壮肾排毒方抗肾纤维化的机制研究

目的：探讨壮肾排毒方抗肾纤维化的作用机制,为临床应用提供实验依据。方法：48只雄性wistar大鼠随机分为正常组、模型组、壮肾排毒方组、福辛普利组各12R。除正常组外其余各组均行5／6肾切除手术制作慢性肾衰竭（CRF）动物模型。于造模第2次手术后1周开始干预,干预12周后取血清及肾组织标本,全自动生化分析仪检测血清尿素氮（BUN）、血肌酐（Scr）。免疫组织化学方法检测肾组织血肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、转化生长因子-β1（TGF-β1）的表达。结果：模型组、壮肾排毒方组、福辛普利组大鼠血清BUN、Scr肾脏组织TNF-α、TGF-β1与正常组比较有显著性差异（P〈0．01）;模型组血清BUN、Scr及肾脏组织TNF-α、TGF-β1与壮肾排毒方组、福辛普利组比较有显著性差异（P〈0．05,P〈0．01）。结论：壮肾排毒方是治疗CKF的有效方剂,其机理可能与抑制大鼠肾组织内TNF-α及TGF-β1的表达有关,可抑制参与肾纤维化的细胞增殖和转分化,延缓肾纤维化的进展,从而达到治疗CRF的目的。     

排毒双调综合疗法对肾切除CRF大鼠血浆AngⅡ和ALD影响的实验研究

目的:观察排毒双调综合疗法对5/6肾切除CRF模型大鼠的治疗作用及对血浆AngⅡ和ALD含量的影响。方法:64只SD大鼠采用两步法造成5/6肾切除CRF模型后,再随机分为病理模型对照组、灌胃组、灌肠组、针刺组、综合疗法组即灌胃+灌肠+针刺。观察治疗前后大鼠的一般状况,测定治疗后Hb、BUN、Scr及血浆Ang、ALD含量;用光镜法观察肾脏病理改变。结果:单纯中药灌胃、灌肠、针刺及综合疗法对CRF模型大鼠都有一定的治疗作用,但综合疗法比单一疗法在改善一般状况,升高Hb、降低血BUN、Scr等方面为优;可显著降低CRF模型大鼠血浆Ang和ALD水平,对肾脏的病理损害有明显的保护作用。结论:排毒双调综合疗法能明显改善5/6肾切除CRF模型大鼠的一般状况,纠正贫血,改善肾功能;降低血浆Ang和ALD水平,减轻肾脏的病变程度,延缓大鼠慢性肾衰进程,且较单一疗法为佳。     

排毒双调综合疗法对大鼠CRF细胞免疫影响的实验研究

目的：观察排毒双调综合疗法对大鼠慢性肾功能衰竭的治疗作用及其可能的作用机理。方法：采用大鼠5／6肾切除动物模型，分为正常组、病理组、灌胃组、灌胃加灌肠及综合疗法组，观察各组大鼠治疗前后一般状况、血红蛋白（HGb）、肾功能（BUN、Scr）、外周血白细胞CD3^＋T细胞、CD4^＋T细胞、CD1^＋T细胞的百分比及CD1^＋／CD8^＋的比值的变化。结果：综合疗法组较病理组、灌胃组、灌胃加灌肠组外周血白细胞中CD3^＋T细胞、CD4^＋T细胞、CD4^＋／CD8^＋比例均明显升高（P〈0．05），BUN、Scr亦较前述三组明显改善（P〈0．01或P〈0．05），一般状况及贫血改善情况等也好于前述三组。结论：排毒双调综合疗法能减轻并延缓慢性肾衰竭的病理进展，且较单纯灌胃、灌胃加灌肠疗效为佳，其作用机理可能与改善细胞免疫功能有关。     

