荧光原位杂交与免疫组化检测结直肠癌组织HER-2基因扩增或蛋白表达情况的研究

目的:用免疫组化(IHC)和荧光原位杂交技术(FISH)检测结直肠癌组织中HER-2蛋白表达或基因扩增状况,探讨HER-2在结直肠癌中的表达及临床意义.方法:采用IHC EnVision法检测68例结直肠癌及40例癌旁粘膜组织中HER-2蛋白的表达情况,并分析其与结直肠癌临床病理特征和预后的关系;对IHC(++)和(+...     

多重PCR靶向富集结合高通量测序筛查结直肠癌中MMR基因的突变

 目的  探讨多重PCR靶向富集结合高通量测序技术在结直肠癌 (colorectal cancer,CRC)中检测错配修复 (mismatch repair,MMR)基因种系突变的应用。方法  收集17例CRC患者和14例正常人的血液并提取基因组DNA;设计和优化寡聚核苷酸探针,使其能对5个基因MLHl、MSH2、PMS1、PMS2和MSH6的73个外显子序列进行有效的PCR扩增和富集;应用多重PCR技术靶向富集样本MMR基因的外显子序列;扩增产物进行文库构建和高通量测序,检测MLHl、MSH2、PMS1、PMS2和MSH6基因的突变情况。结果  31个样本共得到2.7Gb的数据,平均reads数为287 048,测序数据中平均82.18%可与参考序列进行比对,外显子序列平均覆盖度为99.9%,平均测序深度为2 282。在MMR基因的外显子区域共发现13种非同义单核苷酸变异 (single nucleotide variation,SNV)、2种同义 SNV,其中MSH6的c.G3205C:p.G1069R为未见报道SNV。检测结果经Sanger法测序验证,结果一致。结论  多重PCR靶向富集结合高通量测序技术是一套通量高、速度快、费用低、准确性高的MMR基因突变筛查方法。     

确定子宫浆液性乳头状腺癌中HER2/neu基因的状态:免疫组化和荧光原位杂交的比较分析

目的:评价和比较在子宫浆液性乳头状癌(USPC)中H ER2/neu基因蛋白过度表达及基因扩增情况。研究设计:1997—2004年26例因子宫浆液性乳头状癌(USPC分期ⅠA期-Ⅳ期)在阿肯色州立大学医学中心治疗的妇女,在石蜡切片中分别应用免疫组化(IH C)和原位免疫荧光技术(FISH)分析与比较H ER2/neu的蛋白表达和基因扩增。应用FISH技术评估所有样本17号染色体多态性。结果:26例USPC样本中16例(62%)H ER2/neu蛋白呈中-强度表达,其中7例(27%)显示H ER2/neu中度染色(2+),9例(35%)为强染色(3+)。用FISH技术发现26例中有11例(42%)ERBB2基因扩…     

荧光原位杂交和免疫组织化学技术检测乳腺癌HER-2基因扩增和蛋白表达状态对照研究

目的 比较荧光原位杂交(FISH)与免疫组织化学技术(IHC)在检测乳腺癌患者HER-2基因扩增和表达状态方面的应用.方法 采用FISH技术对66例IHC检测结果为HER-2基因过度表达(3+/2+)和低表达或无表达(1+/-)的乳腺癌石蜡切片进行HER-2基因扩增状态检测.结果 用FISH技术检测42例IHC结果显示HER-2基因过度表达(3+/2+)的标本,31例显示HER-2基因扩增,11例无扩增.检测24例IHC检测显示HER-2基因低度表达或无表达(1+/-)的标本,均未显示HER-2基因扩增.两组之间比较,Kappa系数为0.672,P<0.001,显示两项检测技术具有良好的一致性.另外.用FISH技术检测到部分病例显示17号染色体多体性,并且该多体性在HER-2高表达(3+/2+)的病例发生率显著高于低表达或无表达(1+/-)的病例(x~2=4.688,P=0.03).结论 FISH和ICH两项技术具有良好的一致性.IHC可作为HER-2基因扩增和表达状态检测的筛查手段.FISH技术可以作为检测HER-2基因扩增和17号染色体多体性的确诊手段.

