MG-132对高氧肺损伤中细胞凋亡的保护作用及对p38信号通路的影响

目的 探讨泛素蛋白酶体抑制剂MG-132对高氧诱导的大鼠损伤肺组织中细胞凋亡及p38信号通路激活的保护作用.方法 将26只SD大鼠随机分为四组:正常对照组(n=5)、MG-132对照组(n=5)、高氧组(n=8)和MG-132高氧组(n=8).制备高氧肺损伤动物模型,MG-132处理组给予蛋白酶体抑制剂0.5 mg/kg,1次/d,腹腔注射.所有大鼠行肺组织病理学检查;采用TUNEL法检测细胞凋亡;免疫组织化学法检测泛素化蛋白和p38蛋白的表达.结果 高氧暴露的SD大鼠肺组织可见水肿、大量炎症细胞浸润等急性炎症反应.高氧组的凋亡指数、p38MAPK表达均高于正常对照组和MG-132高氧组(P<0.05或P<0.01).结论 高氧可以导致肺组织细胞发生凋亡,可能是通过激活p38MAPK信号通路来调控的.蛋白酶体抑制剂MG-132可以减轻高氧引起的肺损伤,可能对p38MAPK信号通路有抑制作用.     

蛋白酶体抑制剂MG-132对高氧肺损伤的影响及其机制

目的 探讨蛋白酶体抑制剂MG-132对高氧肺损伤的影响及作用机制.方法 (1)30只SD大鼠随机分为空气对照组、高氧组和高氧+MG-132组.(2)建立高氧肺损伤大鼠模型.(3)进行肺损伤病理评分、肺湿/干重比例测定.检测泛素肺组织泛素化蛋白及NF-κBp65的表达.检测蛋白酶体20S及肺组织匀浆髓过氧化物酶(MPO)活性,检测肺组织TNF-α、IL-6表达.结果 (1)高氧组肺损伤明显,肺湿/干重比例、肺损伤病理评分均增高(P<0.01),MG-132能使肺湿/干重比例、肺损伤病理评分降低(P<0.01).(2)免疫组化和Westernblotting结果均显示高氧组泛素化蛋白表达增强(P<0.01),MG-132增强其表达(P<0.01).(3)高氧组蛋白酶体20S活性较空气对照组明显升高(P<0.01),MG-132抑制其活性(P<0.01).(4)高氧组MPO活性、NF-κB表达均较空气组增强(P<0.01),同时TNF-α、IL-6表达也增强(P<0.01).而高氧+MG-132组均降低(P<0.01).结论 (1)MG-132可以减轻高氧引起的肺损伤.(2)MG-132可能通过抑制NF-κB/炎性因子通路而实现保护作用.     

高氧对幼鼠肺组织细胞凋亡及p38 MAPK丝裂原活化蛋白激酶的影响

目的 探讨高氧对幼鼠肺组织细胞凋亡及p38 MAPK丝裂原活化蛋白激酶表达的影响.方法 幼年Wistar大鼠90%氧气暴露建立高氧肺损伤模型,行肺组织病理学检查,应用TUNEL法检测肺组织的细胞凋亡,Western blot法检测p38 MAPK表达.结果 高氧暴露3 d可见肺组织水肿、出血、炎症细胞浸润等急性肺损伤改变.高氧3 d组的肺凋亡指数较空气对照组明显增加,凋亡发生的主要部位为肺泡、支气管上皮及血管内皮细胞.Westem blot结果显示高氧暴露1 d,肺组织的p38MAPK活性迅速升高,于第2天达到高峰,第3天活性有所下降,但仍高于空气对照组.结论 高氧暴露可以诱导肺组织发生细胞凋亡;高氧可以激活p38MAPK通路,参与高氧性肺损伤的调控;活化的p38MAPK可能参与了高氧诱导的肺组织细胞凋亡的调控.     

泛素-蛋白酶体抑制剂对大鼠肺成纤维细胞凋亡和增殖的影响

目的:探讨泛素蛋白酶体抑制剂MG-132对大鼠肺成纤维细胞凋亡和增殖的影响,并初步探索其机制.方法:18只SD大鼠随机分成模型组(n=9)与对照组(n=9),模型组气管内一次性注入博莱霉素(5 mg/kg),对照组气管内注入等量无菌生理盐水,分别于7,28,45 d每组处死动物3只,提取成纤维细胞进行培养并用相同浓度的...     