补肾祛毒汤对肾衰竭大鼠TGF-β_1/Smads信号转导通路的影响

正补肾祛毒汤是本院肾内科治疗慢性肾功能衰竭的经验方,全方以健脾益肾、祛湿泄浊、活血化瘀为法,临床治疗效验颇丰。在临床观察及前期实验中发现其具有明显改善肾功能,抑制TGF-β1表达,促进肾组织肝细胞生长因子的表达,抗肾间质纤维化,延缓肾脏病进展的作用[1]。本实验运用本方干预慢性肾功能衰竭大鼠,观察补肾祛毒汤对大鼠TGF-β1/Smads信号转导通路的影响机制。1材料与方法     

益肾灵对抗马兜铃酸肾病肾组织TGF-β1 TIMP-1 CTGFmRNA表达的研究

目的：探讨益肾灵对马兜铃酸肾病肾组织TGF-β1、CTGF、TIMP-1mRNA表达的影响。方法：采用RT-PCR方法分析肾组织中TGF-β1、TIMP-1、CTGFmRNA表达。结果：本研究的大鼠肾组织RT-PCR检查显示，模型组大鼠组织TGF-β1、CTGF和TIMP-1mRNA表达明显上调，而益肾灵干预后上述上调指标均显著下降。这些结果提示益肾灵可能通过下调促细胞外基质（ECM）合成因子TGF-β1和CTGF及抑制ECM降解因子TIMP-1在肾脏内的表达，而减轻肾间质ECM的蓄积及纤维化。结论：马兜铃酸具有慢性肾毒性作用，本研究结果已初步证实应用益肾灵早期干预CAAN动物模型，能显著减轻肾间质ECM蓄积及纤维化，改善肾功能。该实验结果为今后临床使用中药治疗CAAN提供了初步依据。     

肾复宁颗粒对慢性肾功能衰竭大鼠肾脏TGF-β1mRNA及细胞凋亡基因Fas/FasL表达的影响

目的:观察肾复宁颗粒对慢性肾功能衰竭大鼠的作用及可能机制。方法:SD大鼠采用右肾切除左肾外动脉分支结扎方法建立CRF模型,随机分为模型对照组、雷公藤多甙片组(0.006g/kg)、肾复宁颗粒组(9g/kg)、肾复宁颗粒组(6g/kg)、肾复宁颗粒组(3g/kg),各15只,另设假手术组15只,连续给药8周,观察血清Scr、BUN、Cys-C含量及肾脏组织中TGF-β1mRNA、细胞凋亡基因Fas/Fas L表达水平。结果:治疗后,治疗组及雷公藤多甙片组大鼠血清中Scr、BUN、Cys-C水平明显下降,大鼠肾脏组织中TGF-β1 mRNA、Fas/Fas L表达减少,尤以肾复宁颗粒(9g/kg)显著。结论:肾复宁颗粒通过抑制慢性肾功能衰竭大鼠肾脏TGF-β1mRNA、Fas/Fas L表达,调控肾实质细胞调亡,从而改善肾功能,达到延缓肾脏纤维化作用,其疗效具有一定剂量依赖性。     

“清化固肾排毒颗粒”对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织Wnt4和TGF-β1表达的影响

目的:观察清化固肾排毒颗粒对肾间质纤维化大鼠肾组织Wnt4和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响,从而探讨其对肾间质纤维化的作用机制。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、洛丁新组及清化固肾排毒方高、中、低剂量组,除假手术组外,其余各组大鼠均采用单侧输尿管结扎手术方法(UUO)建立大鼠肾间质纤维化模型,术后各组分别予相应药物或生理盐水灌胃,每日1次。给药第7、14、21日后,各组大鼠禁食不禁水1d,处死,取手术侧肾组织做病理检测,Masson染色观察其病理变化,免疫组织化学染色检测Wnt4及TGF-β1在肾间质的阳性染色表达。结果:经Masson染色后,模型组与各给药组大鼠肾组织胶原纤维蓝染部分较假手术组明显增多,肾纤维化程度显著加重;与模型组比较,清化固肾排毒方各剂量组和洛丁新组大鼠肾组织胶原纤维蓝染部分明显减少,肾纤维化程度相对减轻。免疫组化结果显示,清化固肾排毒方各剂量组和洛丁新组大鼠肾组织Wnt4及TGF-β1阳性表达显著低于模型组(P0.05)。结论:清化固肾排毒颗粒能有效改善肾间质纤维化模型大鼠肾纤维化程度,其可能通过下调Wnt4、TGF-β1改善肾功能,从而达到改善肾纤维化的作用。     

