晶状体蛋白截短导致先天性白内障的两个家系致病基因分析

目的：通过使用全基因组外显子测序确定两个先天性白内障家系的致病基因变异。方法：对2019-2020年在首都医科大学附属北京同仁医院就诊的2个先天性白内障家系部分成员进行详细的临床眼科检查及全身查体。采集先证者及亲属外周血并提取基因组DNA,应用全外显子测序筛查可疑致病基因，并对家系全部成员进行Sanger测序验证候选致病变异位点。结果：经过外显子测序及生物信息学分析，家系1中在CRYBB1基因中存在无义变异c.656G>A,造成βB1晶状体蛋白质第219位色氨酸变异为终止密码子(p.W219X),最终产生晶状体蛋白截短。家系2中的发现在CRYGD基因中存在无义变异c.337C>T,造成γD晶状体蛋白质第113位谷氨酰胺变异为终止密码子(p.Q113X),导致晶状体蛋白截短。结论：位于CRYBB1基因的无义变异c.656G>A是导致家系1出现先天性白内障的病因；位于CRYGD基因的无义变异c.337C>T是导致家系2出现先天性白内障的病因。     

青海藏族先天性心脏病患者SIRT7基因突变分析

目的:筛查SIRT7基因中与青海藏族先天性心脏病发病相关的变异。方法:对254例藏族先心病患者和288例健康对照者的SIRT7基因外显子区进行Sanger测序,排除已知的单核苷酸多态性(SNP)位点、各个数据库中≥1%的位点和对照组中出现的变异,识别病例组携带的罕见编码区非同义突变并进行蛋白质有害性预测和保守性分析。结果:在1例先天性心脏病患者中筛选出一个新的错义突变SIRT7(c.C181G;p.Leu61Val),该突变在对照和公共数据库中均未出现,在线软件预测为致病性,在物种进化中高度保守。结论:本研究首次在青海藏族先天性心脏病患者中识别出SIRT7基因新的错义突变,提示SIRT7可能与藏族先天性心脏病的发生相关。     

肢带型肌营养不良2B型一例

肢带型肌营养不良是以骨盆带和肩胛带为主呈进行性肌肉改变的一组肌肉疾病,常在儿童期发病,具有明显的遗传异质性。报道1例因支气管肺炎就诊患儿,经全外显子组测序技术筛选相关基因变异位点,Sanger测序技术验证分析可疑变异位点。发现患儿DYSF基因（NM＿003494）存在外显子12位点c.2974T>C(p.W992R)和外显子28位点c. 1169A>G(p.D390G)的复合杂合变异,其中位点c.2974T>C(p.W992R)遗传自父亲,位点c.1169A>G(p.D390G)遗传自母亲。按照美国医学遗传学与基因组学学会指南二者均为截断变异（PVS1）且正常人群数据库未收录,均为罕见变异（PM2＿Supporting证据）,评估为可能致病性变异（likely pathogenic）。Sanger测序验证结果与全外显子组测序结果相一致,患儿最终诊断为肢带型肌营养不良2B型。全外显子组测序技术可为肢带型肌营养不良提供基因分析和产前诊断,在临床决策、遗传咨询及再次妊娠计划等方面具有关键性价值。     

目标外显子组捕获测序发现INPP5E突变致Joubert综合征1例

目的:鉴定一个中国Joubert综合征家系的致病基因及位点。方法:对该Joubert综合征家系的先证者进行目标外显子组捕获测序,通过生物信息学分析找到候选的致病基因及位点,利用聚合酶链式反应(PCR)和Sanger测序进行验证。结果:在先证者的9号染色体INPP5E基因上存在2个杂合变异位点,分别为c.1524CG,p.Asp508Glu以及c.1688GA,p.Arg563His。这两个位点在家系中符合遗传共分离规律。结论:目标区域捕获测序结合Sanger测序发现INPP5E基因的c.1524CG以及c.1688GA位点为引起该Joubert综合征家系临床病变的变异位点,这是国内首次报道的由INPP5E基因突变导致的Joubert综合征病例,且c.1524CG为首次发现的新致病位点。     

