒DNA检测在鼻咽癌血清学诊断中的价值。方法：用巢式PCR方法检测58例健康成人和66例鼻咽癌患的外周血EB病毒DNA，免疫酶标法检测血清IgA/VCA滴定。结果：鼻咽癌患外周血单个核细胞和血浆／血清的EB病毒DNA检出率分别为81．82％和84．85％，明显高于健康成人（分别为51．72％和10．34％）。13例IgA/VCA阴性（＜1／40）鼻咽癌患有12例可在血浆／血清中检出EB病毒DNA。血浆／血清EB病毒DNA和IgA/VCA(1/40)双阳性的正确率（83．87％）、阳性实验预测值（97．92％）和优势比（141．0）较单独血浆／血清EB病毒DNA阳性（分别为52．42％，73．33％和1．1423）或IgA/VCA阳性（分别为48．39％，53．85％和1．0480）高。结论：大部分广州健康成人外周血携带有EB病毒，部分可进入溶解周期。检测血浆／血清中EB病毒DNA在鼻咽癌的血清学诊断中具有重要价值。     

南昌地区人群中T细胞白血病病毒1型抗体调查

应用明胶颗粒凝集试验和间接免疫荧光试验，测定南昌地区人群血清中人T细胞白血病病毒1型（HTLV-1）抗体，共712份，其中正常人432份，各类白血病人260份，各类淋巴瘤20份，发现2例阳性，1例成人T细胞淋巴瘤患者（滴度1：80），1例粒细胞白血病患者（滴度1：20），阳性率为0.28%。结果说明南昌地区有HTLV-1感染和传播。     

青岛地区TTV抗体阳性人群的病毒基因检测及序列分析

（1）目的 了解经血传播病毒（TTV）在青岛地区的基因变异情况。（2）方法 选择TTV抗体阳性的标本,用巢式PCR技术扩增血清中的DNA特定片段,纯化后与载体连接并转入大肠杆菌JM109,提取阳性克隆的重组质粒测序并与TTV的已知序列相比较。（3）结果 在选择的20例标本中,15例扩增出TTV DNA,对其中1株测序后与已知序列AB008394比较,发现碱基变异率为13．3％。（4）结论 青岛地区存在TTV变异株。     

双引物聚合酶链反应同时快速检测梅毒螺旋体和单纯疱疹病毒Ⅱ型

目的 建立双引物聚舍酶链反应（PCR）用于同时快速检测梅毒螺旋体和单纯疱疹病毒Ⅱ型。方法 基于单纯疱疹病毒Ⅱ型（HSV-2）的DNA聚合酶基因以及梅毒螺旋体47KD膜蛋白基因序列，自行设计2对特异性寡核苷酸引物，建立了同时检测上速2种痛原体的双引物PCR。结果 各特异性引物仅扩增相应的病原体DNA，即单纯疱疹病毒Ⅱ型扩增产物为202bp以及梅毒螺旋体扩增产物为252bp。其他11种生殖道常见微生物及正常人基因组DNA不被扩增。检测了51例临床标本，梅毒螺旋体暗视野显微镜检查阳性检出率为15．7％，双引物PCR阳性检出率为19．6％；二种方法检测结果间比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。HSV阳性培养率23．6％，双引物PCR阳性率47．1％，双引物PCR阳性检出率显著高于HSV培养且差异有统计学意义（P=0．019）；上速临床标本分别进行了2种痛原体的单引物PCR，与双引物PCR对照结果完全一致。结论 我们建立的双引物PCR一次可同时检测2种病原体，且有快速、敏感、特异以及简便的特点。     

人类微小病毒B19感染与大肠癌的关系

目的探讨人类微小病毒B19感染与大肠癌的关系。方法收集160例临床已确诊的肠癌病人及120例健康体检者血液标本，采用聚合酶链式反应（PCR）技术进行B19DNA检测。结果160例肠癌病人血标本中，B19DNA阳性为15例（9.38％）；120例健康体检者中B19DNA阳性为1例（0．83％）。差异有显著意义（P〈0．01）。结论肠癌病人微小病毒感染率明显高于健康人群。     

