卡泊芬净在体外对棘阿米巴生长的抑制作用

[目的]观察卡泊芬净在体外对棘阿米巴的抑制作用．[方法]用生理盐水作为空白对照,甲硝唑2．0g／L作为阳性对照,观察50,100,500mg／L质量浓度卡泊芬净在体外作用4,8,24,48,72h时观察棘阿米巴生长情况．[结果]与对照组比较,卡泊芬净质量浓度为50,100mg／L时棘阿米巴的生长差异不明显,质量浓度500mg／L、抑制时间4h开始棘阿米巴的生长明显得到抑制．[结论]卡泊芬净质量浓度为500mg／L时在体外对棘阿米巴的生长有抑制和杀伤作用,且效果优于甲硝唑．     

甲硝唑滴眼液与角膜接触镜多功能护理液体外对棘阿米巴原虫的杀伤效果

目的 了解6种角膜接触镜多功能护理液和加入甲硝唑滴眼液的护理液对自生生活性棘阿米巴原虫的杀伤效果.方法 将6种多功能护理液分别加入96孔培养板中,每种护理液占用48孔,其中24孔滴入棘阿米巴悬液,另外24孔先滴入甲硝唑滴眼液后再滴入棘阿米巴悬液,室温静置8 h后在倒置显微镜下观察棘阿米巴的形态变化和数量.将残存的棘阿米巴原虫分别在PYG培养液中培养5 d,观察其形态、活性与增殖能力的变化.结果 单纯护理液组1～6号棘阿米巴原虫检出率分别为0、8.3%、29.1%、41.7%、62.5%、79.2%,加入甲硝唑滴眼液后护理液1～6号棘阿米巴原虫检出率分别为0、0、4.2%、8.3%、16.7%、16.7%,3～6号护理液加与不加甲硝唑滴眼液杀伤棘阿米巴原虫的效果差异有统计学意义(X2=3.75～18.78,P＜0.05).残存的棘阿米巴原虫经培养后活力与增殖力减弱.结论 部分多功能护理液对棘阿米巴原虫的杀伤效果不佳,添加甲硝唑滴眼液后杀伤效果明显提高.     

棘阿米巴的分离及实验室培养

[目的 ]为棘阿米巴感染的病原诊断、形态学观察及进一步的研究建立棘阿米巴的实验室培养方法 .[方法 ]将含有阿米巴的 1g土壤置于敷有大肠杆菌的 15mg/L琼脂培养基上 ( 2 5℃ )培养 1周 ,取单个棘阿米巴包囊纯培养 ,以 0 1mol/L盐酸进行杀菌处理后 ,用PYG培养液进行无菌培养 .[结果 ]从第 3日起可在培养基上观察到滋养体 ,第 5日开始部分形成包囊 ,棘阿米巴滋养体形态呈不规则 ,具有特征性棘状伪足 ,颗粒状胞质内有较多空泡 .包囊具有双层囊壁 ,外囊皱缩 ,内囊呈四边形或波浪状 .[结论 ]建立了分离及培养棘阿米巴的实验方法     

伏立康唑对体外培养棘阿米巴增殖和形态表现的影响

目的：探讨伏立康唑对体外培养棘阿米巴的增殖和形态表现的影响,阐明伏立康唑对棘阿米巴滋养体和包囊的抑制和杀伤作用。方法：选取对数生长期的棘阿米巴原虫分为对照组和实验组（2.5 和25.0 mg·L^-1）,分别于药物作用后24、48、72和96 h收集各组虫体,计数虫体数量并绘制增殖曲线;光镜下观察棘阿米巴的形态表现、活力和贴壁情况;电镜下观察其超微结构。结果：与对照组比较,实验组棘阿米巴虫体数量减少（P<0.01）;光镜下实验组棘阿米巴形态变化明显,由不规则带棘状伪足的滋养体转化为圆形包囊,出现大量细胞碎片;电镜下实验组棘阿米巴的超微结构出现不同程度的破坏、坏死。结论：一定浓度伏立康唑能够有效抑制体外培养棘阿米巴的增殖并改变其形态甚至超微结构,对滋养体和包囊均具有明显杀伤作用。     

