大鼠肝脏冷灌注保存中肝细胞凋亡及其调控基因的研究

目的 通过检测凋亡细胞计数及凋亡相关基因bax和Fas的表达，探讨细胞凋亡及其相关基因在冷灌注保存大鼠肝脏组织中的作用。方法 本研究采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的末端标记法（TUNEL法）及RT-PCR，按照供肝保存时间30、60、90、120、180、300min分为6组进行凋亡细胞计数及其相关基因的检测。结果 不同保存时间大鼠肝脏组织中均有凋亡细胞发生，随着时间延长，凋亡细胞计数呈进行性增加趋势；未检测到bcl-2的表达，但可明显检测到bax和Fas基因的表达。结论 在冷灌注保存肝组织中，细胞凋亡是早期细胞死亡的主要原因之一。细胞凋亡的发生可能与bax和Fas的高表达以及bcl-2的低表达有关。     

大鼠肝脏移植再灌注细胞凋亡与凋亡调控的研究

目的：探讨大鼠肝脏组织再灌注后细胞凋亡及其调控机制。方法：SD大鼠132只，进行原位肝移植，取灌注保存及再灌注后的肝脏组织。采用脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法和逆转录多聚酶链反应，检测肝组织中的凋亡细胞及bcl-2 mRNA、bax mRNA和Fas mRNA。结果：肝移植再灌注后，大鼠肝脏组织标本中凋亡细胞尤其明显。肝脏冷灌注保存180min时，未检测到凋亡抑制基因bcl-2的表达，但可明显检测到bax和Fas基因的表达。移植再灌注后，可检测到bax和Fas基因及凋亡抑制基因bcl-2。结论：移植再灌注肝组织中，细胞凋亡是早期细胞死亡的重要原因，其发生可能与凋亡诱导基因bax和Fas的高表达以及凋亡抑制基因bcl-2的低表达有关。     

缺血后处理对鼠肝缺血再灌注损伤细胞凋亡及Bcl-2和Bax表达的影响

目的观察缺血后处理对肝脏缺血再灌注损伤后早期肝组织细胞凋亡及Bcl-2和Bax表达的影响,并探讨其肝保护的机制。方法建立大鼠肝脏缺血再灌注模型,54只雄性SD大鼠随机分为假手术组（SO组）、缺血再灌注组（IR组）和缺血后处理组（IPC组）。以缺血再灌注前反复多次的短暂预再灌注及停灌注作为后处理。分别于再灌注后1、3、6h测定血清肝酶,SP免疫组化法测定肝脏Bcl-2和Bax表达水平,TUNEL法检测肝组织中凋亡细胞。结果与SO组相比,IR组肝酶活性升高,Bcl-2表达降低,Bax表达升高并可见明显的细胞凋亡;而IPC组同IR组相比,肝酶活性降低,Bcl-2表达升高,Bax表达降低,凋亡指数（AI）下降,差异均有统计学意义。结论缺血后处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤有明显的保护作用,可通过促进Bcl-2表达及抑制Bax表达而拮抗肝细胞凋亡,从而减轻肝脏缺血再灌注损伤。     

