针刺足阳明经穴对家兔胃窦平滑肌细胞内钙离子浓度的影响

目的:探讨针刺足阳明经穴对胃平滑肌细胞内第二信使Ca2 的影响.方法:将45只家兔随机分为生理盐水组、阿托品模型组、针刺足阳明经穴组、针刺足少阳经穴组、针刺足太阳经穴组,每组9只.分组处理后,取胃窦平滑肌,制成活的单个平滑肌细胞悬液,以荧光分光光度计测定细胞内钙离子浓度([Ca2 ]i).结果:针刺足阳明经穴组胃窦平滑肌细胞内[Ca2 ]i明显高于阿托品模型组(P＜0.01),而其他各组间细胞内[Ca2 ]i差异均无显著性意义(P＞0.05).结论:针刺足阳明经穴对胃运动的影响与胃平滑肌细胞内Ca2 释放有关.     

针刺足阳明经穴对家兔胃窦平滑肌细胞舒缩长度的影响

目的 :从细胞水平研究足阳明经与胃相关的特异性。方法 :将 45只家兔随机分为生理盐水组、阿托品模型组、针刺足阳明经穴组、针刺足少阳经穴组、针刺足太阳经穴组 ,每组 9只。分组处理后 ,取胃窦平滑肌 ,制成活的单个平滑肌细胞悬液 ,在显微镜下以测微尺测定细胞舒缩长度。结果 :针刺足阳明经穴组的胃窦平滑肌细胞长度明显短于其他各组 (P <0 .0 1 )。结论 :针刺足阳明经穴能使经阿托品阻断的胃窦平滑肌细胞产生明显的收缩效应 ,进一步证实了足阳明经与胃之间存在特异性的联系。     

足阳明经穴针刺血清对家兔离体胃窦平滑肌细胞舒缩活动的影响

目的:探讨足阳明经穴针刺血清对家兔离体胃窦平滑肌细胞舒缩活动的影响,从离体细胞水平研究足阳明经与胃相关的特异性.方法:将45只家兔随机分为生理盐水组、阿托品模型组、针刺足阳明经穴组、针刺足少阳经穴组、针刺足太阳经穴组,每组9只.分组处理后,颈动脉采血制备针刺血清.另取正常家兔10只,取胃窦平滑肌,经Ⅱ型胶原酶消化后制成正常兔胃窦平滑肌细胞悬液.取1∶2稀释的针刺血清与同体积的正常兔平滑肌细胞悬液作用,用戊二醛固定后在显微镜下以测微尺测定细胞长度.结果:阿托品模型组的血清能使正常兔胃窦平滑肌细胞舒张,细胞长度增加;针刺足阳明经穴组的血清可以促进正常兔胃窦平滑肌细胞收缩,细胞长度缩短,而针刺足少阳经穴组和针刺足太阳经穴组的血清对正常兔胃窦平滑肌细胞的长度影响不明显.结论:足阳明经穴针刺血清能使离体胃窦平滑肌细胞产生明显的收缩效应,从离体细胞水平进一步证实了足阳明经与胃相关的特异性.     

电针足阳明经穴对胃窦胆囊收缩素受体基因表达的影响

目的:探讨足阳明经与胃的特异相关性的内在机制.方法:将60只家兔随机分为A.生理盐水组;B.阿托品组;C."足三里"组(足阳明经);D."阳陵泉"组(足少阳经);E."四白"组(足阳明经);F."承筋"组(足太阳经).除A组外,各组均静脉滴注阿托品,与此同时C～F组分别电针"足三里""阳陵泉""四白"及"承筋"穴20 min.取胃窦平滑肌组织,采用RT-PCR方法测上述组织内胆囊收缩素受体基因(CCKA-R-mRNA)的表达.结果:电针足阳明经"足三里""四白"能上调胃窦组织中CCKA-R-mRNA的表达(P<0.01),电针足少阳经"阳陵泉"及足太阳经"承筋"穴则无此效应(P>0.05).结论:①CCKA-R-mRNA表达增强是电针足阳明经穴对胃运动功能产生兴奋作用的内在机制之一,针刺足阳明经对胃运动的影响,不仅与相关的脑肠肽的释放有关,还与其相应受体基因表达的强弱有关;②足阳明经与胃相关具有相对特异性.     

