TGF-β和BMP对胎兔颅骨成骨样细胞增殖和分化相互作用的实验研究

目的研究转化生长因子β(TGF-β)和骨形态发生蛋白(BMP)对成骨细胞增殖和分化的影响及其相互作用。方法取胎兔颅骨成骨样细胞进行体外培养，使用不同方法，加入TGF-β与BMP，在不同时间点检测其成骨样细胞增殖和分化的相互作用。结果TGF-β增加成骨样细胞DNA含量，抑制ALP活性、骨钙素的产生和矿化骨基质的形成。而BMP的作用相反。联合应用时，TGF-β减弱了BMP对成骨样细胞骨钙素产生和ALP活性的增强作用，BMP降低了TGF-β对成骨样细胞DNA合成的促进作用。在序惯性给药时，早期(9d)用BMP治疗并不影响随后加入的TGF-β对成骨样细胞ALP活性和基质钙化的抑制作用。而早期(10d)用TGF-β治疗却诱导了随后加入的BMP对成骨样细胞分化的促进作用。结论TGF-β促进成骨细胞增殖，BMP促进成骨细胞分化，它们在各自的不同时期发挥对成骨样细胞增殖和分化的影响。     

β转化生长因子在骨改建中的作用

β转化生长因子(TGF-β)在骨改建中起突出的作用。TGF-β刺激基质蛋白合成,对与骨形成及骨吸收有关的细胞有作用。TGF-β在骨及以骨为条件的介质中很丰富。根据骨细胞表型及其分化的阶段,TGF-β可以有多种作用。根据成骨细胞的类型,TGF-β可以引起分化或增殖。TGF-β抑制破骨细胞前身的形成,抑制骨吸收,高浓度时还抑制分离破骨细胞。TGF-β在骨吸收及骨形成之间起偶合作用。     

β-转化生长因子在骨愈合中作用的研究进展

β-转化生长因子（Transforming Growth Factor-β,TGF-β）是一类能促进细胞生长、分化及形态发生的超家族因子中的代表性成员。它在骨中的含量较高、并认为它同骨的形成密切相关。因此，对这一关系的研究有助于揭示TGF-β在骨生理过程中的作用，可能为骨愈合的治疗提供新的手段。     

血管内皮生长因子对骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的影响

[目的]探讨外源性血管内皮生长因子（VEGF）对人骨髓来源间充质干细胞（MSCs）增殖、向成软骨方向定向分化等生物学行为的影响及其机理，为MSCs构建组织工程化软骨奠定基础．[方法]取人骨髓来源间充质干细胞体外培养，将传代后的细胞分别置于含有800ng／ml和1600ng／ml VEGF的诱导培养基中进行培养，将具有促进细胞增殖分化及抑制多种炎性介质活性等多重生物学效应的TGF-β1以10ng／ml浓度配置无血清培养基诱导同组MSCs作阳性对照，观察细胞的增殖，分化。用Ⅱ型胶原免疫组化染色评价不同诱导因素下的软骨基质合成情况。[结果]所有细胞显示了良好的增殖能力，暴露于外源性血管内皮生长因子下的MSCs保持了良好的生长活性，并开始向软骨表型分化，与未添加诱导因子组细胞相比差异有显著性意义，不同浓度VEGF组的细胞合成软骨基质的能力无差异，但均不如阳性对照组。[结论]外源性VEGF具有诱导体外培养的人MSCs向软骨表型分化的能力，但与TGF-β1的诱导能力相比有差距。提示VEGF在MSCs来源的软骨修复过程中充当诱导信息提供者的角色。     

犬骨髓基质干细胞体外定向分化为软骨细胞

目的 体外诱导犬骨髓基质干细胞(BMSCs)定向分化为软骨细胞，探讨体外诱导成软骨的方法和条件。方法 自犬肋骨取骨髓2～3ml，体外行原代和传代培养扩增，顺序加入碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和转化生长因子β1(TGF-β1)，以培养瓶内较高细胞浓度培养，诱导BMSCs分化为软骨细胞。甲苯胺蓝、阿新蓝染色检测软骨基质的分泌，免疫组织化学染色检测软骨特异性Ⅱ型胶原表达。结果 诱导的软骨样细胞甲苯氨蓝异染性、阿新蓝染色阳性；Ⅱ型胶原免疫组织化学检测阳性。结论 应用bFGF和TGF-β1体外可以诱导犬BMSCs分化为软骨细胞，诱导的软骨细胞可作为软骨组织工程较理想的种子细胞。     