HIV感染者中BKV感染率的调查研究

目的了解人类免疫缺陷病毒（HIV）感染者多腐病毒BK病毒（BKV）的感染情况,探讨BK的激活与免疫缺陷的相关性。方法采集HIV感染者及健康体检者外周血标本各400份,提取淋巴细胞基因组DNA,用巢式PCR方法扩增BKV的保守区编码序列,统计分析HIV感染组及健康体检组BKV-DNA检出率。结果HIV感染组及健康体检组外周血白细胞（PBLs）样品中BKV-DNA序列检出率分别为84．5％和58．0％,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论BKV在HIV感染者PBLs中存在较高的感染率,免疫缺陷程度与BK多瘤病毒复活密切相关,BKV威胁着HIV感染者,应引起临床足够的重视。     

类风湿关节炎患者HLA-DR4/1表型与流感病毒血凝素特异性T细胞增殖及其抗体的关系

目的 探讨类风湿关节炎(RA)患者人类白细胞抗原(HLA)-DR4/1表型与流感病毒血凝素(HA)308-317多肽特异性T细胞增殖和血清抗HA308-317抗体之间的关系.方法 将HA308-317多肽与70例RA患者外周血单个核细胞(PBMC)共孵育5 d,3H掺入法测定T细胞增殖.用ELISA法检测RA患者血清HA308-317抗体水平.以序列特异性引物聚合酶链反应(PCR.SSP)技术对RA患者进行HLA-DR分型.结果 在70例RA患者中,27例HLA-DR4/1表型阳性.其中,HA308-317多肽可刺激T细胞增殖的RA患者有17例(62.9%),10例无反应性;15例(55.6%)HLA-DR4/阳性RA患者抗HA308-317抗体阳性.在HLA.DR4/I表型阴性的RA患者中,T细胞对HA308.317多肽有反应性者10例(23.3%),无反应性者33例;25例(58.1%)患者抗HA308-317抗体阳性.HLA-DR4/1表型阳性组HA308-317特异性细胞增殖高于HLA-DR4/1表型阴性组(P＜0.01),但两组血清中HA308-317抗体水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论 RA患者HA308-317特异性T细胞增殖与HLA-DR4/1表型有关,HA308-317抗体生成与HLA-DR4/l亚型无明显关系;HA308-317多肽可能通过诱导HLA-DR4/1特异性T细胞活化参与RA的发病.     

人T细胞白血病病毒的电镜研究

作者对带有HTLV-1的MT-2细胞超微结构进行了初步研究。所见成熟病毒颗粒大小不等具有多形性特征,有C型病毒颗粒特征但核样物较大;细胞中同时存在裸体的病毒核样物、囊膜状结构及相关的膜增殖系统,和颗粒状、微丝状、溶酶体样病毒基质,与病毒发育密切相关。观察这些变化将有助于深入研究HTLV的形态发生及其与宿主细胞的关系。     

类风湿关节炎患者人类白细胞抗原-DR4/1表型与Ⅱ型胶原特异性T细胞增殖及血清Ⅱ型胶原抗体的关系

目的:探讨类风湿关节炎 (RA) 患者HLA-DR4/1表型与Ⅱ型胶原 (CⅡ) 263-272 多肽特异性T细胞增殖和血清CⅡ263-272抗体之间的关系. 方法:将CⅡ263-272多肽与70例RA患者外周血单个核细胞(PBMC)共孵育5天,用3H参入法测定T细胞增殖,用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测患者血清CⅡ263-272抗体水平.以序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)技术对上述患者进行HLA-DR分型.结果:在70例RA患者中,27例HLA-DR4/1表型阳性,43例HLA-DR4/1表型阴性.在HLA-DR4/1表型阳性的RA患者中,CⅡ263-272多肽可刺激T细胞增殖的有15例(55.6%),12例(44.4%)呈无反应性;18例(66.7%) 患者抗CⅡ263-272抗体阳性.而在HLA-DR4/1表型阴性的RA患者中,T细胞对CⅡ263-272多肽有反应性者13例(30.3%),无反应性者30例(69.7%);15例(34.8%) RA患者抗CⅡ263-272抗体阳性.HLA-DR4/1表型阳性组CⅡ263-272特异性细胞增殖和CⅡ263-272抗体生成均高于HLA-DR4/1表型阴性组.结论:RA 患者CⅡ263-272 特异性T细胞增殖和CⅡ263-272抗体生成与HLA-DR4/1表型有关.     

