藤梨根提取物对人胃癌MKN-45细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨太白山藤梨根提取物(Radix Actinidiae extractive,RAE)在体外对胃癌MKN-45细胞增殖与凋亡的影响。方法:用0.01-100μg/ml浓度范围内的RAE和胃癌MKN-45细胞共培养24、48、72、96小时,采用MTT法检测RAE对MKN-45细胞增殖的影响;用流式细胞仪检测其对MKN-45细胞凋亡及细胞周期分布的影响;DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。结果:RAE在体外能够显著抑制胃癌MKN-45细胞的增殖,且呈现浓度和时间依赖性;RAE对胃癌细胞的作用表现为周期特异性,使细胞阻滞于G0/G1期,进一步诱导细胞凋亡。对照组凋亡率为0.53%,1μg/ml、10μg/ml、100μg/ml浓度的RAE干预胃癌细胞48小时后均出现凋亡峰,细胞凋亡率分别为3.27%、8.97%、12.6%。DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡,不同浓度RAE处理的细胞样品中均可看到梯形凋亡条带,并呈现浓度依赖性。结论:RAE在体外对人胃癌MKN-45细胞有显著的抑制细胞增殖及诱导细胞凋亡作用,其作用机制可能是使胃癌细胞周期阻滞于G0/G1期。     

藤梨根提取物对人胃癌MKN－45细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨太白山藤梨根提取物（Radix Actinidiae extractive,RAE）在体外对胃癌MKN-45细胞增殖与凋亡的影响。方法：用0．01—100μg／ml浓度范围内的RAE和胃癌MKN-45细胞共培养24、48、72、96小时,采用MTF法检测RAE对MKN-45细胞增殖的影响;用流式细胞仪检测其对MKN-45细胞凋亡及细胞周期分布的影响;DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。结果：RAE在体外能够显著抑制胃癌MKN-45细胞的增殖,且呈现浓度和时间依赖性;RAE对胃癌细胞的作用表现为周期特异性,使细胞阻滞于Go／G1期,进一步诱导细胞凋亡。对照组凋亡率为0．53％,1μg／ml、10μg／ml、100μg／ml浓度的RAE干预胃癌细胞48小时后均出现凋亡峰,细胞凋亡率分别为3．27％、8．97％、12．6％。DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡,不同浓度RAE处理的细胞样品中均可看到梯形凋亡条带,并呈现浓度依赖性。结论：RAE在体外对人胃癌MKN-45细胞有显著的抑制细胞增殖及诱导细胞凋亡作用,其作用机制可能是使胃癌细胞周期阻滞于G0／G1期。     

塞来昔布抑制人胃癌细胞株增殖及其机制的实验研究

目的:研究特异性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布对人胃癌细胞株MKN-45是否有抑制增殖、诱导凋亡作用并初步探讨其作用机制.方法:采用四氮唑盐比色法(MTT法)观察细胞增殖活力改变;流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期变化; 透射电镜观察细胞超微结构的改变; DNA提取行琼脂糖凝胶电泳观察DNA的"梯状"条带;免疫组化观察bcl-2基因和bax基因表达情况.结果:MTT法显示随着塞来昔布浓度和作用时间增加,细胞抑制率上升.人胃癌细胞株MKN-45在25、50、75、100μmol/L塞来昔布浓度下,24小时细胞抑制率分别为(16.39±1.430%、(23.55±0.11)%、(62.78±1.42)%、(87.53±0.27)%,48小时细胞抑制率分别为 (30.40±0.68)%、(46.18±1.80)%、(89.77±0.21)%、(97.94±0.18)%,(P＜0.05);流式细胞仪测定塞来昔布组出现凋亡峰,50、100μmol/ml浓度的塞来昔布干预24小时后,人胃癌细胞株MKN-45凋亡率分别为(25.5±2.66)%、(57.23±2.19)%;透射电镜观察显示塞来昔布组细胞呈凋亡表现,核固缩、碎裂,染色质浓缩,边集;塞来昔布(50μmol/L、100μmol/L)组培养48小时后DNA琼脂糖凝胶电泳可见典型的梯状条带,而对照组细胞DNA 未见梯状条带;免疫细胞化学法显示经塞来昔布干预后,凋亡蛋白Bax表达增加,而Bcl-2 表达减少,并随时间和药物浓度变化而明显.结论:塞来昔布呈剂量、时间依赖性地抑制MKN-45细胞增殖,促进MKN-45细胞凋亡.其机制之一可能是通过减少Bcl-2的表达、增加Bax的表达,从而启动细胞凋亡途径.     