无精子症患者基因检测分析

目的:利用全外显子测序技术,筛选无精子症患者相关基因,丰富男性不育基因库。方法:抽取20例无精子症患者外周血,提取DNA,使用杂交捕获方法构建DNA文库,采用高通量测序技术检测人类全外显子组中20099个基因的外显子区及旁侧内含子区(20bp),将测序数据与人类基因组hg19参考序列进行比对,筛选变异基因,变异位点进行Sanger测序验证。结果:共计筛选出26个基因43个变异位点,排除15个常染色体隐性遗传的单个变异位点及13个与精子运动相关的变异位点,剩余11个基因的15个变异位点可能与精子发生障碍相关,其中包括FAM71B、STARD9、CLTCL1、PCBP3、S100PBP等5个在睾丸组织高表达基因,SYCE3、EFCAB6、DDX4、KDM5D、RGS22、MTL5等6个基因可能与精子发生障碍相关。结论:通过研究筛选到可能影响男性不育的基因,为男性不育的基因诊断研究提供参考。     

全外显子组测序发现CSPP1所致Joubert综合征1例

目的:探讨一个中国Joubert综合征家系的致病基因及位点。方法:对该Joubert综合征家系的先证者进行全外显子组测序,通过与已知数据库的比对分析,找到候选的致病基因及位点,利用聚合酶链式反应(PCR)和Sanger测序进行验证。结果:在先证者的8号染色体CSPP1基因上存在2个杂合突变位点,分别为c.1132CT,p.R378X以及c.2244_2245delAA,p.E750GfsX30。这两个位点在家系中符合遗传共分离规律。结论:全外显子组测序结合Sanger测序发现CSPP1基因的c.1132CT,p.R378X以及c.2244_2245delAA p.E750fsX30位点为引起该Joubert综合征家系临床病变的突变位点,这是国内首次报道的由CSPP1基因突变导致的Joubert综合征病例。     

智力障碍儿童遗传学病因筛查与分析

目的 分析智力发育障碍(ID)患儿遗传学病因,为ID疾病临床诊疗及家系遗传咨询提供依据。方法 选取2020年1月至2021年1月在西安交通大学第一附属医院诊断为ID的5例患儿为研究对象。通过染色体核型分析对5例ID患儿进行初步分类,染色体分析结果正常患儿进行全外显子组测序分析。Sanger测序及生物信息学分析软件等对全外显子组测序筛选出的可能致病性变异位点进行验证及功能分析。结果 染色体核型分析发现P1患儿核型为46,XY,del(18)(q22q23),其余4例患儿染色体核型正常。全外显子组测序结果显示两例患儿ATP2C2基因均存在c.2096G>A(p.Ser699Asn)和c.2644＿2655del(p.Ser882＿Gly885del)复合杂合变异。家系验证结果显示P2患儿及P3患儿母亲为ATP2C2基因c.2096G>A(p.Ser699Asn)杂合变异携带者,父亲为ATP2C2基因c.2644＿2655del(p.Ser882＿Gly885del)杂合变异携带者。ATP2C2基因c.2096G>A(p.Ser699Asn)变异位点在神州基因组数据1000...     

泰安地区苯丙酮尿症患儿苯丙氨酸羟化酶基因突变的分析

目的探讨泰安地区苯丙氨酸羟化酶(phenylalanine hydroxylase,PAH)基因突变特点,为该地区苯丙酮尿症(phenylketonuria,PKU)的产前诊断、预防、治疗及人群干预措施的制定提供科学依据。方法采用下一代测序技术(NGS)对34例泰安地区PKU患儿及其父母的PAH基因的13个外显子及与外显子连接的上下游200 bp内含子进行测序分析。结果 34例患儿的68个PAH等位基因中共检出63个突变等位基因,突变检出率为92.65%(63/68),共检出28种突变类型。34例患儿均检测到突变位点,且均为杂合突变,其中1例患儿检测出3个突变位点,25例患儿检测到2个突变,8例患儿检测到1个突变。第7外显子为高频突变区,共检测到8种22个基因突变,相对突变频率为34.92%(22/63);第12外显子检测到4种10个基因突变,占总突变的15.87%(10/62)。共发现4种PAH基因新突变,p.H271L、p.D415N和p.M276K被确定为国内首次报道,p.E56D为国际上目前尚未报道过的PAH基因新突变。结论泰安地区PAH基因突变谱广,突变均为杂合突变,第7、12外显子为高频突变区。     