Smad蛋白家族与TGF—β信号转导

转化生长因子 β(transform ing growth factor- β,TGF-β)是一个对多种细胞具有刺激或抑制作用的多功能分子。活性 TGF-β是调节细胞分化的 TGF-β超家族成员之一 ,在调节细胞增殖、分化、迁移、粘附 ,细胞外基质形成 ,胚胎发育 ,创伤修复、骨的重建等方面发挥重要作用。TGF- β及其主要受体的结构、功能目前已基本阐明。近几年来 ,TGF-β的信号转导机制研究由于 Smad蛋白家族的发现而获得了迅速进展。本文主要对 SMAD及 TGF- β/ SMAD信号转导研究进展作一简介。1　 TGF- β的结构TGF-β亚家族至少由 6个结构相关的分子 (T…     

西罗莫司和环孢素A对Th17细胞和调节性T淋巴细胞分化影响的比较

目的 比较西罗莫司(SRL)和环孢素A(CsA)对体外诱导CD4+T淋巴细胞向Th17和调节性T淋巴细胞分化的影响.方法 使用抗CD3和抗CD28单克隆抗体(简称抗CD3单抗和抗CD28单抗)刺激CD4+T淋巴细胞,并在培养体系中分别加入转化生长因子β(TGF-β);TGF-β+白细胞介素6(IL-6);TGF-β+IL-6+SRL;TGF-β+IL-6+CsA.72 h后用流式细胞术检测细胞内Foxp3和IL-17的表达水平,观察CD4+T淋巴细胞的分化情况及SRL和CsA对CD4+T淋巴细胞体外分化的影响.结果 在经抗CD3单抗和抗CD28单抗刺激后,TGF-β可诱导Foxp3+细胞(调节性T淋巴细胞,Treg)的增殖与分化,而TGF-β+ID6可诱导Th17细胞的增殖与分化.在培养体系中加人SRL和CsA,均可使Th17细胞的增殖与分化减少;SRL可促进Treg的增殖与分化,而CsA抑制Treg的增殖与分化.结论 SRL可以促进CD4+T淋巴细胞向Treg增殖与分化,而抑制Th17细胞的增殖与分化;CsA既抑制Treg的增殖与分化,又抑制Th17细胞的增殖与分化.     

TGF-β对胎兔颅骨成骨样细胞增殖和分化影响的实验研究

目的：研究TGF-β对成骨细胞增殖和分化的影响。方法：利用已建立的胎兔颅骨成骨样细胞体外模型，采用MTT法、流式细胞仪检测、骨钙素、胶原和钙含量测定来分析不同浓度的TGF-β对成骨样细胞增殖和分化的影响。结果：低浓度TGF-β（0.010.1ng/ml）促进成骨样细胞增殖，使S期细胞增加，但高浓度TGF-β（110ng/ml）抑制成骨样细胞的增殖。在TGF-β0.01-1ng/ml范围内，与对照组相比，TGF-β各治疗组的骨钙素、胶原和钙含量明显增加，并随TGF-β浓度增加而增加，到TGF-β10ng/ml时，增加不再明显。结论：TGF-β对成骨细胞的增殖表现为双相作用，低浓度促进，高浓度时抑制，可明显促进成骨细胞的分化，并呈一定的量效关系，其有效剂量为0.011ng/ml。     

成骨细胞中雌激素受体β介导雌激素对IL-6和TGF-β的调控作用

[目的]利用小鼠胚胎成骨细胞前体细胞MC3T3-E1为细胞模型,研究雌激素与IL-6和TGF-β三者在成骨细胞分化中的具体作用机制,进一步在细胞水平探讨雌激素受体ERβ在雌激素功能中的作用。[方法]17β-雌二醇处理MC3T3-E1细胞后检测碱性磷酸酶活性、骨桥蛋白、骨保护素、骨钙素等成骨细胞相关因子的表达。同时17β-雌二醇处理后检测细胞因子IL-6和TGF-β的表达是否改变。然后分别用IL-6和TGF-β单独处理后检测MC3T3-E1细胞成骨分化相关因子和破骨细胞分化因子的表达。进一步利用siRNA干扰ERβ的表达,检测在17β-雌二醇诱导下IL-6和TGF-β表达的改变。[结果]雌激素能够诱导MC3T3-E1细胞碱性磷酸酶活性、骨桥蛋白、骨保护素、骨钙素的生成。雌激素处理后细胞因子IL-6的生成受到抑制,而TGF-β的表达上调。干扰了ERβ后,17β-雌二醇处理MC3T3-E1细胞后白细胞介素6及TGF-βmRNA的表达无明显改变。[结论]雌激素通过ERβ,调控IL-6和TGF-β的表达,进而调节成骨细胞的功能和骨的形成。     