紫杉醇对浆液性卵巢癌细胞HO-8910细胞凋亡的诱导作用

目的:探讨紫杉醇对体外培养的浆液性卵巢癌细胞HO-8910细胞凋亡的诱导作用。方法:体外培养卵巢癌细胞HO-8910,用浓度1×10-9 mol/L、1×10-8 mol/L、1×10-7 mol/L和1×10-6 mol/L的紫杉醇作用细胞12 h,24 h,48 h后,提取细胞DNA片段进行2.0 mg/L 琼脂糖凝胶电泳;消化HO-8910细胞并经碘化丙锭(IP)染色后,流式细胞仪(FCM)对细胞进行细胞周期分析;电子显微镜对紫杉醇作用后的HO-8910细胞进行形态学分析。结果:体外培养的卵巢癌HO-8910细胞经不同浓度的紫杉醇处理后,细胞生长明显受到抑制;于1×10-7 mol/L 紫杉醇作用48 h后可观察到细胞凋亡特异的DNA梯状电泳;流式细胞仪分析证实,细胞凋亡率达19.7 %;且电镜下可观察到典型的凋亡早期形态学改变。结论:卵巢癌HO-8910细胞对紫杉醇具有药物敏感性,紫杉醇对卵巢癌细胞的杀伤作用,是通过诱导细胞凋亡途径实现的。     

c-myc反义寡核苷酸对胃癌MKN-45细胞株生物学影响的研究

目的:观察c-myc反义寡核苷酸(ASODN)对胃癌MKN-45细胞株的生物学影响。方法:采用脂质体介导c-myc反义寡核苷酸转染人胃癌细胞系,用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)评价对细胞增殖的影响,免疫细胞化学ABC方法检测转染后c-myc蛋白的表达;流式细胞仪(FCM)观察细胞凋亡;RT-PCR及免疫组化方法检测c-myc基因表达变化。建立荷瘤小鼠模型,通过皮下瘤体内注射药物观察肿瘤体积和抑瘤率的变化。结果:c-myc基因反义寡核苷酸转染MKN-45细胞后,ASODN在0.25～4μmol/L的浓度范围内对MKN-45细胞均有不同程度的增殖抑制作用,作用48h后抑制率为11.2%～23.6%,且呈一定的剂量依赖性;FCM分析结果显示,转染后能诱导胃癌细胞凋亡,G0/G1期细胞增多;免疫细胞化学显示,c-myc蛋白水平明显降低,阳性表达率为(64.9±5.68)%;动物实验显示,ASODN可以抑制荷瘤小鼠肿瘤细胞的生长,肿瘤生长抑制率达41.5%。结论:c-myc基因反义寡核苷酸能明显抑制胃癌MKN-45细胞增殖、诱导细胞凋亡和下调c-myc蛋白水平。     