靶向捕获-高通量测序法对一个先天性白内障家系致病基因的研究

目的:应用靶向高通量测序技术鉴定一个常染色体显性遗传先天性白内障家系的致病基因。方法:采用靶向捕获已知白内障致病基因并行高通量测序,筛选出候选基因,并对其进行家系内外的共分离检验。结果:该家系符合常染色体显性遗传规律,所有患者均为核性白内障。靶向基因测序发现,位于主要内源性蛋白MIP基因的一个杂合突变c.97CT(p.R33C)可能是该家系的致病突变,该变异造成MIP基因编码的水通道蛋白氨基酸序列错义改变,并引起蛋白质结构异常,从而影响其功能。通过一代测序验证并确定该杂合突变为该家系的致病突变。结论:MIP基因c.97CT(p.R33C)突变是造成该先天性白内障家系致病的分子机制。     

新疆南疆地区苯丙酮尿症患儿苯丙氨酸羟化酶基因第7，11，12外显子突变研究

目的探讨新疆南疆地区苯丙酮尿症(PKU)患儿苯丙氨酸羟化酶(PAH)基因第7,11,12外显子突变特征。 方法选择2009年3月至2013年12月在新疆南疆地区,经各级医疗机构确诊的42例PKU患儿(均于新生儿PKU筛查时即被确诊)为研究对象,采集其足跟血或静脉血,采用聚合酶链反应(PCR)产物直接测序法进行PAH基因第7,11,12外显子的基因突变分析。本研究遵循的程序符合新疆维吾尔自治区人民医院等各级医疗机构人体试验委员会制定的伦理学标准,得到该委员会批准,征得受试对象或其监护人知情同意,并与监护人签署临床研究知情同意书。 结果在42例患儿的42对PAH等位基因中,检测出7种PAH基因突变类型,共计46个PAH基因突变位点,其分别为：23个第7外显子c.735G>A(p.Val245Val)静默突变位点;8个第7外显子c.728G>A(p.Arg243Gln)错义突变位点;2个第7外显子c.781C>T(p.Arg261X)无义突变位点;1个第7外显子c.782G>A(p.Arg261Gln)错义突变位点;6个第11外显子c.1155G>C(p.Leu385Leu)静默突变位点;5个第12外显子c.1238G>C(p.Arg413Pro)错义突变位点及1个第12外显子c.1252A>C(p.Thr418Pro)错义突变位点。其中,第7外显子c.735G>A(p.Val245Val)突变位点占此次检出突变位点比例最高,为50.00%(23/46),其突变频率为27.38%(23/84)。PAH基因的等位基因突变检出率为54.76%(46/84)。 结论新疆南疆地区PKU患儿PAH基因第7,11,12外显子的突变特征为：静默突变和错义突变为主要突变,第7外显子出现的突变类型和数量最多。     

Association of obesity,but not diabetes or hypertension,with glucocorticoid receptor N363S variant