肝缺血再灌注细胞凋亡现象及Fas蛋白、PCNA 、p53、bcl-2 mRNA表达

目的：探讨肝缺血再灌注肝细胞凋亡发生的时空分布、基因表达特点及意义。方法：在观察SD大鼠（n=40）肝缺血0,30,45,60min再灌注3,6,24h存活率及病理形态基础上,重点观察大鼠（n=100)全肝血流阻断30min再灌注0,0.5,1,3,6,12,24,48,72,96h凋亡细胞分布（原位末端标记术,TUNEL）,G0-G1期细胞、凋亡细胞、增殖细胞指数分布（流式细胞术）,肝细胞显微及超微结构（光镜、电镜技术）,Fas蛋白、PCNA蛋白（免疫组化）及p53、bcl-2基因mRNA表达（原位杂交）。结果：缺血30min组多见细胞凋亡,细胞应答反应主要为三期：①急性期：再灌注0.5h Fas蛋白首先在血管周围高表达;②亚急期（3-24h):TUNEL阳性细胞在血管周围高分布,并向周围扩展;病理形态可见严重变性、细胞皱缩、细胞增殖三种变化;G1期细胞数大量减少,凋亡峰逐渐升高,12h后出现增殖峰,相关基因表达增强;③恢复早期（24-96h)：G1期细胞指数回升,凋亡峰和增殖峰持续并缓慢下降;相关基因表达陆续减弱。结论：肝缺血30min再灌注期机体可能通过下述基因调控途径影响细胞损伤应答反应：①Fas死亡基因与bcl-2存活基因的双重调控;②细胞凋亡与增殖双重调控;③经p53基因实现的细胞周期调控。     

银杏叶提取物预处理对大鼠移植肝的保护作用

目的探讨银杏叶提取物（EGb）预处理对大鼠移植肝的保护作用。方法采用Kamada’s袖套法建立大鼠原位肝移植模型。将大鼠随机分为银杏叶提取物预处理（EGb）组、生理盐水对照（NS）组和假手术组（SO）。分别于供肝再灌注后2，6，24h处死动物，检测血清ALT和AST；肝组织组织学检查，TUNEL法检测细胞凋亡；RT—PCR检测肝组织TNF—α mRNA及Bcl-2 mRNA的表达。结果供肝再灌注2，6，24h，EGb组血清ALT水平及细胞凋亡指数均明显低于生NS组（P〈0．01）。血清AST水平在供肝再灌注2，6h时明显低于NS组（P〈0．01）。供肝再灌注后2，6h时EGb组TNF—α mRNA的表达明显低NS组（P〈0．05）。供肝再灌注后2，6，24hEGb组Bcl-2 mRNA的表达明显高于NS组（P〈0．01）。结论经EGb预处理供可减轻大鼠肝移植供肝的缺血／再灌注损伤和细胞凋亡，影响TNF—α mRNA，Bcl-2 mRNA的表达，对供肝有保护作用。     

三七总皂甙对大鼠移植肝缺血再灌注损伤的保护作用

摘要：目的:探讨三七总皂甙预处理对大鼠移植肝缺血再灌注损伤的保护作用。方法:建立大鼠原位肝移植模型，然后分为三七预处理组（P组）、对照组（N组）和假手术组（S组）3组，取血检查ALT，AST；用免疫组化法检测caspase-3和TNF-α的表达，TUNEL法检测肝细胞凋亡，行肝组织病理检查。结果:鼠肝移植模型N组的血ALT，AST数值、肝细胞中caspase-3和TNF-α的表达及肝细胞的凋亡均明显高于P组，差异均有显著意义（P<0.05）。结论:肝细胞凋亡加重移植肝缺血再灌注损伤，三七总皂甙预处理对大鼠肝移植缺血再灌注损伤有保护作用。     

银杏叶提取物预处理对大鼠移植肝的保护作用

目的: 探讨银杏叶提取物（EGb）预处理对大鼠移植肝的保护作用。方法:采用Kamada′s 袖套法建立大鼠原位肝移植模型。将大鼠随机分为银杏叶提取物预处理（EGb）组、生理盐水对照(NS)组和假手术组(SO)。分别于供肝再灌注后2，6，24h处死动物，检测血清ALT和AST；肝组织组织学检查，TUNEL法检测细胞凋亡；RT-PCR检测肝组织TNF-αmRNA及Bcl-2mRNA的表达。结果:供肝再灌注2，6，24h，EGb组血清ALT水平及细胞凋亡指数均明显低于生NS组（P<0.01）。血清AST水平在供肝再灌注2，6h时明显低于NS组（P<0.01）。供肝再灌注后2，6h时EGb组TNF-αmRNA的表达明显低NS组（P<0.05）。供肝再灌注后2，6，24hEGb组Bcl-2mRNA的表达明显高于NS组（P<0.01）。结论:经EGb预处理供可减轻大鼠肝移植供肝的缺血/再灌注损伤和细胞凋亡，影响TNF-αmRNA,Bcl-2mRNA的表达，对供肝有保护作用。     