转化生长因子-β、碱性成纤维生长因子和血小板衍生生长因子在大鼠骨折愈合中的表达

目的观察转化生长因子-β（transforminggrowthfactor-β,TGF-β）、碱性成纤维生长因子（basicfi—broblastgrowthfactor,bFGF）和血小板衍生生长因子（platelet—derivedgrowthfactor,PDGF）在大鼠骨折愈合中的表达和分布情况。方法选用SD大鼠制作胫骨骨折模型,伤后不同时期处死取材,分别进行组织学和TGF-β、bFGF和PDGF的免疫组化染色观察。结果（1）伤后3d开始形成原始骨痂。I周时肉芽组织中的间质细胞开始分化为软骨细胞,软骨形成后再进行软骨内化骨。4周时形成连接骨折端的桥接骨痂。（2）伤后早期血肿中炎性细胞表达bF-GF和PDGF。伤后1周骨膜增殖细胞、肉芽组织中的成纤维细胞、内皮细胞、骨端骨细胞以及原始骨痂成骨细胞表达TGF-β、bFGF和PDGF。伤后2周软骨细胞表达TGF-β、bFGF和PDGF。结论TGF-β、bFGF和PDGF有各自的表达和分布特点,并共同调解骨原细胞的增殖和成骨细胞、软骨细胞的分化,最终完成骨折愈合。     

ERK途径在转化生长因子-β3诱导骨髓基质干细胞向软骨分化过程中的作用

目的 观察丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号途径中细胞外信号调节的激酶ERK途径在转化生长因子(TGF)-β3诱导的骨髓基质干细胞(MSCs)向软骨分化的过程中的作用.方法 在体外培养大鼠的MSCs,在含有TGF-β3的诱导培养基中向软骨方向诱导分化,在诱导分化的不同时间点,分别用Western blot测定ERK1/2的表达和磷酸化.确定ERK1/2在分化过程中的变化,同时测定在分化的过程中MSCs与软骨分化相关基因的表达,之后用ERK1/2的抑制剂U0126,观察ERK1/2信号传导通路阻断后对软骨分化的影响.结果 在TGF-β3促使MSCs向软骨方向分化的过程中,ERK1/2参与了细胞的分化和相关软骨基质的合成,ERK1/2抑制剂的使用削弱和减缓了上述过程的发生.结论 ERK1/2途径在软骨分化过程中起重要作用.     

前列腺癌细胞通过转化生长因子（TGF-β）及其受体Ⅱ（TGF-βRⅡ）调节骨髓上皮细胞的生长和分化

对前列腺癌骨转移的潜在机制了解很少。研究表明高转移前列腺癌细胞系（PC-3）抑制骨髓内皮细胞（HBME-1）在胶原凝胶中的生长，诱导它们分化，该过程与体内的血管形成相似。利用cDNA微点阵分析签定PC-3细胞影响HBME-1的相关细胞因子；用细胞因子及其中和抗体研究并确定特异的血管生成因子，例如转化生长因子β（TGF-β）；用实时定量RT—PCR测定TGF—β的RNA，酶联免疫吸附测定前列腺癌细胞系的蛋白质产物；使用TGF-β中和抗体的条件培养基进行实验来分析前列腺痛细胞对TGF-β的激活作用。     

TGF-β1在胆管损伤修复过程中的作用

转化生长因子β1（TGF-β1）与胆管损伤的修复以及过度修复致瘢痕增生关系密切,是一种调节细胞增殖、分化及细胞间基质表达的一类多功能细胞因子,在伤口愈合早期可刺激细胞外基质的产生,抑制蛋白酶和基质酶的活性,从而促进细胞外基质沉积,促进前胶原蛋白Ⅰ和纤维素结合素的合成,为胶原蛋白的蓄积提供网络,增加整合体和其他膜受体,加强细胞与基质的相互作用,有利于炎性细胞向创伤部位移动,诱导肉芽组织形成,促进组织损伤后的修复,但如果过度作用或持续表达,将会导致瘢痕形成。对TGF-β蛋白家族组成、信号转导机制和TGF-β1在创伤愈合、瘢痕形成中的作用及其进展作一综述。     

