用PCR—SSCP分析检测睾丸女性化综合征患者雄激素受体基…

为进一步探讨睾丸女性化（Ｔｆｍ）综合征患者发病的分子机理，并主研究雄激素受体（ＡＲ）结构与功能关系提供资料，应用银染聚合酶链式反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分析方法对４例Ｔｆｍ患者的基因８个外显子中的７个（Ｂ－Ｈ）分别进行了研究。结果表明，所有患者ＡＲ基因的上述外显子经ＰＣＲ扩增后均出现与外显子相应长度一致的条带，表明没有明显的缺失或插入突变。２例患者外显子Ｇ片段在行ＳＳＣＰ分析时分别有     

2例睾丸女性化综合征患者雄激素受体基因中的突变

目的：研究２例完全型睾丸女性化综合征（ＴＦＭ）患者的外阴部皮肤成纤维细胞（ＧＳＦ）中的雄激素受体（ＡＲ）。结果：发现两患者ＡＲ的数量无明显改变，但一患者的ＡＲ亲和力明显降低。用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ（单链构象多态性）方法对两患者ＡＲ基因８个外显子中的７个（Ｂ－Ｈ）分别进行分析，发现两患者ＡＲ基因外显子Ｅ均存在着泳动变位，ＤＮＡ序列分析证实两患者外显子Ｅ各有一点突变，分别使得编码第７４３位和第７５２位的氨基酸发生了改变，后一突变还造成了一Ｓａｕ３ＡⅠ酶酶切位点的消失。结论：结合ＡＲ功能改变及临床表型可以认为，两患者的性分化发育异常是由于两位点的突变所致     

应用PCR—SSCP银染技术检测Wilson病基因第9,14外显子突变

为了研究中国人Ｗｉｌｓｏｎ病基因（ＡＴＰ７Ｂ基因）第９，１４外显子突变特性，方法：应用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染技术初步研究了１４１例Ｗｉｌｓｏｎ病患者ＡＴＰ７Ｂ基因第９及１４外显子分子结构改变，结果：通过用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ对患者和正常人的ＤＮＡ的电泳带迁移作对比分析，发现在患者中第９和１４外显子ＰＣＲ扩增产物迁移异常者分别为６例（２．１％，６／２８２）和４２例（１４．９     

DNA测序产的Wilson‘s病ATP7B基因第14外显子一种新型移码突变

目的：了解中国人肝豆状核变性患者基因（ＡＴＰ７Ｂ基因）第１４外显子（ｅｘｏｎ１４）的突变情况,为该病的基因诊断和治疗提供依据。方法：用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增ＡＴＰ７Ｂ基因的第１４外显子片段,通过ＤＮＡ单链构象多态（ＳＳＣＰ）筛选,以ＰＣＲ产物（ＰＣＲ－ＤＮＡ）循环测序双鉴定。结果;在８５例肝豆状核变性患者和３９例正常人的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ均呈现两种泳动常型（Ⅰ,Ⅱ型）,我们分别对两组中各种带型的     

45例人前列腺癌雄激素受体基因B~H外显子的突变研究

目的和方法：为探讨雄激素受体（ＡＲ）与前列腺癌（ＰＣ）发生发展及内分泌治疗不敏感的关系，我们首先建立了用ＰＣ的穿刺和石蜡切片组织检测ＡＲ基因突变的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ（双链构象多态性）－双链ＤＮＡ循环测序法。并用上述方法检测了４５例国人前列腺癌组织ＡＲ基因Ｂ￣Ｈ我显子的突变。结果：在６例２的癌组织中证实有７个ＳＳＣ溘 变位片段（其中一患者有两个外显子异常）。这６例 ４例为低分化腺癌，其中２例已有远处转     

