松茸不同提取部位的体外抗肿瘤作用

摘 要 目的： 研究松茸不同提取部位的体外抗肿瘤活性。 方法: 采用MTT法测定松茸乙醇提取物各部位及多糖部位对HepG-2细胞、Hela细胞和MCF-7细胞的抑制作用;采用流式细胞术检测多糖部位诱导HepG-2细胞和Hela细胞凋亡的作用。结果:松茸多糖部位体外对3种肿瘤细胞的IC₅₀分别为53.77μg·ml^-1(HepG-2)、40.04 μg·ml^-1(Hela)、100.65 μg·ml^-1(MCF-7),抑制作用均优于其他各部位,且对HepG-2细胞和Hela细胞抑制作用呈现良好的时间与浓度依赖性;松茸多糖部位能诱导HepG-2细胞和Hela细胞凋亡。结论: 松茸多糖部位能显著抑制HepG-2和Hela等肿瘤细胞的生长,具有诱导凋亡的作用,为松茸抗肿瘤的主要活性部位。     

常用中药单体及其制剂对CYP3A活性的体外抑制作用研究

摘 要 目的:研究常用中药单体及其制剂对CYP3A活性的抑制作用。方法: 在体外肝微粒体孵育体系中加入底物睾酮和不同浓度的中药单体或其制剂,以高效液相色谱法检测6β羟基睾酮的生成量,计算CYP3A酶活性。用GraphPad Prism v5.0软件,按照非线性回归计算出药物对CYP3A抑制作用的IC₅₀值。结果:不同中药单体及其制剂对CYP3A抑制作用的IC₅₀值如下：大黄酸IC₅₀值为36.74 μmol·L^-1;大黄素IC₅₀值为23.09 μmol·L^-1、芦荟大黄素IC₅₀值为23.91 μmol·L^-1,蜂胶IC₅₀值为60.3 μg·mL^-1;水飞蓟素胶囊IC₅₀值为24.5μg·mL^-1;丹参酮ⅡA磺酸钠注射液IC₅₀值为0.14%(v/v);五味子酯甲IC₅₀值为0.56 μmol·L^-1。结论: 大黄中的蒽醌、五味子酯甲、蜂胶、水飞蓟胶囊以及丹参酮ⅡA磺酸钠注射液在体外对鼠或人肝CYP3A酶具有抑制作用,临床上使用相关制剂时应密切关注其可能引起的药物相互作用。     

二茂铁杂环类化合物的合成及抗三阴性乳腺癌活性研究

目的 设计、合成杂环二茂铁衍生物,并研究其抗三阴性乳腺癌活性。方法 以二茂铁查耳酮为先导化合物,对其进行结构改造,合成了一系列含有杂环的二茂铁衍生物,并通过CCK8试剂盒测试化合物抗乳腺癌活性。结果 合成了28个二茂铁衍生物,其结构均通过¹H-NMR和MS加以确证。初步的生物活性测试结果表明,所合成的二茂铁衍生物对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞有较强的选择性和抑制活性,其中咪唑杂环化合物抗肿瘤活性强于相应的吡唑类和嘧啶化合物。尤其是28a[IC₅₀=（1.6±0.23）μmol·L^-1]对MDA-MB-231的抑制活性分别是先导化合物3[IC₅₀=（10.7±1.41）μmol·L^-1]和他莫昔芬[IC₅₀=（13.7±1.17）μmol·L^-1]的6和10倍,同时这些二茂铁衍生物对正常乳腺上皮细胞MCF-10A均没有毒性。结论 本研究为开发具有抗三阴性乳腺癌活性的化合物提供了信息和依据。     

羊蹄化学成分及其抗肿瘤活性研究

从羊蹄乙醇提取物分离鉴定了2个萘类化合物、5个蒽醌类化合物及其他4个化合物。萘类为2-甲氧基-6-乙酰基-7-甲基胡桃醌（1）、3-乙酰基-2-甲基-1,4,5-三羟基-2,3-环氧萘醌醇（2）、蒽醌类为大黄素甲醚（3）、大黄素（4）、大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷（5）、大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（6）、大黄酚（7）,以及壬酸十五醇酯（8）、β-胡萝卜苷（9）、5-甲氧基-7-羟基-1（3H）-苯骈呋喃酮（10）和没食子酸（11）。化合物1、8~10为首次从羊蹄中分离得到,1、8为首次从酸模属植物中分离得到;体外细胞试验表明,化合物1对人肝癌HepG-2细胞、子宫癌Hela细胞、肺癌A549细胞具有较强的抑制作用,其IC₅₀分别为2、1.8、4.6 μmol·L^-1,化合物2对人肝癌细胞HepG-2的IC₅₀为100 μmol·L^-1。     