Current status and development of hematopoietic stem cell transplantation in China: a report from Chinese Hematopoietic Stem Cell Transplantation Register Group

Allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (allo-HSCT) has three decades history in China. During these periods, the number of HSCT has been increasing, donor and stem cell sources were expanded, indication of diseases and patients for HSCT extended. Forty-two HSCT units offered their data 1–6 times from July 2007 to June 2010. The annual increase rates were 8.8% to 10.8%. Matched sibling donor is 41%, mismatched related/haploidentical donor is 24%, unrelated volunteer donor is 16%, and umbilical cord blood is 2%. The indications of major disease entities are acute myeloid leukemia (AML, 35%), acute lymphobastic leukemia (ALL, 25%), chronic myeloid leukemia (CML, 21%), and myelodysplastic syndrome (MDS, 8%). The different opinions on the indication of HSCT were supported by some trials, matched/haploidentical HSCT fit for middle or high risk ALL and AML in first complete remission (CR1), the international prognosis score system (IPSS) — middle-II/high risk MDS, CML in advanced stage and so on, when patients have no matched sibling donor. In the Peking University Institute of Hematology, Peking University People’s Hospital, haploidentical HSCT has received a comparable result to matched simbling donor HSCT and unrelated matched donor HSCT; we suggest haploidentical donor might be a routine alternative donor for high-risk patents who need an urgent HSCT without matched related donor in special center.

     

Prevalence of Human T Cell Leukaemia Virus amongst Blood Donors

Background

Human T cell leukaemia virus (HTLV) I/II are retroviruses implicated in transfusion transmitted infection. Present study was undertaken to assess seroprevalence of HTLV in voluntary blood donors along with pattern of blood utilisation. Methods: A total of 258 healthy blood donors who were free from infectious markers in transfusion as per current transfusion guidelines were enrolled. They were screened for HTLV-I/II antibodies by commercially available enzyme immuno assay (EIA) and their blood utilisation data was analysed.

Result

Five (1.9%) donors were found seropositive for HTLV-I/II of which 1.2 % were first time and 0.9% were repeat donors. Blood utilisation data revealed 20.9% and 38.8% units were utilised within 5 and 6–14 days of collection respectively. 45.9% recipients were transfused with single blood unit. 42.9% recipients were immunosuppressed due to underlying disease. Conclusion: The high prevalence of HTLV in blood donors, coupled with single unit transfusion, use of fresh blood, non availability of acellular blood products and immunosuppression in recipients can lead to significant transfusion transmitted HTLV infection. We suggest judicious use of blood products and screening of blood donors in prevention of transfusion transmitted HTLV-I/II.Key Words: HTLV-I/II, Blood donors; Transfusion transmitted infection; Retrovirus     

北京某社区2型糖尿病患者血糖控制情况与肱踝脉搏波传导速度的相关性研究

目的：：探讨2型糖尿病( type 2 diabetes mellitus, T2DM)患者血糖控制与肱踝脉搏波传导速度( brachial-ankle pulse wave velocity, baPWV)的关系。方法：采用横断面研究设计,对北京市某社区40岁及以上的T2DM患者及非患者进行问卷调查、体格检查、糖化血红蛋白( glycated hemoglobin, HbA1c)及血脂等实验室指标检测、baPWV测量。根据HbA1c结果将患者分为血糖控制良好组和血糖控制不良组,分析血糖控制情况与baPWV之间的相关性。结果：共纳入1341名研究对象,包括733名T2DM患者及608名非患者。与非患者相比,T2DM患者中baPWV异常(baPWV≥1700 cm/s)率较高(40.8% vs.26.8%, P<0.001)。分别以HbA1c<6.5%和HbA1c<7.0%为血糖控制目标时,非患者、血糖控制良好的T2DM患者组、血糖控制不良的T2DM患者组之间的baPWV异常率差异有统计学意义(non-diabetes vs. HbA1c<6.5% T2DM vs. HbA1c≥6.5% T2DM：26.8% vs.32.8% vs.42.6%,P<0.001;non-diabetes vs. HbA1c<7.0% T2DM vs. HbA1c≥7.0% T2DM：26.8% vs.36.0% vs.43.4%,P<0.001)。控制性别、年龄、吸烟、糖尿病家族史、2型糖尿病病程、心血管疾病史、腰臀比、收缩压、舒张压、总甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇等因素后进行多重Logistic回归分析,结果显示与非糖尿病人群相比,HbA1c<6.5%的糖尿病患者baPWV异常的OR值为0.927(95%CI 0.560~1.537),HbA1c≥6.5%的糖尿病患者baPWV异常的OR值为1.826(95%CI 1.287~2.591);与非糖尿病人群相比,HbA1c<7.0%的糖尿病患者OR值为1.210(95%CI 0.808~1.811),HbA1c≥7.0%的糖尿病患者baPWV异常的OR值为1.898(95%CI 1.313~2.745)。结论：社区2型糖尿病患者血糖控制情况与baPWV间存在显著的关联关系,血糖控制不良是baPWV异常的危险因素,良好控制血糖可能能够降低糖尿病患者发生心血管疾病的风险。     