OBJECTIVE: To determine whether the N363S variant in the glucocorticoid receptor (encoded by nuclear receptor subfamily 3, group C, member 1: NR3C1) is associated with obesity, type 2 diabetes, or hypertension. RESEARCH METHODS AND PROCEDURES: This was a cross-sectional case-control study involving 951 Anglo-Celtic/Northern European subjects from Sydney. This study consisted of the following: 1) an obesity clinic group, most of whom had "morbid obesity" (mean BMI for group = 43 +/- 8 kg/m(2); n = 152); 2) a type 2 diabetes clinic group (n = 356); 3) patients with essential hypertension who had a strong family history (n = 141); and 4) normal healthy controls (n = 302). N363S genotype, BMI, and a range of other parameters relevant to each group were measured. RESULTS: Compared with the frequency of 0.04 in nonobese healthy subjects, the S363 allele was significantly higher in obesity clinic patients (0.17; p = 5.6 x 10(-8)), subjects with diabetes who were also obese (0.09; p = 0.0045), subjects with hypertension who were also overweight (0.08; p = 0.0016), and overweight healthy subjects (0.12; p = 0.0004). DISCUSSION: The NR3C1 N363S variant is associated with obesity and overweight in a range of patient settings but is not associated with hypertension or type 2 diabetes.     

食管癌组织人乳头瘤病毒感染及其与微卫星杂合性缺失的关系

目的 探讨食管癌组织中14个微卫星位点的杂合性缺失与人乳头瘤病毒(HPV)感染的关系.方法 采用荧光定量PCR法检测112例食管癌标本中HPV-16、18型的感染情况;采用PCR荧光测序仪凝胶电泳检测112例患者匹配的肿瘤和外周血样本中14个微卫星位点的杂合性缺失状况;比较HPV阳性和阴性标本中14个位点的杂合缺失率.结果 染色体3p、9p、13q、17p和17q上的微卫星位点发生了高频的杂合性缺失;发现在2个位点处--D6S497和D13S260,HPV阳性的标本较阴性的拥有更高的杂合性缺失率.结论 缺失涉及众多位点反映出食管癌中基因组存在广泛的不稳定现象;HPV阳性标本在D13S260和D6S497两个位点处拥有更高的杂合缺失率提示食管癌中HPV的作用靶点可能是位于这两个位点处的某些候选基因;另外,四川省是食管癌高发区,该结果也说明HPV是当地食管癌的一重要高危因素.     

32例三阴性乳腺癌患者易感基因胚系突变分析

目的:应用全外显子测序技术初步探讨三阴性乳腺癌(TNBC)患者易感基因突变情况。方法:收集本院就诊的32例TNBC患者,均经临床手术病理确诊。采集患者外周血提取基因组DNA进行全外显子组测序,通过生物信息学分析筛选与乳腺肿瘤相关的易感基因变异。结果:32例TNBC患者中14例检测到BRCA1/2罕见变异,明确致病性或可疑致病变异6例,突变携带频率为18.8%。其中BRCA1:c.5468-1_5474del和c.4749_4750del是较常见的突变;BRCA2:c.6027A>C为新的变异;BRCA2:c.3794G>T、c.7901T>A,BRCA1:c.4616T>C首次在中国人群中发现。除了BRCA1/2变异外,还检测到83个乳腺肿瘤易感基因变异,每个患者携带2.6个变异。2个以上患者携带的乳腺癌易感基因包括ALK、APC、CDH1、PTCH2、RB1CC1、RAD51D、RAD54L、TSC1等。结论:BRCA1/2是TNBC患者最重要的易感基因,其他与DNA损伤修复相关的基因突变可能与TNBC患者的表型有一定的相关性。     

伊犁州婴幼儿发育性髋关节发育不良早期筛查和干预

目的 了解伊犁州6个月内婴儿髋关节发育状况和超声筛查发育性髋关节发育不良(developmental dysplasia of hip,DDH)检出率,探讨DDH发病相关因素,为早期干预提供依据。方法 对2011年4月-2012年4月在本院儿保科体检的6个月内婴儿1 862例(共计髋关节3 724个)进行常规髋关节物理检查和超声筛查,并对DDH相关因素进行流行病学调查,同时对筛查检出的异常病例积极个体化干预治疗。结果 超声筛查出髋关节异常37例(共计50个髋关节),DDH检出率为1.3%,女婴发生率高于男婴,比例为2∶1,哈萨克族、维吾尔族DDH检出率明显高于回族、汉族(4∶1);对不同类型病例积极采取个体化治疗后,均恢复正常。结论 不同性别、民族DDH检出率不同,出后双下肢包裹的婴儿易发生髋关节发育不良;开展婴幼儿DDH早期筛查,对不利因素早期干预,并对DDH患儿进行早期个体化干预治疗具有重要的意义。     

