豚鼠心房肌细胞的分离及其离子流记录

为探讨豚鼠心房肌细胞的分离方法及其离子流记录,采用酶解技术分离豚鼠心房肌细胞,应用膜片钳全细胞记录技术,记录细胞膜L型钙流(L-I_(Ca))及延迟整流性钾流(I_K)。结果获得了具正常电生理活性的单个细胞及高阻封接的形成,成功记录了L-型钙流和延迟整流性钾流。认为本方法分离的单个心房肌细胞具正常的电生理活性,可用于研究心房肌细胞离子通道活性。     

豚鼠心房肌细胞的分离与其离子流记录

为探讨豚鼠心房肌细胞的分离方法及其离子离子流记录，采用酶解技术分离豚鼠心房肌细胞，应用膜片钳全细胞记录技术，记录细胞膜Ｌ型钙流（Ｌ－Ｉｃａ）及延迟整流性钾流（Ｉｋ）。结果获得了具正常电生理活性的单个细胞及高阻封接的形成，成功记录了Ｌ－型钙流和延迟整流钾流，认为本方法分离的单个心房肌细胞具正常的电生理活性，可用于研究心房肌细胞离子通道活性。     

卡维地洛对豚鼠心室肌细胞的电生理作用

目的:观察卡维地洛对豚鼠心室肌细胞膜离子流及跨膜动作电位的影响,探讨卡维地洛对心室肌细胞的直接电生理作用.方法:①应用膜片钳全细胞记录技术记录单个豚鼠心室肌细胞膜L型钙内流(ICa-L)、内向整流性钾流(IJ1)、延迟整流性钾流(IK)和快钠内流(INa),观察不同浓度的卡维地洛对各离子流的影响.②用标觋准微电极技术记录豚鼠右室乳头肌细胞动作电位,观察不同浓度卡维地洛对动作电位各参数的影响.结果:①卡维地洛浓度依赖性地抑制ICa-L、INa,半数抑制浓度(IC50)分别为3.18,0.16 μmol/L.②卡维地洛25μmol/L对IK1最大内向和外向电流差异无统计学意义(n=5,P＞0.05),但使其整流范围由-20～ 40 mV增大至-20～ 80 mV.③卡维地洛0.3μmol/L以上即可浓度依赖性抑制IK尾电流(IK.tail),且对-10 mV钳制电压下IK.tail的抑制作用明显大于对 50 mV下的抑制,在高浓度还抑制缓慢激活型IK(IKs),IC50为12.43μmol/L.④卡维地洛呈反转频率依赖性延长动作电位时程(APD90),还降低动作电位幅度(APA)和0相最大去极化速率(Vmax).结论:卡维地洛低浓度下即可抑制心肌细胞INa、快速激活相IK,高浓度下抑制ICa-L、IKs,还降低Vmax、APA,呈反转频率依赖性延长APD90.     

自发性高血压大鼠肥大心室肌细胞膜离子通道

肥大左心室肌细胞的电重塑也许是室性心律失常发生的基础之一。本研究以正常血压Wistar 大鼠为对照，观察自发性高血压大鼠（SHR）左心室肌细胞膜离子流是否有别于正常心肌细胞，以探讨肥大心室肌细胞电重塑的特征及产生室性心律失常的细胞电生理机制。 一、材料和方法 选用16～20周龄雄性Wistar大鼠及SHR，行腹腔麻醉后称取体重及心脏重量，应用酶解技术分离获得单个左心室肌细胞。采用膜片钳（美国Dagan 8900）全细胞记录技术记录膜离子流并测量细胞膜电容，电压钳制脉冲和数据采集由Pclamp软件（美国Axon Instrument，5 .5）控制，记录不同膜离子流应用不同的电极内液和外液。实验数据以均数±标准差（[A Kx-D]±s）表示，差异采用组间t检验，P<0.05为差异具显著性。     

Cx43基因敲除小鼠心室肌细胞动作电位及钾离子通道电流的变化

目的研究缝隙连接蛋白43(Cx43)基因敲除对心室肌细胞钾离子通道电流的影响。方法选用2～3月大的Cx43基因敲除杂合子小鼠和相匹配的野生小鼠作对照,应用膜片钳全细胞记录技术记录小鼠心室肌细胞动作电位和钾离子流;电流钳状态下,记录心室肌细胞静息电位和动作电位;电压钳状态下,用钾离子通道外液灌流5min,依次记录内向整流性钾电流(IK1)和4-氨基吡啶不敏感的外向钾电流(ISS)。结果Cx43基因敲除小鼠心室心肌细胞动作电位复极到50%和90%的时间缩短,IK1离子流没有变化,而ISS离子流增加。结论Cx43基因敲除导致心室肌细胞动作电位时程缩短,ISS离子流增加。     

