银杏内酯B协同地塞米松对小鼠哮喘模型气道炎症和辅助T细胞亚群的影响

目的：探讨银杏内酯B协同地塞米松对支气管哮喘气道变应性炎症及辅助T细胞亚群的作用。方法：40只BALB/c小鼠随机分成正常对照组、哮喘对照组、地塞米松组、银杏内酯B组和联合干预组,每组8只。除正常对照组外,其余4组均造成哮喘模型,地塞米松组、银杏内酯B组和联合干预组给予相应的药物。收集支气管肺泡灌洗液（BALF）,行白细胞（WBC）及嗜酸性粒细胞（EOS）计数;应用EUSA法测定BALF中IFN-γ和IL-4水平。结果：BALF中WBC及EOS计数：3个用药组较哮喘对照组明显减少（P〈0．01）,联合干预组减少的程度大于地塞米松组、银杏内酯B组（P〈0．05或P〈0．01）。3个用药组小鼠BALF上清中IFN—γ和IL-4水平与哮喘对照组比较,银杏内酯B组、地塞米松组和联合干预组BALF上清中IFN-γ和IL-4水平分别增高和降低（P〈0．05或P〈0．01）,而联合干预组增高和降低的程度大于地塞米松组、银杏内酯B组（P〈0．05或P〈0．01）。结论：银杏内酯B能减轻小鼠哮喘模型BALF中炎性细胞浸润,并减少IL-4的水平;银杏内酯B与激素具有协同抗炎作用;同时具有更好的调节Th亚群失衡的作用。     

布地奈德对哮喘大鼠支气管Eos和STAT6表达的调控作用

目的:研究布地奈德(BUD)对支气管哮喘大鼠支气管Eos和STAT6表达的调控作用.方法:30只清洁级幼年健康雄性Wisar大鼠经造模后,随机分为对照组、哮喘组和BUD组.实验结束后对支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织匀浆进行细胞总数、嗜酸性粒细胞(EOS)计数和分类计数;应用ELISA法测定血清中IL-4的含量;采用免疫组化法检测STAT6蛋白表达的变化.结果:(1)哮喘组BALF中细胞总数、EOS绝对值和EOS占细胞总数的百分比(EOS％)均显著高于对照组(P＜0.01),BUD组BALF中上述各项指标较哮喘组均显著降低(P＜0.01);(2)哮喘组BALF中IL-4的浓度显著高于对照组(P＜0.01),BUD组较哮喘组显著降低(P＜0.01);(3)哮喘组支气管上皮细胞STAT6蛋白阳性表达较对照组明显增强(P＜0.01).结论:哮喘大鼠支气管STAT6较强表达,BUD有抑制气道炎症的作用,使IL-4合成减少,从而下调STAT6及其基因表达.     

地塞米松对哮喘小鼠肺液清除功能障碍的作用

目的：研究支气管哮喘（以下简称哮喘）小鼠肺液清除功能的变化及地塞米松的作用，并探讨其可能机制。方法：雌性C57／BL6小鼠48只，随机分为对照组、哮喘组和地塞米松干预组。以卵蛋白（OVA）联合佐剂腹腔注射（第1、15天）加雾化吸入（第25～29天）方法复制小鼠哮喘模型。分别在末次激发后2h及24h测定各组小鼠肺组织病理变化及湿干重比值（W／D），应用免疫组化法测定各组水通道蛋白5（AQP5）在肺组织中的分布，分别采用实时PCR和蛋白质印迹法测定各组小鼠肺组织中AQP5mRNA和蛋白质的变化。ELISA法测定各组小鼠支气管肺泡灌洗液中细胞数和细胞因子IFN-γ及IL-13的水平。结果：哮喘组小鼠肺组织W／D较对照组明显升高，末次激发后2h和24h分别为4．98±0．46和4．81±0．33，分别升高22．9％和18．7％（P〈0．05），且激发后2h哮喘组小鼠肺组织W／D升高更明显。地塞米松干预组小鼠2h和24h肺组织W／D分别为4．01±0．11和4．21±0．14，与哮喘组小鼠相比显著降低（P〈0．05）；与对照组无显著性差异（P〉0．05）。HE染色可见哮喘组小鼠肺组织支气管周围大量以嗜酸性粒细胞和淋巴细胞为主的炎细胞浸润；地塞米松干预组小鼠气道炎症程度减轻，支气管肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞、单核细胞和淋巴细胞比哮喘组明显减少，IFN-γ和IL-13分别为（89．25±9．71）和（52．37±8．69）pg／mL，与哮喘组EIFN-γ和IL-13分别为（66．71±7．51）和（85．49±9．23）pg／mL]相比明显改善（P〈0．05）。免疫组化分析表明，AQP5主要表达于Ⅰ型肺泡上皮细胞和气道上皮细胞的腔膜面。哮喘小鼠肺组织中AQP5的表达均较对照组明显减少（mRNA减少约42％，蛋白质减少约64％）。地塞米松上调其表达（与模型组比较，P〈0．05）。结论：哮喘小鼠存在肺液清除功能障碍，肺液含量增?     