2,3′,4,4′-四甲氧基联苯对人宫颈癌HeLa细胞增殖的影响

目的 研究2,3′,4,4′-四甲氧基联苯(2,3′,4,4′-tetramethoxybiphenyl,TMBP)对HeLa细胞的体外增殖抑制作用、凋亡诱导作用以及对相关蛋白Caspase-3表达的影响.方法 用体外培养HeLa细胞与不同浓度TMBP作用,应用MTT法、荧光染色法、DNA凝胶电泳及Western blot法观察TMBP对细胞增殖抑制和诱导凋亡的作用.结果 TMBP可时间、剂量依赖性的抑制HeLa细胞生长.100M的TMBP处理24h的细胞,Hoechst 33258荧光染色后可见细胞形态学变化.不同浓度的TMBP处理细胞36h后,出现明显的DNA ladder.Western blot法检测发现Caspase-3酶原蛋白被剪切.结论 TMBP可抑制人宫颈癌HeLa细胞生长并诱导其凋亡,作用机制可能与Caspase-3的活化有关.     

hTERT基因反义核酸对顺铂诱导Raji细胞凋亡的影响

目的利用人类端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的反义寡核苷酸(ASODN)抑制Raji细胞端粒酶活性后,探讨顺铂对Raji细胞凋亡的影响.方法采用苔盼蓝拒染法观察hTERT ASODN与顺铂联合作用对Raji细胞系生长的影响;姬姆萨染色法观察凋亡细胞的形态变化;琼脂糖凝胶电泳及流式细胞仪分析细胞凋亡.结果hTERT ASODN作用于Raji细胞24 h再加入顺铂,对细胞抑制明显增强(P＜0.05).加入顺铂作用后48 h,细胞出现典型的凋亡形态学改变,经琼脂糖凝胶电泳即可见到DNA梯形条带.凋亡细胞百分率(25.24±1.58)%,与正义寡核苷酸与顺铂联合作用组、单用顺铂作用组比较有显著性差异(P＜0.01).结论hTERT基因反义寡核苷酸能促进顺铂诱导Raji细胞凋亡.     

维甲酸对胃癌细胞生长抑制及凋亡的诱导作用

目的:研究9-顺-维甲酸(9-cis-RA)对人胃低分化黏液腺癌细胞(MGC80-3)的作用。方法:MTT比色法观察9-cis-RA对MGC80-3细胞株的生长抑制作用,倒置显微镜观察细胞形态变化,Hoechst33342/PI双荧光染色和DNA凝胶电泳技术分析细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞周期的改变。结果:9-cis-RA可抑制MGC80-3细胞生长,半数抑制浓度(IC50)为8·07×10-6mol/L;显微镜观察可见细胞凋亡特征性改变;10-5mol/L浓度的9-cis-RA药物作用后96h可明显诱导MGC80-3细胞凋亡,琼脂糖凝胶电泳检测到DNA梯带;流式细胞仪检测肿瘤细胞出现典型亚二倍体凋亡小峰,G0/G1期细胞百分率明显升高,由对照组的(61·5±2·2)%增加到(74·3±4·7)%,F=149·795,P=0·000;同时处于S期的细胞数减少,由对照组的(26·3±1·3)%减少到(17·2±1·4)%,F=143·936,P=0·000。细胞周期出现G1期阻滞。结论:9-cis-RA对MGC80-3细胞有明显的生长抑制和诱导凋亡作用。     

紫杉醇对K562细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用

目的　探讨紫杉醇体外抑制 K5 6 2细胞株及诱导凋亡的作用。方法　体外培养 K 5 6 2白血病细胞株 ,以不同浓度紫杉醇处理 12～ 72小时后 ,用 MTT法测定细胞生长抑制作用 ,用细胞形态学观察和 DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡 ,用流式细胞仪 (FCM)检测细胞 DNA含量及细胞周期。结果　 K5 6 2细胞经紫杉醇处理后细胞生长受抑 ,对 K5 6 2细胞的半数抑制浓度 IC50 为 0 .84μg/ ml。经药物作用后可见细胞染色质浓聚和凋亡小体形成 ,FCM显示细胞凋亡率明显增加 ,但电泳检测未见 DNA裂解。结论　紫杉醇能抑制 K5 6 2细胞的生长 ,诱导细胞凋亡可能为其抗肿瘤作用机制之一     

