猪凝血因子Ⅹ及凝血因子Ⅹa的制备工艺研究

目的从猪血中制备猪凝血因子Ⅹ(FⅩ)及凝血因子Ⅹa(FⅩa)。方法采用柠檬酸钡吸附、硫酸铵分级沉淀、DEAE 纤维素离子交换色谱等方法制备FⅩ,并优化FⅩ的激活条件,从而制备FⅩa。通过SDS PAGE进行FⅩ和FⅩa的检测。结果建立了FⅩ和FⅩa的制备工艺,收率分别为每1ml血浆34,12 μg;采用胰蛋白酶激活FⅩ,激活条件为:0 .0 2 %酶浓度、pH 8.0、37℃下作用70min。结论此工艺操作简单,收率高,适合于规模化生产     

沙班类凝血因子Xa抑制剂的研究进展

血栓形成是导致心脑血管疾病的重要诱因,而抗凝治疗在预防血栓栓塞性疾病中起着很重要的作用。凝血因子Xa(FXa)是研究新型抗凝血药的一个重要的靶点,其中,沙班类抗凝血药是最经典的FXa抑制剂,近年来发展迅速,沙班类抗凝血药物具有口服方便、疗效和安全性好,受食物和其他药物影响小及无需监测国际标准化比值(INR)等优点,在临床上广泛应用并弥补了传统抗凝血药的不足。本文对沙班类凝血因子Xa抑制剂的研究进展进行综述。     

批式吸附法制备人凝血因子Ⅸ复合物

目的制备纯度较高,潜在血栓性小的凝血因子Ⅸ(FⅨ)复合物.方法以人新鲜冰冻血浆为原料,采用SD病毒灭活工艺,经国产DEAE-Sepharose Fast Flow胶批式吸附和Ca3(PO4)2吸附制备凝血因子Ⅸ复合物.结果两步的活性收率分别为(89.94±1.31)%(n=7)、(82.27±2.18)%(n=6),制品的FⅨ∶C比活为(16.28±2.80)IU/mg.FIX的量为(126.82±11.60)IU/瓶(200PE).结论本工艺实用性较高,可用于制备低成本,高质量的凝血因子Ⅸ复合物.     

猪凝血因子V的制备及其活性分析

从猪血浆中制备猪凝血因子V,并分析凝血因子V加速凝血酶原活化的促凝活性。采用聚乙二醇沉淀、柠檬酸钡吸附、DEAE纤维素离子交换层析等方法,制备了猪凝血因子V。经SDSPAGE检测,猪凝血因子V得以成功制备,收率为每升血浆收90.2mg,纯度为64.4%。经纤维蛋白凝结实验分析,采用上述方法制备的猪凝血因子V具有较高的促凝血酶原活化活性。     

批式吸附法制备人凝血因子Ⅸ复合物

目的　制备纯度较高,潜在血栓性小的凝血因子Ⅸ(FⅨ)复合物。方法　以人新鲜冰冻血浆为原料,采用SD病毒灭活工艺,经国产DEAE SepharoseFastFlow胶批式吸附和Ca₃(PO₄)₂ 吸附制备凝血因子Ⅸ复合物。结果　两步的活性收率分别为(89.94±1.31) % (n=7)、(82.27±2.18)% (n=6) ,制品的FⅨ∶C比活为(16.28±2.80)IU/mg。FIX的量为(126.82±11.600 IU/瓶(200PE)。结论　本工艺实用性较高,可用于制备低成本,高质量的凝血因子Ⅸ复合物。     

牛凝血酶的制备研究

目的从牛血浆中制备高活力及高收率的凝血酶。方法以牛血为原料,采用柠檬酸钡吸附、硫酸铵分级沉淀、DEAE-纤维素色谱等方法制备凝血酶原,并模拟生理条件用凝血酶原活酶复合物,包括牛凝血因子Ⅴ、Ⅹa、磷脂和Ca2+对凝血酶原进行激活。结果采用此方法制备的凝血酶的比活力为85 U/mg,收率为135μg/mL血浆。结论采用此制备技术,可以大规模制备高活力及高收率的牛凝血酶。     

