血小板增强骨髓间充质干细胞促肿瘤转移作用

目的观察血小板作用于人骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)后对肿瘤细胞转移的作用。方法体外分离培养人骨髓MSCs及健康人外周血中的血小板;实验分为MSCs组、血小板+MSCs组及肿瘤细胞上清处理血小板+MSCs组(T-血小板+MSCs),分别收集3组培养24 h后的MSCs及培养上清(SGC-7901-CM及MSCs-CM);western blot检测其肿瘤相关成纤维母细胞(CAF)标志蛋白α-SMA及Vimentin的表达;Transwell实验检测骨髓MSCs的迁移能力;流式细胞术检测SGC-7901-CM及MSCs-CM共培养后血小板P选择素的表达水平;建立BALB/c裸鼠尾静脉注射SGC-7901胃癌细胞系转移模型,观察体内肿瘤转移情况。结果 SGC-7901-CM及MSCs-CM处理的血小板P选择素的表达水平[分别为(31.4±1.71)%、(21.37±1.00)%]明显高于对照组[(3.17±0.40)%],差异有统计学意义(t分别为27.85和29.18,P均0.01);血小板+MSCs组及T-血小板+MSCs组α-SMA蛋白[分别为(0.79±0.08)、(0.90±0.06)]及Vimentin蛋白[分别为(0.88±0.01)、(0.96±0.04)]的表达水平均明显高于MSCs组[分别为(0.64±0.02)、(0.75±0.05)],差异有统计学意义(t分别为2.96和6.45,4.73和5.73,P均0.01);血小板+MSCs组及T-血小板+MSCs组迁移细胞数[分别为(340.3±27.7)个、(424.3±17.6)个]明显高于MSCs组[(220.7±19.4)个],差异有统计学意义(t分别为6.14和13.48,P均0.01);体内实验结果表明,血小板+MSCs组转移灶及T-血小板+MSCs组转移灶[分别为(4±2)个、(21±4)个]明显高于MSCs组[(0.33±0.06)个],差异有统计学意义(t分别为3.051和8.857,P均0.01)。结论血小板能促进骨髓MSCs迁移,并能增强骨髓MSCs体内促进肿瘤细胞转移能力。     

肿瘤微环境下HMSC分化为肿瘤相关成纤维细胞及其对肿瘤生长作用的观察

摘要：目的：鉴定人骨髓间充质干细胞（human bone marrow-derived mesenchymal stem cell,HMSC）在肿瘤微环境下分化为肿瘤相关成纤维细胞（tumor associated fibroblast,TAF）及对肿瘤生长作用的观察。 方法：用Transwell实验鉴定HMSC向人胃腺癌细胞株（SGC-7901）迁移的能力。对与人胃癌组织或SGC-7901培养上清液（TCM）长期共培养后的HMSC细胞,用免疫荧光染色检测肌动蛋白微丝(F-actin)的表达、免疫细胞化学染色检测α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）及波形蛋白（vimentin）的表达。用实时定量PCR法检测与胃癌组织及TCM共培养后的HMSC细胞中α-SMA表达水平。分别以SGC-7901细胞、SGC-7901细胞＋HMSC细胞、胃癌组织与HMSC共培养细胞＋SGC-7901细胞、TCM与HMSC共培养细胞＋SGC-7901细胞接种裸鼠,构建裸鼠致瘤模型,测定4组模型致瘤时间及瘤体大小。 结果：Transwell实验结果表明HMSC在肿瘤微环境诱导下具有向肿瘤迁移的能力,诱导后的HMSC细胞高表达TAF细胞表面特征蛋白F-actin、α-SMA及vimentin,实时定量PCR结果表明与胃癌组织及TCM共培养后的HMSC细胞α-SMA mRNA表达水平分别为(0.58±0.05)和(0.52±0.06),与对照组(0.35±0.04)相比明显增高（F=4.72,F=5.31,P均<0.05）。 裸鼠致瘤模型显示经肿瘤微环境诱导后的TAF可促进体内肿瘤生长。 结论：肿瘤微环境诱导下HMSC活化并可分化为TAF,并对肿瘤生长起到促进作用。     

