农田栽参模式中人参根腐病原菌鉴定与防治

根腐病是东北农田栽培人参的主要病害之一。该研究为明确引起该病害的病原菌类型,验证苏子粗提物对病原菌的抑制作用,为人参根腐病的防治提供依据。采用组织分离法从人参根腐病株中分离得到单菌株;形态学结果表明,该病原菌的分生孢子有2种形态,小型分生孢子呈镰刀形或长柱形,大型分生孢子呈卵圆形,且有明显分隔;分子生物学鉴定结果表明,通过Blast比对,该菌株18s r DNA扩增产物与Fusarium oxysporum已知序列(JF807402.1)的同源性为100%,确定该病原菌为尖孢镰刀菌F.oxysporum。利用牛津杯法评价苏子粗提物对尖孢镰刀菌的抑制作用,结果表明,当提取物质量浓度为0.50 g·L-1时抑菌效果较好,抑菌直径为11.75 mm。该研究确定农田栽参中根腐病的病原菌类型,为根腐病植物源农药的开发提供材料,保障农田栽参的顺利开展。     

人参致病菌拮抗菌株的筛选及鉴定

目的:筛选对人参黑斑菌、人参锈腐菌等人参致病菌有较好抑菌活性的微生物菌株,为人参病害生防防治提供参考依据。方法:采用平板稀释法从人参栽培土壤和菌剂产品中分离菌株;以人参致病菌为靶标,采用对峙培养法筛选拮抗菌;分别采用16S r DNA和28S r DNA序列分析方法鉴定细菌和真菌菌株的分类学地位。结果:共计从人参栽培土壤中分离到66株菌,其中菌株X对人参致病菌表现较好抑菌活性;从商品化菌剂中分离出17株菌,其中菌株QM、BM2、HZ3、GG、HC和DD对人参致病菌表现较好抑菌活性。经鉴定,菌株X为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),QM、BM2和HZ3为甲基营养型芽孢杆菌(B.methylotrophicus),GG为枯草芽孢杆菌(B.subtilis),HC为棘孢木霉(Trichoderma asperellum),DD为平展木霉(T.effusum)。结论:筛选出的7株拮抗菌对多种人参致病菌有较好抑菌活性,菌株X可用于生防菌剂开发,与菌株QM、BM2、HZ3、GG、HC和DD对应的商品化菌剂可用于人参病害防治。     

人参黑斑病菌生防内生真菌的分离筛选、鉴定及抑菌特性

为获取优良人参黑斑病菌生防内生真菌,该文采用平板对峙培养法,对健康人参叶片分离的1株优势内生真菌进行了筛选评价,并结合形态学观察及ITS序列分析对筛选出的生防内生真菌进行了鉴定。结果表明,对峙培养发现这株菌株对人参黑斑病菌具有较好的抑制作用,抑菌率为(60. 21±0. 12)%,标记为FS-01菌株; FS-01菌株与人参黑斑病菌对峙培养的菌丝交界处,人参黑斑病菌菌丝出现了溶解、断裂和缠绕。未灭菌的FS-01菌株发酵液对人参黑斑病菌的抑菌率为(41. 62±0. 17)%;灭菌的FS-01菌株发酵液对人参黑斑病菌的抑菌率为(13. 94±0. 21)%。经鉴定,FS-01菌株为毛壳菌属Chaetomium中的球毛壳菌C. globosum。     

人参可利用内生菌株的筛选和鉴定

目的研究吉林产人参Panax ginseng内生菌资源状况,筛选出对人参病原菌具有拮抗作用的内生菌。方法采用混菌法初筛和发酵液拮抗法复筛来筛选具有拮抗活性的菌株,并用16 S r DNA和ITS方法鉴定筛选得到的内生菌株。结果在人参中共分离获得133株内生菌,通过初筛和复筛后,从中选出了4株对人参病原菌具有较好拮抗作用的菌株,分别为B16、B25、B69和F32,其中B16、B25和B69对6种以上病原菌均表现出了抑菌作用,F32对菌核病菌、疫病菌和根腐病菌的抑菌效果最好,其抑菌圈直径均大于35 mm,经鉴定它们分别为甲基营养型芽孢杆菌、解淀粉芽胞杆菌、死谷芽孢杆菌和齿孢青霉。结论人参内生菌具有多样性,并有拮抗病原菌活性高的菌株存在,可以成为人参病害生防菌的新来源。     