阿魏酸钠抑制缺血性急性肾衰竭肾小管上皮细胞凋亡

目的：探讨阿魏酸钠对缺血性急性肾衰竭大鼠肾脏小管上皮细胞凋亡的影响及机制。方法：将雄性SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、阿魏酸钠冶疗组、SOD冶疗对照组。观察肾组织病理改变；免疫组化、RT—PCR检测Bax，Bcl-2的表达；采用原位DNAg-断末端标记法（TUNEL）检测肾组织细胞凋亡。结果：大鼠肾脏缺血45min再灌注24h，大鼠肾功能损害明显，肾脏组织病理学改变明显，肾小管上皮细胞凋亡明显，肾组织Bax蛋白、mRNA的表达上调，Bcl-2蛋白、mRNA的表达下调。应用阿魏酸钠干预后。改变与上述相反。结论：在缺血性急性肾衰竭中，阿魏酸钠减轻肾脏缺血再灌注桶伤．减轻肾脏细胞凋亡．缓解肾功能桶害．奠作用至少部分通过调控凋亡相关基因Bcl-2家族基因的表达。     

缺血后处理对大鼠移植肝细胞凋亡的影响

目的：观察缺血后处理(ischemic postconditioning，Post-con)对大鼠移植肝细胞凋亡及 Caspase-3蛋白表 达的影响，探讨在体内条件下，缺血后处理对大鼠移植肝脏凋亡的保护机制。方法：采用 SD 大鼠原位肝移植动物模 型，供肝冷保存时间100min，无肝期控制于21min 内。48只雄性健康 SD 大鼠随机分为2组。对照组受体大鼠供肝 切除前及移植后无特殊处理；后处理组供肝植入后完全再灌注前，给予多次短暂复灌、复停作为缺血后处理。各组受 体一半(n=6) 于再灌注后2h 留取血液，检测血清肝功能指标和 TNF-α水平，另一半(n=6) 于再灌注后6h 取肝脏， 采用电镜、缺口末端标记法检测肝脏凋亡细胞，利用光学显微镜进行细胞计数；免疫组织化学检测 Caspase-3基因蛋 白表达，利用图像分析系统测量平均灰度值进行定量分析。结果：后处理组血清 AST、ALT、LDH 和 TNF-α含量均明 显低于对照组(P＜0． 05) ；组织的病理改变也明显轻于对照组；对照组凋亡细胞数为(112． 25±11． 73) 个/视野，后处理组 为(70． 36±18． 52) 个/视野，两组之间有显著差异(P＜0． 01) ；后处理组 Caspase-3蛋白表达明显下降(P＜0． 01) 。结论：缺 血后处理能够减轻再灌注损伤对移植肝的损害，明显抑制移植肝脏的细胞凋亡。这一作用可能是通过降低炎性细胞 因子水平，从而减少 Caspase-3蛋白表达而实现。     