Abstract：

Objective To evaluate the application of the immunohistochemistry (IHC) and the fluorescence in situ hybridization (FISH) in detecting the amplification and the expression of HER-2 gene in the breast cancer patients. Methods Sixty-six cases of paraffin-embeded breast cancer samples with overexpression, low or no expression of HER-2 gene as detected by IHC were analyzed for HER-2 gene amplification using FISH. Results Among the 42 samples with HER-2 gene overexpression (3+/2+) detected by IHC, 31 showed positive HER-2 gene amplification and 11 showed negative HER-2 gene amplification in FISH. In the 24 samples with low or no HER-2 gene expression (1+/-) detected by IHC, no HER-2 gene amplification was detected by FISH. The results of the two testing methods showed a good consistency with the kappa coefficient of 0.672 (P<0.001). We also found that the 17 chromosome polysomy in 42% of the samples and the incidence of 17 polysomy was significantly higher in the HER-2 gene overexpression (3+/2+) group than in low or no HER-2 gene expression (1+/-) group (x~2=4.688, P=0.03). Conclusion IHC can be used as a screening method for detecting HER-2 gene amplification, and FISH should be performed in cases of HER-2 gene overexpression (3+/2+) as detected by IHC.     

伴17号染色体着丝粒区扩增乳腺癌的人表皮生长因子受体2状态评估

目的:探讨17号染色体着丝粒区(chromosome 17 centromere locus,CEP17)扩增的乳腺癌人表皮生长因子受体2(human epithelial growth factor receptor 2,HER2)状态评估及其意义.方法:218例浸润性乳腺癌,采用免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)检测HER2蛋白表达情况,荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测HER2基因状态.结果:218例中,发现2例FISH检测有CEP17扩增:(1)病例1 HER2信号呈点状分布,平均2.6个/细胞核,CEP17信号呈簇状或多点状分布,HER2/CEP17比值远低于阳性标准,评估为HER2基因未扩增,伴CEP17扩增;(2)病例2 HER2信号呈多点状分布,平均6.8个/细胞核,CEP17信号呈多点状分布,平均5.9个/细胞核,评估为HER2基因扩增,伴CEP17扩增.两例IHC HER2蛋白表达均为2+.结论:乳腺癌CEP17扩增发生率低,可伴随或不伴随HER2扩增;当FISH显示CEP17扩增时,评估HER2信号绝对拷贝数尤为重要,并综合HER2/CEP17比值以及蛋白表达水平进行HER2状态准确评估,为临床治疗靶向用药提供尽可能准确的信息.     

荧光原位杂交和免疫组化法检测乳腺癌HER-2基因扩增及蛋白表达的对比研究

目的 对比研究乳腺癌中免疫组化法(IHC)检测Her-2蛋白表达和荧光原位杂交法(FISH)检测Her-2基因扩增检测结果的差异性和相关性,并评估其临床应用价值. 方法 应用IHC和FISH技术检测50例乳腺癌组织中Her-2蛋白表达及Her-2基因扩增状况,并进行对比分析. 结果 50例乳腺癌中,8例Her-2蛋白表达IHC(+++)的病例中有7例Her-2基因扩增(87.5%),7例IHC(++)的病例有6例Her-2基因扩增(85.71%),3例IHC(+)的病例有2例Her-2基因扩增(66.67%),而在32例IHC(0)的乳腺癌中仍出现2例Her-2基因扩增(6.25%).IHC和FISH两种方法检测结果的总符合率为88.0%,两者呈显著相关(P＜0.001). 结论 IHC是初步筛查乳腺癌Her-2状态的首选方法,Her-2蛋白高强度表达IHC(+++)与基因扩增有较好的一致性,而弱中强度表达IHC(+～++)者有必要进一步行FISH法检测基因状态来指导临床的诊疗.     