人凝血因子Ⅷ制备工艺的优化

目的优化人凝血因子Ⅷ(FⅧ)原液制备工艺,提高FⅧ收得率及纯度。方法采用正交设计优化冷沉淀溶解工艺参数;探讨不同p H对冷沉淀溶解液酸性沉淀的影响,优化得到最佳酸性沉淀条件;通过对离子交换层析工艺的研究,得到离子交换层析的最佳上样流速及柱载量。结果冷沉淀溶解的最佳溶解工艺条件是溶解倍数为4倍、溶解温度为10℃、溶解时间为2 h;溶解液最佳酸性沉淀p H为7.2;离子交换层析的最佳上样流速为1.2 cm·min-1,每毫升凝胶对凝血因子Ⅷ的载量为80.1 IU·m L-1。结论通过对FⅧ原液制备工艺的优化,FⅧ收得率提高了约13%,比活性约提高了30 IU·mg-1。     

凝血因子Ⅸ复合物制品在鼠非停滞模型上的潜在致血栓性的评价

目的　评价两种凝血因子Ⅸ复合物的潜在致血栓危险性。方法　采用鼠非停滞模型 ,动态监测可溶性纤维蛋白单体复合物、纤维蛋白降解产物、D 二聚体、组织纤溶酶原激活剂等指标的变化。结果　采用国产DEAE 琼脂糖快胶离子交换层析和Ca3(PO4 ) 2 吸附法相结合的层析工艺制备的凝血因子Ⅸ复合物引起的上述指标的变化均明显低于改良凝胶吸附法制备的凝血因子Ⅸ复合物。结论　用国产DEAE 琼脂糖快胶离子交换层析和Ca3(PO4 ) 2 吸附法相结合的层析工艺可明显减少凝血因子活化 ,降低制品的潜在致血栓性     

孕产妇凝血因子变化及意义探讨

目的探讨孕产妇凝血因子的变化及其临床意义。方法选择209例孕产妇血清分为三组：足月产妇（55例）、非足月产妇（流产和顺产21例）、足月病理产妇（子痫、死胎133例）。应用北京思达高诊断技术有限公司STAR全自动血凝仪及配套试剂，采用全自动定量免疫比浊法检测AT3、D-2聚体、PT、PA、Fib、APTT。结果三组中非足月产组中位年龄37．2岁（23～39岁），凝血因子中Fibi x^-±s在足月产妇和足月病理产妇各为4．57±0．92、4．65±1．03，P〉0．05；但其异常率却为72．7％、75．89％，P〉0．05；Fib高伴有其他凝血因子异常在两组中各占20％和36．6％，尤其后者以6种凝血因子不同组合／单一异常计45例占44．5％。结论高龄产妇易流产和早产。Fib的升高与孕龄相关，在足月病理产妇中常伴有多种凝血因子的异常，应重视监测围产期特殊生理状态反应导致的病理性异常。     

新型多肽bg115-2体外对活化凝血因子X的抑制作用

目的研究基因重组的新型多肽bg115-2体外对活化凝血因子X(FXa)的抑制作用、与酶结合的动力学特点及抗凝血活性.方法用发色底物法测定bg115-2的FXa抑制活性、特点和酶结合性质;用活化的部分凝血活酶时间(A PTT)和凝血酶原时间(PT)试剂盒测定bg115-2对于大鼠血浆凝血时间的影响.结果bg115-2具有浓度依赖的FXa抑制活性,IC50为13.1×10-9mol·L-1,Ki为7.3×10-9mol·L-1;bg115-2对FXa的抑制活性随时间延长而增强;稀释反应混合物未使FX a的活性恢复;bg115-2可浓度依赖性延长APTT及PT,使APTT延长1倍的浓度为1.3×10-7mol·L-1,使PT延长1倍的浓度为3.0×10-7mol·L-1.结论bg115-2为一强活性的、慢结合的、不可逆的FXa抑制剂,具有较强的抗凝血活性.     