谷氨酰胺对大鼠肝门阻断后肝脏Bcl-2 mRNA表达的影响及其保护作用

目的：探讨谷氨酰胺（L—glutamine，GIn）对肝门阻断后肝脏细胞凋亡及Bcl-2mRNA表达的影响。方法：雄性Wistar大鼠，随机分为假手术组（A组）、对照组（B组）和实验组（C组）3组。采用Pringle’s法进行肝门阳断，持续35min，肝门阻断前C组大鼠腹腔注射Gin。分别于肝门阻断前及再灌注后2,4和24h，每组各选取10只大鼠，测定血清ALT、AST、乳酸脱氢酶（lactic dehydrogenase，LDH）含量；检测肝组织谷胱甘肽（glutathione，GSH）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）的含量；采用原位末端脱氧核苷酸转移酶法（terminal deoxynucleotidy ltransferase—mediated DUTP nick end labeling method，TUNEL）检测肝脏细胞凋亡，并计算凋亡指数（apoptosic index，AD；采用RT—PCR方法检测肝Bcl-2mRNA的表达。结果：与B组相比，再灌注后C组肝组织中MDA含量下降（P〈0．05），而GSH水平增高（P〈0．05）；血清ALT、AST、LDH含量及Al均明显刚氏（P〈0．05）；Bcl-2mRNA表达则显著增强（P〈0．05）。结论：Gin能够减轻过刘匕损伤，上调肝脏Bcl-2 mRNA的表达，抑8UST细胞凋亡，从而在肝门阻断中发挥保护作用。     

丹参对肝脏保存再灌注时Bcl-2、 Bax表达和肝细胞凋亡的影响

目的探讨丹参对肝脏保存再灌注时Bcl-2、Bax表达和肝细胞凋亡的作用.方法建立离体大鼠肝脏保存再灌注模型,分别采用流式细胞仪和原位末端标记(TUNEL)技术,观察Bcl-2、Bax表达和肝细胞凋亡以及丹参对上述指标的影响.结果丹参组保存16、24、32     

Segmental heterogeneity in Bcl-2, Bcl-xL and Bax expression in rat tubular epithelium after ischemia-reperfusion

Summary: Aims: Studies in rats with bilateral clamping of renal arteries showed transient Bcl‐2, Bcl‐xL and Bax expression in renal tubular epithelium following ischemia‐reperfusion. However, current data on the preferential localization of specific mRNAs or proteins are limited because gene expression was not analysed at segmental level. This study analyses the mRNA expression of Bcl‐2, Bcl‐xL and Bax in four segments of proximal and distal tubules localized in the renal cortex and outer medulla in rat kidneys with bilateral renal clamping for 30 min and seven reperfusion times versus control animals without clamp. Methods: Proximal convoluted tubule (PCT), distal convoluted tubule (DCT), proximal straight tubule (PST) and medullary thick ascending limb (MTAL) were obtained by manual microdissection. RT‐PCR was used to analyse mRNA expression at segmental level. Results: Proximal convoluted tubule and MTAL showed early, persistent and balanced up‐regulation of Bcl‐2, Bcl‐xL and Bax, while PST and DCT revealed only Bcl‐2 and Bcl‐xL, when only Bax was detected in PST. DCT expressed Bcl‐xL initially, and persistent Bcl‐2 later. Conclusion: These patterns suggest a heterogeneous apoptosis regulatory response in rat renal tubules after ischemia‐reperfusion, independently of cortical or medullary location. This heterogeneity of the expression patterns of Bcl‐2 genes could explain the different susceptibility to undergo apoptosis, the different threshold to ischemic damage and the different adaptive capacity to injury among these tubular segments.     

凋亡相关蛋白及粘附分子在大鼠心脏急性排斥反应中的作用

目的 探讨凋亡及凋亡相关因子Fas／FasL、Bcl-2/Bax，粘附分子ICAM-1、P-selectin、E-selectin、L-Selectin、PECAM-1和VCAM-1在心脏移植中的表达及意义。方法 用免疫组织化学方法和原位杂交法，检测大鼠心脏移植后不同时间(1、3、5、7d)、Fas／FasL、ICAM-1、P-selectin、L-selectin、E-selectin蛋白、Bcl-2/Bax、VCAM-1、PECAM-1 mRNA的表达情况。结果 随着移植后天数的增加，细胞凋亡增多，Fas／FasL、Bax表达增加，粘附分子ICAM-1、VCAM-1、PECAM-1表达也增加，Selectin表达较少。正常大鼠肝脏未见细胞凋亡及粘附分子的表达。结论 细胞凋亡和粘附分子ICAM-1、VCAM-1、PECAM-1表达增加可能与心脏移植后急性排斥反应有关，而Fas／FasL、Bax可能促进了凋亡的发生。     