荧光原位杂交对乳腺癌HER2基因的检测及临床应用

目的探讨荧光原位杂交法(FISH)检测乳腺癌组织中人类表皮生长因子受体2(HER2)表达的临床意义。方法采用FISH和免疫组织化学(IHC)法分别检测28例乳腺癌标本中HER2基因扩增状况和HER2蛋白表达。结果在IHC法检测HER2蛋白表达(++)的22例标本中,FISH检出6例HER2基因扩增,16例无变化。在HER-2蛋白表达(+++)的6例标本中,FISH检出5例HER2基因扩增,1例无扩增。结论对于IHC法初筛为(++)的患者应再进行FISH检测,以确定HER-2基因的状态,从而确定是否应用曲妥珠单抗治疗。     

回顾分析174例FISH和IHC全自动平台检测HER-2基因的状态

目的:分析全自动免疫组化(IHC)和荧光原位杂交(FISH)技术平台检测乳腺浸润性导管癌患者的HER-2蛋白(即C-erbB2蛋白)和HER-2基因扩增的结果的一致性,分析蛋白基因表达状况与临床病理特征的关系。方法:回顾性分析174例乳腺浸润性导管癌患者的临床资料,样本经手术、麦默通活检或穿刺取样。分析IHC和FISH检测结果;比较IHC检测C-erbB2蛋白与FISH检测HER-2基因的一致性;分析FISH与IHC检测结果与ER、PR及临床病理参数的关系。结果:FISH检测显示,HER-2基因无扩增表达(-)101例、HER-2基因有不同程度的扩增表达(+)73例;IHC检测显示,C-erbB2蛋白(-)、(+)、(++)、(+++)分别为4、15、114、41例;C-erbB2蛋白(+)和HER-2基因扩增(-)的一致率86.7%(13/15),C-erbB2蛋白(++)和HER-2基因扩增(-)的一致率70.1%(81/114),C-erbB2蛋白(+++)和HER-2基因扩增(+)的一致率92.7%(38/41),两者阳性结果具有高度一致性(Kappa=0.766,P0.001);FISH检测结果与年龄有关(P0.05),IHC检测结果与组织学分级有关(P0.05),两种检测方法结果与肿瘤直径、淋巴结转移、ER、PR状态等均无关(P0.05)。结论:可以利用一致性非常好的IHC和FISH两大平台来检测乳腺浸润性导管癌HER-2蛋白和基因的表达状态,以协助临床用药指导;IHC相对价格便宜,初步筛查蛋白结果,可以优先采用,对于结果为不确定的(++)IHC检测标本,再进一步应用FISH法明确HER-2基因扩增状态,以免误导临床;检测操作和阅片判读过程中规范化流程和高科技仪器设备起到很好的辅助作用。     

全自动免疫组化和荧光原位杂交方法检测胃癌HER2状态

【摘要】 目的 探讨胃癌中HER2基因状态分布及HER2基因扩增/HER2蛋白表达与临床病理特征间的关系。方法 收集四川大学华西医院2009年1月～3月170例手术切除原发性胃或胃食管交界处腺癌石蜡组织标本,同时收集患者的临床和病理信息。所有病例行全自动免疫组化(IHC)和荧光原位杂交(FISH)检测HER2蛋白和基因的表达。结果 170例胃癌组织中, IHC检测蛋白表达为：100例(588%)0+,33例(194%)1+,14例(82%)2+,23例(136%)3+。FISH检测HER2基因扩增27例(159%),17号染色体多倍体者20例(704%）。其中4例(4%)IHC检测0+或1+,FISH检测阳性;有14例（378%）IHC检测2+或3+,FISH检测阴性。IHC与FISH结果间差异显著（P＜001)。HER2过表达和基因扩增与患者的年龄、性别、病理分级、肿瘤部位及TNM分期间没有相关性(P＞005),与分化程度、Lauren分级有相关性（P＜001)。结论 IHC与FISH检测胃癌HER2基因的阳性率分别为217%和159%。HER2基因扩增中17号染色体多倍体发生比例较高。分化程度越高,HER2阳性率越高,且主要集中在肠型。IHC可作为胃癌HER2检测的有效筛查手段,其不确定的病例可再行FISH检测确诊。     

