儿童急性白血病淋巴细胞变化与化疗和感染相关性探讨

目的分析儿童急性白血病化疗后外周血中淋巴细胞的变化，探讨淋巴细胞值异常与患儿继发免疫紊乱，导致感染及重症感染发生之间的关系。方法急性淋巴细胞白血病(ALL)27例，急性髓性白血病(AML)9例，经化疗骨髓持续缓解(CCR)9—12个月和21—24个月，外周血白细胞≥4．0×10^9／L时，用流式细胞仪、单克隆抗体(美国BD公司)分别检测患儿外周血中CD3+、CD4+、CD8+、CD19+、CD16／56+细胞的百分数，进行统计分析。结果1．随着化疗次数的增加，机体的免疫活性细胞会受到不同程度损害，T细胞亚群的比例明显失调，CD4+细胞百分数下降(P<0．01)，CD8+细胞百分数上升(P<0．05)，CD4+／CD8+细胞比值严重倒置(P<0．01)，CD19+细胞百分数下降(P<0．05)，临床上常见白血病患儿易感染和多发严重感染亦与此有关。2．CD16／56+标记的自然杀伤细胞并不随化疗次数增加而有变化(P>0．05)，在白血病的治疗中有重要意义。3．AML外周血中CD3+、CD4+、CD8+、CD4+／CD8+、CD19+、CD16+／56+细胞百分数无改变(P>0．05)。结论ALL患儿免疫活性细胞随着化疗次数的增加受到明显影响，有必要尽早进行免疫干预治疗，以提高患儿机体的免疫功能，以增强抗感染能力，恢复机体的免疫监督能力。对CD19+细胞减少，在感染发生时，给与丙种球蛋白，可减轻感染程度。     

白细胞介素-8及其受体在小儿急性白血病骨髓单个核细胞中的表达和临床意义

目的：探讨白细胞介素8(IL8)及受体(IL8R)在小儿急性白血病骨髓单个核细胞中的表达和临床意义。方法：RTPCR法检测32例急性白血病骨髓单个核细胞IL8,IL8RmRNA表达。结果：急性髓系白血病(AML)组中有5例表达IL8(5/10),4例表达IL8R(4/10);急性淋巴细胞白血病(ALL)组中有13例表达IL8(13/22),9例表达IL8R(9/22)。IL8在急性髓系白血病组中的表达水平高于急性淋巴细胞白血病组,差异有显著性(P<0.05)。AML组中M4M5亚型中的表达水平高于M2M3,差异有显著性(P<0.05)。ALL组中B系列ALL表达水平高于TALL,差异有显著性(P<0.05)。化疗后患儿骨髓单个核细胞IL8,IL8R水平显著低于化疗前(P<0.05)。结论：小儿急性白血病有IL8,IL8R的表达,IL8尤其在AML组M4M5亚型及B系列ALL更明显,化疗后两者水平显著下降。     

急性白血病患儿CD4~+CD25~+调节性T细胞和NK细胞免疫作用探讨

目的观察外周血CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)及自然杀伤细胞(na-ture killer cell,NK)在白血病患儿及非白血病患儿的不同,了解白血病患儿的免疫状态,探讨CD4+CD25+Treg细胞及NK细胞在小儿急性白血病肿瘤免疫中的意义。方法以流式细胞术检测急性白血病初诊患儿及非白血病患儿各30例的外周血CD4+CD25+Treg细胞、NK细胞的数量及比例。结果外周血CD4+CD25+CD127-细胞占CD4+T细胞的比例白血病组为(11.45±1.41)%,显著高于对照组为(6.98±1.09)%(P<0.05)。而NK细胞数量白血病组为(5.13±2.97)%,显著低于对照组为(15.06±3.91)%(P<0.05)。结论 (1)急性白血病患儿外周血CD4+CD25+Treg细胞数量升高,NK细胞数量降低,表明急性白血病患儿NK细胞免疫功能处于抑制状态。CD4+CD25+Treg细胞可能在白血病的发生、发展中起一定作用。(2)通过检测CD4+CD25+CD127-T细胞可较好的反映CD4+CD25+Treg细胞的比例,简便可行、重复性好、检测结果准确、可靠。     