表没食子儿茶素没食子酸酯诱导人胃癌BGC823细胞凋亡

[目的]观察表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）诱导人胃癌BGC823细胞凋亡的生物学效应及分子机制。[方法]通过MTT法检测EGCG对BGC823细胞生长的影响;用形态学观察、流式细胞术和DNA琼脂糖凝胶电泳研究EGCG诱导BGC823细胞凋亡。West-ern blot法检测EGCG处理后BGC823细胞NF-κB（p65）、Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白的表达。[结果]EGCG显著性抑制BGC823细胞的生长,呈浓度依赖性。EGCG处理后,光镜下细胞呈典型的凋亡形态学改变;流式细胞术分析表明不同浓度EGCG处理48h后,亚G1期细胞逐渐增加;EGCG（80μg/ml）作用48、72h后,DNA凝胶电泳出现典型梯形条带;Western blot表明EGCG处理48h后,NF-κB（p65）和Bcl-2蛋白表达下调,Bax和Caspase-3蛋白表达升高。[结论]EGCG具有诱导人胃癌BGC823细胞凋亡的作用,其机制可能与抑制NF-κB活化,导致Bax/Bcl-2比值上调,促进Caspase-3活化有关。     

吉西他滨诱导人肺癌细胞株SPC-A-1凋亡及对HMGA1基因表达的影响

[目的]探讨吉西他滨对人肺癌细胞株SPC-A-1增殖、凋亡及HMGA1基因表达的影响。[方法]采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法观察吉西他滨对人肺癌细胞株SPC-A—1增殖的抑制效应：利用DNA琼脂糖凝胶电泳法、细胞AO／EB荧光染色法及流式细胞术检测吉西他滨诱导肿瘤细胞凋亡的作用：采用逆转录一多聚酶链反应技术（RT-PCR）观察吉西他滨对人肺癌细胞株SPC-A-1凋亡相关基因HMGA1mRNA的影响。[结果]吉西他滨对人肺癌SPC-A-1细胞株增殖有抑制作用,其抑制效应具有时间和剂量依赖性;0．1μmol／L、1μmol／L和10μmol／L浓度吉西他滨处理细胞72h后,AO／EB荧光染色法计算细胞凋亡百分比分别是18．56％±1．04％、39．45％±0．83％、48．48％±0．85％（P〈0．05）;细胞经1μmol／L的吉西他滨处理72h后,DNA琼脂糖凝胶电泳法显示有特异性的DNA梯状条带;0．1μmol／L、1μmol／L和10μmol／L吉西他滨处理细胞72h后,凋亡率分别为20．65％±0．83％、38．53％±0．97％、51．48％±1．04％,对照组为5．19％±0．89％（P〈0．05）：随着吉西他滨浓度的增加．HM—GA1基因表达下调,各组与β-actin条带灰度比值分别为0．856±0．030、0．696±0．007、0．543±0．037,对照组为0．907±0．007（P〈0．05）。[结论]吉西他滨可抑制人肺癌SPC-A—1细胞株的生长,促进凋亡,可能的机制和下调HMGA1基因表达有关。     

鲨鱼软骨制剂抑癌作用与诱发胃癌细胞凋亡

 目的　研究鲨鱼软骨制剂 (SCP)对人胃癌细胞 (MGC80 - 3)生物学行为的影响并探讨其抗癌作用机制。方法　用不同浓度的 SCP加入体外培养的 MGC80 - 3细胞系中 ,用 MTT比色法 ,荧光显微镜 ,透射电子显微镜技术和琼脂糖凝胶电泳方法 ,观察 MGC80 - 3细胞形态学和生化方面的改变。结果　 SCP明显抑制 MGC80 - 3细胞生长 ,IC50 值为 1 mg/ ml;荧光显微镜下可见MGC80 - 3细胞在形态学上出现典型的核固缩、破裂等凋亡细胞的形态学改变 ;透射电镜下可见细胞核染色质凝集呈帽状分布于核膜下 ,凋亡细胞附近可见多个高电子密度的凋亡小体 ;琼脂糖凝胶电泳呈现典型的“梯状”(DNA ladder)带。结论　SCP诱导人胃癌细胞凋亡是其抑制肿瘤作用机制的重要方面之一。     