加味薯蓣丸对腺嘌呤所致慢性肾功能衰竭大鼠TGF-β1的影响

目的加味薯蓣丸对腺嘌呤所致慢性肾功能衰竭大鼠TNF-β1的影响。方法将雄性SD大鼠48只,随机分为空白对照组、造模组、加味薯蓣丸治疗组、尿毒清治疗组4组,用250 mg.kg-1.d-1腺嘌呤连续灌胃21 d制作大鼠慢性肾功能衰竭模型,造模成功后用加味薯蓣丸及尿毒清颗粒治疗31 d。治疗结束后,测大鼠24 h尿蛋白定量,取肾组织作光镜观察,用免疫组化法测大鼠肾组织TGF-β1。结果加味薯蓣丸可以明显降低腺嘌呤诱导慢性肾功能衰竭大鼠24 h尿蛋白含量,并降低TGF-β1在肾内表达。结论加味薯蓣丸通过抑制TGF-β1在肾脏组织中的表达以减轻肾间质纤维化,减轻其肾小管-间质损害,改善其病理状态,延缓和防止肾小球硬化,以延缓慢性肾衰竭发展至终末期的进程。     

扶正活血方对5/6肾切除大鼠肾组织Fn和TGF-β1 mRNA表达的影响

目的:探讨扶正活血方对慢性肾功能衰竭(CRF)大鼠肾组织纤维连接蛋白(Fn)和转化生长因子β1(TGF-β1) mRNA表达的影响.方法:采用5/6肾切除制作大鼠CRF模型.模型制作成功后随机将模型大鼠分为模型组、扶正活血方组、黄芪组、丹参组、依那普利组,并与正常组对照.治疗2个月后,观察各组CRF大鼠肾组织Fn和TGF-β1 mRNA表达情况.结果:模型组血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、24小时尿蛋白定量(24hpro)明显高于正常组,肾组织Fn和TGF-β1 mRNA表达明显强于正常组.经过扶正活血方治疗后,肾组织Fn和TGF-β1 mRNA表达明显减弱,蛋白尿水平明显降低.结论:扶正活血方可改善CRF大鼠肾功能,延缓CRF进展,其机制可能与降低CRF大鼠肾组织Fn和TGF-β1 mRNA表达有关.     

壮肾排毒胶囊治疗慢性肾功能衰竭的实验研究

目的：观察壮肾排毒胶囊对腺嘌啉灌服所致大鼠慢性肾功能衰竭的影响。方法：用腺嘌呤灌服制造大鼠慢性肾功能衰竭模型，通过检测大鼠肾脏指数，肾长径、血清肌酐、尿素，血钙，因磷，二氧化碳结合力，一氧化氮，一氧化氮合酶及肾脏病理组织学变化，观察壮肾排毒胶囊对慢性肾功能衰竭的作用。结果：壮肾排毒胶囊能明显对抗腺嘌啉引起大鼠肾脏重量，肾脏指数，肾长径的变化，明显降低大鼠血清肌酐，尿素氮，升高血钙，降低血磷，明显提高二氧化碳结合力，显升高血清NO和和NOS，明显减轻肾脏病理组织学的改变。结论：壮肾排毒胶囊对腺嘌呤所造成的大鼠慢性肾功能衰竭有明显防治作用。     