CTLA-4/CD28的表达与儿童急性淋巴细胞白血病临床预后的关系

目的探讨外周血T淋巴细胞表面CTLA-4/CD28的表达与儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)发病及治疗转归的相关性。方法采用流式细胞术(FCM)分别检测21例B细胞型ALL患儿初发且未治疗前、经VDLD方案治疗达到完全缓解并持续缓解予CAT巩固停药2~3周后外周血T淋巴细胞表面CTLA-4、CD28的表达。结果(1)治疗前:ALL患儿外周血CD4~+T、CD8~+T淋巴细胞CTLA-4表达显著高于正常水平(P<0.01),CD28表达显著低于正常水平(P<0.01);(2)治疗后:ALL患儿在达到完全缓解时外周血CD4~+T、CD8~+T淋巴细胞CTLA-4的表达显著低于治疗前(P<0.01),与正常对照组比较差异无显著性(P>0.05),CD28的表达显著高于治疗前(P<0.01),与正常对照组比较差异无显著性(P>0.05)。结论(1)T淋巴细胞不能被充分活化,对肿瘤的免疫监视与清除功能降低,可能是ALL的发病因素之一;(2)化疗过程中注重调节T淋巴细胞的免疫功能、刺激T淋巴细胞正常活化可能有助于提高ALL的治疗缓解率。     

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目的探讨呼吸道合胞病毒(RSV)支气管肺炎患儿外周血单个核细胞(PBMCS)高迁移率族蛋白B-1(HMGB1)mRNA表达,及血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平、T细胞亚群,并探讨HMGB1、TNF-α、T细胞亚群在RSV支气管肺炎免疫发病机制中的临床意义。方法对2007年9月至2009年3月于苏州大学附属儿童医院呼吸科住院治疗的52例RSV支气管肺炎患儿,其中25例为呼吸道合胞病毒(RSV)感染,27例为RSV和细菌混合感染。同时选择23例健康儿童作对照组,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法对其PBMCS HMGB1mRNA表达进行检测,并应用ELLSA法检测外周血浆TNF-α,流式细胞仪检测T细胞亚群。结果 (1)3组间PBMCS HMGB1mRNA的表达、血浆TNF-α水平差异有统计学意义(P<0.05),RSV感染组和混合感染组HMGB1的表达差异有统计学意义(P<0.05);(2)CD3+、CD3+CD8+、CD3-CD19+、CD19+CD23+、CD3-CD(16+56)+的百分比在3组间差异均有统计学意义(P<0.05);(3)CD3+、CD3+CD8+、CD3-CD(16+56)+亚群:RSV感染组和混合感染组之间差异无统计学意义(P>0.05),但较对照组有明显降低(P<0.05);(4)CD3-CD19+RSV感染组和混合感染组之间差异无统计学意义,但较对照组明显增高(P<0.05);(5)CD3+CD4+、CD4+CD25+在3组间差异无统计学意义(P>0.05);(6)混合感染组CD19+CD23+、CD4+CD25+较对照组明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HMGB1可能参与了RSV和细菌混合感染支气管肺炎的免疫发病过程,HMGB1与TNF-α作用机制可能不同。     

急性白血病患儿治疗期机体免疫功能变化

目的了解急性白血病 (AL)患儿不同病程时细胞和体液免疫的变化。方法采用流式细胞仪检测32例AL患儿及28例正常对照儿童外周血CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD3-/CD(16 +56) +、CD19+的含量 ,采用特定蛋白分析仪检测同期患儿IgA、IgG、IgM的含量。结果AL完全缓解患儿在治疗后6、12、18个月CD4 +、CD4+/CD8+、CD3-/CD(16 +56) +、CD19+细胞数明显低于正常对照组 (P均<0.01) ;CD8+明显高于正常对照组 ;同期血清IgG、IgA、IgM水平与正常对照组比较 ,差异均无显著性 (P均>0.05)。结论AL患儿治疗期存在着细胞免疫功能障碍 ,免疫功能检测可为免疫调节治疗提供客观依据。     