人胃癌微环境来源间充质干细胞促进胃癌细胞BGC-823的体外增殖、迁移和促血管生成能力

目的探讨人胃癌微环境来源间充质干细胞(GC-MSCs)能否促进胃癌细胞增殖、迁移及其体外促血管生成能力。方法采用MTT增殖试验和细胞克隆形成试验观察GC-MSCs细胞对胃癌细胞系BGC-823生长的影响;Transwell迁移试验检测GC-MSCs细胞对BGC-823细胞迁移能力的影响;利用管形成试验观察并分析GC-MSCs细胞对BGC-823细胞促血管生成能力的影响;RT-PCR检测GC-MSCs细胞作用BGC-823细胞后其促血管生成相关基因(VEGF、MIP-2和TGF-β1基因)的表达情况。结果 MTT增殖试验和克隆形成试验结果表明,GC-MSCs来源的细胞培养上清可以明显促进胃癌细胞BGC-823的体外生长(P0.05);Transwell迁移试验结果表明,GC-MSCs来源细胞培养上清对BGC-823的迁移能力具有显著促进作用(P0.01);RT-PCR检测结果显示,GC-MSCs来源的细胞培养上清可明显上调促血管生成相关因子(VEGF、MIP-2和TGF-β1基因)在BGC-823细胞中的表达水平;管形成试验结果显示,BGC-823和GC-MSCs细胞共培养上清与BGC-823、GC-MSCs单独培养组相比具有更强的促血管生成能力。结论 GC-MSCs可通过旁分泌的方式促进胃癌细胞增殖、迁移及其促血管生成能力,进而诱导胃癌的恶性转化。     

胃癌间质干细胞活化Wnt/β-catenin信号通路促进胃癌细胞增殖及迁移作用的探讨

目的探讨胃癌间质干细胞(gastric-cancer-derived mesenchymal stem cells,GC-MSCs)活化Wnt/β-catenin信号通路促进胃癌细胞增殖、迁移的作用。方法采用贴壁培养法从胃癌组织中分离GC-MSCs,成骨、成脂培养基诱导GC-MSCs分化。收集GC-MSC上清,胃癌细胞系HGC-27分别经L-DMEM培养液(Control组)、GC-MSC上清(GC-MSC组)、GC-MSC上清及20μmol/L ICG001(GC-MSC+ICG001组)处理24 h,克隆形成试验和Transwell迁移试验分别检测细胞增殖、迁移能力,免疫荧光染色或western blot检测Wnt/β-catenin信号相关蛋白(β-catenin、CD44、CyclinD3)的表达水平。结果 GC-MSC上清处理组HGC-27细胞增殖形成的克隆数[(203.700±8.762)个]显著高于Control组[(33.670±1.856)个](t=18.98,P0.01),且其迁移细胞数[(349.700±7.881)个]较Control组[(145.000±3.712)个]亦显著增多(t=23.46,P0.01)。GC-MSC上清可促进HGC-27细胞β-catenin入核,诱导Wnt/β-catenin信号下游蛋白CD44、CyclinD3的表达。Wnt/β-catenin信号抑制剂ICG001可下调上述分子的表达,逆转GC-MSC上清对HGC-27细胞的促增殖、促迁移作用。与GC-MSC组[(203.000±3.606)个]相比,GC-MSC+ICG001组的克隆细胞数[(70.667±2.603)个]显著减少(q=39.24,P0.01),且迁移细胞数[(166.000±3.215)个]较GC-MSC组[(352.700±4.096)个]显著降低(q=47.73,P0.01)。结论 GC-MSCs活化Wnt/β-catenin信号并促进胃癌细胞增殖及迁移。     

miR-1288调控骨髓间质干细胞促进胃癌细胞迁移

目的探讨miR-1288在胃癌细胞培养上清诱导后骨髓间质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cell,BMMSC)中的表达情况及其调控BMMSC对胃癌细胞迁移能力的影响。方法采用SGC-7901、MGC-803和HGC-27 3种胃癌细胞培养上清分别处理BMMSC,实时荧光定量PCR检测处理前后BMMSC中miR-1288的表达水平。采用寡核苷酸片段NC-mimics和miR-1288-mimics转染BMMSC,Transwell试验检测转染后BMMSC对HGC-27细胞迁移能力的影响。收集胃炎和胃癌组织标本,实时荧光定量PCR检测组织中miR-1288的表达水平。结果经SGC-7901、MGC-803和HGC-27胃癌细胞上清处理后BMMSC中miR-1288的表达水平分别是对照组的(5.91±0.25)倍(t=15.55,P0.01)、(9.69±0.62)倍(t=13.34,P0.01)和(24.29±2.69)倍(t=8.631,P0.01)。miR-1288-mimics转染组迁移细胞数量为(623.3±26.03)个,明显高于NCmimics对照组[(326±32.08)个],差异有统计学意义(t=7.197,P0.01)。胃癌组织中miR-1288的表达水平显著高于胃炎组织(P0.05)。结论胃癌上清诱导后BMMSC和胃癌组织中异常高表达miR-1288,其可参与调控胃癌细胞的迁移。     