ATM在人胃癌细胞系的表达及其在细胞DNA损伤中的作用

目的：研究DNA损伤剂对ATM基因缺陷和正常的胃癌细胞系的作用机制。方法：Western—blot方法检测6株胃癌细胞系ATM蛋白的表达情况,并用DNA损伤剂顺铂作用于ATM基因缺陷的MKN28细胞系和ATM基因正常的BGC823细胞系,采用Western—blot、DNAladder、Hoechest33258／PI双荧光染色等方法观察凋亡相关激酶的表达和细胞的应答反应。结果：Western—blot显示,ATM蛋白在胃癌细胞系MGC803、MKN28、MKN45、SGC7901的表达水平显著低于BGC823和AGS细胞系,BGC823细胞在CDDP作用后,ATM蛋白表达水平升高,磷酸化chkl和chk2活性24小时后增强,而Cdc25C表达减少;MKN28细胞中G2期检测点蛋白ATM、P—chkl、P—chk2表达较低,Cdc25C表达较高,但在CDDP作用前后无明显变化。MKN28细胞在DNA损伤剂作用后出现显著凋亡,而BGC823细胞在DNA损伤剂作用48小时后未见显著凋亡。结论：ATM在细胞周期的多个环节均有凋控作用,特别是在细胞周期检测点和DNA损伤的修复中有重要的监视和启动作用。     

三氧化二砷诱导胃癌细胞凋亡及对相关基因表达的影响

目的 研究三氧化二砷（As2O3)诱导胃癌细胞的凋亡作用及对凋亡相关基因p53、c-myc、bcl-2、bcl-xl和bcl-xs表达的影响,探讨其诱导胃 癌凋亡的作用机制。方法 研究As2O3对胃癌细胞SGC－07901和MKN－45的诱导凋亡作用和对凋亡相关基因表达的影响。结果 As2O3作用于细胞可见典型的细胞凋亡。出现典型的亚二倍体“凋亡峰”。10μmol／LAs2O3的诱导胃癌细胞SGC－7901和MKN－45的凋亡率为13．8％和22．5％。细胞凋亡指数在1．42％－9．5％之间。As2O3作用后能明显下调SGC－7901细胞的bcl-2蛋白和mRNA的表达;对SGC－7901细胞的p53、c-myc、bcl-xl和bcl-xs蛋白的表达无影响。As2O3能促进MKN－45细胞的p53蛋白和mRNA的表达,对MKN－45细胞的bcl-2、c-myc、bcl-xl和bcl-xs基因表达无影响。结论 As2O3可通过不同途径诱导胃癌细胞凋亡,通过下调SGC－7901细胞的bcl-2的蛋白表达诱导其凋亡,通过上调p53表达诱导胃癌MKN－45细胞凋亡。     

K562细胞硫氧还蛋白还原酶活力测定及其抑制剂体外抗白血病的初步研究

 目的　探讨慢性粒细胞白血病（CML）细胞株K562中硫氧还蛋白还原酶（TrxR）的活力及其新型抑制剂乙烷硒啉（BBSKE）体外抗白血病作用。方法　应用胰岛素还原法检测K562细胞株及健康人骨髓单个核细胞中TrxR的活力。运用CCK-8法测定BBSKE对K562细胞的增殖抑制率。应用激光共聚焦显微镜、琼脂糖凝胶电泳以及Annexin Ⅴ-FITC／PI双标记流式细胞术观察BBSKE的抗白血病作用。结果　K562细胞中TrxR的活性明显高于健康人骨髓单个核细胞,10 μmol／L BBSKE与K562细胞作用24 h,激光共聚焦显微镜可见典型的细胞凋亡表现,琼脂糖凝胶电泳后可见典型的DNA“梯”条带出现,流式细胞术检测凋亡率为（10.28±2.74）%;10 μmol／L BBSKE对CML患者原代细胞有诱导凋亡的作用,凋亡率为（5.70±0.48）%。结论　慢性粒细胞白血病细胞株K562中TrxR活力高于健康人骨髓单个核细胞,BBSKE有抑制TrxR活力、抑制K562细胞增殖和诱导凋亡的作用,是治疗CML潜在的有效药物。     