卡维地洛对氧自由基所致心肌细胞L型钙电流异常的保护作用

目的　研究卡维地洛对氧自由基引起的豚鼠单个心室肌细胞L型钙电流异常的保护作用。方法　采用全细胞膜片钳技术 ,观察 0 5mmol/L的H2 O2 引起单个豚鼠心室肌细胞L型钙电流改变及预先应用 0 5 μmol/L卡维地洛对这种改变的影响。结果　 0 5 μmol/L卡维地洛对正常豚鼠心室肌细胞L型钙电流及其通道动力学影响不显著。 0 5mmol/LH2 O2 作用下 ,豚鼠心室肌细胞L型钙电流峰值明显降低 (P <0 0 0 1) ,电流 电压曲线上移 ,通道稳态激活曲线和稳态失活曲线左移 ,通道恢复时间明显延长 (P <0 0 0 1)。预先给予 0 5 μmol/L卡维地洛 ,明显减轻H2 O2 对L型钙电流的抑制作用 (P <0 0 1) ;并且可减轻H2 O2 对L型钙通道动力学的异常影响。结论　卡维地洛可减轻氧化应激对心肌细胞L型钙电流的影响 ,这可能是其治疗心力衰竭的机制之一     

自发性高血压大鼠肥大心室肌细胞膜离子通道电重塑的研究

肥大左心室肌细胞的电重塑也许是室性心律失常发生的基础之一。本研究以正常血压Ｗｉｓｔａｒ大鼠为对照 ,观察自发性高血压大鼠 (ＳＨＲ)左心室肌细胞膜离子流是否有别于正常心肌细胞 ,以探讨肥大心室肌细胞电重塑的特征及产生室性心律失常的细胞电生理机制。一、材料和方法选用 16～ 2 0周龄雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠及ＳＨＲ ,行腹腔麻醉后称取体重及心脏重量 ,应用酶解技术分离获得单个左心室肌细胞。采用膜片钳 (美国Ｄａｇａｎ 890 0 )全细胞记录技术记录膜离子流并测量细胞膜电容 ,电压钳制脉冲和数据采集由Ｐｃｌａｍｐ软件 (美国Ａｘｏ…     

风湿性心脏病慢性心房颤动对心房肌细胞外向钾电流影响的研究

研究风湿性心脏病 (RHD)慢性心房颤动 (AF)对心房肌细胞外向钾 (K+ )电流影响 ,探讨钾电流的变化在心房电重构 (AER)中的作用。采用酶解法获得人心房肌单个细胞 ,利用膜片钳技术的全细胞记录法 ,记录AF和窦性心律患者心房肌细胞外向性K+ 电流的两个主要组分 :瞬时外向钾电流 (Ito)和持续外向钾电流 (IKSUS)。结果发现AF患者心房肌细胞外向性K+ 电流的两个主要组分Ito和IKSUS在不同去极化电压下均较窦性心律患者明显减小 (P <0 .0 1)。外向电流减小是延缓复极的因素 ,所以外向钾电流的变化可能在慢性AF引起的AER中不起主要作用。AER是多种离子流共同作用的结果。     