两面针内生真菌遗传多样性分析及其抗菌活性研究

为了揭示抗菌草药两面针内生真菌的分布和种群特征及其在抗菌研究中的应用潜力,该研究对广西野生两面针内生真菌的分子鉴定、遗传多样性和抗菌活性进行研究。两面针内生真菌分离培养和分子鉴定的结果显示,从两面针植物中分离获得35株内生真菌,隶属于2门4纲10目12科15属,刺盘孢属Colletotrichum和镰孢属Fusarium为优势菌属,均占总菌株数的20%;根、茎和叶内生真菌多样性存在明显差异,茎部内生真菌的Shannon index(H'=1.678)明显较根(0.882 1)和叶(0.515 4)部高。抗菌活性分析结果显示,14.28%的内生真菌至少对1种病原指示菌有抑菌活性,其中Fusarium sp. ZN-34菌株对大肠杆菌的抑菌效果最强; Fusarium sp. ZN-26菌株对金黄色葡萄球菌的抑菌效果则最好;综合抑菌的广谱性和效能而言,Fusarium sp. ZN-26和Phialemoniopsis pluriloculosa ZN-35对2种病原细菌的抗菌效果较好。以上研究结果表明,广西野生药用植物两面针中蕴藏着丰富多样的内生真菌资源及多种有较好抑菌活性的内生真菌,可为两面针内生真菌抗菌基础物质的提取、分离和分析及天然新颖抗菌剂的开发提供可利用的候选菌株。     

3种仙人掌植物内生真菌抑菌活性的研究

目的从墨西哥仙人掌、元江仙人掌、绿仙人掌的肉质茎中分离内生真菌,并进行初步鉴定及活性筛选。方法选择30种病原微生物作为指示菌进行抑菌试验。结果从3种仙人掌的茎中分离出111株内生真菌,其中49株内生真菌对一种或多种病原微生物有抑制作用,来自墨西哥仙人掌、元江仙人掌、绿仙人掌的抗菌活性菌株比例分别为48.4%、42.9%及42.3%,其中平板抑菌直径大于15mm的高抗菌株有20株。抗菌活性菌株主要分布于青霉属、曲霉属等19个属中。结论首次从仙人掌中分离和鉴定出111株内生真菌,仙人掌内生真菌中广泛分布着活性菌株。     

人参皂苷compound K转化菌株的筛选

目的:筛选具有人参皂苷转化能力的真菌菌株,用于生产稀有人参皂苷compound K.方法:通过液态发酵,以三七茎叶总皂苷为底物,采用TLC和HPLC-ELSD检测转化产物,从12株植物病原真菌中筛选能够转化产生人参皂苷compoundK的最佳菌株.结果:获得一株高效人参皂苷转化真菌,可以转化产生人参皂苷compound K,该菌株为镰刀属真菌串珠镰孢Fusarium moniliforme.结论:串珠镰孢对三七茎叶总皂苷具有较高的转化效率,有望用于生产制备compound K等低含量高活性的稀有人参皂苷.     

四川主产区川芎根腐病病原菌鉴定

目的:明确四川主产区川芎根腐病病原菌类群,为病害防治提供依据。方法:从都江堰、彭州采集典型病株,按照柯赫氏法则,通过形态学观察和真菌r DNA-ITS序列分析,确定病原菌种类。结果:菌株f2-16、f3-2、f4-19、f5-7可引起病害发生;与Gen Bank已知序列Fusarium solani(GQ229075)、Plectosphaerella cucumerina(JQ796755)、Fusarium oxysporum(JN232136)、Phoma glomerata(FJ481024)同源性分别为99%、99%、100%、100%;4种菌均存在于都江堰病样,仅f3-2菌种存在于彭州病样。结论:茄类镰刀菌F.solani、尖孢镰刀菌F.oxysporum、小不整球壳菌P.cucumerina和球状茎点霉Ph.glomerata是川芎根腐病的病原,不同地区间病原菌类群存在差异。     