地塞米松对哮喘豚鼠气道白介素-5、白介素-10mRNA表达及嗜酸性粒细胞凋亡的影响

目的：检测地塞米松对哮喘豚鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中白介素-5（IL-5）mRNA及IL-10 mRNA表达水平及嗜酸性粒细胞（EOS）凋亡率。方法：健康雄性Hartley系豚鼠随机分为地塞米松组、哮喘组和正常对照组。采用原位细胞凋亡（TUNEL）、RTPCR技术检测BALF中EOS凋亡、IL-5 mRNA及IL-10 mRNA表达水平。结果：地塞米松组BALF中的EOS较哮喘组明显下降，EOS凋亡明显上升（P〈0．01）；IL-5 mRNA水平较哮喘组明显下降，IL-10 mRNA水平较哮喘组明显升高（P〈0.05）。结论：地塞米松可以通过减少IL-5 mRNA的表达，增加IL-10 mRNA的表达有效抑制哮喘豚鼠气道EOS的上升，增加EOS的凋亡。     

PTEN在哮喘大鼠肺部的表达及地塞米松的干预

目的：研究哮喘大鼠PTEN的表达和地塞米松（DXM）对其表达的影响。方法：24只体重（200±10）g的SPF级雄性SD大鼠,随机分为3组：正常对照组、哮喘组、地塞米松组。对支气管肺泡灌洗液（BALF）进行细胞分类计数;应用双抗体夹心酶联免疫吸附试验法测定BALF中IL-13浓度;采用免疫组化法和Western blot法分别检测PTEN的表达及各组大鼠肺组织PTEN量的变化。结果：正常对照组、地塞米松组支气管PTEN蛋白的表达分别为7.87±0.80、1.80±0.23,均高于哮喘组（0.92±0.23,均为P〈0.01）,其主要表达细胞是支气管上皮细胞;哮喘组大鼠BALF中IL-13表达明显升高,明显高于正常对照组;地塞米松组BALF中IL-13量明显下降,与哮喘组比有统计学意义。哮喘组大鼠支气管PTEN蛋白与BALF中的IL-13浓度呈显著负相关（r=-0.675,P〈0.01）。结论：气道上皮细胞是PTEN主要表达细胞,哮喘大鼠PTEN蛋白表达明显减少,PTEN能减少Th2因子的表达;DXM可以促进PTEN的表达,可能为其抑制哮喘气道炎症形成的重要作用机制。     