DiO标记对人骨髓间充质干细胞生物学功能的影响

目的用细胞膜绿色荧光探针Di O标记人骨髓间充质干细胞(h BMMSCs),探讨其对h BMMSCs生物学功能的影响。方法采用Ficoll密度梯度离心法分离、培养h BMMSCs;流式细胞术检测Di O对h BMMSCs的标记效率;通过Transwell迁移实验、平板克隆实验、生长曲线分析、成脂及成骨诱导实验分别检测Di O对h BMMSCs迁移、增殖和多向分化能力的影响。结果Di O对h BMMSC的标记效率可达(99.5±0.4)%;Transwell迁移实验、平板克隆实验、生长曲线分析、成脂及成骨诱导实验结果表明,与未标记h BMMSCs相比,标记后的h BMMSCs迁移、增殖及成脂、成骨分化能力未见明显改变,差异均无统计学意义(P均0.05)。结论经Di O处理未见明显影响h BMMSCs的生物学功能,可做为安全、有效的h BMMSCs体外标记绿色荧光染料。     

miR-1调控胃癌细胞SGC-7901迁移能力的实验研究

目的探讨微小RNA-1(miR-1)对胃癌细胞系SGC-7901迁移能力的调控作用。方法脂质体转染寡核苷酸片段NCmimics及miR-1-mimics、NC-inhibitor及miR-1-inhibitor至SGC-7901细胞,定量RT-PCR检测转染后SGC-7901细胞中miR-1的表达水平,Transwell实验观察转染后细胞迁移能力,western blot检测转染后细胞上皮间质转化(EMT)指标。结果miR-1-mimics转染组miR-1的表达水平(900.10±240.40)明显高于NC-mimics转染组(1.01±0.18),差异有统计学意义(t=6.48,P0.01)。miR-1-inhibitor转染组miR-1的表达水平(0.65±0.04)明显低于NC-inhibitor转染组(1.01±0.14),差异具有统计学意义(t=4.19,P0.05)。miR-1-mimics转染组迁移细胞数量[(362±10)个]明显高于NC-mimics转染组[(112±10)个],差异有统计学意义(t=21.65,P0.01)。miR-1-inhibitor转染组迁移细胞数量[(64±8)个]明显低于NC-inhibitor转染组[(133±14)个],差异有统计学意义(t=17.07,P0.01)。与NC-mimics转染组比较,miR-1-mimics转染组上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)表达减弱(t=19.28,P0.01),神经钙粘蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达增强(t=5.43,P0.01;t=23.14,P0.01);与NC-inhibitor转染组比较,miR-1-inhibitor转染组E-cadherin表达增强(t=6.14,P0.01),N-cadherin和Vimentin表达减弱(t=6.78,P0.01;t=7.94,P0.01)。结论 miR-1过表达可促进胃癌细胞的迁移;miR-1低表达能可抑制胃癌细胞的迁移;miR-1可能通过EMT转化增强胃癌细胞的迁移能力。     

长链非编码RNA LINC00473对人胃癌细胞增殖和迁移能力的影响

目的探讨LINC00473在人胃癌细胞系中的表达水平及其对胃癌细胞生物学行为的影响。方法采用实时荧光定量PCR检测胃癌细胞中LINC00473的表达水平;转染靶向LINC00473的siRNA片段或LINC00473过表达载体以构建敲减或过表达的胃癌细胞系;通过CCK-8细胞增殖实验、平板克隆形成实验、Transwell迁移实验、western blot实验检测细胞的增殖和迁移能力以及EMT相关蛋白标志物表达水平的变化。结果与GES-1细胞相比,LINC00473在胃癌细胞中的表达水平明显降低(P0.05)。与siNC转染对照组相比,敲减LINC00473表达后,靶细胞的增殖能力(F=163.10,P0.01)、克隆形成(t=3.29,P0.05)和迁移能力(t=4.68,P0.05)明显增加;E-cadherin表达减弱(t=4.08,P0.05),N-cadherin(t=5.06,P0.01)、Snail(t=7.69,P0.01)和Vimentin(t=3.82,P0.05)蛋白的表达水平升高。与Vector转染对照组相比,上调LINC00473表达后靶细胞的增殖能力(F=186.00,P0.01)、克隆形成(t=3.22,P0.05)和迁移能力(t=5.52,P0.01)明显下降;E-cadherin表达升高(t=2.90,P0.05),N-cadherin(t=7.44,P0.01)、Snail(t=2.78,P0.05)和Vimentin(t=4.64,P0.01)蛋白的表达水平降低。结论敲减LINC00473的表达可促进胃癌细胞的增殖、迁移的能力,可能通过调控EMT参与胃癌细胞的迁移。     