PSCA表达及其单抗对PC-3M细胞生长与凋亡影响的观察

目的：观察前列腺干细胞抗原（prostate stem cell antigen,PscA）在人雄激素非依赖性前列腺癌PC-3M细胞的表达状况以及PSCA特异性单克隆抗体（PSCA—mAb）对PC-3M细胞生长和凋亡的影响。方法：采用细胞免疫化学方法检测PSCA在PC-3M的表达;以O～1．0／tg／mL浓度的PSCA—mAb作用PC-3M细胞0～96h,采用细胞生长曲线、四甲基噻唑氮蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术（flow cytometry,FCM）分析P＆3M细胞生长及凋亡的变化。结果：PSCA在PC-3M细胞膜和细胞质呈阳性表达;0．1／μg／mLPSCA—mAb作用时的细胞生长抑制率为（11．3±2．2）％,0．2／μg／mL为（27．5±3．4）％,0．4／μg／mL为（39．4±5．8）％,0．6μg／mL为（47．7±7．4）％,0．8μg／mL为（69．3±8．2）％,l.0〉g／mL为（70．8±9．3）％,细胞凋亡率为0．1／μg／mL为（8．7±1．4）％,0．2μg／mL为（12．3±2．8）％,0．4μg／mL为（21．6±3．2）％,0．6〉g／mL为（33．6±4．9）％,0．8g／mL为（41．4土5．8）％,1．0μg／mL为（42．3土6．1）％,均显著高于相应对照组细胞生长抑制率和凋亡率,P均〈0．01;PSCA-mAb作用PC-3M细胞24h的生长抑制率为（47．8士6．4）％,48h为（59．4±7．3）％,72h为（70．3±7．9）％,96h为（71．1±9．0）％,细胞凋亡率24h为（33．6±4．3）％,48h为（36．3±5．1）％,72h为（42．7±5．7）％,96h为（43．4±6．3）％,均高于相应的对照组细胞生长抑制率和凋亡率,P均〈O．01。MTT及FCM分析结果表明,PSCA-mAb在0．6μg／mL作用72h时,细胞生长抑审l率为（71．5±6．2）％,凋亡率为（44．4±5．5）％,均达到最大。结论：PSCA在人雄激素非依赖性前列腺癌PC-3M细胞呈阳性表达;PSCA-mAb能够时间一剂量依赖性地抑制PC一3M生长和诱导其凋亡。     

RIN1过表达对人胃腺癌MKN28细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响

[目的]研究RIN1过表达对人胃腺癌MKN28细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响。[方法]①采用Western blot法和免疫荧光法检测RIN1在MKN28细胞中表达;②采用Burd-U标记检测MKN28细胞高表达RIN1后细胞增殖能力变化;③采用Transwell法、细胞划痕法检测MKN28细胞高表达RIN1后细胞侵袭和迁移能力变化;④采用AV/PI染色法、Hoechst染色法检测MKN28细胞高表达RIN1后细胞凋亡情况。[结果]①RIN1在MKN28细胞中呈高表达,表达量是空载对照组的3.22倍,且主要分布在细胞质中;②Burd-U染色结果显示,RIN1高表达MKN28细胞的阳性率显著性升高,与空载对照组相比为75.6%±5.4%vs 25.6%±1.1%（P〈0.01）;③RIN1高表达MKN28细胞的侵袭和迁移能力明显增强,与空载对照组相比分别为122.0±7.0 vs 65.00±2.52（P〈0.01）和54.22%±3.45%vs 38.6%±2.45%（P〈0.01）;④RIN1高表达MKN28细胞株细胞凋亡数显著性减少,与空载对照组相比为21.63%±2.60%vs 8.07%±1.60%（P〈0.01）。[结论]RIN1过表达促进MKN28细胞增殖、侵袭和迁移,抑制MKN28细胞凋亡;RIN1可能是介导胃癌发生的癌基因之一。     