地塞米松抑制哮喘大鼠肺组织p38蛋白激酶的表达

目的:探讨支气管哮喘大鼠肺组织p38蛋白激酶(p38 MAPK)表达的变化以及地塞米松对其影响.方法:复制大鼠哮喘模型,随机分成3组:正常对照组、哮喘对照组和地塞米松(DEX)干预组.分别采用酶联免疫吸附法(ELISA)和蛋白质印迹检测支气管肺泡灌洗液(BALF)IL-5含量和肺组织磷酸化p38 MAPK表达的变化,并观察气道阻力、BALF中EOS计数以及肺组织病理学变化.结果:哮喘对照组大鼠肺组织磷酸化p38 MAPK表达水平及气道阻力、BALF中IL-5含量和EOS计数均较正常对照组显著增加(P＜0.01);DEX干预组上述指标较哮喘对照组显著降低(P＜0.01),肺组织病理学损伤程度明显减轻.肺组织磷酸化p38 MAPK表达水平与气道阻力、BALF中IL-5含量和EOS计数之间分别呈显著正相关(r=0.77、0.63、0.65,P＜0.01).结论:p38 MAPK可能参与了支气管哮喘的发病过程.DEX对哮喘的治疗作用至少部分与抑制磷酸化p38 MAPK的表达有关.     

脂多糖对幼年哮喘大鼠Toll样受体4及气道炎症的作用

目的探讨不同浓度脂多糖对哮喘大鼠肺组织Toll样受体4表达及气道炎症的影响。方法使用清洁级SD大鼠50只,随机分为对照组（A）、哮喘组（B）、地塞米松组（C）低剂量LPS组（D1）及高剂量LPS组（D2）五组,对哮喘大鼠肺组织的病理变化、炎症细胞改变、OVA-sIgE含量的影响、肺组织TLR4mRNA表达及EOS凋亡的影响进行分析。结果肺组织的病理变化：A组肺间质视野清晰,肺组织形态良好,可见肺泡管、小支气管,未见明显炎症细胞浸润。B组肺间质及肺泡腔内、支气管及血管周围大量炎症细胞浸润,支气管黏膜下水肿,黏膜皱褶增多,粘液腺增生。与B组比较,C组和D2组上述现象明显减轻,D1组无明显变化。BALF中细胞总数、EOS计数及EOS百分比B组均明显高于A组（P＜0．01）;C组和D2组均明显低于B组（P＜0．01）;D1组与B组差异均无统计学意义（P＞0．05）。OVA—sIgE含量：c组、D2组与A相比有明显差异（P＜0．01）,但较B组有明显降低（P＜0．01）。D1组与B组比较差异无统计学意义（P＞0．05）。TLR4mRNA表达能力：A组与B组差异无统计学意义（P＞0．05）;C组、D1组、D2组均明显高于B组（P＜0．01）;D1组明显低于D2组（P＜0．01）。EOS凋亡率：B组和D1组有少许核深染为棕褐色的凋亡细胞。A组、C组、D2纽较B纽增多（P＜0．05或P＜0．01）。结论高剂量脂多糖能降低血清中OVA-sIgE水平,上调TLR4表达,诱导哮喘大鼠肺组织EOS凋亡;低剂量脂多糖虽激活TLR4信号通路,却不能缓解哮喘的气道炎症。     

地塞米松对哮喘模型大鼠肺组织病理变化和TGF-β表达的影响

目的：探讨哮喘时肺组织炎症、中性粒细胞（PMN）、肺泡Ⅱ型（AT-Ⅱ）细胞等的病理改变和转化生长因子-β1（TGF-β1）的表达及地塞米松对其的影响。方法：建立哮喘大鼠模型，支气管肺泡灌洗液（BALF）行细胞计数，光镜、电镜观察肺组织病理改变，免疫组化法检测肺组织TGF—β1的表达。结果：BALF中A组细胞总数、EOS计数显著性高于C组（P〈0．01），D组显著性高于C组但低于A组（均P〈0．01）。肺组织中A组PMN计数显著性高于C组（P〈0.01），D组显著性高于A组（P〈0．01）。A组AT-Ⅱ细胞变性、坏死、崩解、板层体空泡化现象。TGF．B1的表达水平在A组显著性高于C组（P〈0.01），D组显著性高于C组但低于A组（分另为P〈0．01，0．05）。结论：哮喘大鼠肺组织炎症细胞浸润、气道黏膜损伤、AT-Ⅱ细胞损伤、表达水平增加；地塞米松可减少上述病理改变，但对肺组织中PMN数目有增加作用，可能会加重对肺组织的损伤。     