原发性肾病综合征患儿外周血CD4+CD25+调节性T细胞及CD19+CD23+细胞水平的变化及其意义

目的通过观察原发性肾病综合征(PNS)患儿外周血淋巴细胞亚群,尤其是CD4+CD25+调节性T细胞及CD19+CD23+细胞水平的变化,探讨其免疫发病机制。方法采用双标法用流式细胞仪检测25例初发PNS患儿(PNS组)外周血T淋巴细胞亚群(CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+CD25+)、B淋巴细胞亚群(CD3-CD19+、CD19+CD23+)及自然杀伤细胞(CD3-CD16+56+)水平,同时选取同期19例健康儿童作为健康对照组。数据采用SPSS 15.0软件进行统计学分析。结果 PNS组患儿外周血中CD3+、CD3+CD8+、CD4+CD25+、CD19+CD23+淋巴细胞均显著高于健康对照组(Pa<0.05),而自然杀伤细胞则较健康对照组显著降低(P<0.05);PNS组CD3+CD4+、CD4+/CD8+、CD3-CD19+淋巴细胞与健康对照组比较差异无统计学意义。结论体内淋巴细胞亚群的紊乱参与了PNS的发病过程,其中CD4+CD25+调节性T细胞及CD19+CD23+细胞的变化为PNS的免疫治疗目标提供了理论依据。     

nm-23H1基因在儿童白血病细胞表达的研究

目的探讨nm23H1基因在儿童急性白血病(AcuteLeakemia,AL)细胞中的表达及临床意义。方法采用半定量逆转录聚合酶链反应,RTPCR检测67例次AL儿童患者,ALL31例,AML14例,AL(CR)18例,复发4例及10例ITP患儿骨髓细胞nm23H1表达,将nm23H1/GAPDH≥0.5定为(+)。结果儿童ALL、AML中nm23H1基因表达显著高于正常对照组(P<0.001),AML中M4+M5组的nm23H1表达程度较M2+M3组高(P<0.05)。经化疗在CR后儿童AL患者表达显著低于初诊患儿,复发病人再度升高且阳性表达程度高的易复发。nm23H1基因表达程度与外周血白细胞计数及乳酸脱氢酶值呈正相关(r=0.472P<0.01;r=0.403P<0.05)。CD7+患者nm23H1表达高CD7患者(P<0.05)而与HLADR,CD34阳性或阴性表达无显著性。结论nm23H1可能在儿童AL中发挥一定作用,尤其在粒单或单核细胞性白血病中更具重要作用,还与儿童AL的病情活动有关,与白血病细胞处的分化阶段无明显关系。nm23H1基因的表达是儿童AL重要的预后因素。     

儿童急性白血病化疗合并真菌感染探讨

目的探讨儿童急性白血病化疗合并真菌感染的因素及其感染病原学特点。方法白血病并发真菌感染按EORTC诊断标准。分析真菌感染率、感染部位、感染相关危险因素、病原菌特点。结果共17例白血病患儿21次并发真菌感染,急性淋巴细胞性白血病(ALL)13例,急性非淋巴细胞性白血病(AML)4例;合并真菌感染率为27.6%。感染部位主要位于上呼吸道(61.9%)。病原菌培养均示浅表真菌,如白色念珠菌、酵母样菌。化疗阶段是白血病患儿合并真菌感染的重要因素(P<0.05),免疫功能和中性粒细胞绝对值在临床上亦是主要的影响因素。结论白血病患儿合并真菌感染与疾病本身、机体免疫功能低下、中性粒细胞绝对值和化疗阶段相关。因此,免疫支持、早期诊断、及时治疗颇为重要。     

