ATP生物发光法与MTT法检测卵巢癌体外化疗敏感性的比较

目的 比较ＡＴＰ法与ＭＴＴ（四唑蓝）法对卵巢癌细胞体外化疗敏感性的预测价值。方法 分别以ＡＴＰ法和ＭＴＴ法检测５种化疗药物对卵巢癌３ＡＯ细胞的抑制作用。结果 （１）ＡＴＰ法与ＭＴＴ法相关性良好。（２）ＡＴＰ法更加灵敏、稳定。ＡＴＰ法在８０个细胞时即可测出发光强度的改变;而ＭＴＴ法细胞 达３００时才能测出ＯＤ值变化。试验所需细胞浓度,ＡＴＰ法与ＭＴＴ法分别为１×１０＾４￣５×１０＾４个／ｍｌ和１×１     

ATP生物发光法与核仁组成区银染法检测白血病细胞体外药物敏感性

目的：评价两种方法检测白血病细胞体外药物敏感性的结果和临床意义。方法：用ＡＴＰ生物发光法和核仁组成区银染（ＡｇＮＯＲ）法测定急性白血病化疗前８种化疗药物的体外敏感性，计算抑制率，分析体内外敏感性。结果：２５例次ＡＴＰ生物发光法和２３例次ＡｇＮＯＲ法的阳性、阴性和总符合率分别为９４４％和８８９％；８５７％和４００％；９２０％和７８３％。两种方法同时测定１４例结果为９０９％和８００％；１００％和５００％；９２９％和７１４％。结论：在两法同测１４例中，ＡＴＰ生物发光法优于ＡｇＮＯＲ法。     

细胞凋亡检测用于卵巢癌化疗药物敏感性试验及其与ATP法的比较

目的　探讨细胞凋亡检测用于卵巢癌化疗药物敏感性试验的可行性。方法　采用末端标记法直接检测顺氯胺铂等 6种化疗药物诱导 4例卵巢癌实体瘤细胞凋亡的结果 ,并与三磷酸腺苷生物发光法 (ATP法 )检测结果进行对比。结果　同一种化疗药物对不同来源的癌细胞的细胞凋亡诱导程度不同 ,与 ATP法比较二者的检测结果存在一致性 (P0 =0 .75 )。结论　上述结果提示 ,细胞凋亡检测能直接用于了解药物诱导肿瘤细胞凋亡的程度 ,若作为一种药物敏感性试验方法与 ATP法组合应用 ,将有可能提高临床应用效果     

细胞凋亡检测用于卵巢癌化疗药物敏感性试验及其与ATP法的比较

目的 探讨细胞凋亡检测用于卵巢癌化疗药物敏感性试验的可行性。方法 采用末端标记法直接检测顺氯胺铂等6种化疗药物诱导4例卵巢癌实体瘤细胞凋亡的结果。并与三磷酸腺苷生物发光法（ATP法）检测结果进行对比。结果 同一种化疗药物对不同来源的癌细胞的细胞凋亡诱导程度不同，与ATP法比较二者的检测结果存在一致性（P0=0.75)。结论 上述结果提示，细胞凋亡检测能直接用于 了解药物诱导肿瘤细胞凋亡的程度，若作为一种药物敏感性试验方法与ATP法组合应用，将有可能提高临床应用效果。     

改良MTT法在卵巢癌细胞株化疗药物敏感试验中应用的研究

探讨ＭＴＴ法药敏试验对卵巢癌临床化疗的指导意义。采用改良ＭＴＴ法检测了６株卵巢癌细胞对１０种化疗药物１０种不同浓度的药物敏感性。通过卵巢癌细胞株对化疗药物的量效关系曲线求出药物的ＩＤ５０值及ＡＵＣａｔＩＤ５０值来判断药效。     

姜黄素及其联合化疗对卵巢癌细胞株3AO体外增殖的抑制作用

目的:探讨姜黄素(curcumin熏Cur)及其联合化疗对人卵巢癌细胞株3AO细胞体外生长的抑制作用。方法:将Cur单独应用或与临床上常用的卵巢上皮癌化疗药物顺铂(cDDP)、卡铂(CBP)、拓扑替康(TPT)联合应用,观察对3AO细胞生长抑制率的影响,药物敏感实验采用MTT法。结果:Cur抑制3AO细胞的生长,其半数抑制浓度(IC50)为23.4μmol/L;Cur与各种浓度的cDDP、CBP或TPT联用,可提高各种药物对3AO细胞的生长抑制率(P<0.05～0.01)。结论:Cur在体外对人卵巢癌3AO细胞具有抑制作用,与cDDP、CBP或TPT联合应用,可提高3种药物的化疗效果。     