灌胃灌肠加针剌法对5／6肾切除慢性肾衰竭大鼠模型血浆内皮素含量的影响

目的：观察灌胃灌肠加针刺疗法对慢性肾衰竭大鼠的疗效及其对血浆内皮素含量的影响并探讨其作用机制。方法：采用5／6肾切除慢性肾衰竭大鼠模型，将其分为正常组、病模组、灌胃组、灌肠组、针刺组及综合疗法组，以各组大鼠治疗前后的体重、血红蛋白、肾功能、血浆内皮素含量等作为观察指标，来探讨该疗法对实验性慢性肾衰竭大鼠的治疗作用及其与单纯灌胃、灌肠及针刺疗法的比较。结果：与其他各单一疗法组比较，综合疗法能明显降低大鼠血浆内皮素的含量（P〈0．01）；在纠正贫血、改善肾功能方面也作用显著。结论：本疗法对慢性肾衰竭有减轻并延缓其进展的作用，且较单一疗法的疗效为佳，其作用机制可能与降低血浆内皮素含量、延缓肾纤维化密切相关。     

补肾解毒通络方对慢性肾衰大鼠的实验研究

目的:观察补肾解毒通络方对腺嘌呤所致大鼠慢性肾衰的影响。方法:通过腺嘌呤灌胃建立大鼠慢性肾衰模型,观察补肾解毒通络方对大鼠血尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、转化生长因子-β1(TGF-β1)及其mRNA的影响。结果:经补肾解毒通络方治疗的大鼠,血清BUN、Scr降低,TGFβ-1和TGFβ-1mRNA的表达下调,与模型组比较有统计学差异(P0.01或P0.05)。结论:补肾解毒通络方能有效延缓慢性肾功能衰竭的进展,可能与其抑制TGFβ-1和TGF-β1mRNA的表达来减轻肾间质纤维化有关。     

肾康注射液延缓5/6肾切除大鼠慢性肾功能衰竭进展的机理探讨

目的：探讨肾康注射液延5／6肾切除(5／6NX)大鼠延缓慢性肾功能衰竭的作用机理。方法：采用苯那普利、来适可为实验对照组,研究了肾康注射液对5／6NX大鼠肾小球硬化、肾功能、高脂血症及肾组织TGF-β1的影响。结果：肾康注射液可以显著降低5／6肾切除大鼠的血压、24h尿蛋白定量、血尿素氮(BITN)、血肌酐(Scr)、胆固醇(CH)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL),明显减轻5／6肾切除大鼠的肾脏病理损害,显著抑制肾组织TGF-β1的表达。对以上指标的改善作用,与苯那普利、来适可无明显差异。结论：肾康注射液可以减轻5／6肾切除大鼠肾脏病理损害,改善肾功能,降低尿蛋白含量、高脂血症及肾组织TGF-β1。     

扶正泄浊保肾汤对腺嘌呤致CRF大鼠肾功能的影响

目的用观察扶正泄浊保肾汤对慢性肾功能衰竭(CRF)大鼠症状、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、电解质及肾组织转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响,探讨该方治疗CRF作用机理。方法雄性SD大鼠50只按体重随机抽取10只为正常对照组,其余40只大鼠采用腺嘌呤灌胃的方法建立早期CRF大鼠模型;造模后再将模型大鼠随机分为模型组、科素亚组、中药小剂量组和中药大剂量组,每组10只;相应药物治疗30 d后处死大鼠,取标本送检。结果治疗后扶正泄浊保肾汤大、小剂量组大鼠体质量大于模型组及科素亚组(P<0.01),Scr、BUN低于模型组(P<0.01),大剂量组BUN显著低于科素亚组(P<0.05);能升血钙、降血磷;大剂量组肾组织TGF-β1的表达明显低于模型组及科素亚组(P<0.01),且低于小剂量组(P<0.05)。结论扶正泄浊保肾汤能改善CRF大鼠肾功能及一般情况,延缓CRF病程,其机制与减少TGF-β1在肾组织的阳性表达,抑制肾小球硬化和肾间质纤维化进展关系密切。     