针刺影响家兔胃窦平滑肌细胞内IP3含量的经脉特异性研究

目的探讨针刺足阳明经对胃窦平滑肌细胞内IP3(三磷酸肌醇)影响的经脉特异性.方法将45只家兔随机分为生理盐水组、阿托品组、针刺足阳明经组、针刺足少阳经组、针刺足太阳经组.分组处理家兔后,立即分离其胃窦平滑肌细胞,制成活的单个平滑肌细胞悬液,测定细胞内IP3的含量.结果针刺足阳明经组胃窦平滑肌细胞内IP3含量为(39.00±12.97) pmol/106 cell,高于其他各组(P<0.05或P<0.01),而其他各组间两两比较差异均无统计学性意义(P>0.05).结论针刺足阳明经升高静滴阿托品后胃窦平滑肌细胞内IP3含量具有经脉的相对特异性.     

足阳明经穴针刺血清对家兔离体胃窦平滑肌细胞内钙离子浓度影响的实验研究

目的：观察足阳明经穴针刺血清对家兔离体胃窦平滑肌细胞内钙离子（Ca^2＋）浓度的影响。方法：将45只家兔随机分为5组各9只。生理盐水组，耳缘静脉滴注0．9％NaCl溶液；阿托品模型组，耳缘静脉滴注以生理盐水配制的2．5mg／100ml的阿托品；足阳明经穴组，造模并电针双侧足三里、天枢、梁门、四白穴；足少阳经穴组，造模并电针双侧阳陵泉、带脉、13月、阳白穴；足太阳经穴组，造模并电针双侧承筋、背下点、背上点、攒竹穴。分组处理后，颈动脉采血制备血清。另取正常家兔10只，制备正常兔胃窦平滑肌细胞悬液。取各组1：2稀释的血清与同体积的正常兔胃窦平滑肌细胞悬液作用，以荧光分光光度计测定细胞内Ca^2＋浓度。结果：阿托品模型组Ca^2＋浓度低于生理盐水组，差异有显著性意义（P〈0．05）；足阳明经穴组Ca^2＋浓度明显高于生理盐水组、阿托品模型组、足少阳经穴组、足太阳经穴组，差异均有非常显著性意义（P〈0．01）；足少阳经穴组与足太阳经穴组比较，差异无显著性意义（P〉0．05）。结论：足阳明经穴针刺血清使离体胃窦平滑肌细胞内Ca^2＋浓度升高具有经脉的相对特异性。     

针刺足阳明经穴对静脉滴注阿托品家兔外周脑肠肽胃动素、P物质的影响

目的:探讨针刺足阳明经穴对胃运动抑制家兔外周脑肠肽胃动素、P物质含量的影响。方法:45只家兔随机分为生理盐水组、阿托品模型组、电针足阳明经穴组、电针足少阳经穴组、电针足太阳经穴组,每组9只。分组处理后,放免法测定血浆、胃窦平滑肌组织胃动素、P物质含量。结果:电针足阳明经穴组血浆、胃窦平滑肌组织中胃动素、P物质含量均高于阿托品模型组(P<0.01),而电针足少阳经穴组和足太阳经穴组与阿托品模型组比较,差异均无显著性意义(P>0.05)。结论:电针足阳明经穴可升高胃运动抑制家兔外周脑肠肽胃动素、P物质的含量,且足阳明经具有经脉的相对特异性。     

从针刺不同经穴对家兔胃黏膜保护作用探讨多经司控同一脏腑的规律

目的:探讨经脉腧穴与脏腑的特异关系.方法:将56只家兔随机分为7组,分别针刺不同经的穴位.硝酸还原酶法测定胃黏膜NO和NOS含量,放射免疫法测定PGE2、EGF含量,加权法分析各组综合效应.结果:(1)针刺足阳明经组与其余各组比较,能显著升高胃黏膜PGE2、EGF含量(P＜0.01);(2)针刺足阳明、足太阴经组与其余各组比较,能显著升高胃黏膜NO和NOS含量(P＜0.01);(3)针刺足阳明经组综合效应明显高于其余各组(P＜0.01);针刺足太阴经组综合效应明显高于模型组(P＜0.01).结论:多经司控同一脏腑具有一定的普遍性,但从作用强度和广度看又具有经脉的相对特异性;胃与足阳明经关系最为密切,足太阴经次之.     

足阳明经对大鼠胃肌电穴位特异性研究

目的:探讨足阳明经对大鼠胃肌电的穴位特异性影响.方法:采用现代电生理技术,选择足阳明经"四白"、"地仓"穴及手太阳小肠经"颧髎"穴及"四白旁开点"做同步对照,将32只大鼠随机分为四白组、颧髎组、地仓组、四白旁开组,每组8只,比较观察电针对禁食24 h麻醉状态下大鼠胃肌电的针刺效应.结果:电针四白、地仓穴组对胃电振幅、时程及峰簇数的发放具有一定的兴奋效应,其效应以四自穴作用最为明显,地仓次之,与针刺前比较均有统计学意义(P＜0.01),而电针颧髎、四白旁开点,对胃电活动则无明显作用,与针刺前比较均无统计学意义(P＞0.05).结论:电针足阳明经对大鼠胃肌电具有一定的兴奋效应,其调整作用具有经脉、穴位的相对特异性.     