蛋白酶体抑制剂MG-132对脂多糖致急性肺损伤大鼠的抗炎作用

目的探讨蛋白酶体抑制剂MG-132对急性肺损伤（ALl）大鼠的抗炎作用机制。方法将雄性SD大鼠54只随机分为对照组、Au组和MG-132组,每组18只。对照组尾静脉注入生理盐水,Au组、MG-132组尾静脉注射脂多糖（LPS）5mg／kg,MG-132组于实验前30min腹腔注射MG-13210mg／kg。三组动物在注射生理盐水或LPS后2、4、8h各随机处死6只,观察肺组织病理学变化,测定肺组织湿重／干重比值（W／D）,酶联免疫吸附法（ELISA）检测大鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中细胞间粘附分子1（ICAM-1）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）的表达,Westernblot法测定肺组织核因子κB（NF-κB）P65蛋白的表达。结果Au组大鼠病理切片可见明显肺组织充血、水肿、大量炎性细胞浸润等典型Au表现,MG．132组病理学损伤明显减轻。与对照组比较,Au组大鼠2、4、8h肺组织W／D比值及BALF中ICAM．1、TNF-α的表达、肺组织NF-κBP65蛋白的表达均明显升高（P〈0．05）,MG-132组大鼠2、4、8h肺组织W／D比值及BALF中ICAM-1、TNF-α的表达、肺组织NF-κBP65蛋白的表达均较Au组明显降低（P〈0．05）。肺组织NF—κBP65蛋白的表达与ICAM-1、TNF-仪的表达呈显著正相关（P〈0．01）。结论MG-132可改善内毒素性急性肺损伤炎症反应,其抗炎作用可能与抑制NF—κB信号通路的激活有关。     

容量激活性氯离子通道在大鼠低氧性PASMCs中的表达及与p38MAPK通路的关系

目的 探讨容量激活性氯离子通道（CLC3）在大鼠低氧性肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）中mRNA和蛋白表达的变化以及其与p38MAPK信号通路的关系.方法 取10只雄性SD大鼠,用酶消化法获得PASMCs并且进行原代培养,用小鼠抗大鼠SMα-actin免疫荧光细胞化学的方法进行鉴定.经培养鉴定的PASMCs随机分为：常氧组（N组,n=6）,低氧组（H组,n=6）,DMSO对照组（D组,n=6）,SB203580干预组（SB组,n=6）,Anisomycin干预组（A组,n=6）,用免疫印迹技术检测CLC3蛋白的表达,半定量反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术测定CLC3 mRNA水平的表达.结果 与N组比较,H组PASMCs中CLC3 mRNA和蛋白的表达量均显著上调（P均＜0.01）;与D组比较,SB组CLC3 mRNA和蛋白的表达均上调（P均＜0.01）,A组mRNA的表达明显下调（P＜0.01）,蛋白的表达轻微下调（P＞0.05）.结论 低氧可上调大鼠PASMCs中CLC3 mRNA和蛋白的表达;p38MAPK通路抑制剂SB203580能上调PASMCs中CLC3 mRNA和蛋白的表达;p38MAPK通路激活剂Anisomycin可下调PASMCs中CLC3 mRNA和蛋白的表达.     

高氧性肺损伤中MAPK信号途径的表达及其作用机制

目的:探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路三亚族ERK,p38,JNK在大鼠高氧性肺损伤动物模型中的表达及作用.方法:24只3周龄Wistar大鼠随机分成4组:空气对照组和高氧暴露3,7和14 d组,每组动物6只.高氧暴露组置于常压高氧仓中(O2≥95%),空气对照组置于常压空气中(O2=21%).光镜下观察肺组织病理学改变,采用二步法免疫组化检测磷酸化ERK,p38,JNK在肺组织中的分布.Western Blot检测磷酸化MAPK蛋白表达变化.结果:高氧暴露3,7 d组出现急性肺损伤的典型病理学特征,高氧暴露14 d组肺间质及纤维细胞增生明显.免疫组化显示空气对照组仅肺泡上皮细胞及气道上皮细胞见少量磷酸化ERK,p38,JNK阳性表达,高氧暴露组则阳性细胞明显增多,广泛分布于肺内细胞中:肺泡上皮细胞、气道上皮细胞、胸膜间皮细胞、浸润炎细胞及间质纤维细胞,p38阳性表达尤多见于炎性细胞中.Western Blot显示高氧暴露组较空气对照组磷酸化蛋白表达明显增强,ERK,JNK高氧暴露7 d组表达最强(P＜0.05),p38在高氧暴露14 d组表达最为明显(P＜0.05).结论:高浓度氧可激活MAPK信号途径,磷酸化ERK,p38,JNK在高氧损伤肺组织表达明显增加,MAPK三亚族ERK,p38,JNK活性变化在时间上并不具有同步性.     