第四批人凝血因子VIII国家标准品制备和标定

目的:建立经两步病毒灭活工艺制备的人凝血因子VIII国家标准品,以替代第三批人凝血因子VIII国家标准品。方法:按《中国药典》2010年版三部对人凝血因子VIII产品的生产工艺要求和质量标准,制备第四批人凝血因子VIII国家标准品(批号20100101),用WHO第七批人凝血因子VIII国际标准品(批号99/678),采用一期法进行协作标定,采用加速破坏试验进行稳定性考察。结果:批号20100101人凝血因子VIII国家标准品效价为12.1IU/支,稳定性好,其它项目指标均达到国家标准品的要求。结论:建立了符合国家标准品要求、并经病毒灭活的第四批人凝血因子VIII国家标准品。     

冷沉淀凝血因子制备方法的改进

目的 通过冷沉淀凝血因子制备方法的改变提高了产品质量.方法 1将新鲜冰冻血浆置于4±2摄氏度水浴箱内融化后,虹吸出血浆,袋内剩余40～50 ml冷沉淀凝血因子2将新鲜冰冻血浆置于(4±2)℃冰箱中过夜融化,经离心后分离出冷沉淀凝血因子20～30 ml.结果 离心法优于虹吸法.结论 本文对比离心法和虹吸法两种方法制备冷沉淀凝血酶因子,得出离心法制备冷沉淀凝血因子质量优于虹吸法,将冷沉淀凝血因子制备方法进行改进.     

人凝血因子Ⅷ血液制品中的病毒灭活与验证

目的 研究人凝血因子Ⅷ制备过程中S/D病毒灭活法和80℃、72 h干热灭活法的病毒灭活工艺的灭活效果。方法 经过S/D法及80℃、72 h干热法双重处理灭活病毒,并通过加入指示病毒(PRV、Sindbis、HIV、EMCV、PPV)验证病毒灭活效果。结果 上述工艺可有效灭活脂包膜和非脂包膜病毒。最终制品中TNBP残余量小于1/10万(10 ppm)、吐温-80(Tween-80)残余量小于1/万(100 ppm),符合安全标准,人凝血因子Ⅷ的生物活性及其他各项指标未发现明显变化。结论 可以作为人凝血因子Ⅷ实验过程中的病毒灭活方法。     

人凝血因子Ⅷ提取工艺优化研究

目的：优化血浆中人凝血因子Ⅷ提取工艺条件。方法以人血浆冷沉淀为原料,人凝血因子Ⅷ的比活性回收率作为评价指标,采用单因素试验,对铝胶的加量,铝胶吸附时的pH值、酸沉淀时的pH值等进行研究,优选提取工艺。结果加入冷沉淀重量12%的铝胶,并将pH值调节至7.1进行吸附,上清液中人凝血因子Ⅷ比活性可达9.50IU/mg,酸沉淀时将pH值调节至6.3,离心上清夜中人凝血因子Ⅷ比活性为11.50 IU/mg。经过以上两步处理,可将人凝血因子Ⅷ比活性提高近2倍。结论人凝血因子Ⅷ提取工艺优化研究工艺合理、可行,能有效达到纯化提取人凝血因子Ⅷ的效果。     