针刺足阳明经穴对大鼠胃肌电穴位特异性及胃电传出途径的实验研究

目的:探讨足阳明经对大鼠胃肌电穴位特异性影响及其传出途径研究.方法:选用足阳明经头面部四白、地仓穴,以及手太阳经颧髎穴及非经非穴四白旁开点,比较观察电针对禁食24h麻醉状态下大鼠胃肌电的影响;并通过腹注阿托品、六烃季胺、利血平神经阻断剂,观察传出途径阻断后电针四白穴对大鼠胃肌电的影响.结果:电针四白、地仓穴对胃电振幅、时程及峰簇数的发放具有一定的兴奋效应,其效应以四白穴作用最为明显,地仓次之,与针刺前比较均有统计学意义(P＜0.01),而电针颧髎、四白旁开点,对胃电活动则无明显作用,与针刺前比较均无统计学意义(P＞0.05);针刺四白穴能部分取消阿托品、六烃季胺对大鼠胃电的抑制效应,部分增强利血平后大鼠胃电的兴奋效应.结论:电针足阳明经对大鼠胃肌电具有一定的兴奋效应,其调整作用具有经脉、穴位的相对特异性.而电针对胃电的调整作用,与胆碱能神经、交感神经、肾上腺素能神经的参与有关.     

青蒿琥酯对人结肠癌细胞HCT-8细胞凋亡和细胞周期的影响

目的:研究青蒿琥酯对人结肠癌HCT-8细胞凋亡和细胞周期的影响.方法:实验分为10,20,30 μmol·L-1青蒿琥酯处理组,阴性对照组和空白对照组.采用透射电镜和流式细胞仪检测青蒿琥酯对HCT-8细胞的凋亡诱导效果;采用流式细胞仪分析青蒿琥酯对HCT-8细胞周期的影响;采用Western blot印迹法检测青蒿琥酯对细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达的影响.结果:经青蒿琥酯处理后,电镜下可见HCT-8细胞膜皱缩、染色质凝聚、核碎裂、凋亡小体形成.10,20,30 μmol·L-1青蒿琥酯处理组凋亡率分别为17.1％±3.8％,29.5％±5.1％,41.4％±5.8％,显著高于空白对照组5.1％±1.4％.P＜0.05.在20 μmol· L-1青蒿琥酯处理组,HCT-8细胞G0/G1期所占比例随着药物作用时间延长而增加,S期与G2/M期细胞所占比例则下降.10,20,30 μmol·L -1青蒿琥酯处理组Bax蛋白表达水平分别为0.20±0.03,0.40±0.05和0.50±0.08显著高于空白对照组(0.06 ±0.02),P＜0.05;Bcl-2蛋白表达水平未见明显变化,Bcl-2/Bax呈下降趋势.结论:青蒿琥酯可以抑制人结肠癌细胞HCT-8增殖,诱导细胞凋亡,其诱导凋亡作用机制可能与其阻滞结肠癌细胞周期和上调促癌基因Bax表达有关.     

淫羊藿苷对血管平滑肌细胞周期及周期相关蛋白表达的影响

目的 研究淫羊藿苷（icariin．ICA）对同型半胱氨酸（homocysteinemia，HCY）诱导增殖的血管平滑肌细胞（vascular smooth musckle cell．VSMC）细胞周期的影响及其机制。方法建立HCY诱导的兔VSMC增殖模型，与不同浓度的ICA共同培养48h后，用流式细胞仪检测VSMC细胞周期变化及细胞周期调控相关蛋白Cyclin D1和CDK4的表达。结果0．2mg／L、0．4mg／L ICA组G0／G1期细胞数明显增多，s期细胞数明显减少，与HCY组相比有统计学意义（P〈0．01）；CyclinDl和CDK4的表达量均随ICA剂量增加而减少。结论 ICA桔抗HCY诱导的兔VSMC增殖．其主要机制可能与Cyclin D1及CDK4的低表达所致的细胞周期抑制有关。     