槲皮素对胃癌细胞SGC-7901上皮间质转化的抑制作用

目的探讨槲皮素对人胃癌细胞SGC-7901上皮间质转化的影响及机制。方法胃癌细胞SGC-7901分为对照组(普通培养液)、LY294002组(培养液+LY294002)、槲皮素组(培养液+槲皮素);采用MTT法检测槲皮素对胃癌细胞SGC-7901增殖的影响,依据细胞生长抑制率计算槲皮素对胃癌细胞SGC-7901的半数抑制浓度(median inhibitory concentration,IC_(50))值,参照IC_(50)值进行后续实验;采用划痕试验检测3组胃癌细胞SGC-7901增殖、迁移能力;采用Western blot法检测胃癌细胞AKT、p-AKT、Snail、Vimentin及E-钙黏附素(E-cadherin)蛋白表达情况;采用荧光定量PCR法检测3组胃癌细胞上皮间质转化相关因子Snail、Vimentin及E-cadherinmRNA的表达情况。结果槲皮素对胃癌细胞SGC-7901有明显的增殖抑制作用,其IC_(50)为(112.9±2.05)μmol/L;LY294002组胃癌细胞迁移距离[(0.16±0.03)mm]、槲皮素组胃癌细胞迁移距离[(0.15±0.02)mm]均低于对照组[(0.44±0.04)mm](P0.05),LY294002组与槲皮素组比较差异无统计学意义(P0.05);Snail、Vimentin、p-AKT蛋白表达水平在LY294002组(0.760±0.003,0.750±0.006,0.71±0.03)、槲皮素组(0.750±0.006,0.690±0.004,0.68±0.02)均明显低于对照组(1,1,1),E-cadherin表达在LY294002组(2.89±0.19)与槲皮素组(3.66±0.18)均高于对照组(1)(P0.05);LY294002组、槲皮素组、对照组AKT蛋白表达水平(1.03±0.02,1.02±0.01,1)比较差异无统计学意义(P0.05);Snail、Vimentin mRNA表达水平在LY294002组(0.72±0.02,0.78±0.03)、槲皮素组(0.71±0.01,0.79±0.03)均明显低于对照组(1,1),E-cadherin mRNA表达水平在LY294002组(2.51±0.08)、槲皮素组(2.77±0.16)均高于对照组(1)(P0.05);LY294002组Snail、Vimentin、E-cadherin mRNA及Snail、Vimentin、E-cadherin、p-AKT蛋白表达水平与槲皮素组比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论槲皮素对人胃癌细胞SGC-7901上皮间质转化有抑制作用,其作用机制可能是抑制AKT信号通路。     

紫杉醇联合miR-200a对胃腺癌SGC-7901细胞增殖侵袭能力的影响

目的观察紫杉醇联合应用 miR-200 a 对胃癌 SGC-7901细胞增殖侵袭能力的影响。方法体外应用50 nmol/L紫杉醇单独处理胃癌SGC-7901细胞或联合应用脂质体转染miR-200 a模拟物（miR-200a mimics）,通过流式细胞仪检测细胞凋亡水平和周期分布,克隆形成试验观察细胞的增殖能力,Tr-answell实验和细胞划痕试验观察细胞的侵袭迁移能力。通过以上实验比较单独应用紫杉醇与联合应用miR-200 a对胃癌细胞增值侵袭能力影响的差异,并探讨可能的作用机制。结果流式细胞凋亡检测表明50 nmol/L紫杉醇联合应用 miR-200a 细胞早期凋亡率高于单独用药组[（22.79±0.43）％ vs．（11.76±0.64）％,P＜0.05],联合组阻滞于G2/M期细胞比例（63.74±1.76）％高于单独应用紫杉醇组的（51.75±2.01）％,结果具有统计学差异（ P＜0.01）;细胞克隆形成实验显示联合用药组克隆形成率与紫杉醇组相比[（4.03±0.25）％vs．（7.80±0.30）％]显著降低（P＜0.01）;Transwell侵袭实验表明联合用药组穿过小室的细胞数目少于紫杉醇组（22.00±2.00 vs．56.33±5.13,P＜0.01）;细胞划痕试验表明在划痕后48 h,联合组细胞迁移水平与单独用药组迁移率已有显著降低[21.43±2.34）％ vs．（54.26±2.49）％, P ＜0.01]。结论紫杉醇联合应用miR-200 a能增加紫杉醇对胃癌SGC-7901细胞增殖侵袭能力的抑制作用,为今后胃癌的化疗及基因靶向治疗提供新的思路。     