卡介菌多糖核酸对哮喘小鼠胸腺活化调节趋化因子及mRNA表达的影响

目的观察卡介菌多糖核酸(BCG-PSN)对小鼠哮喘胸腺活化调节趋化因子(thymus and activation regulated chemo-kine,TARC)及mRNA表达的影响。方法以卵清白蛋白(OVA)致敏和激发建立小鼠哮喘模型。30只清洁级♂Balb/c小鼠随机分为3组,每组10只:正常对照组、哮喘组、BCG-PSN治疗组。末次激发24h后留取支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺组织。BALF行细胞计数及分类;应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定BALF中TARC、IL-4和IFN-γ蛋白的浓度;光镜观察肺组织病理变化;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定肺组织中TARC mRNA的表达;采用免疫组织化学法测定肺组织中TARC蛋白的表达。结果与正常对照组相比,哮喘组BALF中细胞总数、嗜酸粒细胞(EOS)绝对值及百分比、TARC和IL-4浓度、肺组织中TARC蛋白及mRNA的表达均增高,BALF中IFN-γ浓度低于正常对照组。经BCG-PSN干预后,BALF中细胞总数、EOS绝对数及百分比,TARC、IL-4浓度较哮喘组均下降,肺组织中TARC蛋白及mRNA的表达较哮喘组均下调,BALF中IFN-γ浓度较哮喘组增高。免疫组化显示TARC蛋白主要表达于支气管上皮细胞。BALF中TARC浓度与EOS绝对值、IL-4浓度呈正相关。结论卡介菌多糖核酸可降低TARC在肺组织中的表达,降低气道炎症。     

STAT6在哮喘小鼠肺组织的表达及激素的影响作用

目的探讨信号转导和转录激活因子(STAT)-6在支气管哮喘发病机制中的作用及激素的影响作用。方法经腹腔注射与鼻腔滴注卵白蛋白(OVA)制作小鼠哮喘模型,并设对照组和地塞米松干预组,激发后观察各组肺组织病理学改变,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学检测肺组织STAT6mRNA和蛋白表达。结果OVA末次激发24h后,病理组织学显示哮喘组小鼠肺组织可见大量炎细胞浸润,STAT6mRNA(2.46±0.24与1.41±0.26,P<0.01)及蛋白表达水平较对照组明显增加,地塞米松治疗后,小鼠肺组织炎细胞浸润减轻,STAT6mRNA(1.80±0.36与2.46±0.24,P<0.01)及蛋白表达水平下降。结论哮喘气道中STAT6过度表达,地塞米松可通过调控STAT6表达发挥抗炎作用。     

致敏大鼠脑皮层和肺气道中干扰素—γ和白介素—4相关性的变化

目的:探讨致敏大鼠抗原攻击后脑皮层和肺气道中干扰素-γ(IFN-γ)和白介素-4(IL-4)出现的相关性变化.方法:观察致敏大鼠吸入抗原诱导的支气管肺灌洗液(BALF)和肺组织切片炎症变化,用ELISA法测定BALF和脑皮层IFN-γ和IL-4水平变化.结果:抗原攻击组BALF中的炎症细胞数目明显高于对照未攻击组(P<0.05).地塞米松(DXM,0.5mg/kg,ip)明显减少BALF中的白细胞总数,几乎完全抑制嗜酸性粒细胞(EOS)和淋巴细胞的聚集,但增加中性粒细胞数目.抗原攻击组的组织学检查积分(EOS浸润、粘膜水肿和上皮损伤)也明显高于对照未攻击组(P<0.05).DXM(0.5 mg/kg,ip)减少支气管和细支气管的EOS数目,改善粘膜水肿和上皮损伤.致敏大鼠抗原攻击后,BALF中的IFN-γ水平降低伴随IL-4升高导致了IFN-γ/IL-4比例下降.与此同时,脑皮层匀浆中也出现相似的改变.DXM(0.5mg/kg,ip)能反转BALF和脑皮层匀浆中的IFN-γ/IL-4比例下降.结论:致敏大鼠抗原攻击后脑皮层和肺气道中的IFN-γ和IL-4出现相关性变化.     