软骨发育不全FGFR3基因突变的研究

目的了解中国人软骨发育不全患者成纤维细胞生长因子受体３（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒ３，ＦＧＦＲ３）基因变异情况。方法应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ和限制性内切酶酶切方法，分析辽宁地区７例软骨发育不全（ａｃｈｏｎｄｒｏｐｌａｓｉａ，ＡＣＨ）患者外周血ＤＮＡ标本中ＦＧＦＲ３基因第１０外显子区域。结果７例患者均检测到相同的Ｇ３８０Ｒ点突变。结论表明Ｇ３８０Ｒ为中国人ＡＣＨ患者常见突变。应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ和限制性内切酶酶切的方法检测ＦＧＦＲ３基因突变是产前诊断和早期诊断ＡＣＨ患者的简便、快速、可靠的手段     

胃腺癌p53基因第5,7外显子突变的研究

采用聚合酶链式反应－单链构型多态（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）技术结合ＰＣＲ产物直接方法初步分析了２３例原发性胃癌ｐ５３基因第５、７外显子的突变，经ＳＳＣＰ检测发现第５外显子无一例异常泳动变位，而第７外显子发现２例阳性结果，经测序证实一例发生了剪切位点突变，另一例突变为静息突变。     

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为了研究中国人Ｗｉｌｓｏｎ病基因（ＡＴＰ７Ｂ基因）第９、１４外显子突变特征。方法：应用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染技术初步研究了１４１便Ｗｉｌｓｏｎ病患者ＡＴＰ７Ｂ基因第９及１４外显子的分子结构改变。结果：通过用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ对患者和正常人的ＤＮＡ的电泳带迁移作对比分析，发现在患者中第９和１４外显子ＰＣＲ扩增产物迁移异常者分别为６例（２．１％，６／２８２）和４２例（１４．９％，４２／２８２）。结论：依据ＤＮＡ单链构象与分子电泳迁移的关系，这一初步结果提示该组病人中ＡＴＰ７日基因的第１４外显子可能存在着较高的突变率。     

p16基因突变及蛋白表达异常与人胰腺癌关系的研究

目的：研究ｐ１６基因的突变及蛋白表达异常在人胰腺癌发生及侵润转移中的作用。方法：应用ＰＣＲ、ＰＣＲ－ＳＳＣＰ、ＤＮＡ测序及免疫组织化学技术,对３５例人胰腺癌的ｐ１６基因第２外显子进行了检测,研究ｐ１６基因的突变及蛋白表达情况。结果：１２例在ｐ１６基因第２外显子部分存在至少５２２ｂｐ的纯合缺失。７例存在２个点突变（突变位点均相同）：其一为第１２６密码子碱基ＧＴＣ→ＡＡＴ的错义突变,氨基酸由缬氨酸（Ｖａｌ）变成了天冬酰胺（Ａｓｎ）;另一为第１２７密码子ＧＣＡ→ＧＣＧ的同义突变。缺失及突变共占５４．３％（１９／３５）。Ｐ１６蛋白三维结构模拟提示,Ｖａｌ１２６Ａｓｎ对蛋白空间结构有一定影响,从而影响Ｐ１６蛋白的功能。１２例缺失标本呈现Ｐ１６蛋白表达阴性,９例标本（其中７例点突变）出现Ｐ１６蛋白表达下降,共占６０％（２１     

乳腺癌p16基因的纯合缺失、高甲基化、突变及其表达

目的 研究ｐ１６基因在乳腺癌中的纯合缺失,高甲基化和突变等结构变化及其与表达之间的关系,方法 应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和ＰＣＲ甲基化银染分析技术（ＰＣＲ－ＭＡＳＳ）对６０例乳腺癌和２４例癌旁组织进行了ｐ１６基因纯合缺失和ｐ１６基在第１外显子的甲基化检测,用ＰＣＲ－单链构象多态性（ＳＳＣＰ）和ＤＮＡ测序技术进行了ｐ１６基因突变分析,检测了ｐ１６蛋白和ｍＲＮＡ的表达。结果 ６０例乳腺癌中,检出７例（