儿童急性淋巴细胞白血病化疗后T淋巴细胞重建的研究

目的观察急性淋巴细胞白血病儿童在化疗结束后T淋巴细胞亚群的变化,了解T淋巴细胞重建过程。方法采用流式细胞仪分析76名ALL治疗后停药不同阶段的儿童外周血T淋巴细胞亚群。结果CD3+HLA-DR+细胞、CD4+CD45RO-CD45RA-细胞百分率在停药后0~12月组高于对照组(P<0·05),CD3+CD4-CD8+、CD8+CD28-细胞百分率在停药后0~12月、12~24月24~48月组均高于对照组,CD3+CD8-CD4+、CD4+CD45RO-CD45RA+细胞的百分率、CD4/CD8值、CD45RA/CD45RO值在停药各个阶段与对照组相比明显降低(P<0·05)。结论化疗结束后,活化的T细胞可能在停药早期免疫系统的监视作用中起积极的作用,患儿的T淋巴细胞恢复需要较长的时间。CD4+CD45RO-CD45RA+、CD3+CD4+CD8-淋巴细胞的恢复最慢。     

826例0岁至学龄前健康儿童外周血淋巴细胞亚群分布的调查分析

目的 调查分析0岁至学龄前健康儿童外周血淋巴细胞亚群的分布。方法 826例0岁至学龄前汉族儿童分为新生儿组、婴儿组、幼儿组、学龄前组,使用流式细胞术检测各组外周血淋巴细胞亚群。结果 CD3⁺细胞、CD3⁺CD4⁺细胞、CD3^-CD19⁺细胞和CD4⁺/CD8⁺在0岁至学龄前儿童不同性别之间的差异具有统计学意义（P < 0.05）,CD3^-CD19⁺细胞以女童较低,其他3个指标以女童较高;CD3⁺、CD3⁺CD4⁺及CD4⁺/CD8⁺均以新生儿组最高,其中CD3⁺CD4⁺及CD4⁺/CD8⁺含量随年龄增长逐渐降低,至学龄前最低（P < 0.05）;CD3^-CD19⁺和CD3^-CD16⁺CD56⁺细胞含量以新生儿组最低,随年龄增长而增高,CD3^-CD16⁺CD56⁺细胞以学龄前组最高,而CD3^-CD19⁺细胞含量在幼儿期达峰值后降低（P < 0.05）;CD3⁺CD8⁺细胞含量以学龄前组最高（P < 0.05）。不同年龄组男童的淋巴细胞亚群分布的变化趋势与不同年龄组儿童的规律一致;在女童中,CD3⁺CD4⁺及CD4⁺/CD8⁺含量也是以新生儿组最高（P < 0.05）。结论 淋巴细胞亚群在不同年龄、性别健康儿童之间的分布不同,建议按年龄、性别分别建立参考值。     

急性白血病细胞中CD19的表达及其意义

目的 观察CD19在儿童急性白血病(AL)中的表达与分布,为白血病的诊断、鉴别以及导向治疗提供依据。方法 采用27个荧光直标单克隆抗体(简称单抗)及CD45／SSC双参数设门多色流式细胞术对210例儿童AL细胞进行免疫诊断和分型,并对CD19在各种类型AL细胞中的表达情况进行分析。结果在93例急性淋巴细胞性白血病(ALL)病例中,CD19的阳性率(99％,92／93)明显高于B细胞系其他相关抗原的阳性率,如CD10(88％,82／93,P=0．003)、CD20)(25％,23／93,P=0．001)和CD22(60％,56／93,P=0．001);CD19在9例含B系成分的杂合型白血病(hybrid acuteleukemia,HAL)中全部表达,而在24例T细胞系ALL和5例T／My(髓)HAL上均无表达;在79例急性髓系白血病(AML)中,仅5例(6％)CD19阳性,明显低于它在B系ALL中的阳性率(99%,P=0．001)。结论 CD19对B系ALL细胞的特异性较好,敏感性高,在B细胞系各个分化阶段持续稳定表达,是诊断B系ALL较为可靠的表面标记,也可作为导向治疗B系ALL的理想靶点。     