饮用水对角膜接触镜保存盒棘阿米巴污染的影响

[目的]观察饮用水的棘阿米巴污染情况,研究其与角膜接触镜保存盒棘阿米巴污染的关系.[方法]对延吉市居民饮用水棘阿米巴污染情况及大学生角膜接触镜保存盒和保存液的棘阿米巴污染情况进行调查.将103份饮用水和93份角膜接触镜保存液及保存盒擦拭液接种于有灭活大肠杆菌的无营养琼脂培养基中在28℃条件下培养1周,观察棘阿米巴生长情况.[结果]93份角膜接触镜保存盒擦拭液及保存液中有1份(1%)检出棘阿米巴污染,103份饮用水中有41份(40%)检出棘阿米巴污染.[结论]角膜接触镜保存液和保存盒棘阿米巴污染可能与不正确地使用饮用水清洗和保存角膜接触镜有关.     

TRAIL联合顺铂体外杀伤前列腺癌PC-3细胞株的实验研究

目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)联合化疗药物顺铂(DDP)对前列腺癌PC-3细胞株的体外杀伤作用. 方法 分别采用不同浓度的DDP(1.0μg/ml、5.0μg/ml、10.0μg/ml、20.0μg/ml、50.0μg/ml、100.0μg/ml)与TRAIL(10.0ng/ml、20.0ng/ml、50.0ng/ml、100.0ng/ml、200.0ng/ml)作用PC-3细胞株,24h后MTT法检测细胞的吸光度;DDP(5.0ng/m1)与TRAIL(50.0ng/ml)联合作用PC-3细胞4h、8h、12h、16h、20h、24h后,MTT法检测检测细胞的吸光度;并按细胞的抑制率(100%)=(1-实验组吸光度/阳性对照组吸光度)×100%计算DDP组、TRAIL组及两者联合应用对细胞的抑制率,比较组间细胞抑制率的差异. 结果 单独应用DDP或者TRAIL对PC-3细胞体外杀伤作用有浓度依赖性,浓度增高一定程度时对PC-3细胞的抑制作用会处于一个相对平台期;联合应用DDP+TRAIL组与单独应用同浓度的DDP及TRAIL组相比,其对PC-3细胞的体外杀伤作用明显增强,P<0.05,差异具有显著性意义;联合应用DDP与TRAIL对PC-3细胞的体外杀伤作用具有明显的时间依赖性. 结论 DDP能明显提高TRAIL对前列腺痛PC-3细胞株的杀伤作用,其机制与死亡受体DR5的表达上调有关.     

田基黄体外抗HBsAg和HBeAg作用的研究

目的观察田基黄在体外对HBsAg和HBeAg的抑制作用。方法将田基黄与等量的HBsAg或HBeAg阳性血清混匀。使混合后的浓度分别为6g／L、12g/L、24g/L、48g/L和96g/L;孵育8h、16h。采用ELISA法测定HBsAg或HBeAg的滴度,观察其对HBsAg或HBeAg的抑制作用。结果96g/L和48g/L浓度的田基黄在作用16h后对HBsAg或HBeAg具有明显的抑制作用（P〈0．01）.结论田基黄在体外有较强的抗HBsAg和HBeAg作用。     

小鼠棘阿米巴性脑炎模型的建立

[目的]建立小鼠棘阿米巴性脑炎模型.[方法]经鼻腔滴注给ICR小鼠接种赫氏棘阿米巴,感染后每天观察病程变化并记录死亡例数.取死亡小鼠一半的脑组织匀浆置于铺了灭活处理大肠杆菌的琼脂培养基上培养,观察棘阿米巴的生长情况;取另一半脑组织行HE染色观察病理学改变.[结果]棘阿米巴感染后1周开始可见死亡小鼠,实验组小鼠脑组织中可观察到棘阿米巴生长.脑组织HE染色观察可见棘阿米巴滋养体浸润,其周围有炎性细胞浸润.[结论]应用鼻腔滴注法成功建立了棘阿米巴性脑炎模型.     

激光和血卟啉对肿瘤细胞的杀伤作用研究

[目的]研究激光和血卟啉对肿瘤细胞的杀伤特点.[方法]体外应用K562和MCF7细胞观察不同浓度血卟啉和不同激光强度对细胞的杀伤特点及其激光束杀伤细胞的分布特性;体外培养S180肉瘤细胞接种健康小鼠建立荷瘤小鼠模型,观察静脉注射血卟啉0.5和12h后激光照射对肿瘤的杀伤作用.[结果]在固定的血卟啉浓度或激光强度下,随着激光强度或血卟啉浓度的增加,对肿瘤细胞的杀伤作用成线性作用增强(R2=0.9967,R2=0.9994),其中杀伤作用=血卟啉浓度(μg/ml)×激光能量(J);激光束对细胞的杀伤作用存在明显的不均匀性;荷瘤小鼠在给药后0.5 h给与激光治疗效果好于给药后12h.[结论]血卟啉浓度和激光剂量对肿瘤的杀伤作用存在线性量效关系且激光束对细胞杀伤作用存在明显的不均匀性,该结果为制定最佳的临床治疗方案提供了依据.     