SB203580防治大鼠高氧肺损伤的作用与机制

目的:探讨p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)特异性抑制剂SB203580对新生大鼠高氧肺损伤产生保护作用的机制. 方法:160只新生大鼠随机分为空气对照组、高氧肺损伤组、高氧肺损伤 SB203580组和高氧肺损伤 生理盐水组,建立模型. 作用12, 24, 72 h和1 wk后,分别处死大鼠. 取大鼠72 h的左肺以Western Blot法检测p38MAPK的表达情况,取大鼠4个时相点的右肺以ELISA法检测IL-8和TGF-β1的含量. 结果:72 h时, 高氧肺损伤组和高氧肺损伤 生理盐水组p38MAPK呈阳性表达;在这两个组中,肺组织IL-8 和TGF-β1浓度随时间延长呈持续上升趋势,在各时相点均高于空气对照组和高氧肺损伤 SB203580组(P＜0.01). 结论:SB203580能够通过阻断p38MAPK表达,进而抑制IL-8和TGF-β1表达来减轻新生大鼠高氧肺损伤.     

MG-132对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的研究蛋白酶体抑制剂MG-132对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,用MG-132干预,TTC染色测梗死体积,TUNEL法检测细胞凋亡。结果大鼠脑缺血再灌注后,梗死体积和细胞凋亡指数逐渐增高,至24 h达高峰。MG-132干预后,脑梗死体积缩小,作用24 h缩小44%,细胞凋亡指数减小(P<0.05)。结论 MG-132通过抗凋亡而产生神经保护作用,具体机制可能为阻断泛素-蛋白酶体(UPP)途径。     

p38 MAPK在大鼠急性肺损伤模型中的表达及抗氧化剂NAC的影响

目的:观察磷酸化的分裂原激活的蛋白激酶(p38 MAPK)在脂多糖(LPS)引起的大鼠急性肺损伤中在体原位的表达. 方法:采用免疫组织化学ABC法和Western-blot技术,检测磷酸化的p38 MAPK在大鼠急性肺损伤模型气道和肺组织的表达,并同时观察N-乙酰半胱氨酸(NAC)对其表达的影响. 结果:对照组气道和肺组织无或偶见反应极弱的p38 MAPK阳性细胞,散在分布于气道上皮细胞和肺泡上皮细胞. LPS致伤组p38 MAPK阳性细胞较对照组明显增多(P<0.01),主要分布于浸润的炎症细胞、气道上皮细胞、肺泡上皮细胞、胸膜间皮细胞和血管内皮细胞. NAC治疗组气道和肺组织中阳性细胞数较LPS致伤组明显减少(P<0.01),Western-blot结果验证了上述结果. 结论:LPS诱发的大鼠急性肺损伤模型中,磷酸化p38 MAPK在气道和肺组织内表达增加,p38 MAPK的激活见于肺组织内多数细胞,提示肺内炎性和非炎性细胞均有p38 MAPK信号分子的激活. NAC是有效的抗氧化剂,其对急性肺损伤的炎症抑制可能是通过抑制p38 MAPK的激活起作用.     

p38MAPK信号通路抑制剂对NMDA诱导的体外培养的皮层神经元损伤的保护作用及机制

目的 观察MK801及SB203580对N-甲基-D-天（门）冬氨酸（NMDA）诱导的皮层神经元损伤的影响, 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK)信号通路在神经元损伤中的作用和机制。方法 培养7d的新生SD大鼠皮层神经元随机分为对照组、NMDA损伤组、MK801干预组、SB203580干预组、联合干预组（SB203580+MK801）。MTT比色实验评价细胞生存力,乳酸脱氢酶(LDH)释放率测定细胞损伤程度,吖啶橙/溴化乙锭 (AO/EB) 双重荧光染色观察细胞凋亡形态和数目,Western blotting检测大鼠皮层神经元各组p38MAPK、BCL-2和BAX表达情况。结果 与对照组比较,NMDA损伤组神经细胞存活力降低、培养上清液中LDH含量增加、凋亡细胞增多、p38MAPK和BAX表达增加(P均＜0.01),BCL-2表达降低(P＜0.05);与NMDA损伤组比较,各个干预组细胞生存力提高、LDH释放率降低、凋亡减少、p38MAPK及BAX的表达减少、BCL-2表达增多(P均＜0.01)。结论 MK801,SB203580对NMDA诱导的皮质神经元损伤具有保护作用,p38MAPK通路可能参与介导MK801的保护作用,其共同机制是通过抑制p38MAPK信号通路介导的凋亡相关蛋白实现的。     