养阴活血方药对CsA慢性肾毒性大鼠肾间质纤维化的拮抗

环孢素A（CsA）是器官移植后抗排斥常规用药之一，CsA慢性肾毒性因导致肾间质纤维化而使肾功能进行性减退，直至肾功能衰竭。拮抗CsA引起的肾间质纤维化，是器官移植后保障移植物长期存活的重要措施之一。本研究以养阴活血中药为干预措施，观察其对CsA慢性肾毒性模型大鼠的肾间质形态学的影响，及用药后肾间质TGF-β1、FN、Ⅳ胶原蛋白表达及肾间质TGF-β1mRNA表达的变化。     

加味苓桂术甘汤对肾纤维化大鼠肾组织TGF-β1表达的影响

目的:观察加味苓桂术甘汤对大鼠肾纤维化模型的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:将40只Wistar雄性大鼠随机分为4组:正常对照组、模型对照组、低剂量加味苓桂术甘汤组与高剂量加味苓桂术甘汤组。按200mg/(kg·d)腺嘌呤灌胃建立大鼠肾纤维化模型。28d后采集血液标本,检测大鼠血清BUN、Cr水平的变化;留取肾组织,用于HE染色观察肾组织病理改变及免疫组化方法检测肾组织TGF-β1的表达。结果:模型对照组血清BUN、Cr、肾组织TGF-β1较正常对照组明显升高,加味苓桂术甘汤各组上述指标较模型对照组明显下降。结论:加味苓桂术甘汤可保护肾功能,通过下调TGF-β1表达延缓肾纤维化进展。     

清化固肾排毒颗粒对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织TGF-β1和α一SMA表达的影响

目的：观察清化固肾排毒颗粒对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织转化生长因子-β1（TGF-β1） 和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达的影响,探讨其抗肾纤维化的作用机制。方法：72只SPF级SD大鼠随机分为假手术组、模型组、洛丁新组及清化固肾排毒颗粒组,除假手术组外,其余各组大鼠均采用单侧输尿管结扎手术方法（UUO）建立肾纤维化梗阻大鼠模型,术后各组分别予相应药物或生理盐水灌胃,每天1次。第7、14、21天,各组大鼠禁食不禁水1天,处死,取肾组织做病理检测,HE染色观察其病理变化,免疫组织化学染色检测TGF-β1和α-SMA在肾间质的阳性染色表达。结果：与假手术组比较,干预第7、14、21天,模型组、洛丁新组、清化固肾排毒颗粒组大鼠肾小管间质损伤指数显著增加,肾组织TGF-β1和α-SMA的表达均明显升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）。与模型组比较,干预第7、14、21天,洛丁新组和清化固肾排毒颗粒组大鼠肾小管间质损伤指数明显减轻,肾组织TGF-β1和α-SMA的表达均明显降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论：清化固肾排毒颗粒可能通过下调TGF-β1和α-SMA的表达来抑制上皮细胞间充质转化和细胞外基质的过度积聚,实现改善肾间质纤维化的作用。     

雷公藤多甙对早期糖尿病肾病大鼠肾组织TGF-β1表达的影响

目的：探讨雷公藤多甙（TW）对糖尿病肾病（DN）模型大鼠肾组织中TGF-β1表达的影响。方法：采用高脂饲料＋链脲佐菌素诱导糖尿病肾病造模,用TW灌胃DN大鼠,生化检测实验大鼠24小时尿蛋白、血肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）、血浆白蛋白（ALB）;LeicaQwinPlus图像分析系统测量肾小球直径;PAS染色观察大鼠肾脏病理变化;免疫组化（IHC）检测肾组织TGF-β1表达。结果：TW能够降低实验大鼠24小时尿蛋白、SCr、BUN,升高ALB,减小肾小球直径及减轻肾重,改善肾脏病理变化及降低肾组织TGF-β1表达,与模型组相比,具有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）。结论：TW可能通过影响DN大鼠肾组织中TGF-β1的表达,改善上述生化指标,减轻肾脏病理损害。     