造血干细胞研究发展历史引发的思考

本文简要地回顾了世界干细胞研究数十年的历史经过.它的原始研究是为了解决二次大战末在日本两次核爆炸中所见的致死性造血损伤,这也说明世界干细胞研究为什么从造血干细胞开始,而且人们长期不关心非造血干细胞在体内是否存在.20世纪50-60年代一些聪明设计的动物实验有力地暗示造血干细胞在体内的存在,动物研究又证实正常骨髓可以修复已严重破坏的骨髓,于是人们开始相信骨髓移植就是造血干细胞移植.培养造血祖细胞集落的陆续发现证明造血祖细胞的存在.直至上世纪90年代,有了NOD-SCID或羊胎等体内检测造血干细胞的可靠方法之后,才划清了造血干细胞和祖细胞的界限.本文列举了许多实例,说明实验血液学和临床血液学发展的互动性,以及其它生物学和技术的进步,尤其是免疫学和分子生物学的进步,极大地推动了干细胞基础研究和临床干细胞移植的发展.比如HLA、单克隆抗体、DNA分子克隆、基因重组工程技术以及近年发展的生物信息学、基因组学、蛋白质组学、干涉RNA、干细胞工程技术等,使干细胞基础和临床研究进入了21世纪的新时代.免疫治疗、间充质干细胞和干细胞工程的发展,结合用于造血干细胞移植,使细胞治疗多元化成为本世纪发展的新动向.本文着重地介绍了干细胞研究的每一步发展都同时出现认识上的误区,以及给干细胞研究带来了挫折.一个误区的澄清常常历时20甚至40多年之久.例如造血干细胞与祖细胞的区分;造血干细胞体外扩增研究在世界各国注定的失败;移植脐血缺乏的是造血干细胞,还是祖细胞;多数白血病是否起病于造血干细胞;以造血干细胞是否是基因治疗中最佳的外源基因载体;又如干细胞工程能否克隆实质脏器等等.在成体组织内存在成体干细胞是21世纪划时代的伟大发现,却也带来了误区和风波.本文重点分析了在成体干细胞发现的同时为什么会出现横向分化、去分化等缺乏科学根据的假说,以及部分同行视线混乱的根源与教训.文章指出误区的发生是由于缺乏实践和认识的片面性造成的,科学实践是检验和纠正认识片面性的唯一途径.整个干细胞研究的发展历史正是一个不断纠正认识误区的过程,也是必由之路.     

维甲酸诱导HL—60细胞分化与细胞周期的关系

研究全反式维甲酸（RA）在体外诱导人髓系白血病细胞系（HL-60）分化过程中细胞周期的改变。利用流式细胞术动态测定RA在体外诱导HL-60细胞分化过程中细胞周期的改变。结果发现：（1）在RA与IL-60细胞共培养48小时内，S G2/M期比例无明显变化，但S期细胞的比例改变与RA的浓度有关，在10^-6 mol/L RA浓度S期细胞比例先出现一过性升高，继而持续下降，在10^-5 mol/L浓度S期细胞比例表现为持续性下降；（2）重培养试验证明：S G2/M和S期细胞比例的下降与成熟分化细胞的增加相一致；（3）RA诱导HL-60细胞成熟分化并不是在一个时间点上同时进入分化状态，而一量细胞开始进入成熟分化，即使在无RA存在的情况下，细胞仍能分化至成熟。结论提示：RA与HL-60细胞必须相互作用一定时间后才能触发细胞成熟分化，S期细胞的比例改变与RA药浓度有关，一量细胞开妈进入成熟分化，即使在无RA存在的情况下，细胞仍能分化至成熟。     