人参病害生防细菌分离鉴定及其抑菌活性测定

目的:筛选对人参黑斑菌、人参菌核菌、人参立枯丝核菌等有抑菌活性的微生物菌剂产品,有效解决人参生产过程中的农残超标问题,为人参病害绿色防控提供参考依据。方法:采用稀释平板法从微生物菌剂中分离活体菌株,室内对峙培养验证菌株的抑菌活性;根据菌落形态特征、显微结构及gyr A、gyr B基因序列鉴定菌株的归属。结果:从"KDL"复合微生物菌剂中分离出12株细菌(编号:Y1～Y12),除Y12外,其余菌株对七种人参致病菌均有抑菌活性。其中,Y4对人参菌核菌的抑菌率最高(68. 42%),Y9对人参立枯丝核菌的抑菌率最高(54. 07%),Y2对人参疫病菌、人参黑斑菌、人参灰霉菌和人参锈腐菌的抑菌率最高(分别为68. 25%、52. 58%、49. 46%和40. 65%),Y3对人参根腐菌的抑菌率最高(47. 37%)。经鉴定,Y1、Y2和Y8为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis,Y3～Y7、Y9～Y11为解淀粉芽孢杆菌B. amyloliquefaciens。结论:分离自"KDL"复合微生物菌剂的绝大部分菌株对七种人参致病菌均有较好的抑菌活性,推测该菌剂可能对人参病害具有生防潜力,可尝试用于人参病害防控。!     

木霉属真菌诱导根及根茎类中药材抗根腐病的研究及应用进展

根腐病是大多数中药材种植过程中所面临的一种防治难度较大且损失较为严重的微生物病害，根或根茎类中药材中高达87.6%易患根腐病，严重影响中药材种植产业的发展。木霉属真菌是一类具有生物防控功能的真菌，可诱导植物提升其对微生物病害的抵御能力，同时可促进植物生长，高效减少多种微生物病害对种植造成的损失。而目前木霉属真菌在中药材种植业中使用尚少，故对预防和治理栽培中药材的根腐病有很大的应用潜力。针对上述现状，该文经过比较讨论，认为相较于化学防治、物理防治，生物防治中药材根腐病较为高效且符合我国中药生态种植事业发展需求；该文综述了近十年木霉属真菌在防治栽培根或根茎类中药材根腐病方面的研究及应用进展，发现现阶段针对木霉属真菌防治中药材根腐病的研究大部分止步于验证木霉属真菌菌株抑制病原菌生长的效果，针对木霉属真菌对中药材诱导的效果研究尚浅，多数中药材作物对木霉属真菌的响应机制相关研究更是几乎空白，且大田试验报道较少，距离木霉属真菌应用于生产实践任重而道远。综上，该文旨在承上启下，提倡深化相关研究并将木霉属真菌应用于中药种植。     

重庆石柱黄连根腐病病根可培养真菌多样性研究

根腐病是制约石柱县黄连产业发展的主要病害之一。为了明确根腐病病根中真菌组成及致病菌情况,为该病的防治提供数据,该研究在不同季节采集石柱4个黄连主产区一至五年生的黄连根腐病病根进行真菌分离,对分离到的菌株进行分子鉴定、形态鉴定和种属统计。结果共计分离到真菌437株,分别属于5亚门,11纲,16目,22科,28属。黄连根腐病病根部位可培养真菌数量、种类随生长年限、地点、季节而变化,但未显示出明显变化规律。Ilyonectria sp.,Pythium sp.,Phoma sp,Trichoderma sp.是优势属。结合前期初步离体回接结果推断,Pythium sp.,Ilyonectria sp.,Phoma sp.,Fusarium sp.中都可能包含病原菌。Trichoderma sp.中可能筛选出根腐病菌的拮抗菌。     

不同地块人参根区土壤微生物群落组成及其多样性分析

目的:分析土壤微生物群落组成及其多样性与土壤理化性质的相关性,揭示不同地块人参锈腐病发病率与土壤微生态差异的关系。方法:以人参根区土壤为研究对象,采用高通量测序技术,对农田健康、农田病重、林地健康、林地病重等4组人参根区土壤细菌的16S r RNA基因序列和真菌ITS序列进行测序。结果:人参根区土壤微生物细菌OTU数量大于真菌,说明细菌群落占主导地位;影响土壤微生物群落组成的重要因素是土壤p H和交换性铝;细菌中黄单胞菌属Xanthomonadaceae可能是导致本研究中病重组发病较重的原因之一;无论农田还是林地,真菌中的土赤壳属Ilyonectria的病原菌在病害组的相对丰度均显著高于健康组,其可能是导致土壤微生态失衡、土壤质量下降,进而引起人参锈腐病发生的主要原因。结论:揭示了健康和病害人参根区土壤微生物群落组成多样性的差异,阐明了土壤质量与土壤微生物差异之间的关系,为人参种植中科学合理选地奠定理论基础。     