生物荧光探剂对人食管癌细胞(ECa109)杀伤作用的观察

本文采用 ECal09细胞体外培养微孔板法,观察了廿余种生物荧光探剂对细胞的瞬时杀伤作用,结果表明其中21、22、23、24、25号药物在浓度100μg/ml 作用时间4h 时,杀伤率在88.4±10.0～99.0±1.0%之间。观察对细胞增殖的抑制作用,结果显示药物浓度100μg/ml作用时间3h 时,7、9、15号药物可使细胞数明显减少,形态改变,停止分裂。21、22、23、24、25号药物当浓度50μg/ml 时仍具抑制作用,尤以23、24号作用最强。对药物作用后的 ECa109细胞又进行了荧光显微镜观察,发现其中酯化衍生物能进入活细胞内,在荧光显微镜下显示强绿荧光,而部分损伤细胞,荧光强度明显减弱,死细胞则无荧光。     

阿奇霉素体外对赫氏棘阿米巴的抑制作用

棘阿米巴是广泛存在于自然环境中、自由生活的致病性阿米巴,可引起人体棘阿米巴性角膜炎(acanthamoeba keratitis,AK)[1],在艾滋病等免疫功能低下的人群中还会引起阿米巴性肉芽肿性脑炎、皮肤感染等[2-3].棘阿米巴原虫包括滋养体和包囊两个阶段,当周围环境不利于生长或受到药物作用时,滋养体就转化为包囊而增强对环境和药物的抵抗能力.因此,临床上有关棘阿米巴感染的治疗效果不理想.阿奇霉素为新型半合成大环内酯类抗生素,临床上用于多种细菌、支原体和衣原体感染,但尚未见用于有关棘阿米巴感染的报道.我们通过体外研究观察阿奇霉素对棘阿米巴的杀伤作用.     

小鼠睾丸体外培养模型研究邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯对睾酮合成及机制的影响

目的 探讨睾丸体外培养模型下邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)暴露对小鼠睾丸睾酮合成及基因表达的影响。 方法 用浸浴式一次性通气旋转装置体外培养小鼠睾丸组织。实验分为二甲基亚砜(DMSO)溶剂对照组和4个DEHP剂量染毒组(终浓度0.1、1.0、10.0、100.0 μmol/L)。分别培养24、48、72 h,每24 h通气一次。放射免疫法测定收集培养基中睾酮水平;Elisa法测定收集培养基中抑制素基因β_B基因(INHBβ)水平;实时荧光定量(QT)-PCR检测睾丸组织相关基因表达水平;HE染色观察睾丸组织病理学变化;免疫组化法检测睾丸组织相关蛋白表达。 结果 与DMSO溶剂对照组相比,DEHP一定浓度范围内,可使睾酮合成增加,但在DEHP 100.0 μmol/L染毒48、72 h,睾酮合成开始减少。Elisa测定INHBβ在DEHP 0.1 μmol/L、1.0 μmol/L染毒组合成增加,从DEHP 10.0 μmol/L开始合成减少。QT-PCR检测结果显示,与DMSO溶剂对照组相比,3β羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)、抗细胞色素P450 17α羟化酶(P450c17)、细胞色素P450侧链裂解酶(P450Scc)、波形蛋白(vimentin)mRNA表达下降,尤其是DEHP 100.0 μmol/L剂量组(P<0.05),INHBβ mRNA表达无显著变化。HE染色,各组睾丸组织未观察到明显病理学改变。免疫组化检测结果显示,与DMSO溶剂对照组相比,蛋白3β-HSD、P450c17、P450Scc表达增强,vimentin表达减弱,尤其是DEHP 10.0 μmol/L、100.0 μmol/L两个剂量染毒组。 结论 DEHP暴露对体外培养睾丸的睾酮合成有影响,其机制可能由于其影响了相关功能基因表达,进而对睾酮合成产生正负调控两种作用。     