卡维地洛对模拟缺血时豚鼠乳头肌动作电位和心室肌细胞ATP敏感性钾电流的影响

目的　观察卡维地洛对模拟缺血豚鼠乳头肌动作电位和心室肌细胞ATP敏感性钾电流(IK·ATP)的影响 ,探讨卡维地洛对心室肌ATP敏感性钾通道 (KATP)调节及其在抗心肌缺血、抗心律失常中的作用机制。方法　应用标准玻璃微电极技术 ,观察 0 0 3μM、0 3μM和 3 0 μM 3种不同浓度的卡维地洛对模拟缺血时豚鼠心室乳头肌动作电位的影响 ,同时采用全细胞膜片钳方法 ,记录模拟缺血时上述 3个浓度的卡维地洛对豚鼠心室肌细胞IK·ATP的作用。结果　模拟缺血液灌流细胞 ,其中 1 5 1 %(n =5)的细胞KATP通道在 3min内完全开放 ,这些细胞均在KATP通道完全开放后 (1 2 3 0 0± 33 64)s死亡。模拟缺血液加入 0 0 3μM (n =9)、0 3μM (n =9)、3 0 μM (n =1 0 )卡维地洛灌流细胞的各组 ,KATP通道分别于灌流后 (9 0 0± 3 1 6)min、(9 77± 0 86)min和 (1 1 74± 4 41 )min开放。 +40mV时的IK·ATP(pA/pF)分别是 2 5 44± 1 8 48、2 0 1 7± 30 83和 3 95± 2 48,与对照组 32 65± 36 0 2比较 ,0 0 3μM组差异有显著性 (P <0 0 5) ,后两者差异呈高度显著性 (P <0 0 1 ) ;模拟缺血液灌流 5～ 2 0min(n =1 5)均可见动作电位时限 (APD)显著缩短 ,APD90 从正常对照组的 (2 31 0± 1 4 3)ms降至 (1 30 0±1 2 4     

镁离子对心肌细胞内向整流钾离子流的影响

目的：探讨镁离子对豚鼠心室肌细胞内向整流钾通道内向整流作用的影响。方法：应用膜片钳内面向外膜式记录并研究豚鼠心室肌细胞单通道内向整流性钾离子流。结果：在无镁离子浸浴液下,心室肌细胞内向整流性背景钾通道（Ik1)的内向整流作用不明显;当浸浴液含1mmol.L^-1镁离子时,Ik1出现明显的内向整流作用。结论：镁离子的存在是Ik1产生内向整流作用的必要条件。     

芪桂益脉灵对豚鼠心室肌细胞钾离子通道活性的抑制作用

目的观察芪桂益脉灵对豚鼠心室肌细胞钾离子单通道的影响。方法实验应用膜片钳技术,采用细胞贴附记录模式,当灌注不同浓度的芪桂益脉灵原液时,观察钾离子通道的开放活性。结果芪桂益脉灵原液对钾离子通道的平均开放概率NP0值为0.11±0.04,对照组为0.62±0.17。芪桂益脉灵原液对钾离子通道的阻断作用在正常灌注液冲洗后可以恢复,冲洗后钾离子通道开放概率NP0值为0.41±0.12,与对照组相比无统计学意义(P>0.05)。结论芪桂益脉灵的抗心律失常作用与其有效抑制钾离子通道活性有关。     

血管紧张素-(1-7)对心肌细胞L-型钙通道的影响

目的 :研究血管紧张素 (1 7) [Ang (1 7) ]对正常豚鼠心室肌细胞L 型钙离子通道的影响 ,旨在探讨Ang (1 7)发挥降压作用的离子通道及分子基础。 方法 :应用膜片钳全细胞记录技术。结果 :Ang (1 7)可使ICa L呈浓度依赖性增加 ,选择性AngⅠ型 (AT1)受体拮抗剂缬沙坦或非选择性AT1受体拮抗剂Sarthran(Sar)均可消除Ang (1 7)增加ICa L的作用。结论 :Ang (1 7)通过AT1受体增加ICa L,其降压作用不是通过抑制钙离子内流而实现的。     

犬心房肌细胞分离的方法学探讨

目的建立稳定的适于膜片钳实验研究的犬心房肌细胞分离方法。方法取健康成年犬心脏12个,采用Langendorff灌流,行回旋支插管,正常台式液灌流10 s,使心脏自主收缩排除残留余血。持续高钾液灌流,同时结扎其他血管及分支,剪去其余心脏组织,待左房及左心耳充盈,无钙台氏液灌流5 min,125 U/ml胶原酶Ⅱ200ml反复灌流消化约30~45 min,后用无钙台氏液冲洗心脏5 min,剪下心房肌组织,KB液中室温下剪碎,吹打,孵育5 min后,用200目筛网过滤,逐步复钙法复钙后,室温静置1 h,应用于膜片钳记录。结果分离的活性心肌细胞比率约90%,形态呈杆状、横纹清晰、膜周边光滑完整。结论采用本方法可以获得高产量与高质量的用于膜片钳离子流检测的心房肌细胞。     