蛋白酶体抑制剂MG-132对体外C6胶质瘤细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用

目的：探讨蛋白酶体抑制剂MG-132对大鼠C6胶质瘤细胞体外增殖抑制和诱导凋亡作用。方法：分别以不同浓度（10、20和50 μmol•L^-1）的MG-132培养C6胶质瘤细胞,通过MTT法检测不同培养时间细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,HE染色、AO/EB染色以及透射电镜观察细胞形态学变化。结果：MTT法检测显示10 μmol•L^-1MG-132作用于C6胶质瘤细胞24、48和72 h后,细胞增殖A值(0.46±0.03、0.48±0.03和0.45±0.02)均显著低于正常对照组（P<0.01）,且随浓度增加其抑制作用逐渐增强;10μmol•L^-1 MG-132作用C6胶质瘤细胞12 h后即可经流式细胞仪检测到明显的凋亡亚二倍体峰,以不同药物浓度（10、20和50 μmol•L^-1）处理C6胶质瘤细胞12 、24 和48 h后其细胞凋亡率均显著高于正常对照组（P<0.01）;形态学检查呈现凋亡细胞的特征。结论：蛋白酶体抑制剂MG-132在体外可显著抑制大鼠C6胶质瘤细胞增殖并诱导其发生凋亡。     

高氧对发育期肺细胞凋亡和Notch1信号通路的影响

目的 观察高氧暴露下发育期肺组织细胞凋亡和Notch1的表达变化,探讨其在新生大鼠高氧肺损伤机制中的作用。 方法 将120只足月SD 新生大鼠随机分为空气组 (N组) 和高氧组 (O组),每组60只。O组出生后立即置入氧气（体积分数）>95%的持续高氧环境中饲养,N组则在空气中饲养。两组分别于暴露高氧或空气4、7、14 d 时随机抽取8只,麻醉后取肺组织, 比较两组肺组织病理学改变、凋亡指数;检测Notch1在发育期肺组织中的表达变化。结果 O组死亡率高于N组,且O组各时间点肺组织出现典型的急慢性肺损伤病理学改变;TUNEL细胞凋亡检测发现O组各时点细胞凋亡高于N组 (P<0.05);O组各时间点肺组织Notch1表达低于N组 (P<0.05)。结论 持续高浓度氧可致肺损伤、凋亡增加和发育受阻。高氧暴露可能通过下调Notch1信号表达调控肺细胞分化发育,利于肺损伤修复。     

激活大麻素受体2可减轻实验性脓毒症大鼠的急性肺损伤

目的 探讨激活大麻素受体2（CB2）对大鼠脓毒症急性肺损伤的保护作用及机制。方法 将48只SD大鼠随机分为对照组、模型组、CB2激动剂组和P38 MAPK抑制剂组（12只/组）。对照组腹腔注射生理盐水,其余3组均腹腔注射脂多糖造模6 h;CB2激动剂组在注射脂多糖前30 min腹腔注射CB2激动剂JWH133（3 mg/kg）,P38 MAPK抑制剂组在CB2激动剂组基础上提前30 min腹腔注射P38 MAPK抑制剂SB203580（5 mg/kg）。观察和检测肺组织病理学、含水率、液体清除率、炎症因子的变化情况,肺组织CB2、紧密连接的基因及蛋白表达情况以及P38 MAPK磷酸化情况。结果 与对照组相比,模型组大鼠的肺泡结构破坏严重,液体清除率、肺组织中CB2、occludin和ZO-1蛋白的mRNA及蛋白表达降低,肺组织含水率、P38 MAPK的磷酸化程度、肺灌洗液中TNF-α、IL-1β均增加,差异有统计学意义（P<0.05）。与模型组相比,CB2激动剂组肺泡形态有所恢复,但仍有炎性浸润,肺组织含水率、P38 MAPK磷酸化程度、肺灌洗液中TNF-α、IL-1β降低,液体清除率、肺组织CB2、occludin和ZO-1蛋白的mRNA及蛋白表达增加,差异均有统计学意义（P<0.05）。与CB2激动剂组相比,P38 MAPK抑制剂组肺泡结构有所恢复,肺组织P38 MAPK磷酸化程度、肺灌洗液中TNF-α、IL-1β水平降低,occludin、ZO-1蛋白表达增加,差异均有统计学意义（P<0.05）,而CB2的mRNA及蛋白表达无变化（P>0.05）。结论 CB2激活后可通过抑制P38 MAPK信号通路,降低肺组织炎症因子释放,促进紧密连接蛋白表达,对实验性脓毒症大鼠急性肺损伤起到保护作用。     