FISH及免疫组化技术检测乳腺癌Her-2基因与蛋白的临床应用价值

目的 分析免疫组化技术(IHC)检测石蜡标本乳腺癌组织中原癌基因-2(Her-2)蛋白表达与荧光原位杂交技术(FISH)检测Her-2基因扩增状态的临床应用价值.方法 IHC和FISH技术分别检测98例乳腺癌癌组织中的Her-2蛋白表达和Her-2基因扩增.结果 98例石蜡包埋乳腺癌组织中1例Her-2表达蛋白为阴性的患者中,Her-2 基因扩增亦为阴性,符合率100%(1/1);15例Her-2蛋白表达为(+)的患者中,Her-2 基因扩增为阴性的12例,符合率为 80.0%(12/15);49例Her-2蛋白表达为(++)的患者中,Her-2基因扩增为阳性的25例,符合率51%(25/49);33例Her-2蛋白表达为(+++)的患者中,Her-2 基因扩增为阳性的27例,符合率81.8%(17/21).IHC法初筛为阴性(-~+)和强阳性(+++)检测结果与FISH检测结果一致性较高(Kappa =0.602＞0.40,P＜0.01),且两法检测差异无统计学意义(χ2=0.508,P＞0.05).结论 IHC方法检测乳腺癌组织中Her-2蛋白表达阴性和强阳性与FISH检测结果一致性较高.     

FISH检测平顶山地区乳腺癌组织中HER-2基因的表达

目的 FISH方法检测乳腺癌组织中人表皮生长因子2(Her-2)的扩增情况,并与免疫组化结果相比较,优化实验方法。方法用FISH方法及免疫组化检测乳腺癌Her-2的表达,分析相关性。结果 202例乳腺癌患者中,FISH检测Her-2基因扩增60例,阳性率29.7%(60/202),其中Her-2蛋白阴性,Her-2基因未扩增36例,扩增1例,符合率94.7%;Her-2蛋白(+),Her-2基因扩增12例,符合率18.5%;Her-2蛋白(++),Her-2基因扩增22例,符合率26.8%;Her-2蛋白(+++),Her-2基因扩增26例,符合率92.8%。结论 FISH检测准确率较高,IHC阴性和(+++)时与FISH结果一致性较好,可作为治疗依据,IHC(+)～(++)时仅能作初步筛查,明确Her-2情况仍需FISH检测。     

SISH检测乳腺癌HER2基因及17号染色体倍体分析

目的:评价银增强原位杂交(SISH)用于乳腺癌患者人表皮生长因子受体2(HER2)基因扩增状态检测的可行性和17号染色体多体的发生情况及其意义。方法:对90例手术后乳腺浸润性导管癌患者标本行全自动免疫组织化学(IHC)染色检测HER2蛋白表达,荧光原位杂交(FISH)和SISH检测HER2基因状态及17号染色体多体的发生率。结果:在IHC(3+)、(2+)、(1+/0)3组中,SISH检测与FISH检测在检测HER2基因扩增方面的总体符合率为96%。17号染色体多体的发生率在IHC(3+)、(2+)、(1+/0)3组中分别为44%,26%和0.02%,其总的发生率为18%。结论:SISH技术用于乳腺癌HER2基因状态检测结果与FISH相当,具有可行性和实际使用价值;17号染色体可能与乳腺癌患者的预后有关。     

IHC与FISH检测118例乳腺浸润性导管癌HER-2的对比分析

目的:比较IHC与FISH检测乳腺浸润性导管癌HER-2的一致性。方法:分别用IHC和FISH对118例乳腺浸润性导管癌HER-2进行检测,比较两者检测结果的相关性。结果:118例浸润性乳腺导管癌标本,IHC检测结果为:14例为(-);20例为(1+),55例为(2+),29例为(3+)。FISH检测结果为:53例为2.2,64例为1.8,1例为1.8-2.2。IHC检测HER-2阳性的病例FISH检测中阳性符合率96.6%(28/29),IHC检测HER-2阴性的病例FISH检测均为阴性,符合率100%(34/34)。IHC检测HER-2(2+)的55例患者中有25例经FISH检测证实HER-2阳性,30例呈阴性。FISH检测共发现5例17号染色体多体,其发生率为4.24%。IHC检测到8例乳腺癌HER-2表达存在异质性,异质性在FISH检测中亦得到证实。结论:IHC与FISH检测乳腺浸润性导管癌HER-2具有高度一致性,免疫组化HER-2(2+)病例需行FISH检测。     