溶血磷脂酸对豚鼠心室肌动作电位及延迟整流钾电流的影响

目的观察溶血磷脂酸（LPA）对离体豚鼠心室乳头肌动作电位及心室肌细胞延迟整流钾电流的影响。方法采用标准玻璃微电极技术记录豚鼠乳头肌动作电位。应用全细胞电压钳方法记录心室肌细胞延迟整流钾电流（Ik）。结果LPA0．1、1．0、10umol/L可浓度依赖性增加心室肌动作电位幅度（APA）（P〈0．05，P〈0．01，P〈0．01），延长动作电位50％、90％时程（APD50、APD90）（P〈0．05），钾通道阻断剂TEA可部分阻断LPA对APD50的延长作用。LPA0．1、1．0、10umol／L可明显抑制Ik（P〈0．05）。结论LPA可增加豚鼠心脏乳头肌动作电位幅值、延长动作电位时程，并抑制豚鼠心室肌细胞Ik。     

绝对不应期电刺激对正常豚鼠和慢性心力衰竭豚鼠心室肌细胞动作电位及钠离子-钙离子交换的影响

目的:探讨绝对不应期电刺激(ARPES)对正常豚鼠和慢性心力衰竭(衰竭)豚鼠心室肌细胞动作电位(AP)及钠离子-钙离子(Na -Ca2 )交换的影响.方法:应用膜片钳技术中电流钳记录ARPES对AP时程的影响,再以不同的AP电压钳记录细胞膜Na -Ca2 交换电流.结果:①ABPES延长AP时程,以APD30最为显著(P＜0.01),差异有统计学意义.②与正常豚鼠心室肌细胞比较,衰竭豚鼠心室肌细胞AP的平台期明显不同,表现在APD90变化(P＜0.05)及APD50变化(P＜0.01),差异有统计学意义.③分别以基础刺激(S1)下的AP(APS1)和ARPES下的AP(APARPES)为测试电压,记录AP电压钳下的细胞膜Na -Ca2 交换电流,在正常豚鼠心室肌细胞,APARPES电压钳记录的单位膜电容下的外向电流强度的整合值高于APS1电压钳记录的相应值,而单位膜电容下的内向电流强度的整合值无显著变化.在衰竭豚鼠心室肌细胞,APARPES电压钳记录的单位膜电容下的外向电流强度的整合值明显高于APS1电压钳记录的相应值,而单位膜电容下的内向电流强度的整合值无显著变化.外向电流峰值的增加更为明显.结论:ARPES延长正常豚鼠和衰竭豚鼠心室肌细胞AP时程,对心室肌细胞膜Na -Ca2 交换电流的影响可能是其增强整体心脏收缩功能的机制之一.     

腺苷对心肌细胞的电生理作用及机制探讨

采用微电极技术及膜片钳全细胞记录方式，研究腺苷对豚鼠心肌细胞的电生理作用及其机制。结果表明：腺苷可明显缩短心房肌及房室结区细胞动作电位时程，降低房室结区细胞动作电位振幅、零相最大去极化速率，膜片钳上证明此为腺苷加强延迟整流性钾通道电流和抑制Ｌ型钙通道电流所致。对心室肌细胞无此明显的作用，但应用异丙肾上腺素后证明腺苷能拮抗β１受体的作用。腺苷的作用能被选择性腺苷Ａ１受体阻断剂８－环戊基－１，３－二丙基黄嘌呤消除，提示腺苷对心肌细胞的作用由Ａ１受体介导。本研究也探讨了腺苷对心房肌和心室肌作用区别的可能原因，以及心房肌和心室肌对异丙肾上腺素合用腺苷时反应不同的可能机制。     