游离脂肪酸对βTC6细胞葡萄糖刺激胰岛素分泌的影响及吡格列酮的干预作用

目的：观察游离脂肪酸（FFA）对体外培养的βTC6细胞胰岛素分泌功能的影响及盐酸吡格列酮作用的干预。方法：体外培养βTC6细胞,0.5mmol/LFFA分别干预1h、48h,放射免疫法检测胰岛素。不同浓度的吡格列酮（0.1、1.0、10.0μmol/L）与FFA共同干预βTC6细胞48h,放射免疫法检测胰岛素浓度。结果：FFA干预1h后,βTC6细胞的葡萄糖刺激的胰岛素分泌（GSIS）增加（P〈0.05）,FFA干预48h后,βTC6细胞的GSIS较干预前下降（P〈0.05）。FFA与吡格列酮共同干预时,随着吡格列酮浓度的升高,GSIS呈上升的趋势,1.0μmol/L和10.0μmol/吡格列酮与FFA共同干预组GSIS较FFA干预48h增加（P〈0.05）。结论：FFA对B细胞具有短期刺激作用及脂毒性作用,吡格列酮可以部分改善脂毒性作用。     

蒲元胃康胶囊对体外培养幽门螺旋杆菌的影响

①目的观察蒲元胃康胶囊煎煮液对体外培养幽门螺旋杆菌及小鼠小肠推进功能、自主活动的影响。②方法向幽门螺旋杆菌培养液中加入灭菌蒲元胃康胶囊煎煮液,培养４８ｈ,观察最低抑菌和最低杀菌浓度;用０．６,１．２,２．４ｇ／ｋｇ体质量蒲元胃康胶囊和６ｇ／ｋｇ体质量胃苏冲剂给小鼠灌胃,连用７ｄ．观察小鼠小肠炭末推进百分率;以同样剂量和给药方法,观察蒲元胃康胶囊对小鼠二甲苯性耳肿胀、醋酸性化学致痛及自主活动的影响。③结果蒲元胃康煎煮液对体外培养幽门螺旋杆菌最低抑菌浓度（ＭＩＣ）为１∶５１２,最低杀菌浓度（ＭＢＣ）为１∶５１２,蒲元胃康胶囊能明显增加小鼠小肠炭末推进百分率,并且具有镇痛和明显降低小鼠自主活动次数的作用。④结论蒲元胃康胶囊煎煮液对体外培养幽门螺旋杆菌有抑制和杀灭作用,同时有提高小肠推进功能和镇痛、安定作用     

仙鹤草水提液对食管癌Eca109细胞生长的抑制作用

目的:研究仙鹤草水提液对人食管癌Eca109细胞生长的抑制作用及其可能机制.方法:MTT法测定0g/L、2 g/L、4 g/L、8 g/L、16 g/L的仙鹤草水提液分别作用于Eca109细胞24 h、48 h、72 h,观察对Eca109细胞生长的抑制作用;采用免疫组织化学染色技术检测16 g/L仙鹤草水提液作用72 h对Eca109细胞Bcl-2、P53蛋白表达的影响.结果:MTT结果显示16 g/L仙鹤草水提液作用48 h和72 h后Eca109细胞生长明显受抑;免疫组化结果显示16 g/L仙鹤草水提液作用72 h后Eca109细胞内Bcl-2蛋白表达下调,P53蛋白表达上调.结论:仙鹤草水提液体外能诱导Eca109细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2蛋白表达及上调P53蛋白表达有关.     

地衣活性化合物C11H12O5体外抗肿瘤作用

目的 研究地衣活性化合物C11H12O5对人乳腺癌细胞株MCF-7、人肝癌细胞株HepG2及人肺腺癌细胞株A-549的体外抗癌作用, 观察其体外抗癌的剂量-效应关系和时间-效应关系.方法 采用体外细胞培养方式, 以MTT法检测OD值, 计算不同处理浓度和处理时间下肿瘤细胞的增殖抑制率.结果 化合物C11H12O5在剂量2、4、8、16和32μg/m L时, 对人乳腺癌细胞株MCF-7的抑制率分别为14.19%、13.84%、28.90%、59.50%、80.29%, IC50为12.43μg/m L;对人肝癌细胞株HepG2的抑制率分别为3.89%、11.09%、21.66%、46.27%、66.69%, IC50为18.88μg/m L;人肺腺癌细胞株A-549的抑制率分别为14.13%、11.09%、45.98%、86.19%、99.02%, IC50为6.21μg/m L.结论 地衣活性化合物C11H12O5对人乳腺癌细胞株MCF-7、人肝癌细胞株HepG2、人肺腺癌细胞株A-549均有显著体外抗肿瘤作用, 存在明显的剂量-效应关系, 其中A-549对该化合物最敏感.对A-549体外抑制作用时间-效应关系不明显.     