卵巢癌个体性化疗方案的初步研究

目的评价卵巢癌细胞对8种化疗药物的敏感性,为临床卵巢癌患者个体性化疗方案的制定提供有用的研究模式.方法①应用MTT法检测8种化疗药物对卵巢癌细胞系HO-8910细胞和对照组不同时间、不同浓度化疗药物及其组合的细胞抑制率,筛选出抑制率最高的化疗药物并进行组合.②通过FCM法检测其诱导细胞凋亡的效果,采用Annexin-V-FITC结合PI染色和TdT介导X-dUTP缺口末端标记(TUNEL)法.结果①在MTT法定量检测中,8种化疗药物作用48h对HO-8910细胞系抑制率与对照组相比具有不同程度的差异性,其中以4PPC(32μg/ml)的CDDP与4PPC(0.12μg/ml)的As2O3效果最显著,此时H0-8910细胞系的抑制率分别为80.43%和73.37%,与对照组比较,差异显著(P=0.01)(2).MTT法定量检测21种化疗药物组合对HO-8910细胞系抑制率,筛选出抑制率最高的化疗药物组合:CDDP BLM 紫杉醇(抑制率94.44%),与对照组比较,差异显著(P=0.0125).(3).FCM法定量检测组合CDDP BLM 紫杉醇作用2、4、6、8、10、12、24、48h 8个时间段对HO-8910细胞系的细胞凋亡率,与空白对照组比较有不同程度的差异,其中以作用48h的细胞凋亡率最高(75.70%),差异显著(P=0.0136).结论①卵巢癌细胞的化疗敏感性与化疗药诱导的卵巢癌细胞凋亡密切相关.②细胞抑制率,早期细胞凋亡,晚期细胞凋亡,细胞凋亡率可作为制订卵巢癌个体性治疗方案的评价指数体系.③在细胞抑制率的基础上优选出相应的抗癌药物,再通过细胞凋亡率评价抗癌药物的优化组合方案,这一肿瘤个体性化疗方案制定程序具有可行性,为卵巢癌者个体性化疗方案的制定提供了一个有用的研究模式.     

小片段RNA干扰提高人卵巢癌耐药细胞对化疗药物的敏感性研究

目的采用针对多药耐药基因MDR1的小片段RNA(siRNA)转染人卵巢癌耐药细胞株,了解转染后能否提高细胞对化疗药物的敏感性。方法用脂质体将合成针对MDR1的siRNA转染具有MDR1高表达的人卵巢癌泰素耐药细胞株OVCAR8/TR,并用ATP生物发光法检测转染前、后细胞对顺铂、5-氟脲嘧啶、阿霉素和泰素4种化疗药物敏感性的变化。结果OVCAR8/TR细胞对顺铂、阿霉素和泰素均耐药,转染后细胞能够明显提高通过P-gp转运药物泰素和阿霉素的敏感性,泰素对细胞的抑制率由转染前的26%提高到78%,阿霉素对细胞的抑制率则由转染前的37%提高到58%,对顺铂的耐药性则没有改变。单用脂质体转染组的药敏结果与未转染组差异无统计学意义。结论siRNA干扰能够逆转人卵巢癌化疗药物的多药耐药,提高对化疗药物的敏感性。     

三磷酸腺苷生物发光法在卵巢癌体外化疗药物敏感试验中的应用

为探讨新鲜卵巢癌标本化疗药物敏感试验结果与临床疗效的相关性，采用三磷酸腺苷生物发光法（ＡＴＰ－ＣＶＡ），用液闪计数仪对２５份新鲜卵巢癌组织标本进行药敏检测。结果显示：在ＡＴＰ浓度为１０＾－９～１０＾－５ｍｏｌ／ｍｌ时，ＡＴＰ标准品与发光计数呈一线性关系，Ｙ＝１．４８Ｘ＋１５．０３，相关系数为０．９９６３；所检测的２５份标本中成功２２份，试验的可评价率为８８％，其敏感性为８５．７％（１２／１４），特异性为８３．３％（５／６），阳性预测值为９２．３％（１２／１３），阴性预测值为７１．４％（５／７），总的预测准确率为８５％（１７／２０）。上述结果表明，本药敏试验结果的预测准确性较高，与临床疗效之间具有很好地相关性，值得进行更深入的研究。     