Bepridil对豚鼠心室肌细胞动作电位时程和跨膜离子流的作用

为观察bepridi1对豚鼠单心室肌细胞动作电位时程 (APD)及动作电位形成过程中主要离子流的作用 ,探讨其诱发长QT间期及多形性室性心动过速的电生理机制。采用Nystatin 破膜法研究bepridil对豚鼠单心室肌细胞APD的作用 ,常规全细胞方法研究其对主要跨膜离子流的作用。结果 :在 5Hz剌激频率时 ,0 .1μmol/Lbepridil使APD明显延长 ,APD90 平均延长 18.0l%( 6 2 .40± 7.6 5msvs 5 2 .88± 5 .90ms,P <0 .0 5 )。当bepridil在细胞外液中的浓度增至1或 3μmol/L时 ,APD恢复到用药前水平 ;但当药物浓度进一步提高到 10 μmol/L时 ,APD明显缩短 ,动作电位幅度下降 ,这一作用随着药物浓度的升高而加强。在持续 2 5 0ms和 10 0 0ms至不同膜电位的去极化的实验中 ,bepridil能明显降低延迟整流钾电流 (IK)的尾电流和稳态电流 ,抑制作用呈浓度依赖性。在 3 0 0 0ms、+6 0mV去极化及IK的快成分 (Ikr)被E 40 31完全阻断时 ,bepridil对IK 的慢成分 (Iks)亦具有抑制作用 ,但两种情况下的半抑制浓度 (IC50 )不同 :3 0 0 0ms,+6 0mV去极化bepridil对IK 的IC50 为 1.6 2 μmol/L ,约为在 +2 0mV、10 0 0ms去极化时对IK 尾电流IC50 ( 0 .12 μmol/L)的 13.5倍。在 1Hz频率去极化时 ,该药对钠电流 (INa)和钙电流 (ICa)也具有浓     

清心安神方对豚鼠心室肌细胞动作电位的影响

目的探讨清心安神方对豚鼠心室肌细胞动作电位的影响。方法 60只健康雄性豚鼠随机分为含药血清组24只,空白血清组36只。含药血清组使用清心安神方浓缩液连续灌胃3 d,空白血清组给予等量生理盐水进行灌胃,两组豚鼠均在末次用药1 h后,于腹主动脉取血后离心取血清。分离豚鼠心室肌细胞,用膜片钳技术记录膜电位曲线。结果含药血清组豚鼠单个心室肌细胞动作电位复极至50%(APD50)及APD90延长(P0.05),而动作电位幅值(APA)、APD50~90及3相复极速率(V3)差异无统计学意义(P0.05);血清对照与血清洗脱、血清洗脱与含药血清组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论清心安神方可延长豚鼠心室肌细胞全细胞动作电位APD50及APD90。     

内皮素对豚鼠心室肌细胞触发电活动的影响

应用玻璃微电极技术和膜片钳全细胞记录，研究出皮素（ＥＴ－１）致豚鼠心室肌细胞早期后除极（ＥＡＤｓ）的作用及发生机制。结果显示：５０ｎｍｏｌ／Ｌ ＥＴ－１灌流能明显延长动作电位时程ＡＰＤ５０，诱发ＥＡＤｓ。产生ＥＡＤｓ基础可能在于促进心室肌细胞Ｌ－型钙内流（Ｌ－Ｉｃａ），使稳态激活曲线左移，其作用呈浓度依赖性。     

卡维地洛对抗乌头碱诱发的大鼠心律失常作用的研究

评价卡维地洛抗大鼠实验性心律失常的作用 ,探讨其抗心律失常作用的离子通道机理 ,为临床用药提供理论依据。采用乌头碱诱发大鼠心律失常模型 ;采用膜片钳技术 ,观察乌头碱、卡维地洛对急性分离的大鼠心室肌细胞钠通道电流 (INa)的影响。结果 :诱发大鼠出现室性早搏、室性心动过速、心室颤动及心脏停搏时 ,对照组及卡维地洛组所用乌头碱的量 (μg)分别为 :室性早搏 :2 1.75± 3.4 7vs 31.81± 2 .0 4 ;室性心动过速 :2 3.5 2± 4 .13vs 36 .0 6± 3.79;心室颤动 :37.6 3± 7.94vs 6 4 .13± 1.4 0 ;心脏停搏 :6 9.31± 1.85vs 84 .6 5± 5 .2 5。利用膜片钳技术观察到 :对照组INa密度为 :5 8.6 3± 11.6 5 pA/pF ;卡维地洛组加入乌头碱后以及再加入卡维地洛后的INa密度分别为73.35± 12 .80 (pA/pF) ;10 .19± 0 .0 2 (pA/pF) ,与自身加药前相比P <0 .0 5。乌头碱及卡维地洛使INaI V曲线分别向下方及向上方移位。结论 :卡维地洛具有抗乌头碱诱发的大鼠心律失常的作用 ,其抗心律失常作用机制之一可能与Ⅰ类抗心律失常药类似 ,即抑制INa。