FISH技术在乳腺癌Her2基因检测中的应用

目的:探讨乳腺癌中免疫组化法(IHC)检测cerbB2蛋白表达和荧光原位杂交法(FISH)检测Her2基因扩增,并评估其临床意义.方法:IHC及FISH法分别检测50例乳腺癌组织中cerbB2蛋白表达及Her2基因扩增状态,并进行分析比较.结果:50例乳腺癌中Her2蛋白表达(++)者21例中,17例出现Her2基因扩增(80.95%),4例无扩增;Her2蛋白表达(+++)者29例中,28例出现Her2基因扩增(96.55%),1例无扩增;50例乳腺癌中共有45例Her2基因扩增(90%),5例无扩增.两种方法的检测结果阳性率差异无统计学意义(P>0.05).结论:免疫组化检测Her2蛋白表达的情况可以傲为临床治疗的初筛,免疫组化检测Her2蛋白表达(++)及(+++)的病例需要进一步行Her2基因的扩增,来确定临床治疗方案.     

乳腺癌17号染色体多体与HER2基因扩增及预后因素的相关性

目的 分析乳腺癌17号染色体多体与HER2基因扩增及预后因素的相关性,探讨其临床意义.方法 采用免疫组化(IHC)技术检测120例浸润性乳腺癌患者HER2蛋白表达情况,选择IHC结果为( + + )及( + + + )的患者92例行荧光原位杂交(FISH)检测其HER2基因扩增及17号染色体多体.结果 58.7%(54/92)的患者出现HER2基因的扩增,免疫组化( + + )、( + + + )的病例所占比例分别为72.8%(67/92)、27.2%(25/92);FISH与免疫组化检测在HER2蛋白( + + )、( + + + )的符合率分别为47.8%(32/67)、88%(22/25);20.7%的患者存在17号染色体多体,HER2基因扩增组出现17号染色体多体的概率比HER2基因无扩增组更高(P<0.01);存在17号染色体多体的患者其淋巴结转移率更高;17号染色体多体与肿瘤最大直径及组织学分级无相关性.结论 HER2免疫组化( + + )的患者建议行FISH检测.17号染色体多体与HER2基因扩增相关,且可能是导致HER2基因扩增的原因之一.17号染色体多体可能提示乳腺癌的预后.     

荧光原位杂交法应用于胃癌Her-2基因检测及其临床意义

目的：探讨荧光原位杂交法(FISH)应用于胃癌Her-2基因检测及其临床意义。方法选取54例胃癌组织标本,采用免疫组化法(IHC)及FISH对标本中胃癌Her-2蛋白表达与基因扩增情况进行测定,并比较测定结果。结果（1）FISH测定结果：14例表现为标本扩增,40例表现为标本无扩增,Her-2基因扩增率为25.93%;（2）IHC测定结果：10例Her-2表达为+++,8例Her-2表达为++,16例Her-2表达为+,20例Her-2表达为0,Her-2蛋白表达率为18.52%;（3）扩增符合率：Her-2蛋白表达为0时,Her-2扩增符合率为5.00%;Her-2蛋白表达为+时,Her-2扩增符合率为6.67%;Her-2蛋白表达为++时,Her-2扩增符合率为37.50%;Her-2蛋白表达为+++时,Her-2扩增符合率为90.00%;总符合率为25.93%,且呈现为正相关（P<0.05）。结论在胃癌筛查中,可将IHC作为初步筛查手段,而针对晚期胃癌患者则建议行FISH检测,以便进一步了解Her-2基因状态,为临床靶向治疗提供明确信息。     