卵巢癌个体性化疗的体外药敏研究

目的以人卵巢癌细胞系HO-8910为对象,以人黑色素瘤细胞株A-375为阳性对照,以细胞抑制率、细胞凋亡为指标,评价8种化疗药物在体外诱导卵巢癌细胞凋亡效应,为临床卵巢癌患者个体性化疗提供实验依据。方法MTT法检测细胞抑制率,FCM法检测诱导细胞凋亡的效果。结果与结论①卵巢癌细胞的化疗敏感性与化疗药诱导的卵巢癌细胞凋亡密切相关;②细胞抑制率,早期细胞凋亡,晚期细胞凋亡,细胞凋亡率可作为制订卵巢癌个体性治疗方案的评价指数体系;③在细胞抑制率的基础上优选出相应的抗癌药物,再通过细胞凋亡率评价抗癌药物的优化组合方案,这一肿瘤个体性化疗方案制定程序具有可行性,为卵巢癌者个体性化疗方案的制定提供了一个有用的研究模式。     

三磷酸腺苷生物发光法在卵巢癌体外化疗药物敏感试验中的应用

为探讨新鲜卵巢癌标本化疗药物敏感试验结果与临床疗效的相关性,采用三磷酸腺苷生物发光法(ATP-CVA),用液闪计数仪对25份新鲜卵巢癌组织标本进行药敏检测.结果显示:在ATP浓度为10-9～10-5mol/ml时,ATP标准品与发光计数值呈一线性关系,Y=1.48X+15.03,相关系数为0.9963;所检测的25份标本中成功22份,试验的可评价率为88% ,其敏感性为85.7%(12/14),特异性为83.3%(5/6),阳性预测值为92.3%(12/13),阴性预测值为71.4%(5/7),总的预测准确率为85%(17/20).上述结果表明,本药敏试验结果的预测准确性较高,与临床疗效之间具有很好的相关性,值得进行更深入的研究.     

肺癌细胞株对6种抗癌药物敏感性测定

目的　探讨肺癌细胞株抗癌药物的敏感性。方法　采用体外MTT比色分析法对 10株肺癌细胞进行NVB、GEM、TAX、SN - 38、CDDP、5 -Fu 6种抗癌药物的体外敏感试验。结果　 ( 1) 6种抗癌药物对SCLC的显效顺序依次为GEM、NVB、CDDP、TAX、5 -Fu、SN - 38,4株SCLC的敏感性顺序依次为Lu135、N2 31、H6 9、SBC - 3;( 2 ) 6种抗癌药物对NSCLC的显效顺序依次为 5 -Fu、NVB、GEM、CDDP、TAX ,对SN - 38均为耐药 ,3种 6株NSCLC的敏感性顺序依次为Lu 6 5、PC 7、LK - 2、PC 9、PC 14、A 5 49;( 3)SCLC株对 6种抗癌药物敏感性优于NSCLC ,6种抗癌药物对 4株SCLC的总有效率为 87 5 % ,敏感为 6 2 5 % ,较敏感为 2 5 % ,耐药为12 5 % ;对 6株NSCLC的总有效率为 5 2 78% ,敏感为 16 6 7% ,较敏感为 36 11% ,耐药为 4 4 4 4%。结论　 10株肺癌细胞株对 5 -Fu最敏感 ,GEM、NVB、CDDP、TAX次之 ,SN - 38效果最差。 6种药物中对 5 -Fu、CDDP未表现出明显耐药性 ,其余 4种均存在不同程度的耐药性 ,表明肺癌细胞株存在自然耐药性。     