Modulation of anti-apoptosis by endogenous IAP expression in MKN45 human gastric cancer cells

BACKGROUND: This study was designed to clarify differences in apoptotic signal transduction between gastric cancer cells and leukemia cells. MATERIALS AND METHODS: In order to study apoptotic signal transduction of gastric cancer cells, MKN45 gastric cancer cells expressing the wild-type p53 gene and U937 myeloid leukemia cells expressing a mutated p53 gene were prepared. Cisplatin (CDDP) was used to induce apoptosis. We compared apoptotic signal transduction downstream to mitochondria between those two lines. RESULTS: In contrast to U937 cells, MKN45 gastric cancer cells revealed delayed response in release of mitochondrial cytochrome c into the cytosol following caspase 3 activation. In signal pathways downstream of caspase 3 cleavage, of the three substrates detected, poly (ADP-ribose) polymerase (PARP) and PKC (protein kinase c) delta were not activated in MKN45 cells compared with U937 cells, resulting in delayed appearance of DNA ladder formation during CDDP-induced apoptosis. MKN45 constitutively expressed cLAP1, regardless of CDDP treatment, compared with no expression in U937 Drug sensitivity testing showed that MKN45 was more resistant to CDDP than U937 cells. CONCLUSION: We demonstrated that there is a delayed mitochondrial response and incomplete activation of caspase 3 in MKN45 gastric cancer cells compared with U937 leukemia cells. In addition, there was endogenous cLAP1 expression in MKN45 cells, which may be a factor in the presumed anti-apoptotic system in these human gastric cancer cells.     

The evaluation of gastric cancer sensitivity to 5-FU/CDDP in terms of induction of apoptosis: time- and p53 expression-dependency of anti-cancer drugs

Clinical in vivo and in vitro studies have revealed pronounced gastric cancer activity using the combination of 5-fluorouracil (5-FU) and cisplatin (CDDP). In addition, the combination of 5-fluorouracil plus cisplatin (FP treatment) possesses synergistic cytotoxicity against gastric cancer. Sensitivity of two gastric cancer cell lines to anti-cancer drugs, 5-fluorouracil (5-FU) and/or cisplatinum (CDDP), was evaluated by use of either flow cytometric analysis (FACS) or morphological observation in terms of induction of apoptosis. In morphological observation, a new experimental technique was used in which cancer cells were distributed in thin collagen gel as one or two cell layers, and cultured with anti-cancer drugs. Thereafter, cells were stained with fluorescent Hoechst 33258 (Ho) and photographed, then stained with hematoxylin and eosin (H&E) and photographed again. Cell death patterns were determined by combining observations of Ho- and H&E-stained cells. While combined administration of 5-FU and CDDP did not induce apoptosis of MKN-28 (mutant-type p53), apoptotic cells were markedly observed in the case of MKN45 (wild-type p53). In addition, consecutive administration of CDDP for 3 h and 5-FU for 21 h effectively induced apoptosis of MKN45. These results indicated that the type of p53 expression in cancer cells could be a promising factor in predicting response to FP therapy and the administration of CDDP prior to 5-FU may be more effective in inducing apoptosis of gastric cancer cells with wild-type p53 expression. These data may provide evidence to support the idea that p53 expression is related to multidrug resistance (MDR) in FP therapy of gastric cancer cell lines.