人参抗病、促生菌的筛选及田间效果评价

筛选出同时具有抗病和促生作用的菌株,明确菌株的田间应用效果。采用平板对峙法从人参内生及根际土壤298株菌株中筛选得到具有很好拮抗效果的菌株,同时采用Ashby培养基验证其固氮潜能、Salkowski方法测定产IAA能力、硅酸盐培养基初筛和火焰分光光度法复筛测定解钾能力、CAS方法检测产生铁载体能力;通过形态学、生理生化和16S rRNA序列分析鉴定其种类;采用灌根法测定其田间防治人参病害和促生效果。通过筛选获得1株具有广谱抗菌效果并且具有固氮、解钾和产IAA、铁载体的能力的菌株TY15,鉴定其为成团泛菌Pantoea agglomerans;田间测定菌株TY15对人参成株期锈腐病平均防效为68.02%,与300亿/克益微可湿性粉剂处理的防效(68.94%)相当;经TY15菌株处理的人参与清水对照相比,鲜重增加22.73%。最终获得了1株具有很好应用前景的菌株TY15。     

泰山黄精内生真菌的分离鉴定及抑菌活性研究

目的 研究泰山黄精内生真菌的分布及其多样性,并筛选具有抑菌活性的内生真菌.方法 采用平板分离法分离黄精内生真菌,采用滤纸片扩散法测试黄精内生真菌培养物抗耐药菌活性,同时采用分子生物学方法对筛选出的活性菌株进行鉴定.结果 从泰山野生黄精的根、茎、叶和果实中共分离出32株内生真菌,分属于7个属,分布最广的类群是镰刀菌属Fusarium sp.,占总菌株的31.3％,其次是不产孢真菌Sterile mycelia (28.1％)和链格孢属Alternaria sp.(21.9％).各组织中内生真菌的分布存在一定的组织差异性,根中内生真菌的分离率最高,茎和叶中次之,果实中最少.共有来自5个属的14株内生真菌至少对1种供试菌株有抗菌活性,其中8株具有广谱抗耐药菌活性.对活性最强、抑菌谱最广的不产孢菌株HJG-10进行分子生物学鉴定,将其确定为裂褶菌Schizophyllum commune.结论 泰山黄精中蕴含着大量具有抑菌活性的内生真菌,为寻找和开发新型抑菌生物制剂开辟了一条新途径.     

五味子中内生拮抗活性细菌的分离与筛选

目的 从不同地区采集五味子植株,分离内生细菌,并进行菌群密度、拮抗菌筛选和抑菌活性研究。方法 采用平板分离法分离内生细菌并纯化典型菌株;平板对峙法测定体外拮抗活性;生长速率法测定抑菌活性。结果 不同种植地、五味子不同器官中内生细菌的菌群密度差异较大,野生的较栽培的大;五味子各器官中,根中的内生细菌最多,其次为茎,叶片中最少。从分得的大量内生细菌中共纯化出302株内生细菌,拮抗菌比率平均为24.19%。从中选出了12株对五味子茎基腐病菌、人参根腐病菌、棉花枯萎病菌、番茄灰霉病菌、人参黑斑病菌具有较好拮抗作用的菌株。12株菌株的发酵产物对供试病原菌菌丝生长均有一定的抑制作用,其中JYg-2对人参根腐病的抑制率最高,达80.02%。结论 五味子植株体内存在大量内生细菌,并且含有一定比率的拮抗菌,拮抗活性稳定。因此五味子内生细菌可以成为开发拮抗菌资源的重要途径,并具有较大潜能。     

银杏内生真菌的分离鉴定及其生物活性研究

目的:探讨银杏内生真菌的分离方法、菌种鉴定及其代谢产物粗提物的体外抗真菌、抗氧化活性,为进一步深入研究银杏内生真菌及其代谢产物的活性提供依据。方法:首次对天目山地区野生银杏植株树皮、枝条、树叶进行了内生真菌的分离;采用微量稀释法测试银杏内生真菌粗提物抗病原真菌活性。采用DPPH法测试银杏内生真菌粗提物抗氧化活性。同时采用分子生物学方法对筛选出的活性内生真菌进行鉴定。结果:研究发现,共计9株(16.1%)内生真菌粗提物的抗白色念珠菌Candida albicans、新生隐球菌Cryptococcus neoformans、红色毛癣菌Trichophyton rubrum、薰烟曲霉菌Aspergillus fumigatus活性较好。其中以天目山野生银杏树皮中分离得到的青霉属T-1-2-1菌株粗提物抗真菌活性最佳,对4种供试真菌均具有一定的抗菌活性,其抗红色毛癣菌的MIC80为4 mg.L-1,与阳性对照氟康唑的抗菌活性相当;共计5株(8.9%)内生真菌的抗氧化活性较好,其中,以毛壳属T-3-2-2、炭角菌属T-6-5-7菌株抗氧化活性最好。结论:银杏内生真菌是一个潜在的、丰富的抗菌、抗氧化新药资源库,值得进一步研究和开发。     