Lineage Switch in MLL‐Rearranged Infant Leukemia Following CD19‐Directed Therapy

Rearrangements of the mixed lineage leukemia (MLL) gene occur frequently in infants with both acute lymphoblastic leukemia (ALL) and acute myeloid leukemia (AML). Conversions of leukemia cell lineage are rare, but occur most commonly in the setting of MLL‐rearrangement. Blinatumomab is a bidirectional antibody targeting CD19 with significant activity in relapsed B‐precursor ALL. We report an infant with ALL with t(4;11)(q21;q23) refractory to cytotoxic chemotherapy who was treated with blinatumomab. Following rapid initial clearance of peripheral lymphoblasts, bone marrow evaluation demonstrated a leukemic lineage switch to CD19‐negative monoblastic AML. Complete remission was achieved with myeloid‐directed chemotherapy.     

手足口病患儿淋巴细胞亚群和免疫球蛋白及补体C3、C4水平分析

目的 分析淋巴细胞亚群、免疫球蛋白及补体C3、C4在手足口病患儿免疫状态评估中的临床应用价值。方法 选取282例手足口病患儿为手足口病组,130例健康儿童为健康对照组;检测两组外周血CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺T淋巴细胞、CD19+B淋巴细胞、CD56+自然杀伤细胞比例,CD4⁺/CD8⁺、IgA、IgM、IgG和补体C3、C4水平。结果 多因素分析显示,手足口病组CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺T淋巴细胞比例及补体C3、C4水平低于健康对照组（P < 0.05）,CD56+自然杀伤细胞比例、IgG水平高于健康对照组（P < 0.05）。单独效应分析显示,0岁~手足口病组CD4⁺/CD8⁺高于健康对照组（P < 0.05）;0岁~及3岁~的男性手足口病组IgM水平高于健康对照组（P < 0.05）;3岁~男性及0岁~女性手足口病组IgA水平低于健康对照组（P < 0.05）。结论 手足口病患儿存在细胞免疫及体液免疫功能紊乱,监测淋巴细胞亚群、免疫球蛋白水平可以为手足口病患儿的免疫状态评估提供实验室依据。     

细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子P21WAF1、P27KIP1在急性白血病的表达及其意义

目的探讨细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子P21WAF1、P27KIP1在急性白血病的表达情况及其临床意义。方法采用免疫细胞化学S-P染色法测定32例白血病患儿骨髓单个核细胞P21WAF1、P27KIP1的表达情况,分别观察阳性率及表达强度。结果32例白血病骨髓涂片标本中P21WAF1或P27KIP1在ALL、AML及总标本中表达阳性率均低于对照组(P均<0.05)。阳性病例P21WAF1阳性细胞百分率在ALL与AML中无差异,但积分显示阳性程度AML弱于ALL;P27KIP1阳性细胞率及积分在ALL及AML中均无显著差异(P均>0.05)。随访观察部分病例,经诱导化疗达到完全缓解后随访,两种蛋白有阳转或表达增强现象。结论P21WAF1、P27KIP1低表达参与急性白血病的发生发展;随临床缓解,P21WAF1、P27KIP1表达增强,提示P21WAF1、P27KIP1可能作为化疗疗效的分子学指标。     