富于T/组织细胞型的弥漫大B细胞性淋巴瘤的误诊分析

目的：探讨富于T细胞/组织细胞型的弥漫大B细胞性淋巴瘤（TCRBCL）的病理形态、预后和免疫组化的特点及鉴别诊断。方法：根据WHO淋巴瘤分类（2008版）的标准对4例TCRBCL进行临床、组织病理和免疫组化分析,应用全自动免疫组化仪（DAKO）检测瘤细胞及背景细胞的免疫表型,抗体包括CD20,CD79a, CD3,CD15,CD68,CD30、CD10,BCL-6,CD21。结果：少量肿瘤性大细胞分布于小淋巴细胞及组织细胞背景中,免疫组化肿瘤性大细胞CD20阳性,背景小细胞CD3阳性,组织细胞CD68阳性。结论：TCRBCL是一个独立的组织学类型,是弥漫大B细胞性淋巴瘤的形态学变异体,易误诊为霍奇金淋巴瘤、反应性淋巴组织增生、淋巴瘤样肉芽肿病等,诊断应结合形态学和免疫表型特征。     

健脾化瘀方对胃癌细胞SGC-7901凋亡和周期的影响

目的:观察健脾化瘀方体外对人胃癌细胞株SGC-7901增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法:①采用MTT法观察不同浓度健脾化瘀方体外对人胃癌细胞株SGC-7901增殖的抑制作用;②用Annexin V/PI荧光双染法检测健脾化瘀方诱导肿瘤细胞进入凋亡的影响;③用流式细胞仪检测健脾化瘀方对SGC-7901细胞周期的阻滞效应。结果:①健脾化瘀方能抑制人胃癌细胞SGC-7901增殖,随着药物浓度的增大以及作用时间的延长,其对细胞的抑制率也明显增强,呈现剂量及时间依赖性。②当2mg/ml和4mg/ml健脾化瘀方作用于人胃癌SGC-7901细胞48h可显著诱导细胞凋亡的产生。③细胞周期方面,健脾化瘀方作用于人胃癌细胞SGC-7901后G2/M期比例与阴性对照组相较显著上升,G0/G1期稍有上升,而S期比例下降,表明细胞被阻滞于G2/M期。结论:健脾化瘀方可明显抑制人胃癌细胞SGC-7901的增殖作用并能够诱导该细胞凋亡,改变细胞周期。     

细胞凋亡机制概述

细胞凋亡是一种重要的生物学过程,是在基因调控下所发生的一系列细胞主动死亡过程。就近几年细胞凋亡信号传递机制、酶学机制以及基因调控机制的研究作一概述。     

细胞凋亡机制概述

细胞凋亡是一种重要的生物学过程,是在基因调控下所发生的一系列细胞主动死亡过程。就近几年细胞凋亡信号传递机制、酶学机制以及基因调控机制的研究作一概述。     

通莲I号方及其拆方对食管癌Eca109细胞增殖及细胞周期的影响

目的: 研究通莲I号方及其拆方在不同浓度下对食管癌Eca109细胞形态和生长周期的调节作用;探讨该方抑制食管癌细胞增殖的机制。 方法: 将Eca109细胞以1×10⁶个/皿密度接种于Φ100 mm培养皿中,以10％小牛血清DMEM培养液培养,37 ℃,5%饱和湿度的CO₂培养箱孵育,细胞贴壁24 h,分别加入浓度为25~3 200 mg·L^-1倍比梯度的通莲I号方(T)、清热解毒拆方(Q)、活血行气拆方(H)、滋阴养血拆方(Z)等4方提取液,孵育48 h后,MTT比色法检测细胞增殖变化、光镜观察细胞形态、流式细胞技术(FCM)测定细胞周期。 结果: T,Q,H的IC₅₀值分别为386,771,729 mg·L^-1;与空白对照组(C)相比,T,Q,H 3方显著影响Eca109细胞周期变化:G1期细胞所占比率分别为69.43%,60.84%,61.90%。同时,T,Q,H组细胞的S期与C组比较,均有显著性差异(P<0.05),T方作用最强。而Z方对细胞的抑制作用较弱,与C组无显著性差异。 结论: 通莲I号方通过抑制细胞进入S增殖期从而干预食管癌Eca109细胞生长,各拆方具有协同作用,全方作用最优。     