慢性粒细胞白血病患者PBMCs中CD4+CD25+细胞体外增殖及对CD4+CD25-细胞增殖的影响

目的 探讨慢性粒细胞白血病(CML)患者外周血单个核细胞(PBMCs)来源的CD4 CD25 细胞体外增殖及对CD4 CD25-细胞增殖的影响.方法 以免疫磁性分离方法(MACS)分选出CML患者外周单个核细胞中的CD4 CD25 及CD4 CD25-细胞后,用流式细胞仪分析细胞的纯度及活力;再以小鼠抗人CD3单抗、小鼠抗人CD28单抗及rh IL-2作为刺激因子,CD4 CD25 细胞与CD4 CD25-细胞共培养,观察CD4 CD25 细胞对CD4 D25-细胞增殖的抑制效应.结果 (1)分选后健康对照组及CML患者PBMC中CD4 CD25 细胞纯度分别为(84.93±2.55)%、(86.32±2.40)%,两者相比,无显著差异(P＞0.05);(2)经MACS分选后正常对照组与CML患者CD4 CD25 细胞活力分别为(98.12±0.68)%、(97.33±0.78)%,两者相比,无显著差异(P＞0.05);(3)无论是健康对照还是CML患者的CD4 CD25 细胞均具有明显抑制效应性细胞如CD4 CD25-细胞的增殖,随着CD4 CD25 细胞数的增加,这种抑制增殖的能力也相应增加,当CD4 CD25 T:CD4 CD25-T为1:1时,抑制率最大.结论 MACS分选法能够分选出高纯度及高活力的CD4 CD25 细胞,分选后CD4 CD25 细胞在体外均能抑制CD4 CD25-细胞增殖,且这种抑制效应呈一定效靶比关系.     

酪氨酸蛋白磷酸酶2高表达对p210bcr/abl诱导的慢性粒细胞白血病细胞增殖与凋亡抵抗的影响

目的研究Src癌基因同源的酪氨酸蛋白磷酸酶2(Shp2)在慢性粒细胞白血病(CML)细胞中的表达,及其在p210bcr/abl诱导的白血病细胞恶性增殖和凋亡抵抗中的作用。方法收集25例p210bcr/abl阳性CML患者白血病细胞样本,8例非肿瘤病人骨髓和10例正常人外周血细胞样本作阴性对照,K562和KU812白血病细胞系作为p210bcr/abl阳性对照,KG1白血病细胞作为Shp2阳性对照。用Western印迹技术定量分析与比较Shp2在白血病细胞和正常骨髓造血细胞中的表达情况,通过特异性抑制剂分别下调Shp2和白血病融合基因p210bcr/abl后,观察Shp2表达对p210bcr/abl阳性白血病细胞增殖与凋亡的作用。细胞增殖与凋亡检测应用流式细胞仪。结果(1)磷酸化Shp2蛋白在92%患者CML白血病细胞样本中呈高表达状态,而在8例非肿瘤患者骨髓和10例正常人外周血细胞中低表达或不表达。磷酸化Shp2/β肌动蛋白比值分别为0.91±0.62、0.16±0.09和0.03±0.05(P均<0.01)。(2)下调Shp2蛋白表达后,白血病细胞凋亡率从4.89%上升到38.69%(P<0.01),而S期细胞从33.6%下降到10.8%(P<0.01)。(3)特异性抑制p210bcr/abl融合基因表达蛋白后,白血病细胞中磷酸化Shp2蛋白明显下降,同时出现明显细胞凋亡与生长抑制现象。结论(1)磷酸化Shp2蛋白在慢性粒细胞白血病细胞患者中呈过度表达状态,并且与白血病细胞恶性增殖与凋亡抵抗密切相关。(2)bcr/abl融合基因阳性患者的白血病细胞中Shp2的过度表达可能由p210bcr/abl蛋白激活引起。