EFFECT OF SHORT-COURSE, HIGH-DOSE STEROID THERAPY IN A CHILD WITH MYELODYSPLASTIC SYNDROME

High-dose methylprednisolone (HDMP) has been shown to induce differentiation of myeloid leukemic cells with a remarkable antileukemic effect in children with various subtypes of acute myeloblastic leukemia (AML). Here the beneficial effect of short-course HDMP therapy in a child with myelodysplastic syndrome (MDS) is reported. Oral methylprednisolone sodium succinate (Prednol-L) was administered at a single daily dose of 30 mg/kg for 5 days to a 4-year-old girl with refractory anemia with excess of blasts and hypocellular bone marrow before the initiation of chemotherapy. In addition to dramatic clinical improvement, the patient's white blood cell count increased from 2.3 ×10 9 /L to 5.0 ×10 9 /L, and peripheral blood blast cells disappeared 4 days after HDMP treatment. Repeated bone marrow aspirate 1 week after the initiation of HDMP disclosed increased cellularity with no blasts. Furthermore, short-course HDMP treatment stimulated the increase in the number of peripheral blood lymphocytes and CD3 + , CD4 + , CD8 + , CD19 + , CD34 + , and NK cells. Results obtained with HDMP from the previous studies and the present case suggest that high-dose methylprednisoloneis a promising agent in the treatment of MDS and it is recommended as an initial treatment especially for MDS children with hypocellular bone marrow at presentation.     

EFFECT OF SHORT-COURSE,HIGH-DOSE STEROID THERAPY IN A CHILD WITH MYELODYSPLASTIC SYNDROME

High-dose methylprednisolone (HDMP) has been shown to induce differentiation of myeloid leukemic cells with a remarkable antileukemic effect in children with various subtypes of acute myeloblastic leukemia (AML). Here the beneficial effect of short-course HDMP therapy in a child with myelodysplastic syndrome (MDS) is reported. Oral methylprednisolone sodium succinate (Prednol-L) was administered at a single daily dose of 30 mg/kg for 5 days to a 4-year-old girl with refractory anemia with excess of blasts and hypocellular bone marrow before the initiation of chemotherapy. In addition to dramatic clinical improvement, the patient's white blood cell count increased from 2.3 &#50 10 9 /L to 5.0 &#50 10 9 /L, and peripheral blood blast cells disappeared 4 days after HDMP treatment. Repeated bone marrow aspirate 1 week after the initiation of HDMP disclosed increased cellularity with no blasts. Furthermore, short-course HDMP treatment stimulated the increase in the number of peripheral blood lymphocytes and CD3 + , CD4 + , CD8 + , CD19 + , CD34 + , and NK cells. Results obtained with HDMP from the previous studies and the present case suggest that high-dose methylprednisoloneis a promising agent in the treatment of MDS and it is recommended as an initial treatment especially for MDS children with hypocellular bone marrow at presentation.     

CD56阳性伴特异髓系抗原表达的白血病5例临床和预后分析

目的 CD56阳性并伴特异髓系抗原表达的白血病在儿童罕见,但有独特的临床特点及预后,有人认为可能来源于非成熟自然杀伤(NK)细胞,但备受争议,分析其临床过程有助于加深认识。方法白血病患儿有以下特征者纳入分析:骨髓幼稚细胞细胞化学染色过氧化酶阴性(MPO-)伴免疫表型CD56+CD3-CD7+CD34+和髓系抗原+,或细胞化学MPO+伴CD56+CD3-HLA-DR-和髓系抗原+。根据文献前者被认为可能是髓系/NK前体细胞急性白血病(MNKPL),后者可能是髓系/NK细胞急性白血病(MNKL)。治疗采用高危急性淋巴细胞白血病方案,含阿糖胞苷、米托蒽醌、依托泊苷、门冬酰胺酶和甲氨蝶呤等。结果 2005-2008年,5例1～8岁男性患儿具有上述特征,4例符合MNKPL,1例符合MNKL。符合MNKPL的4例并无成人患者常见的明显髓外浸润,但有骨髓活检的2例见明显骨髓纤维化。该4例对治疗反应极其缓慢,至今3例已持续缓解20～57个月,1例死于缓解期肺炎。结论有CD56+并伴特异髓系抗原表达的儿童白血病其临床特征可能异于成人患者,用含有用于髓系和淋系白血病化疗药物的治疗方案,可能有助于改善MNKPL的预后。