羽扇豆醇对人高转移肝癌HCCLM3增殖影响的机制研究

摘 要 目的： 研究羽扇豆醇（Lupeol）在人高转移肝癌细胞系HCCLM3中的抗增殖作用机制。方法: 运用CCK 8法检测不同浓度Lupeol在12-48 h对HCCLM3细胞活力的影响及相关Caspase参与Lupeol（20～100 μmol·L^-1）诱导的细胞凋亡类型;运用Realtime PCR评价Lupeol对细胞内Caspase家族及Bcl 2相关基因的mRNA表达的影响;同时运用流式细胞术检测Lupeol对细胞周期分布的影响。结果:Lupeol在24～48 h能够抑制HCCLM3的细胞增殖,并呈现浓度依赖性,在24 h处理细胞的IC₅₀为93 μmol·L^-1;运用60～100 μmol·L^-1的Lupeol能够使HCCLM3细胞在G2/M期细胞数增加1倍;Lupeol能够活化Caspase通路,与对照组相比Lupeol处理后细胞内Caspase 3的mRNA表达量增加50%～150%,同时100 μmol·L^-1的Lupeol处理细胞后使胞内p53及Bax的mRNA表达量分别上调1倍以上,并显著降低Bcl 2及PARP的mRNA水平(P<0.05或P<0.01)。结论: Lupeol具有抑制肝癌细胞增殖能力,对肝癌预防及治疗可能具有一定的协同作用。     

HPLC梯度洗脱法测定葡萄糖酸依诺沙星注射液的有关物质

摘 要 目的： 建立梯度洗脱的HPLC法测定葡萄糖酸依诺沙星注射液中有关物质。方法: 色谱柱：Diamonsil^TM C₁₈(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相A：0.025 mol·L^-1磷酸溶液（三乙胺调pH3.0）甲醇-乙腈（80∶10∶10）,流动相B：0.025 mol·L^-1磷酸溶液（三乙胺调节pH3.0）-甲醇-乙腈（350∶325∶325）,梯度洗脱;流速：1.1 ml·min^-1;检测波长：269 nm、284 nm;进样量：20 μl;柱温：40℃。结果:在该色谱条件下,供试品稳定性及分离度良好。5-羟甲基糠醛在19.80 ng·ml^-1～19.80 μg·ml^-1范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 9),检出限为0.18 ng,平均回收率为99.68%,RSD为0.12%(n=9)。结论: 本法结果准确、灵敏度高、专属性强、重复性好,可用于葡萄糖酸依诺沙星注射液有关物质的检测。     

新型抗EV71病毒3C蛋白酶抑制药的设计、合成及其活性

摘 要 目的： 寻找抗EV71病毒新化合物。方法: 采用分子模拟技术,以EV71病毒3C蛋白酶活性口袋为靶,设计二肽、三肽,四肽,五肽和六肽等多个系列寡肽化合物,合成对接评分较高的寡肽化合物并进行抗EV71病毒活性筛选。结果: 五肽对接评分高于其他系列寡肽,显示五肽化合物与EV71 病毒3C蛋白酶有更强的键合力。研究中合成了两个评分较高的五肽化合物25和化合物16,体外抗EV71病毒活性实验显示化合物25活性较强（EC₅₀=1.36 μmol·L^-1,CC₅₀=211.94 μmol·L^-1, SI=155.84）,而化合物16则无明显活性。结论:五肽化合物25可作为抗EV71病毒新骨架开展进一步研究。     

银杏内酯B对血小板活化因子刺激的大鼠中性粒细胞功能的影响银杏内酯B对血小板活化因子刺激的大鼠中性粒细胞功能的影响

目的 研究银杏内酯B对血小板活化因子(PAF)刺激的大鼠中性粒细胞粘附、趋化及脱颗粒功能的影响。方法 从大鼠外周血分离中性粒细胞,用MTT比色法、Boyden小室法及β-葡萄糖苷酸酶释放法分别检测PAF诱导的粒细胞粘附、趋化及脱颗粒反应。结果10 μmol·L^-1 银杏内酯B可显著抑制中性粒细胞的粘附反应;1～1 000 nmol·L^-1 可剂量依赖性抑制10 nmol·L^-1 PAF诱发的粒细胞趋化反应,其IC₅₀为4.84 nmol·L^-1; 0.01～10 μmol·L^-1可抑制1 μmol·L^-1 PAF诱发的粒细胞释放β-葡糖苷酸酶,其IC₅₀为3.56 μmol·L^-1。结论银杏内酯B能够抑制PAF刺激的大鼠中性粒细胞粘附、趋化及脱颗粒反应。     