Dexamethasone alleviate allergic airway inflammation in mice by inhibiting the activation of NLRP3 inflammasome

Dexamethasone (DEX) is the mainstay treatment for asthma, which is a common chronic airway inflammation disease. However, the mechanism of DEX resolute symptoms of asthma is not completely clear. Here, we aimed to analyze the effect of DEX on airway inflammation in OVA-induced mice and whether this effect is related to the inhibition of the activation of NLRP3 inflammasome. Female (C57BL/6) mice were used to establish the allergic airway inflammation model by inhalation OVA. The number of inflammatory cells in the bronchi alveolar lavage fluid (BALF) was counted by Swiss-Giemsa staining, and the contents of IL-1β, IL-18, IL-5 and IL-17 were detected by ELISA. The degree of inflammatory cells infiltration and mucous cells proliferation in lung tissue were separately observed by H&E and PAS staining. The proteins expression of NLRP3, pro-caspase-1, caspase-1, IL-1β, IL-6 and IL-17 in lung tissue were detected by Western blotting. We found that DEX significantly inhibited OVA-induced inflammatory cells infiltration, airway mucus secretion and goblet cell proliferation in mice. The total and classified numbers of inflammatory cells and the levels of IL-1β, IL-18, IL-5 and IL-17 in the BALF of the experimental group were significantly lower than those of the model group after DEX treatment. DEX also significantly inhibited the activity of NLRP3 inflammasome and reduced the protein contents of Pro-Caspase-1, Caspase-1, Capase-1/Pro-Caspase-1, IL-1β, IL-6 and IL-17 in lung tissues. Our study suggested that DEX alleviates allergic airway inflammation by inhibiting the activity of NLRP3 inflammasome and the levels of IL-1β and IL-18.     

磷酸酰肌醇-3激酶抑制剂对小鼠气道炎症影响的实验研究

目的观察磷酸酰肌醇-3激酶（P13K）抑制剂LY294002对卵白蛋白诱导哮喘小鼠气道炎症的影响。方法Balb／c小鼠30只，采用随机数字表法分为3组，每组10只：LY294002处理组、卵白蛋白组、正常对照组。通过卵白蛋白多次腹腔注射致敏和反复雾化激发，建立哮喘小鼠模型。末次抗原激发后48h收集支气管肺泡灌洗液和骨髓标本，计数细胞总数和嗜酸性粒细胞，并行肺组织学检查。结果与卵白蛋白组比较，LY294002处理组支气管肺泡灌洗液中细胞总数及嗜酸性粒细胞绝对数明显减少（P〈0．05）：肺组织中细支气管、血管周围嗜酸性粒细胞浸润得到控制，气道黏液分泌减少。结论P13K特异性抑制剂LY294002对卵白蛋白致敏的哮喘小鼠气道炎症具有抑制作用。     