三根祛瘤方对人卵巢癌细胞HO-8910抑制作用的研究

目的：研究三根祛瘤方对人卵巢癌细胞株HO－8910的体外生长影响。方法：用含三根祛瘤方125mg/ml,62.5mg/ml,31.3mg/ml,15.6mg/ml,7.8mg/ml不同浓度培养液,分别培养HO－8910细胞24小时,48小时,72小时,应用MTT[四甲基偶氮唑蓝]比色法观察HO－8910细胞生长情况。结果：三根祛瘤方对人卵巢癌细胞HO－8910的体外生长有抑制作用,并呈现出时间和剂量依赖关系,最佳抑制浓度为62．5mg/ml,最佳作用时间为48小时。结论：三根祛瘤方对人卵巢细胞HO－8910的体外增殖有抑制作用。     

miR-206/CDK4信号在卵巢癌生长和化疗增敏中的作用

探讨 miR-206/CDK4信号在卵巢癌生长和化疗增敏中的作用.方法 分别提取卵巢癌和癌旁组织总RNA并将它们逆转录成cDNA.实时荧光定量PCR检测miR-206在卵巢癌和癌旁组织中差异表达.在将miR-206 mimic和其特异抑制剂以及它们各自对照分别转染卵巢癌细胞后,MTT和流式细胞仪用于检测细胞增殖和细胞周期的改变.Western blot和荧光素酶报告基因活性分析鉴定miR-206的靶基因和其调控信号通路.miR-206诱导5-Fu对卵巢癌细胞化疗增敏作用被鉴定.结果 荧光定量PCR分析显示,miR-206在卵巢癌组织中表达明显下调.在转染miR-206 mimics后,细胞的增殖明显抑制,细胞周期也出现G/S转化障碍.机制分析显示,miR-206 mimic能明显抑制CDK4,c-Myc和CCNDl表达.与之相反,在使用miR-206特异抑制剂后,细胞的增殖能力明显恢复,而CDK4表达能明显增高.荧光素酶报告基因活性分析显示,miR-206能直接结合CDK43'UTR.药敏分析显示,miR-206能明显降低IC50值(P＜0.001),从而增加5-Fu对卵巢癌细胞的敏感性.结论 miR-206作为候选抑癌基因,直接靶击CDK4基因,从而抑制了卵巢癌细胞生长,并诱导了5-Fu对卵巢癌细胞的化疗敏感性.     

四氮唑兰法在肝癌细胞化疗药物敏感性试验中的应用

目的：探索MTT法在癌细胞体外化疗物敏感性试验中的应用价值。方法：采用四氮唑兰（MTT）法,对20例原发性肝癌患者癌细胞进行7种抗癌药物敏感性测定。结果：检测成功率为805,7种化疗药物对肝癌细胞的有效率分别为：5－Fu和MMC为37．5％,ADM25％,MTX21．4％,Car20％,DDP12。5％,A-C0%,结论MTT法在肝癌细胞体外化疗药物敏感性试验中检测成功率高,个体差异明显。因此,MTT法药敏试验在指导临床肿瘤化疗,提高化疗效果中具有重要的应用价值。     

卵巢癌药敏试验的微量法研究

目的　探讨微量检测 ATP在卵巢癌药敏试验中应用的可行性。方法　对 35例新鲜卵巢癌组织标本进行药敏试验 ,应用 Victor 2多功能检测仪微量检测 ATP值。结果　 1Victor 2多功能检测仪微量检测 ATP标准品与发光值的关系 ,在 ATP浓度为 10 - 9～ 10 - 5m ol/ml时 ,显示极好的线性关系 ,直线方程为 Y =0 .892 X +10 .2 5 7,相关系数 r=0 .998(P<0 .0 1)。 2微量检测 ATP的变异系数平均为 7.3%。 3微量检测 ATP进行药敏试验 ,敏感性 92 .0 % ,特异性 70 .0 % ,预测准确率为 87.1%。结论　应用 Victor 2多功能检测仪微量检测 ATP进行药敏试验 ,方法稳定 ,实验成本降低 ,更为简便、快速 ,误差小 ,值得推广和普及     

Low expression of S100P associated with paclitaxel resistance in ovarian cancer cell line