山胡椒内生真菌Trichoderma sp. SHJN1和Perenniporia sp. SHJG1的抗肿瘤活性成分研究

目的 从民族药山胡椒内生真菌Trichoderma sp.SHJN1和Perenniporia sp.SHJG1的代谢物中寻找活性先导化合物。方法 采用正相硅胶、反相硅胶、Sephadex LH-20凝胶及制备型HPLC等对Trichoderma sp.SHJN1和Perenniporia sp.SHJG1发酵物进行分离纯化，再通过NMR、ESI-MS等鉴定化合物结构，同时采用人乳腺癌细胞（MCF-7）和人肺癌细胞（A549）对这些化合物的抗肿瘤活性进行初步评价。结果 从2株内生真菌次级代谢产物中共分离鉴定了12个化合物：alantrypinone （1）、oryzalactam （2）、phomoindene A （3）、cis-gregatin B （4）、huaspenone B （5）、stigmasta-7，22-dien-3β，5α，6α-triol （6）、ergosterol （7）、1-deoxy-2-demethylviridiol （8）、viridiol （9）、trichodermamides A （10）、chromone （11）、对-羟基苯乙酸（12）。抗肿瘤活性评价结果显示，化合物3 抑制MCF-7细胞增殖活性IC₅₀为（62.9±1.02）μmol·L^-1[顺铂（cisplatin，DDP） IC₅₀为（30.1±1.67）μmol·L^-1]；化合物8 和9 抑制A549细胞增殖活性的IC₅₀分别为（34.6±1.57）μmol·L^-1和（44.9±1.74）μmol·L^-1[DDP IC₅₀为（20.6±1.42）μmol·L^-1]。结论 化合物3 ，8 和9 具有潜在抗肿瘤活性。     

查耳酮类化合物合成及抗乳腺癌活性研究

目的 设计、合成并筛选具有抗乳腺癌活性的查耳酮类化合物。方法 利用Claisen-Schmidt 羟醛缩合反应,合成了一系列的查耳酮类化合物,并通过MTT法测试化合物抗乳腺癌活性。结果 合成了36个查耳酮类化合物,其结构均通过¹H-NMR和¹³C-NMR进行了表征。初步生物活性结果表明大部分目标分子查耳酮对MCF-7有较强的抑制活性,对MDA-MB-231也展现出了中等的抑制活性,其中化合物27(IC₅₀=11.3 μmol·L^-1)对MCF-7的抑制活性是他莫昔芬的1.5倍,同时这些查尔酮类化合物对正常细胞均没有毒性。结论 本研究为开发具有抗乳腺癌活性的查耳酮类化合物提供了参考和依据。     

葎草中黄酮类成分的分离鉴定及对HepG2细胞的抑制作用

摘 要 目的： 对葎草中主要黄酮类化学成分进行提取分离,并检测其对HepG2细胞的抑制作用。方法: 乙醇提取葎草后,采用柱层析技术分离纯化提取的有效成分,并通过光谱法分析鉴定化合物结构。采用台盼蓝染色法检测葎草中木犀草苷（LGL）和大波斯菊苷（AGL）对HepG2细胞的抑制作用。结果: 葎草中的主要黄酮类成分为木犀草苷和大波斯菊苷。台盼蓝实验结果显示,当LGL和AGL的浓度由6.25 μmol·L^-1升到100.0 μmol·L^-1时,LGL对HepG2细胞增殖抑制率由28.8%上升至95.2%,AGL对HepG2细胞增殖抑制率由3.6%上升至21.3%。结论:木犀草苷对HepG2细胞生长具有明显的抑制作用,且呈剂量依赖性,而大波斯菊苷对HepG2细胞生长抑制作用不明显。     

葛根素和大豆甙元抑制[3H]氟硝西泮和体外大鼠脑膜的结合

从中药葛根中提取到两种苯二氮艹卓受体活性化合物:葛根素和大豆甙元。两种化合物在体外可抑制[3H]氟硝西泮和大鼠脑细胞膜的结合,IC₅₀值分别为18.46μmol·L^-1和15.43μmol·L^-1。大豆甙元还可抑制[³H]哌唑嗪和α1-肾上腺素受体的结合(IC₅₀值为89μmol·L^-1)。两种化合物的GABA比分别为1.11和1.12,提示两种黄酮化合物是苯二氮艹卓受体的拮抗剂或部分激动剂。Scatchardplot分析显示:两种化合物对[³H]氟硝西泮与膜结合的抑制作用是通过竞争性与非竞争性混合机制而实现的。     