A novel filtration system for point of care washing of cellular therapy products

The cell therapy industry would greatly benefit from a simple point of care solution to remove dimethylsulphoxide (DMSO) from small‐volume thawed cell suspensions before injection. A novel dead‐end filtration device has been designed and validated, which takes advantage of the higher density of thawed cell suspensions to remove the DMSO and protein impurities from the cell suspension without fouling the filter membrane. The filter was designed to avoid fluid circuits and minimize the surface area that is contacted by the cell suspension, thus reducing cell losses by design. The filtration process was established through optimization of the fluid flow configuration, backflush cycles and filter geometry. Overall, this novel filtration device allows for a 1 ml of thawed cryopreserved cell suspensions, containing 10⁷ cells of a fetal lung fibroblast cell line (MRC‐5), to be washed in less than 30 min. More than 95% of the DMSO and up to 94% of the albumin–fluorescein–isothiocyanate content can be removed while the viable cell recovery is higher than 80%. It is also demonstrated that this system can be used for bone marrow‐derived human mesenchymal stem cells with more than 73% cell recovery and 85% DMSO reduction. This is the first time that a dead end (normal) filtration process has been used to successfully wash high‐density human cell suspensions. In practice, this novel solid–liquid separation technology fills the need for small‐volume washing in closed processing systems for cellular therapies. Copyright © 2016 John Wiley & Sons, Ltd.     

丙戊酸钠抑制HL-60细胞增殖并诱导其凋亡与分化

为进一步研究丙戊酸钠(sodium valproate;VPA)对白血病细胞HL-60的增殖、凋亡和分化的影响,采用MTT法检测不同浓度的VPA对HL-60细胞增殖的作用;细胞化学染色法观察药物作用后细胞形态的变化;NBT还原实验结合形态学作为观测细胞分化指标;应用流式细胞术检测不同浓度药物作用后细胞周期的变化及凋亡细胞的比例。结果显示:VPA能明显抑制HL-60的增殖;经2mmol/L VPA处理24-48小时后,HL-60出现胞浆空泡、核固缩、核碎裂及凋亡小体;Annexin V阳性的早期凋亡细胞比例由2.9%升高到17.1%;流式细胞术检测出明显的亚二倍体峰;G1期细胞由51.1%增加至84.6%,S期细胞由37.9%减低至14.4%。0.25mmol/L VPA作用1周后,促进HL-60细胞向中幼粒、晚幼粒阶段分化,NBT阳性细胞百分率为(47±2)%。结论:VPA能明显抑制白血病细胞HL-60的增殖,并诱导其分化及凋亡。     

低氧对间充质干细胞的影响

氧对于几乎所有的生命都是必需的,它维持能量代谢及细胞的功能,但机体多种细胞是处于生理或病理性低氧状态中,而体外细胞实验一般是在20%氧浓度下进行,并不符合生理状态。直到最近,关于低氧对于间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSC）的影响有了一系列的研究。体外实验表明,适度低氧下MSC的生长和存活能力更好,氧浓度可以影响MSC向成骨、成软骨、成脂的分化倾向,低氧能提高特异性受体和配体相结合所介导的迁移。低氧可影响胚胎干细胞、造血干细胞、神经干细胞的生理学特性也是一证据。干细胞对缺氧反应的分子机制主要涉及低氧诱导因子-1（hypoxic inducible factor-1,HIF-1）信号通路。本文综述了低氧对MSC的存活、增殖、分化和迁移的影响,以及涉及HIF-1等的分子机制。     

Comparison of in vivo red cell survival of donations collected by Haemonetics MCS versus conventional collection

The Haemonetics Multicomponents System (MCS) cell separator allows concurrent donation of red cells in addition to platelets and/or plasma, thus increasing the versatility of apheresis donations. In vivo survival of autologous red cells obtained by MCS was compared with red cells collected conventionally. In this cross-over controlled study, five male volunteers donated one unit of red cells by MCS and one unit of whole blood by the conventional manual method, 3 months apart. After storing donations in SAG-M for 35 days under standard conditions, radioactive (⁵¹Cr)-labelled autologous red cells were injected into each donor. The post-transfusion recovery (PTR) of red cells at 24 and 48 h did not show any significant difference between red cells obtained manually and by MCS, indicating that processing differences have no detrimental effects on red cell survival.     