TGF-β3真核表达载体转染骨髓基质干细胞促进其向软骨分化的实验研究

[目的]构建生长转化因子(TGF-β3)含绿色加强绿色荧光蛋白的真核表达质粒pIRES2-EGFP-TGF-β3,然后用该质粒转染骨髓基质干细胞(Marrow stromal cells,MSCs)并促进MSCs向软骨方向分化。[方法]用RT-PCR法从大鼠的胚胎组织中提取TGF-β3的DNA全长,首先连接到pMDl8-T载体,扩增、纯化后经测序公司测序确定插入目的基因序列的正确性,然后再用带有EcoRI、PstI内切酶的引物,从pMD18-T将TGF-β3的全长再次扩增出来,最后将带有酶切位点的TGF-β3的全长插入到真核质粒pIRES2-EGFP中,构建真核表达载体pIRES2-EGFP-TGF-β3。体外培养大鼠MSCs,应用阳性脂质体将pIRES2-EGFP-TGF-β3转染到MSCs中,24h后在荧光显微镜下观察蛋白的表达,流式检测MSCs的转染效率;Westen Blot检测TGF-β3蛋白的表达;之后进行MSCs细胞球团培养,分别于第7、14、21、28d检测软骨基质胶原Ⅱ,胶原X和Aggrecan的表达,同时用甲苯胺蓝检测蛋白聚糖(proteoglycan)的表达。[结果]测序结果和酶切鉴定结果表明成功的构建了pIRES2-EGFP-TGF-β3质粒,转染MSCs之后,转染的效率达30%。Westen Blot结果表明TGF-β3获得了成功的表达,在接下来的细胞球团培养过程中,转染后MSCs被成功诱导向软骨分化。     

孕激素调节人成骨细胞转化生长因子-β1、β2的表达

目的研究孕激素对正常成人成骨细胞转化生长因子(TGF)-β1、TGF-β2表达的调节作用,探讨孕激素治疗绝经后骨质疏松症(OP)的作用机制.方法鉴定成人成骨细胞(hOB),测定碱性磷酸酶(ALP)活性、骨钙素分泌,Van Gieson氏苦味酸酸性复红染色法进行Ⅰ型胶原染色.hOB用孕酮干预.Northern杂交、ELISA分别检测hOB TGF-β1、TGF-β2 mRNA和蛋白质分泌.结果观察到hOB分泌的ALP活性为(74.3±4.7)mU/mg蛋白,培养上清液骨钙素含量为(3.84±0.39)ng/ml蛋白,Ⅰ型胶原染色呈红色.观察到孕酮增强hOB TGF-β1、TGF-β2 mRNA表达呈剂量依赖性(P＜0.001);10-9mol/L孕酮诱导12～24 h促进TGF-β1、TGF-β2 mRNA表达,呈时间依从性.孕酮促进hOB TGF-β1、TGF-β2蛋白质分泌呈剂量依赖性(P＜0.001);10-9mol/L孕酮诱导12～24 h促进TGF-β1、TGF-β2蛋白质分泌,呈时间依从性.结论孕激素可能通过诱导成骨细胞TGF-β1、TGF-β2表达,促进成骨细胞增殖与分化,增强成骨功能及骨基质合成,促进骨形成.     

腺病毒介导TGF-β1基因感染兔软骨细胞修复关节软骨缺损

[目的]探讨腺病毒介导转化生长因子β1（TGF-β1）基因感染对兔关节软骨细胞增殖和分化的影响，观察其构建组织工程化软骨对关节软骨缺损的修复质量。[方法]以腺病毒Adeno-X^TM为基因转移载体，制备携带TGF-β1基因的高滴度腺病毒液感染兔关节软骨细胞，通过光电镜、免疫细胞化学、Northern杂交及流式细胞仪分析细胞周期等方法观察软骨细胞形态、增殖及外源基因的表达。再将其与骨基质明胶（BMG）支架相复合移植修复同种异体关节软骨缺损。[结果]腺病毒感染软骨细胞后免疫细胞化学染色可检测出外源基因编码蛋白的表达，Northern杂交显示Ⅱ型胶原表达水平增加，TGF-β1的表达显著增加了原代软骨细胞S／G2／M期细胞比例。将其复合于骨基质明胶上，经组织染色和电镜观察可见软骨细胞贴附于BMG表面和孔隙内大量增殖，在体移植修复实验组新生组织为透明软骨，关节面平整，软骨下骨完全重建再生。[结论]软骨细胞经携带TGF-β1基因的腺病毒感染后，能促进软骨细胞的增殖，可用于制备组织工程化软骨。     