灵芝多糖对哮喘大鼠肺泡巨噬细胞GITR/GITRL信号系统表达的影响

目的 通过观察灵芝多糖对哮喘大鼠肺泡巨噬细胞糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(GITR)及其配体(GITRL)表达水平的影响,探讨灵芝多糖治疗哮喘炎症的机制。方法 将40只清洁级SD大鼠随机分为对照组、哮喘组、地塞米松(DXM)干预组和灵芝多糖干预组4组,分离提纯支气管肺泡灌洗液(BALF)中肺泡巨噬细胞,分别采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(QRT-PCR)及免疫细胞化学方法检测GITR/GITRL mRNA及蛋白在肺泡巨噬细胞上的表达。结果 哮喘组BALF中肺泡巨噬细胞GITR/GITRL mRNA和蛋白的表达水平显著高于对照组(P<0.05或P<0.01);灵芝多糖干预组和DXM干预组GITR/GITRL mRNA和蛋白的表达水平显著低于哮喘组(P<0.05或P<0.01);灵芝多糖干预组GITR/GITRL蛋白的表达水平显著高于DXM干预组(P<0.05),而2组间GITR/GITRL mRNA的表达水平差异无统计学意义。灵芝多糖干预组BALF中细胞总数计数显著低于哮喘组(P<0.01),肺组织炎性病理改变较哮喘组显著减轻。GITR/GITRL mRNA及蛋白均显著呈直线正相关(P<0.01)。结论 灵芝多糖能下调肺泡巨噬细胞GITR/GITRL信号系统的表达、降低BALF中细胞总数计数、减轻肺组织炎性病理改变,起到治疗哮喘的作用,但此作用弱于DXM。     

Ligustrazine attenuates inflammation and the associated chemokines and receptors in ovalbumine-induced mouse asthma model

Ligustrazine which is isolated from Chinese herb ligusticum chuanxiong hort, has been widely used in traditional Chinese medicine (TCM) for asthma treatment. In this study, we aim to observe the effect of ligustrazine on inflammation and the associated chemokines and receptors in ovalbumin (OVA)-induced mouse asthma model. Our data demonstrates that ligustrazine suppresses airway hyperresponsiveness to methacholine and lung inflammation in OVA-induced mouse asthma model. Ligustrazine also induces inhibition of inflammatory cells including neutrophils, lymphocytes and eosinophils. In addition, ligustrazine significantly reduces IL-4, IL-5, IL-17A, CCL3, CCL19 and CCL21 level in BALF of asthma mice. Furthermore, ligustrazine induces down-regulation of CCL19 receptor CCR7, STAT3 and p38 MAPK protein expression. Collectively, these results suggest that ligustrazine is effective in attenuation of allergic airway inflammatory changes and related chemokines and receptors in OVA-induced asthma model, and this action might be associated with inhibition of STAT3 and p38 MAPK pathway, which indicates that ligustrazine may be used as a potential therapeutic method to treat asthma.     

黄芪多糖对哮喘小鼠气道炎症启动因子TSLP和DCs表达的影响

摘要：目的 研究黄芪多糖(APS)对支气管哮喘模型小鼠气道上皮中胸腺间质淋巴细胞生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)和树突状细胞(dendritic cell,DCs)表达的影响。方法 饲养雌性BALB/c小鼠30只,随机将其分为对照 组、哮喘模型组和黄芪多糖组,各组采取相应的干预措施。通过支气管哮喘激发试验、肺组织病理学和酶联免疫吸附试验 (ELISA)评价哮喘模型造模是否成功;肺组织中TSLP mRNA的相对表达水平采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测;蛋白免疫印 迹实验(Western blot)检测肺组织中TSLP蛋白的表达;流式细胞术检测支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中 DCs表面CD40、CD80和CD86的表达水平。结果 哮喘模型组小鼠气道反应性增高和肺组织HE染色结果均为哮喘的典型表现且 哮喘模型组BALF中IL-13、IL-5和IL-4的表达水平显著高于黄芪多糖组和对照组(P<0.001);黄芪多糖组和对照组小鼠肺组织中 TSLP mRNA的表达水平与哮喘模型组相比较低(P<0.001),TSLP mRNA的表达水平在黄芪多糖组与对照组之间差异无统计学意 义(P>0.05);黄芪多糖组与对照组小鼠肺组织中TSLP蛋白的表达与哮喘模型组相比较弱;黄芪多糖组与对照组BALF中DCs表面 CD54、CD80、CD86的表达明显低于哮喘模型组(P<0.001),黄芪多糖组与对照组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 黄芪 多糖可明显抑制哮喘模型小鼠气道上皮细胞TSLP水平和DCs表面CD54、CD80、CD86的表达,并减轻气道炎症反应。