六亚甲基二乙酰胺诱导HL-60细胞分化及其分子机制的研究

本研究探讨六亚甲基二乙酰胺（HMBA）对髓系白血病HL-60细胞分化的作用及其分子机制。应用MTT比色法观察不同浓度HMBA在不同时间点对细胞增殖的抑制作用，采用Wright—Giemsa染色观察细胞形态学变化，运用流式细胞仪测定细胞分化抗原CD11b的表达，并进行细胞周期分析，半定量RT—PCR分析c-myc、mad1、p21、p27、hTERT、HDAC1基因mRNA的表达。结果表明：HL-60细胞经不同浓度（0．5、1、2mmol/L）HMBA处理后细胞增殖受到较明显的抑制，并随时间延长、剂量增大抑制作用明显增强。HL-60细胞经2mmol／L HMBA处理后，细胞形态学上趋于分化成熟，细胞停滞于G0／G1期；CD11b表达显著增高；c-myc、hTERT mRNA表达显著下调，mad1、p21、p27mRNA表达显著上调，而HDAC1 mRNA表达无明显变化。结论：HMBA能诱导HL-60细胞分化，其分子机制可能是通过调节c-myc／mad1开关引起p21、p27上调，并且下调hTERT mRNA表达，与HDAC1活性抑制无关。     

血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤12例临床分析

为了探讨血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤(AITL)的临床、病理特征及预后情况,回顾性分析了经病理检查证实的12例AITL患者的临床特点、病理形态及免疫表型、治疗和生存情况。结果表明:12例患者主要症状为全身淋巴结肿大,9例伴有发热等全身症状。确诊依据淋巴结活检,病理组织学呈现淋巴结结构破坏,免疫母细胞增生,树枝状血管增生的特点,免疫表型全部为成熟外周T细胞性。12例患者均用CVP为主的化疗方案,总有效率58%。3年生存率为25%,全组中位生存25个月。结论:AITL临床过程呈侵袭性,进展快,中位生存期短,预后差,应探索更为有效的治疗方案。     

VEGF反义RNA促骨髓瘤细胞凋亡及抑制内皮细胞形成血管作用的体外研究

本研究探讨血管内皮细胞生长因子（VEGF）反义RNA对人多发性骨髓瘤细胞系U266增殖、凋亡及内皮细胞ECV304体外血管形成的影响和以VEGF反义RNA进行多发性骨髓瘤（MM）基因治疗的可行性。将VEGF121反向克隆入真核表达质粒pIRES2-EGFP构建重组质粒AS-VEGF，酶切、测序鉴定。用此真核表达重组质粒转染人骨髓瘤细胞系U266，G418筛选获得阳性克隆。RT-PCR、Westernblot法分别检测阳性克隆中VEGFmRNA和蛋白的表达；利用MTT法、流式细胞术检测转染细胞增殖、凋亡的变化；利用基质胶中内皮细胞ECV304的网络形成检测血管形成。结果表明：获得了携带反义VEGF基因的真核表达重组质粒AS-VEGF；VEGF121反义RNA部分阻断了U266细胞中VEGF的表达，转染重组质粒的U266细胞VEGFmRNA和蛋白表达都较对照组细胞有明显减少，细胞的增殖受到抑制，凋亡增加。转染重组质粒的细胞培养上清在基质胶中作用ECV304细胞后的血管形成较对照组亦有明显减少。结论：VEGF反义RNA可以下调VEGF表达，从而抑制骨髓瘤细胞系U266增殖，增加其凋亡并抑制血管形成。     

两种消化酶在培养晶状体上皮细胞中的消化作用

目的：分析Ⅰ型胶原酶和胰酶在晶状体上皮细胞体外培养中的不同消化作用,以寻找更好的实验方法。方法采用胰酶消化培养法,Ⅰ型胶原酶消化培养法,分别进行晶状体上皮细胞的原代培养,设立对照组和实验组,倒置相差显微镜观察细胞的生长情况,并通过台盼蓝染色观察经消化酶解后游离细胞的存活数量,判别两组间消化作用的差异。结果Ⅰ型胶原酶消化的组织片更容易贴壁,生长速度更快,其游离细胞台盼蓝不着色率为（78．85±6．78）％,胰酶消化法为（27．20±3．28）％,两种酶消化后细胞存活率比较,差异有统计学意义（P＜0．05）。结论Ⅰ型胶原酶消化法培养晶状体上皮细胞的成功率远优于传统改良的胰酶消化法。