TGF-β信号转导机制研究进展

TGF-β(transforming growth factor-β)是人体内一个十分重要的细胞因子，与许多生理和病理过程有关。在整形外科领域，创面愈合过程中TGF-β发挥着非常重要的作用，其表达与功能异常与瘢痕增生有密切的关系。TGF-β调控许多细胞的生物学行为，包括细胞增殖、识别、凋亡、特殊分化等。TGF-β发挥其作用时，首先与细胞表面的TGF-β Ⅱ、Ⅰ     

TGF-β1/Smad3信号转导通路与创伤后瘢痕形成

目的对近年TGF-β1/Smad3信号转导通路与创伤后瘢痕形成的相关研究作一综述。方法广泛查阅国内外近年有关TGF-β1/Smad3信号转导通路及与创伤后瘢痕形成的文献,并进行综述。结果 TGF-β1是纤维化疾病的重要影响因子,通过TGF-β1/Smad3信号通路转导产生其生物学效应。该途径受多种因子调控并在细胞及分子水平与其他信号通路串话。该途径参与创伤后早期炎性反应、创面愈合及后期病理性瘢痕的形成。在分子水平干预转导途径的各个环节,可以影响纤维化及细胞外基质沉着的进程。结论 TGF-β1/Smad3信号转导途径是影响创伤后瘢痕形成及细胞外基质沉着的重要途径。对该途径进行深入研究,可为临床促进创面的愈合及病理性瘢痕的防治奠定理论基础。     

TGF-β/Smads信号通路与前列腺癌侵袭转移

转化生长因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）是一种具有多种生物学活性的多肽类细胞因子，对细胞的增殖、分化、凋亡等过程起重要的调节作用。研究已发现TGF-β在前列腺癌的发生、发展中具有双重作用。其可抑制正常前列腺上皮和早期前列腺癌细胞的增殖，而在进展期则可促进肿瘤的侵袭转移。TGF-β可通过促血管新生、抑制宿主免疫系统、诱导细胞自身及周围基质微环境改变等多种机制参与前列腺癌的进展。Smads蛋白是TGF-β作用的唯一底物，是将TGF-β信号从细胞外转导到细胞核内的关键步骤。     

腺病毒介导TGF-β1及BMP-7基因共表达感染骨髓基质干细胞修复兔关节软骨缺损

目的探讨腺病毒介导转化生长因子β1(TGF-β1)及骨形成蛋白7(BMP-7)基因共表达感染对骨髓基质干细胞(MSCs)增殖和定向分化的影响,观察其构建组织工程化软骨对关节软骨缺损的修复质量和疗效。方法以腺病毒AdEasy为基因转移载体,制备携带TGF-β1和BMP-7基因的高滴度腺病毒感染兔MSCs,利用外源性基因编码的生长因子诱导其表达软骨细胞表型,通过免疫细胞化学、原位杂交、RT-PCR及己糖醛酸水平检测等方法鉴定。再将其与骨基质明胶(BMG)支架相复合体外构建组织工程化软骨,移植修复同种异体兔关节软骨缺损并进行形态学和组织学观察及修复结果分析。结果腺病毒感染MSCs后免疫细胞化学染色和RT-PCR可检测出外源基因及其编码蛋白的表达,通过原位杂交可检测出Ⅱ型胶原蛋白基因表达,细胞培养液中己糖醛酸水平明显升高。将其复合于骨基质明胶上,经组织染色和电镜观察可见前体软骨细胞贴附于BMG表面和孔隙内大量增殖,在体移植修复实验组新生组织为类透明软骨,修复效果明显优于各对照组。结论MSCs经携带TGF-β1和BMP-7基因的腺病毒感染后,体外能向软骨细胞作定向分化,可用于制备组织工程化软骨,使提高关节软骨缺损的修复质量成为可能。