曲靖地区0~14岁儿童发育性髋关节发育不良患病情况及相关因素分析

目的 了解曲靖地区0~14岁儿童发育性髋关节发育不良(developmental dysplasia of the hip,DDH)患病情况及相关危险因素,为科学实施三级预防策略提供支撑。 方法 选取2015年1月—2019年12月在曲靖地区妇幼保健医院进行健康体检的0~14岁1 332例儿童作为研究对象。0~6月龄婴儿采用Graf超声筛查DDH,7月龄~14岁儿童采用X线检查筛查DDH。分析0~14岁儿童DDH流行特点及危险因素,根据结果制定疾病三级防治策略。 结果 1 332例儿童中,DDH检出22例,检出率为1.65%;各年龄段DDH检出率比较,差异无统计学意义(χ²=1.646,P＞0.05);女性DDH检出率高于男性(χ²=7.090,P<0.05),左侧髋关节DDH检出率高于右侧(χ²=4.583,P＜0.05);经单因素χ²检验多因素logistic回归分析显示,羊水过少(OR=3.851)、臀位产(OR=2.064)、臀纹不对称(OR=2.776)和有家族史(OR=3.560)为0~14岁儿童DDH发病的独立危险因素(P＜0.05)。 结论 0~14岁儿童DDH以女性和左侧髋关节多见,其中羊水过少、臀位产、臀纹不对称和有家族史为DDH发病的独立危险因素。DDH预防遵循三级防治策略,主要包括孕期监测羊水量、胎位,疾病初期对高危儿童筛检、家庭指导以及疾病期间对症治疗等。     

广东人群PP2A-B亚基基因5'-侧翼区多态性连锁不平衡和单体型分析

目的 探讨蛋白磷酸酶2A(PP2A)的调节B/PR5δ亚基基因5'-侧翼区多态性的连锁不平衡和人群单体型分布特征.方法 选取经体检排除急慢性疾病的50例广东汉族健康人群为调查对象,以人PPP2R2D基因5'-侧翼区中-1684 A>G(rs11146169)、-1196 C>T(rs9419202)、-462 G>A(...     

慢性锰中毒易感性与基因多态性的病例对照研究

目的探讨遗传因素与慢性职业性锰中毒的关系。方法病例组为４９名职业性锰中毒患者,来源于近１５年来３个钢铁公司诊断的锰中毒病例,发病前为接触锰的冶炼工和电焊工;对照组为５０名与病例组同车间、同工种、未发生锰中毒的工人,且年龄、性别、吸烟饮酒习惯和锰暴露时间等均相近。对细胞色素氧化酶Ｐ４５０２Ｄ６（ＣＹＰ２Ｄ６）基因ＮＱＯ１基因进行了分析。ＣＹＰ２Ｄ６基因２９３８ＣＴ的多态性应用ＰＣＲ结合限制性内切酶（ＨｈａⅠ酶）片断长度多态性（ＲＦＬＰ）进行分析;ＮＱＯ１基因的第６外显子的６０９ＣＴ多态性应用ＰＣＲ结合ＨｉｎｆⅠ酶切的ＲＦＦＰ分析。结果ＣＹＰ２Ｄ６Ｌ等位基因频率在锰中毒工人和无中毒工人之间的差异有显著性,ＣＹＰ２Ｄ６Ｌ基因型在锰中毒患者中的分布明显低于对照组,提示ＣＹＰ２Ｄ６基因可能是与锰中毒有关的易感／耐受基因。未发现ＮＱＯ１基因在两组间分布的差异有显著性。结论本研究显示ＣＹＰ２Ｄ６基因可能是锰致神经系统损害的易感性／耐受性生物标志物之一。     