口服避孕药与凝血因子的变化及因子V基因突变的关系

目的　探讨国产复方口服避孕药 (COC)与凝血因子的变化及因子V基因突变的关系。方法　测定 14 1例健康妇女凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅹ活性 ;分析女性脑卒中患者因子Ⅴ基因多态性。结果　炔诺酮组和炔诺孕酮组凝血因子X活性均数均显著高于对照组 (97 0 8± 14 78,P <0 0 5 ;98 5 8± 13 2 8,P <0 0 1) ;炔诺酮组凝血因子Ⅷ活性均显著高于对照组 (15 0 96± 5 7 11,P <0 0 5 ) ;二服药组凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ活性均数与对照组相似 ,差异无显著性 ;女性脑卒中患者中服避孕药者和非服避孕药者均未发现因子Ⅴ基因多态性。结论　长期服用国产低剂量COC对妇女的凝血因子有一些负面影响 ,不同避孕药的影响略有不同 ;COC不会引起中国妇女凝血因子ⅤLeiden突变。     

融浆方法对人凝血因子FⅡ,FⅦ,FⅧ,FⅨ,FⅩ收率的影响

目的分析传统法与改良法两种融浆方法对冷沉淀量和人凝血因子FⅡ,FⅦ,FⅧ,FⅨ,FⅩ收率的影响。方法采用两种不同的融浆方法融浆、离心后取样,按照2005年版《中国药典（三部）》规定的方法检测,对两种融浆方法生产的凝血因子收率和冷沉淀量进行统计分析。结果改良法冷沉淀量和FⅧ的收率明显高于传统法（P〈0.01）。结论采用改良法生产凝血因子和冷沉淀,可以明显提高冷沉淀量和Ⅷ因子收率,而对其他凝血因子活性没有影响。     

新鲜冰冻血浆融化后不同放置时间凝血因子的变化

目的探讨新鲜冰冻血浆融化后24h内凝血因子的变化,为指导临床治疗提供理论依据。方法采用SYSMEX CA-1500型自动血凝分析仪,对20份血浆样品分别于融化后0、6、12、24h测定凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白(FIB)、凝血酶时间(TT)、凝血因子Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ(FⅦ、FⅧ、FⅨ)活性水平。结果新鲜血浆融化后24h之内无明显改变的有PT、FIB、TT(P>0.5);其他指标在不同时间段各有明显的改变,同时显示FⅧ半衰期为12～24h。结论新鲜冰冻血浆融化后放置会有凝血因子活性衰减,为保证输血质量,应尽可能融化后立即输注。     

凝血因子Ⅷ制备工艺研究

凝血因子Ⅷ制剂是治疗血友病甲的最主要血液制品。８０年代中期发展了新一代血浆凝血因子Ⅷ浓制剂及基因重组凝血因子Ⅷ技术，不仅提高了凝血因子Ⅷ制剂的纯度，减少了副作用，而且降低了病毒感染的危险性。本文介绍了凝在子Ⅷ制剂的生产及病毒灭活工艺。     

重组活化人凝血因子Ⅶ的药物经济学考察

目的:对重组活化人凝血因子Ⅶ进行药物经济学考察。方法:采用文献回顾方法,对血友病药物费用及影响因素进行探讨。结果:重组活化人凝血因子Ⅶ治疗血友病止血时间短。相对于激活凝血酶原复合物,重组活化人凝血因子Ⅶ更具成本-效果优势,其治疗费用的最主要影响因素并不一定是价格。结论:重组活化人凝血因子Ⅶ的价格不应成为限制其临床应用的依据。     

不同保存时间对血浆凝血因子活性的影响

新鲜冰冻血浆(FFP)是于采血后6～8 h内从全血中(ACD或CPD方抗凝保存液)中完成分离,速冻并保于与-20℃以下的血浆,含有全部凝血因子,特别是不稳定的凝血因子(Ⅴ和Ⅷ).FFP在临床应用较广泛,尤其适用于对凝血因子缺乏、肝功能衰竭、大量输血等疾病的治疗.由于血浆中不稳定凝血因子的活性易受血液采集、制备、储存诸多因素的影响,且临床上因种种原因经常出现FFP融化后不能及时给患者输注,导致疗效降低.笔者对我市中心血站提供的FFP随机抽查40份,进行不同时间血浆凝血因子活性水平监测,现报告如下.