阿魏酸衍生物的合成及其抗肿瘤活性研究

目的 设计、合成了一系列含有喹唑啉结构的阿魏酸衍生物，并对其抗肿瘤活性进行研究。方法 基于拼接原理，将阿魏酸与喹唑啉进行结合，并对喹唑啉6位进行修饰得到目标化合物，采用CCK-8法测试目标化合物对肺癌细胞A549的抗肿瘤活性，利用分子对接技术对目标化合物与表皮生长因子受体的结合模式进行模拟。结果 目标化合物的结构经HRMS(ESI)、¹H-NMR进行确证；体外抗肿瘤活性结果表明化合物11d、11f、12d和12g的IC₅₀低于阳性药吉非替尼，11c的IC₅₀值与吉非替尼相当。结论 化合物11d(IC₅₀=3.09 μmol·L^-1)对肺癌细胞A549抗肿瘤活性较强，值得深入研究。     

正交试验法优选狼毒大戟中活性成分的提取工艺

摘 要 目的：优选狼毒大戟中活性成分的最佳提取工艺。方法: 选用L9(3⁴ )正交试验设计,以提取物中岩大戟內酯B和狼毒乙素的含量为指标,考察乙醇浓度、溶剂用量、提取温度和提取时间对提取效果的影响。结果:最佳提取工艺为料液比1∶〖KG-*2〗10,加入浓度为70%的乙醇溶液,以70 ℃为提取温度,加热回流提取1 h。结论:优选得到的提取工艺稳定、合理、可行,操作简单,能耗低,大大提高了岩大戟内酯B和狼毒乙素的提取率。     

HPLC波长切换法测定氨咖黄敏胶囊4个成分的含量

摘 要 目的： 建立HPLC波长切换法同时测定氨咖黄敏胶囊中4个成分的含量。方法: 采用Agilent ZORBAX SB C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,以乙腈（A）-甲醇（B）-磷酸二氢铵溶液（取0.1 mol·L^-1磷酸二氢铵溶液1 000 ml ,加磷酸1 ml,混匀）（C）为流动相,梯度洗脱,流速1.0 ml·min^-1,柱温 35℃,变换波长时间为（0～9 min ：225 nm;9～38 min ：450 nm）。结果: 采用HPLC波长切换法测定氨咖黄敏胶囊4个成分的含量,线性范围分别为：对乙酰氨基酚24.680～394.900 μg·ml^-1（r=0.999 9）,马来酸氯苯那敏0.201～3.214 μg·ml^-1（r=0.999 9）,咖啡因1.129～18.070 μg·ml^-1（r=0.999 9）,胆红素0.010～0.165 μg·ml^-1（r=0.999 8）;平均回收率分别为：99.25% (RSD=0.46%), 99.29% (RSD=0.32%),99.49% (RSD=0.48%)及99.75% (RSD=0.55%)（n=6）。结论:该法简单,灵敏,准确,重复性好,可用于氨咖黄敏胶囊的含量测定。     

鱼藤素降低小鼠神经母细胞瘤细胞Neuro-2A存活率的实验研究

摘 要 目的： 研究鱼藤素对小鼠神经母细胞瘤细胞Neuro-2A (N2A)存活率及凋亡的影响。方法: N2A细胞以5×10⁴·ml^-1密度接种到细胞培养板中,1×10^-8 mol·L^-1鱼藤素处理后6,12,24,48,72 h等5个时间点上测定细胞存活率;加入鱼藤素0,1×10^-11,1×10^-10,1×10^-9,1×10^-8,1×10^-7,1×10^-6 mol·L^-1等7个不同浓度干预48 h后测定细胞存活率。2×10^-8 mol·L^-1鱼藤素干预24 h,测定细胞匀浆中caspase 3活力。结果:5×10⁴·ml^-1 N2A细胞以含10%胎牛血清DMEM培养基培养,第48 h达到细胞生长曲线的峰值。1×10^-8 mol·L^-1鱼藤素干预24～72 h,时间依赖性显著降低N2A细胞存活率(P<0.05);在鱼藤素干预48 h时间点上,1×10^-8～1×10^-6·mol·L^-1浓度范围内剂量依赖性可显著降低N2A细胞存活率(P<0.05),其IC₅₀=1.6×10^-8 mol·L^-1。鱼藤素作用于N2A细胞24 h可显著提高caspase 3活力,约达到对照组的5.6倍。结论: 鱼藤素可时间依赖性且剂量依赖性降低N2A细胞存活率,可能与增加caspase 3活力有关。     