新生儿访视期先天性心脏病和发育性髋关节发育不良同步筛查模式研究

【目的】 建立北京市新生儿访视期开展先天性心脏病(congenital heart disease, CHD)和发育性髋关节发育不良(developmental dysplasia of hip,DDH)同步筛查模式,使CHD和DDH可疑患儿早确诊,早康复,提高生存质量。 【方法】 由社区儿保人员在新生儿访视期间采用经过专项培训的筛查方法开展CHD和DDH同步筛查,采集2009年北京市9区县18社区新生儿访视期间1 799名筛查数据资料进行描述性统计分析。 【结果】 2009年6—8月期间1 799名访视新生儿中,筛出CHD可疑患儿42例(23.35‰),确诊17例(9.45‰);同时筛出DDH可疑患儿24例(13.34‰),确诊2例(1.11‰)。 【结论】 新生儿访视期开展CHD和DDH同步筛查模式的特点突出表现为开始时间早,覆盖面广,筛查技术简单有效,普及性强,有利于CHD和DDH患儿把握最佳的康复时间。     

Antibodies and CD4(+) T-cells mediate cross-protection against H5N1 influenza virus infection in mice after vaccination with a low pathogenic H5N2 strain

A H5N2 low pathogenic avian influenza virus (LPAIV) was isolated from a natural reservoir in Bavaria during a routine screen and was used as a vaccine strain to scrutinize the immune response involved in cross-protection after challenge infection with a H5N1 highly pathogenic avian influenza virus (HPAIV). The challenge virus was also isolated from a natural reservoir in Bavaria. Wild type, antibody deficient (muMT), CD4(-/-) and CD8(-/-) mice were infected with the apathogenic H5N2 vaccine strain and challenge infection with a 100-fold MLD(50) of the H5N1 strain was performed 80 days later. While 100% of the wild type and 100% of the CD8(-/-) mice stayed healthy, only 50% of the CD4(-/-) and none of the antibody deficient mice were protected. These results support the view that the humoral immune response and to certain extends the CD4(+) T helper cells are a prerequisite for cross-protective immunity against H5 influenza virus.     

Variants in iron metabolism genes predict higher blood lead levels in young children

BACKGROUND: Given the association between iron deficiency and lead absorption, we hypothesized that variants in iron metabolism genes would predict higher blood lead levels in young children. OBJECTIVE: We examined the association between common missense variants in the hemochromatosis (HFE) and transferrin (TF) genes and blood lead levels in 422 Mexican children. METHODS: Archived umbilical cord blood samples were genotyped for HFE (H63D and C282Y) and TF (P570S) variants. Blood lead was measured at 24, 30, 36, 42, and 48 months of age. A total of 341 subjects had at least one follow-up blood lead level available and data available on covariates of interest for inclusion in the longitudinal analyses. We used random-effects models to examine the associations between genotype (HFE, TF, and combined HFE + TF) and repeated measures of blood lead, adjusting for maternal blood lead at delivery and child's concurrent anemia status. RESULTS: Of 422 children genotyped, 17.7, 3.3, and 18.9% carried the HFE H63D, HFE C282Y, and TF P570S variants, respectively. One percent of children carried both the HFE C282Y and TF P570S variants, and 3% of children carried both the HFE H63D and TF P570S variants. On average, carriers of either the HFE (beta = 0.11, p = 0.04) or TF (beta = 0.10, p = 0.08) variant had blood lead levels that were 11% and 10% higher, respectively, than wild-type subjects. In models examining the dose effect, subjects carrying both variants (beta = 0.41, p = 0.006) had blood lead 50% higher than wild-type subjects and a significantly higher odds of having a blood lead level > 10 microg/dL (odds ratio = 18.3; 95% confidence interval, 1.9-177.1). CONCLUSIONS: Iron metabolism gene variants modify lead metabolism such that HFE variants are associated with increased blood lead levels in young children. The joint presence of variant alleles in the HFE and TF genes showed the greatest effect, suggesting a gene-by-gene-by-environment interaction.