宁夏枸杞内生菌的抗菌和抗肿瘤活性研究

为筛选具有抗菌抗肿瘤活性的枸杞内生菌资源,对分离自宁夏枸杞的10株内生菌发酵液的抑菌活性和体外细胞毒活性进行检测,通过ITS和16S rDNA序列分析对菌株进行了分子鉴定。结果表明,5株内生真菌对供试病原菌都未表现出抑制活性,放线菌AL6对3种病原真菌都有一定的抑制作用,而AL5仅对金黄色葡萄球菌有较强抑制活性。但内生真菌的抗肿瘤活性明显强于放线菌。当发酵液浓度为0.2 g·L~(-1)时,有4株内生真菌至少对1种肿瘤细胞的抑制率高于50%。序列分析表明,5株内生真菌隶属于曲霉属、青霉属和翘孢霉属。5株内生放线菌隶属于链霉菌属、微球菌属和拟诺卡氏菌属。曲霉属菌株FL1对A549和HeLa细胞的抑制活性都较强,其IC_(50)分别为0.022,0.028 g·L~(-1),值得进一步研究。     

拮抗人参根部病原菌木霉的筛选及其生物学特性初步研究

目的：筛选抗人参根部病原菌的优良木霉菌株。方法：通过不同培养基培养,对10株木霉的生物学特性进行比较；通过平板对峙试验,对木霉抗人参疫病菌、人参锈腐病菌和人参立枯病菌能力进行分析。结果和结论：绿色木霉Tv04-2和哈茨木霉Th3080不仅在土壤浸液培养基和PDA培养基上生长良好,而且对3种病原菌均表现出较高的抑制率。木霉在不同的光照条件及不同的pH下生长速度存在显著性差异。除Tv04-2对菌虫绝霸不敏感外,木霉菌株对人参病害防治中大多数常用杀菌剂敏感。     

西红花球茎腐烂病拮抗真菌的筛选、鉴定及抑菌机制

目的 筛选西红花Crocus sativus球茎腐烂病拮抗真菌,探讨其抑菌机制。方法 以前期分离得到的24株西红花内生真菌为材料,采用平板对峙法筛选球茎腐烂病拮抗真菌;应用ITS分子技术进行菌种鉴定,用扫描电镜观察拮抗后病原菌尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum菌丝形态;检测拮抗菌株CS05菌丝产生β-1,3-葡聚糖酶与几丁质酶的含量及病原菌产碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,AKP)的含量。结果 筛选得到对尖孢镰刀菌有显著拮抗作用的内生真菌8株,其中CS05抑制效果最好,相对抑制率为(76.53±3.82)%;将CS05鉴定为担子菌门多孔菌目栓菌属真菌变色栓菌Trametes versicolor;CS05能产生β-1,3-葡聚糖酶与几丁质酶,促使尖孢镰刀菌胞外AKP含量增加,菌丝出现稀疏紊乱、缠绕皱缩等现象。结论西红花内生真菌CS05能较好地拮抗球茎腐烂病菌尖孢镰刀菌,为西红花球茎腐烂病的生物防治提供了参考依据。     

海洋真菌汤姆青霉FS77的抗菌活性研究

目的:研究海洋真菌汤姆青霉Penicillium thomii FS77发酵提取物对细菌和植物病原真菌的抗菌活性,为进一步开发抗菌活性物质奠定基础。方法:采用滤纸片法、生长速率法分别测定海洋真菌汤姆青霉FS77的发酵液和菌丝体提取物对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、大肠杆菌(Escherichia coli)和植物病原真菌链格孢(Alternaria alternata)、胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)、柱枝双孢霉(Cylindrocladium scoparium)的抑制作用;采用连续稀释法测定这2种提取物对供试菌株的最低抑制浓度。结果:汤姆青霉FS77提取物对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌具有抑菌活性,其中发酵液和菌丝体提取物对枯草芽孢杆菌的抑制效果最好,抑菌圈直径均为14.35、10.67 mm,最低抑菌浓度分别为1.56 mg/mL;对植物病原真菌链格孢、胶孢炭疽菌也有较好的抑制效果,抑制率均达50%以上,最低抑菌浓度均为3.12mg/mL。结论:海洋真菌汤姆青霉FS77具有潜在的应用价值,其抗菌活性物质值得进一步深入研究。