丹参对大鼠供肝冷保存缺血再灌注损伤中肝细胞凋亡的影响

目的 探讨丹参对大鼠原位肝移植供肝冷保存缺血再灌注损伤中肝细胞凋亡的影响.方法 将40只SD大鼠分为对照组、实验组及假手术组,建立原位肝移植模型.供肝灌注冷保存以4℃乳酸林格氏液为基液,实验组加丹参注射液(60 ml/L),对照组不加丹参.保存5 h后植入受体.移植后6 h处死大鼠取样,检测血浆中ALT、AST水平;采用TUNEL法检测移植术后肝细胞凋亡情况;流式细胞仪检测凋亡相关基因Bcl-2、FasL蛋白的表达;光镜下观察移植肝脏病理形态学的改变.结果 再灌注后实验组ALT、AST显著低于对照组.与对照组比较,实验组肝细胞凋亡指数明显下降(F=133.802,P<0.05);肝组织中Bcl-2蛋白表达增加(F=91.063,P<0.01);FasL蛋白表达无明显变化(F=1.329,P>0.05);实验组与对照组比较肝组织形态学的再灌注损害程度明显减轻.结论 丹参可通过促进抑制凋亡基因Bcl-2蛋白的表达来抑制冷保存再灌注导致的肝细胞凋亡,对原位肝移植肝脏的缺血再灌注损伤有保护作用.     

The effect of alpha-melanocyte-stimulating hormone on renal tubular cell apoptosis and tubulointerstitial fibrosis in cyclosporine A nephrotoxicity

BACKGROUND: The pathogenesis of cyclosporine A (CsA)-induced nephrotoxicity has been known to be secondary to hemodynamic changes, but increasing evidence indicates that CsA has a direct toxicity to renal tubular cells, leading to their apoptosis and tubulointerstitial fibrosis. This study evaluated the mechanism for CsA-induced tubular cell apoptosis, tubulointerstitial fibrosis and its associated proteins, and the therapeutic effects of alpha-melanocyte-stimulating hormone (MSH) on them. METHODS: Male Sprague-Dawley rats fed with a low-sodium diet were divided into three treatment groups: group A (vehicle-injected group), group B (CsA 15 mg/kg-injected group), and group C(CsA+alpha-MSH-injected group). After 42 days, creatinine clearance; blood CsA level; apoptosis; inflammation and tubulointerstitial fibrosis in renal tissue; and the expression of Bax, Bcl2, Fas, FasL, and transforming growth factor (TGF)-beta protein were determined. RESULTS: CsA-induced tubular cell apoptosis; cellular infiltration; and increase of Fas, Bax, TGF-beta protein expression with significant tubulointerstitial fibrosis, and reduced Bcl2 protein expression. alpha-MSH treatment prevented the Bax and TGF-beta protein increase and induced Bcl2 protein increase, together with reduction of apoptosis, inflammation, and tubulointerstitial fibrosis. CONCLUSIONS: These findings suggest that chronic CsA nephrotoxicity is related to Bax and Bcl2-related apoptosis pathways, and that alpha-MSH can attenuate the CsA-induced tubulointerstitial fibrosis as well as tubular cell apoptosis.     