Background Recent studies indicate that S100P expression may be a biomarker that can predict the success of cancer chemotherapy. Whether it is relevant to chemotherapeutics in ovarian cancer is unknown. In this study, we investigated the association of S100P expression with paclitaxel sensitivity in ovarian cancer cell lines. Methods We measured S100P expression and paclitaxel resistance profiles in parent SKOV3 and OVCAR3 cell lines. Then, the two cell lines were transiently transfected with S100P siRNA. We also constructed an OVCAR3 cell clone that stably overexpressed S100P. The effect of S100P expression level on the survival of cells exposed to paclitaxel was measured using the MTT assay. S100P expression was evaluated by semi-quantitative RT-PCR and Western blotting. Significance of differences was calculated using independent samples t-test and one way analysis of variance （ANOVA）. Results Lower S100P expression was associated with a survival advantage in OVCAR3 cells exposed to paclitaxel; the survival advantage in SKOV3 cells was smaller （P 〈0.05）. The survival advantage associated with decreased S100P expression was even greater for SKOV3 and OVCAR3 cells that had been transfected with S100P siRNA before being exposed to paclitaxel （P 〈0.05）. Consistent with this, the OVCAR3 cell clone that was transfected to overexpress S100P was more sensitive to paclitaxel （P 〈0.05）. Conclusions Low S100P expression contributes to drug resistance to paclitaxel in ovarian cancer cell lines. S100P expression thus might be a marker that can predict the effectiveness of paclitaxel based chemotherapy. Such a marker could be helpful in improving individual medication regimens for ovarian cancer patients.     

人增殖抑制基因(HSG)对肿瘤细胞系化疗敏感性的作用

目的:将人增殖抑制基因(hHSG)用电子穿孔的转基因方式转染到体外培养的人肿瘤细胞系中,观察hHSG 基因对内源性hHSG表达水平不同的肿瘤细胞系的化疗敏感性的影响.方法:首先用免疫组化方法检测不同组织来源的肿瘤细胞系中hHSG的表达水平,然后选择内源性hHSG表达水平较低的肺腺癌(A549)和内源性hHSG表达水平较高的宫颈癌(HeLa S3)细胞系,用电穿孔方法转染含有hHSG的真核表达载体(pEGFP-hHSG)24 h后,加入放线菌酮(CHX),采用细胞计数、MTT法观察hHSG对肿瘤细胞增殖抑制作用及对CHX的化疗敏感性的影响.结果:hHSG在不同组织来源的肿瘤细胞系都有不同程度的表达, pEGFP-hHSG转染到两种内源性hHSG表达水平不同的肿瘤细胞系后,这两种肿瘤细胞的生长增殖都明显受到抑制,同时外源性的hHSG也增强了这些肿瘤细胞系对CHX的敏感性.结论:外源性hHSG可不依赖其内源性表达水平而抑制肿瘤细胞的增殖,与CHX并用可增强肿瘤细胞对CHX的敏感性,具有协同作用.     

Chemosensitivity testing of an ovarian cancer cell line: comparison of MTT assay and [3H]-thymidine incorporation.

Chemosensitivity test has its role in cancer therapy. Using an accurate, efficient, and simple way to choose the proper chemosensitive drugs in our clinical study will help advance our work. The MTT assay is a rapid, precise, and new method to perform drug sensitivity assay. We used an ovarian cancer cell line (OC-3L-VGH) to compare the accuracy of the MTT and the [3H]-TdR incorporation assay in measuring chemosensitivity of 7 anticancer drugs. Good correlation was observed between the MTT and the [3H]-TdR assay for drug sensitivity testing (r = 0.893, P less than 0.001). Based on this study we found it may be preferable to use the MTT assay for chemosensitivity screening.     

抑制RhoC基因对卵巢癌细胞紫杉醇敏感性的影响

目的 探讨RNA干扰技术沉默Ras homolgyC(RhoC)基因对卵巢癌细胞SKOV3细胞对紫杉醇敏感性的影响.方法 体外设计合成针对RhoC基因的微小干扰RNA(miRNA),转染卵巢癌细胞SKOV3,应用RT-PCR和Western印迹方法检测转染前后基因mRNA和蛋白的变化,应用MTT方法检测干扰后SKOV3细胞对紫杉醇敏感性的变化,同时应用RT-PCR法检测转染前后SKOV3细胞中的凋亡基因Caspase-3、Survivin mRNA的表达水平.结果 转染针对RhoC基因的miRNA后24、48、72 h,SKOV3细胞mRNA和蛋白水平显著下降;关闭RhoC基因后,SKOV3细胞对紫杉醇的敏感性显著提高.与单独使用紫杉醇相比,在RhoC-miRNA联合紫杉醇组中促进凋亡的基因Caspase-3明显增高,而抗凋亡蛋白Suvlvin mRNA水平显著降低.结论 RNA干扰RhoC基因能增加卵巢癌SKOV3细胞对紫杉醇的敏感性,其协同机制可能与Caspase-3基因的上调,Suvivin基因的下调有关.