芹菜素对人CIK细胞杀伤结肠癌SW1116细胞的影响

目的观察芹菜素对人结肠癌细胞SW1116及CIK细胞的作用,探讨芹菜素对人CIK细胞杀伤结肠癌SW1116细胞的影响。方法不同浓度的芹菜素分别诱导人CIK细胞和结肠癌细胞SW1116细胞24、48、72 h,四甲基偶唑蓝(MTT)法检测上述两种细胞的生长。乳酸脱氢酶释放法检测CIK细胞对结肠癌SW1116细胞杀伤活性。结果体外培养10 d后,CIK细胞比例由3.12%增加到17.55%。与对照组比较,浓度1.17～4.7μmol/L芹菜素作用后的CIK细胞的增殖率显著提高(P<0.05),浓度37.5～600μmol/L的芹菜素对SW1116细胞生长抑制率显著提高(P<0.05),三个时间段比较均无明显差异。浓度2.35～9.4μmol/L的芹菜素作用48 h后,CIK细胞对结肠癌SW1116细胞的杀伤活性显著高于对照组(P<0.05)。结论芹菜素在一定浓度范围内可促进CIK细胞的生长,明显提高CIK细胞对SW1116细胞的杀伤作用,且抑制结肠癌SW1116细胞的生长。     

三种药物对体外人芽囊原虫的作用效果观察

目的了解甲硝唑、替硝唑和阿奇霉素对人芽囊原虫的作用效果。方法从门诊病人阳性粪便中分离出人芽囊原虫，接种到96孔无菌培养板中，实验组加入不同药物浓度的甲硝唑、替硝唑和阿奇霉素，对照组加入无菌生理盐水，应用细胞增殖实验方法检测三种药物对人芽囊原虫的抑制和杀灭作用。结果药物作用72h后，甲硝唑、替硝唑和阿奇霉素药物浓度为5μg／ml时相对抑制率分别为5．45％、16．13％和11．23％，光镜下原虫形态发生了改变。结论甲硝唑、替硝唑和阿奇霉素对体外人芽囊原虫的生长具有抑制和杀灭作用，替硝唑的作用效果最好     

雷公藤内酯醇对牛晶状体上皮细胞增殖细胞核抗原表达的影响

目的:观察雷公藤内酯醇(Triptolide,Tri)对体外培养的牛晶状体上皮细胞(bovine Lens epithelial cell,BLECs)增殖细胞核抗原的影响和对BLECs增殖的作用。方法:取第4代对数生长期的牛LECs,培养24h后,加入重组人表皮生长因子(Recombinant Human Epithelial Growth Factor,rhEGF)(终浓度50μg/L)和不同浓度的Tri(40,20,10μg/L),再分别作用6,12,24,48,72h后,采用流式细胞仪检测增殖细胞核抗原(PCNA)在LECs的阳性表达率及增殖抑制率。结果:不同浓度Tri(40～10μg/L)抑制处于增殖状态的LECs,PCNA表达率在6～72h内随浓度增高和作用时间延长有明显的下调,10μg/L组6hPCNA表达是(76.74±0.8),与同时间增殖对照组比较有显著性差异(P<0.05),12h(70.32±1.6),24h(61.96±2.1),48h(54.98±2.0),72h(42.15±1.6);20μg/L组6hPCNA表达是(68.58±3.2),12h(55.34±2.6),24h(49.59±1.6),48h(36.61±0.5),72h(30.00±1.1);40μg/L组6hPCNA表达是(60.96±1.2),12h(46.45±1.7),24h(32.10±0.5),48h(27.15±1.1),72h(19.16±1.5),以上各组与同时间增殖对照组比较均有非常显著性差异(P<0.01),呈明显的时间—效应关系和剂量—效应关系。结论:雷公藤内酯醇使牛晶状体上皮细胞内PCNA的表达率下降,改变细胞周期,从而抑制细胞增殖。