荧光原位杂交与免疫组化技术在非小细胞肺癌中的应用比较

目的研究荧光原位杂交(FISH)与免疫组化技术(IHC)在非小细胞肺癌中的应用,并将结果进行比较。方法使用IHC和FISH技术对患有非小细胞肺癌的28例患者石蜡标本的蛋白表达和EGFR基因进行检测,将检测数据进行比较。结果 28例非小细胞肺癌患者标本中,IHC法对EGFR基因的检测结果显示,表达为强阳性的有14例,中等阳性的有6例,弱阳性的有2例,阴性的有6例。总阳性率为78.57%。28例非小细胞肺癌患者标本中,FISH法对EGFR基因的检测结果显示,表达为阳性的患者有21例,表达为阴性的患者有7例,阳性率为75.00%。结论 FISH技术对EGFR基因检测的结果可以对IHC技术进行补充,并且也可以避免IHC假阳性对非小细胞肺癌患者使用酪氨酸激酶抑制剂治疗效果进行误判,产生不必要的负担。IHC技术可以用来排除患者的EGFR基因扩增,FISH技术可以用来对患者进行确诊,IHC和FISH技术相互补充可以对非小细胞肺癌的治疗有重要的指导作用。     

乳腺癌HER-2不同检测方法的比较研究

目的 比较荧光原位杂交技术（FISH）与免疫组织化学法（IHC）用于检测HER-2的效果。方法 将本院2020年1月-2022年3月期间收治的乳腺癌患者247例作为研究对象，均同时采用FISH与IHC检测HER-2基因或蛋白的表达情况，比较两种方法检测结果及一致性。结果 本研究纳入的247例患者均留取合适标本进行相关检查，结果表明HER-2蛋白表达采用免疫组化检测+++，可疑及+患者分别有8.10%(20例)，73.68%(182例)和10.12%(25例)，HER-2蛋白表达采用荧光原位杂交技术检测有扩增和无扩增患者分别为30.36%(75例)和69.64%(172例)。247例患者免疫组化检测HER-2结果为+++、++和+时与荧光原位杂交技术检测的符合率分别为85.00%、96.70%、20.00%，免疫组化检测HER-2结果为+++、++的202例患者中有97.03%的患者FISH检测有HER-2基因扩增，而结果为+的患者中有20.00%患者FISH检测有HER-2基因扩增。FISH和IHC检测结果经一致性检验后发现一致性较好（Kappa值=0.543,P <0.05）。...     

Ⅰ期结直肠癌转移基因突变特征及临床特征分析

正结直肠癌是一种常见的恶性肿瘤,在所有恶性肿瘤中发病数居第三位~([1-2])。随着结直肠癌筛查的发展,T1/T2结直肠癌的发现比例提高,但确诊为结直肠癌的患者大约50%～60%发生转移~([3]),肝脏为最常见的转移器官~([4-6])。Yaeger等~([7])在2018年通过测序平台MSK-IMPACT 341、IMPACT 410、IMPACT 468对1134个结直肠癌(CRC)样本(1099患者)进行了前瞻性靶向测序,确定APC内含子区域的剪接改变、96%的结直肠癌增加了致癌性WNT途径改变等。     

HER-2在结直肠癌中的研究进展

人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER-2,又称为ERBB2)是一种致癌驱动因子,也是乳腺癌和胃癌等恶性肿瘤公认的治疗靶点。近年来研究发现,HER-2在部分结直肠癌患者中扩增或者过表达,这为结直肠癌的靶向治疗提供了新的思路。此外,临床试验结果表明,部分晚期结直肠癌患者接受靶向HER-2的单抗联合治疗可获得显著的生存获益。因此,有必要对HER-2分子在结直肠癌疾病中的价值进行重新评估。本文综述HER-2在结直肠癌患者中的检测方法、临床病理特征以及靶向治疗等方面的研究进展,以期为结直肠癌的临床治疗提供理论依据。