壮肾排毒胶囊治疗慢性肾功能衰竭的实验研究

目的：观察壮肾排毒胶囊对腺嘌呤所致大鼠慢性肾功能衰竭的影响。方法：用腺嘌呤制造大鼠慢性肾功能衰竭模型，通过检测大鼠肾脏指数、肾长径、血清肌酐、尿素、血钙、血磷、二氧化碳结合力、一氧化氮、一氧化氮合酶及肾脏病理组织学变化，观察壮肾排毒胶囊对慢性肾功能衰竭的作用。结果：壮肾排毒胶囊能明显对抗腺嘌呤引起大鼠肾脏重量、肾脏指数、肾长径的变化，明显降低大鼠血清肌酐、尿素氮，升高血钙，降低血磷，明显提高二氧化碳结合力，显著升高血清NO和NOS，明显减轻肾脏病理组织学的改变。结论：壮肾排毒胶囊对腺嘌呤所造成的大鼠慢性肾功能衰竭有明显防治作用。     

排毒保肾丸对5/6肾切除大鼠肾纤维化的影响

目的观察排毒保肾丸对5/6肾切除大鼠肾纤维化的疗效并探讨其作用机制。方法将50只SD雄性健康大鼠按1∶1∶3比例随机分为正常组(10只)、假手术组(10只)、造模组(30只),假手术组只分离肾包膜不行肾切除,造模组建立5/6肾切除模型。收集大鼠24 h尿液,检测24 h尿蛋白定量(24 h urinary protein,24h UP);采血检测血清尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)和肌酐(serum creatinine,SCr)。根据血SCr水平再将30只造模组大鼠随机分为模型组、排毒保肾丸组、尿毒清颗粒组,每组10只。排毒保肾丸组和尿毒清颗粒组分别予排毒保肾丸[1.0 g/(kg·d)]和尿毒清颗粒[3.33 g/(kg·d)]溶于蒸馏水中灌胃,正常组、假手术组、模型组均予2 m L蒸馏水灌胃。均每日1次,共给药4周。观察给药过程中大鼠精神状态、活动度、体毛色泽、大便形状等一般情况和体重的变化。4周后收集大鼠24 h尿液,检测24 h UP;采血检测BUN、SCr、转化生长因子β1(transforming growth fator-β1,TGF-β1)、Ⅲ型前胶原(procollagen typeⅢ,PCⅢ)、Ⅳ型胶原(collagen typeⅣ,ColⅣ)、层粘连蛋白(laminin,LN)、纤维连接蛋白(fibronectin,FN);处死大鼠,取左侧残余肾组织行病理检查,免疫组织化学法检测肾组织TGF-β1、FN蛋白表达量,实时荧光定量PCR检测肾组织TGF-β1、FN mRNA表达。结果与正常组比较,假手术组大鼠上述观察指标差异无统计学意义(P0.05);与假手术组比较,模型组大鼠一般情况较差,体重增长缓慢,24 h UP增加(P0.01),血清BUN、SCr、TGF-β1、PCⅢ、ColⅣ、LN、FN升高(P0.01),残肾病变重,肾组织TGF-β1、FN蛋白及TGF-β1、FN mRNA表达增加(P0.01);与模型组比较,排毒保肾丸组和尿毒清颗粒组大鼠一般情况较好,体重增长较快,血BUN、SCr下降(P0.01),24 h UP减少(P0.05),血TGF-β1、PCⅢ、ColⅣ、LN、FN降低(P0.05,P0.01),残肾病变轻于模型组,肾组织TGF-β1、FN蛋白及TGF-β1、FN mRNA表达减少(P0.01);与尿毒清颗粒组比较,排毒保肾丸组血SCr、FN及肾组织FN蛋白及FN mRNA表达降低(P0.05)。结论排毒保肾丸具有抗5/6肾切除大鼠肾纤维化的作用,通过基因转录和蛋白翻译两个水平下调TGF-β1、FN的表达是其作用机制之一。