HPLC梯度洗脱法测定泮托拉唑钠肠溶胶囊的有关物质

摘 要 目的： 建立泮托拉唑钠肠溶胶囊有关物质的测定方法。方法: 采用色谱柱Kromasil C₁₈（250 mm×4.6 mm,5 μm）,流动相以0.01 mol·L^-1磷酸氢二钾溶液( 用磷酸调节pH至7.0) 乙腈进行梯度洗脱,柱温为40℃,流速为1.0 ml·min^-1,检测波长为289 nm,进样量为20 μl。结果:泮托拉唑钠与降解产物均良好分离,最低检测限与最低定量限分别为0.16 ng和0.48 ng。结论: 本法简便、专属,灵敏度高,可用于泮托拉唑钠肠溶胶囊的有关物质测定。     

月腺大戟的化学成分及其乳腺癌细胞毒活性研究

目的 研究大戟科植物月腺大戟的化学成分及其对乳腺癌细胞毒活性。方法 采用多种色谱技术对化合物进行分离纯化,根据化合物的理化性质和光谱数据分析鉴定化合物的结构。采用噻唑蓝（MTT）比色法研究化合物对6种乳腺癌细胞的抑制活性。结果 月腺大戟植物中分离得到10个化合物,分别鉴定为：2,4-二羟基-6-甲氧基-3-甲酰基苯乙酮（1）;2,4-二羟基-6-甲氧基-3-甲基苯乙酮（2）;月腺大戟素A（3）;3,3''-乙酰基-4,4''-二甲氧基-2,2'',6,6''-四羟基二苯基甲烷（4）;岩大戟内酯B（5）;岩大戟内酯A（6）;亚油酸（7）;fischeria A（8）;β-香树脂醇乙酸酯（9）;单十九酸甘油酯（10）。乳腺癌细胞毒活性研究显示：化合物3对乳腺癌细胞MDA-MB-231、Sum149、MCF7、ZR-75-1、SKBr3、BT474的IC₅₀值分别为6.69、5.50、5.50、7.08、8.64、5.42 μmol/L。结论 化合物6、7、8、10为首次从该植物中分离得到;化合物3对乳腺癌细胞具有显著的抑制活性。     

从远志中分离鉴定出一种多巴胺受体活性化合物

从中药远志中提出一种多巴胺受体的配基,四氢非州防己胺。此化合物在体外可抑制[³H]SCH23390和[³H]螺哌隆与大鼠纹状体膜的结合,IC₅₀值分别为0.75±0.08μmol·L^-1和0.92±0.10μmol·L^-1。它在体外还能抑制[³H]哌唑嗪和大鼠脑皮质细胞膜结合(IC₅₀值为46μmol·L^-1),但不能改变[³H]QNB及[³H]muscimol对膜的结合。Scatchandplot分析显示此化合物对[³H]SCH23390和[³H]螺哌隆与膜结合的抑制作用是通过竞争性与非竞争性混合机制而实现的。     

吴茱萸碱对大鼠离体子宫平滑肌的舒张作用及机制研究

摘 要 目的：探讨吴茱萸碱对大鼠离体子宫平滑肌的舒张作用及其可能机制。方法: 以前列腺素F2α（PGF2α）诱导大鼠离体子宫平滑肌收缩,生物机能实验系统观察吴茱萸碱舒张离体子宫平滑肌的作用以及辣椒素受体阻断药capsazepine、磷脂酶Cβ阻断药U73122和钙调蛋白阻断药W 7对吴茱萸碱作用的影响,Prism 5.01非线型可变斜率回归计算半效浓度(EC50)。结果: 吴茱萸碱对PGF2α(EC50=9.60×10-11 mol·L^-1)收缩离体子宫平滑肌舒张作用的EC50为9.56×10 9 mol·L^-1。半抑制浓度(IC50)的capsazepine(6.30×10-11 mol·L^-1),U73122(2.57×10-11 mol·L^-1)和W 7(5.65×10-13 mol·L^-1)预舒张离体子宫平滑肌后,吴茱萸碱的EC50降低,量效曲线左移。EC50的大小顺序依次为：U73122 吴茱萸碱(1.95×10-12 mol·L^-1)＞capsazepine 吴茱萸碱(7.35×10-13 mol·L^-1)＞W 7 吴茱萸碱(8.88×10-15mol·L^-1)。结论: 吴茱萸碱对PGF2α收缩的离体子宫平滑肌有舒张作用,其作用机制可能与辣椒素受体1、磷脂酶Cβ和钙调蛋白有关。