通莲Ⅰ号方及其拆方对食管癌Eca109细胞增殖及细胞周期的影响

目的:研究通莲Ⅰ号方及其拆方在不同浓度下对食管癌Eca109细胞形态和生长周期的调节作用;探讨该方抑制食管癌细胞增殖的机制.方法:将Eca109细胞以l x106个／皿密度接种于Φ100 mm培养皿中,以10％小牛血清DMEM培养液培养,37℃,5％饱和湿度的CO2培养箱孵育,细胞贴壁24 h,分别加入浓度为25～3 200 mg·L-1倍比梯度的通莲Ⅰ号方(T)、清热解毒拆方(Q)、活血行气拆方(H)、滋阴养血拆方(Z)等4方提取液,孵育48 h后,MTT比色法检测细胞增殖变化、光镜观察细胞形态、流式细胞技术(FCM)测定细胞周期.结果:T,Q,H的1C50值分别为386,771,729 mg·L-1;与空白对照组(C)相比,T,Q,H3方显著影响Eca109细胞周期变化:G1期细胞所占比率分别为69.43％,60.84％,61.90％.同时,T,Q,H组细胞的S期与C组比较,均有显著性差异(P＜0.05),T方作用最强.而Z方对细胞的抑制作用较弱,与C组无显著性差异.结论:通莲Ⅰ号方通过抑质细胞进入S增殖期从而干预食管癌Eca109细胞生长,各拆方具有协同作用,全方作用最优.     

中药胃康宁对胃癌细胞生长与胃癌细胞周期调控因子的影响

目的 观察中药胃康宁含药血清对胃癌细胞生长与胃癌细胞周期调控因子CyclinD2、CyclinE、Cdk2（Cyclin dependant kinase2,CDK2）Cdk4、Cdk6和p16^INK4a、p27^KIP1mRNA及其蛋白表达的作用。 方法 分别将高、中、低不同剂量的中药胃康宁制剂对SD大鼠进行灌胃，制备含药血清，然后分别用不同剂量含药血清培养胃癌细胞，用流式细胞仪检测细胞周期的变化；采用免疫组织化学SABC法及RT-PCR法检测各组胃癌细胞中CyclinD2、CyclinE、Cdk2、Cdk4、Cdk6和p16^INK4a、p27^KIP1蛋白和mRNA的表达。 结果 中药胃康宁能将增殖过程中的MGC-803胃癌细胞阻滞于G0-G1期，使之不进入或延迟进入S期（即DNA合成期），抑制胃癌细胞的生长；免疫组化法结果显示，与空白对照组比较，中药胃康宁高、中剂量组CyclinE和Cdk2，CyclinD2和Cdk4、Cdk6蛋白均有明显升高，而p27KIP1、p16INK4a蛋白则显著降低（P＜0.01）；RT-PCR结果显示，中药胃康宁高、中剂量组均能明显降低CyclinD2、CyclinE、Cdk2和Cdk4、Cdk6 OPTD值，同时升高p27KIP1、p16INK4a OPTDI值（P＜0.01）。 结论 中药胃康宁可抑制胃癌细胞促细胞周期相关因子CyclinD2、CyclinE、Cdk2、Cdk4和Cdk6的表达，同时增强胃癌细胞周期抑制因子p27^KIP1、p16^INK4a的表达，这可能是中药胃康宁抑制胃癌细胞生长的作用机制。     

白花丹素对人舌癌Tca细胞增殖及凋亡作用的探讨

目的 探讨白花丹抑制舌癌细胞Tca的增殖及对细胞凋亡的影响.方法 将舌癌细胞Tca按5×10(3)个/孔的浓度接种于96孔细胞培养板,置于37℃,5% CO2的培养箱中预培养24 h,待细胞80%长满孔底,24 h后将白花丹分别按0.025,0.1,0.2,0.3 mg/ml和0.4 mg/ml分别加入各培养组中,每组5复孔.置37℃、5% CO2培养箱中培养.分别培养48,72,96,120 h后,用酶标仪在490 nm下,MTT染色法测定细胞增殖情况,计算白花丹对肿瘤细胞的抑制率.同时,Hoe-chest33342荧光染色法测定细胞核变化情况,观察细胞凋亡的形态学变化情况.结果 随着白花丹浓度的增大和作用时间的延长,白花丹对人舌癌细胞增殖的抑制作用越明显.当药物浓度达0.4 mg/ml时,培养48 h时与其他各组比较有统计学意义(P<0.05或P<0.01),当药物浓度在0.3 mg/ml细胞培养达96h时,与小于0.3 mg/ml和小于96h培养时间的其他各组比较均有显著性差异(P<0.05),说明此点是白花丹有效成分抑制肿瘤细胞的一个关键点.细胞培养72 h后Hoechst33342染色发现,随着药物浓度的不断增加,凋亡细胞的数量越来越多.当药物浓度达到0.4 mg/ml时,镜下几乎很少见到完整的细胞核出现,相反出现了大量的细胞和碎片和不完整的细胞核.结论 白花丹提取物可以有效抑制肿瘤细胞增长,导致肿瘤细胞大量地细胞凋亡,说明其在肿瘤治疗中具有很大的应用价值.