完全性葡萄胎绒毛凋亡与基因表达的相关研究

目的 :探讨完全性葡萄胎绒毛凋亡、增殖活性与 Bcl-2、Bax、Fas、Fas-L及增殖细胞核抗原 ( PCNA)基因表达的相关性。方法 :收集正常早孕绒毛标本及近一年归档的完全性葡萄胎绒毛蜡块 ,原位末端标记法 ( TUNEL)进行细胞凋亡的组织学检测 ,免疫组织化学法测定 Bcl-2、Bax、Fas、Fas-L、PCNA的分布与含量 ,原位杂交法测定 Fas、Fas-Lm RNA的分布与含量。结果 :正常早孕绒毛有少量凋亡细胞 ,主要分布于合体滋养细胞 ,Bcl-2、PCNA蛋白仅在细胞滋养细胞表达且含量丰富 ,Bax、Fas、Fas-L蛋白在合体滋养细胞表达且含量低下。完全性葡萄胎绒毛合体滋养细胞凋亡较正常早孕明显增多 ,Fas、Fas-L 蛋白及其 m RNA不仅在合体滋养细胞而且在细胞滋养细胞表达均明显增强 ,Bcl-2、Bax蛋白在两种细胞中表达也增强 ;PCNA蛋白仅见于细胞滋养细胞 ,含量丰富。结论 :完全性葡萄胎绒毛凋亡细胞增多 ,主要经 Fas/ Fas-L 转录与翻译水平介导 ,表现为高凋亡与高增殖共存现象 ,可能与其无控生长的特性相关。     

肢体缺血-再灌注损伤时细胞凋亡的变化及阿魏酸钠保护作用

目的：阐明氧自由基与细胞凋亡、Bcl-2和Bax蛋白表达在大鼠肢体缺血及再灌注不同时相中的变化规律和相互关系，探讨阿魏酸钠对肢体缺血-再灌注损伤的影响。方法：采用大鼠股动脉夹闭模型，设立缺血组、对照组及阿魏酸钠组，测定肌肉组织中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性，检测肌肉组织中Bcl-2和Bax蛋白表达的变化，观察细胞凋亡现象。结果：随着再灌注时间的延长(24h内)，氧自由基水平、凋亡指数(AI)及Bax蛋白表达水平进行性升高，阿魏酸钠组三者水平低于对照组；Bcl-2蛋白在短时间内升高，而后逐渐下降，阿魏酸钠组Bcl-2蛋白表达水平的峰值低于对照组，下降也较对照组平缓，至再灌注24h时，阿魏酸钠组Bcl-2蛋白表达水平已高于对照组；氧自由基、Al之间呈显著正相关，氧自由基、Al与Bcl-2／Bax比值呈显著负相关。结论：氧自由基及细胞凋亡同时参与肢体缺血-再灌注损伤，氧自由基可能通过调节Bcl-2／Bax两蛋白的比例关系而发挥其促进细胞凋亡的作用，阿魏酸钠可以有效清除自由基，抑制细胞凋亡，减轻肢体再灌注损伤。     

反义K-ras基因对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨反义K-ras癌基因对胰腺癌细胞增殖和凋亡及Fas/FasL、Bcl-2、Bax表达的影响.方法 将重组逆转录病毒载体pLXSN转染包装细胞PT-67,获得重组逆转录病毒.在细胞和动物水平将该重组逆转录病毒分别感染PC-3和BxPC-3胰腺癌细胞,经G418筛选获得稳定细胞系,应用MTT、流式细胞仪和免疫组化法分别研究其增殖、凋亡及其相关基因表达情况.结果 成功制备含反义K-ras基因的重组逆转录病毒.感染含反义K-ras基因重组病毒后,胰腺癌PC-3细胞和移植瘤(有K-ras基因第12密码子点突变GGT→GTT)增殖受到抑制,G<,0/1>期细胞增加而S期细胞明显减少,细胞凋亡增加.免疫组化显示含反义K-ras癌基因逆转录病毒感染后PC-3细胞Bax/Bcl-2比值升高,Fas表达上调.结论 反义K-ras基因可使胰腺癌细胞及移植瘤增殖受到抑制,并可通过上调Bax/Bcl一2比值和(或)促进Fas表达诱导细胞凋亡.