p38MAPK/eNOS信号通道在胰高血糖素样肽-1抑制AGEs诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用

目的探讨p38MAPK信号通道在胰高血糖素样肽-1（GLP-1）拮抗糖基化终末产物（AGEs）诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡
的作用。方法实验组分为对照组、AGEs组、GLP-1组、AGEs+GLP-1组、AGEs+抑制剂组及AGEs+GLP-1+抑制剂组,western
blot技术检测p-p38MAPK/p38MAPK、p-eNOS/eNOS蛋白表达情况,Annexin V/PI流式检测细胞凋亡率。结果与对照相比较,
单独加入AGEs或GLP-1可分别导致p-p38MAPK蛋白表达水平明显上升（P=0.001）或下降（P<0.001）;与对照组相比AGEs可
显著降低p-eNOS表达水平（P=0.007）,而予以GLP-1或p38MAPK抑制剂（SB203580）预处理后,受抑制的eNOS蛋白表达水平
再次显著升高（P=0.004）;在AGEs 组加入SB203580 或GLP-1 预处理后,AGEs诱导的细胞凋亡率均显著下降（P<0.001,P<
0.001）。结论GLP-1至少部分通过抑制p38MAPK蛋白磷酸化,上调磷酸化eNOS蛋白的表达,对人脐静脉内皮细胞起到抗凋
亡的保护作用。
     

新生鼠高氧肺损伤中p38MAPK的磷酸化

目的 探讨p38丝裂素活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)在新生鼠高氧肺损伤中的表达及意义.方法 160只新生鼠分为空气对照组、高氧肺损伤组、高氧肺损伤 SB203580组和高氧肺损伤 生理盐水组,分别建立动物模型.在12、24、72 h和1周4个时相点处死,进行肺组织病理学检查、肺湿/干重比值(W/D)测定、Western blot法检测p38MAPK的表达.结果 高氧暴露72 h即可建立肺损伤模型.新生鼠暴露于高氧12h后,p38MAPK开始表达,72h达高峰,后逐渐降低.在高氧暴露72 h后,空气对照组未见p38MAPK表达,高氧肺损伤组可见p38MAPK表达;高氧肺损伤 生理盐水组p38MAPK表达明显强于高氧肺损伤 SB203580组.结论 p38MAPK参与了新生鼠高氧肺损伤的过程,SB203580可以减轻这种损伤.     

胃癌细胞MKN-45和SGC-7901中MTA1的泛素化修饰及其对MTA1表达的影响

目的 :转移相关基因1(metastasis associated 1,MTA1)已知与肿瘤转移密切相关,且与胃癌恶性程度明显相关,并可以通过影响信号转导途径发挥其功能,本研究拟确定MTA1是否可以被泛素化途径所调控。方法:以蛋白酶体抑制剂MG-132处理胃癌细胞后,以IP/WB实验检测MTA1的表达水平,并将带Myc标签的MTA1质粒以及带HA标签的泛素(HA-Ub)质粒转入该细胞,检测Myc-MTA1的表达。结果:以蛋白酶体抑制剂MG-132处理胃癌细胞MKN-45、SGC-7901后,MTA1表达水平显著增加;免疫共沉淀实验显示泛素分子可以与MTA1直接结合,并且实验组较对照组相比泛素化程度明显增加;将HEK293细胞以si MTA1处理封闭MTA1的表达后,将Myc-MTA1质粒以及HA-Ub质粒转入该细胞,发现当后者存在时Myc-MTA1可被强烈泛素化。结论:在胃癌细胞中MTA1是可被泛素化途径修饰的蛋白。